TỔNG QUAN
Tổng quan về họ Loranthaceae
Họ Tầm gửi (Loranthaceae) bao gồm hơn 70 chi và gần 1000 loài, chủ yếu phân bố ở vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới, với đặc điểm là bán ký sinh trên cây thân gỗ A Jussier đã mô tả và đặt tên cho họ này vào năm 1808, lấy tên từ chi Loranthus, một trong hai chi được C Linnaeus nghiên cứu trong “Species Plantarum” Mặc dù trước đây Viscaceae (họ Ghi) từng được xem là phân họ của Loranthaceae, nhưng các nghiên cứu gần đây cho thấy hai họ này có sự khác biệt về phôi học, tế bào học và địa sinh học Nhiều công trình nghiên cứu dựa trên dữ liệu sinh học phân tử đã đồng thuận rằng Loranthaceae nên được tách thành một họ thực vật độc lập Hệ thống Angiosperm Phylogeny Group I cũng đã khẳng định vị trí độc lập của họ Loranthaceae so với Viscaceae.
China” đã ghi nhận họ Tầm gửi với 8 chi và 48 loài [11] Năm 2008, R V
Russell và D L Nickrent đã hoàn thiện hệ thống phân loại của Engler bằng cách nghiên cứu trên nhiều gen như rbcL, matK, và trnL-F, đồng thời áp dụng thuật toán Bayes và phương pháp parsimony với độ tin cậy cao Nghiên cứu đã phân tích 69 trong tổng số 73 chi thuộc họ Tầm gửi, cho thấy chi Scurrula có mối quan hệ gần gũi với Taxillus, trong khi chi Macrosolen có quan hệ gần gũi với một chi khác.
Elytranthe là một chi thuộc tông Elytrantheae, trong đó có hai chi được tìm thấy tại Việt Nam, với số lượng nhiễm sắc thể n = 12.
Elytranthe và Macrosolen thuộc tông Lorantheae với số lượng nhiễm sắc thể n = 9 Tại Việt Nam, có 4 chi thuộc tông này, bao gồm Dendrophthoe, Helixanthera, Scurrula và Taxillus Nghiên cứu này góp phần phân loại các taxon trong họ Tầm gửi.
Công trình của R V Russell và D L Nickrent (2008) về họ Loranthaceae là một nghiên cứu toàn diện, kết hợp nhiều phương pháp và bao quát các chi trên toàn cầu Nghiên cứu này tích hợp các đặc điểm hình thái và dữ liệu sinh học phân tử nhằm xây dựng một cái nhìn sâu sắc về họ thực vật này.
Bài viết đề cập đến 4 cây phát sinh chủng loại mang tính tin cậy cao, mặc dù vẫn còn một số điểm chưa hoàn thiện về vị trí của một số chi Đây là công trình hoàn thiện nhất và mới nhất về họ Tầm gửi tại Việt Nam, nơi đã ghi nhận 6 chi: Dendrophthoe, Elytranthe, Helixanthera, Macrosolen, Scurrula, Taxillus với hơn 30 loài, trong đó nhiều loài được sử dụng làm thuốc Nguyễn Tiến Bân (1994) trong Tạp chí Sinh học số 16 đã đưa ra danh sách họ Tầm gửi gồm 2 phân họ Loranthoideae.
Họ Viscoideae bao gồm 8 chi và 43 loài, 1 thứ Năm 2003, tác giả đã phân loại Loranthoideae và Viscoideae thành hai họ độc lập, gọi là Loranthaceae và Viscaceae, khi đó họ Tầm gửi có 5 chi, 33 loài và 1 thứ Tác giả chỉ đề cập đến tên synonym, sinh học – sinh thái, phân bố và giá trị sử dụng Theo Nguyễn Tiến Bân, Scurrula được xem là synonym của Taxillus dựa vào các đặc điểm hình thái như hoa mẫu 4, đối xứng hai bên và số lượng hoa trong cụm hoa ít Năm 2014, Lê Ngọc Hân xác nhận họ Loranthaceae ở Việt Nam có 29 loài và 1 thứ, được phân chia thành 1 phân họ, 2 tông, 2 phân tông và 6 chi.
Tổng quan về chi Macrosolen
1.2.1 Vị trí phân loại thực vật
Theo hệ thống phân loại mới nhất APG IV (Angiosperm Phylogeny Group) [8] dựa trên các dẫn liệu về hình thái và sinh học phân tử, chi
Macrosolen có vị trí phân loại như sau:
Ngành: Angiosperms (Thực vật hạt kín)
1.2.2 Nghiên cứu về chi Macrosolen trên thế giới
Lần đầu tiên vào năm 1830, Blume đề cập đến Macrosolen trong cuốn
“Flora Javae nec non insularum adjacentium” [15] như là 1 nhánh của chi
Loranthus (họ Loranthaceae) gồm 13 loài được lấy tên lần lượt là: L formosus,
L evenius, L sphaerocarcus, L subumbellatus, L tetragonus, L retusus, L cochinchinesis, L patulus, L viridiflorus, L ampullaceus, L tomentosus, L elasticus, L clavatus với đặc điểm chung trên cơ quan sinh sản: hoa lưỡng tính, lá bắc 3 rời rạc hoặc liền nhau, cánh hoa hợp thành ống, hoa mọc thành chùm hoặc xim, hiếm khi đơn lẻ, có nhiều sắc màu … Năm 1841, Reichenbach đã tách Macrosolen thành một chi riêng biệt, ghi chép đặc điểm, minh họa chi tiết các loài thuộc chi một cách hệ thống trong tài liệu “Deut Bot Herb.-Buch”
[16] Tên hữu hiệu của chi được chính thức ghi nhận là Macrosolen (Blume)
Rchb và việc sử dụng đến nay không có sự thay đổi nào so với nhận định trước đó của Blume Miquel cũng đồng tình rằng Macrosolen thuộc họ Loranthaceae và đã mô tả chi tiết 14 loài trong chi này Tuy nhiên, một số nhà nghiên cứu như Betham và Hooker vẫn giữ quan điểm tương tự như nhận định ban đầu của Blume.
Macrosolen là 1 bộ phận của chi Loranthus, hay Engler cho rằng nó là nó là nhánh của chi Elytranthe [20]
Năm 1894, Van Tieghem đã giới thiệu hệ thống phân loại thực vật dựa trên đặc điểm hình thái trong tác phẩm Sur La Classification Des Loranthacées Trong hệ thống này, Macrosolen được xếp vào một trong ba chi thuộc tông Elytranthe Tuy nhiên, chỉ sau một năm, hệ thống của Van Tieghem đã có sự thay đổi, phân chia tông Elytranthe thành 18 chi thay vì 3 chi như ban đầu.
Macrosolen trước đây được chia thành hai chi theo hệ thống mới là Macrosolen và Miquelina Vào năm 1900, Engler đã phát hiện sự khác biệt rõ ràng về hình thái ở đài hoa và lá bắc, từ đó quyết định khôi phục lại chi Macrosolen và Enelytranthe Các tài liệu sau năm 1900 như Bulletin du Jardin Botanique de Buitenzorg, The Gardens’ Bulletin Singapore, và Vân Nam thực vật chí đều công nhận chi Macrosolen thuộc họ Loranthaceae Hệ thống phân loại APG cũng xác nhận điều này.
IV (2016) [8] đã xếp Macrosolen là một chi thuộc họ Loranthaceae Hiện nay, chính thức ghi nhận 42 loài thuộc chi Macrosolen theo Plant of the World
Online [27] Các mẫu vật của các loài thuộc chi đã thu thập hiện tại tập trung ở Trung Quốc, khu vực Đông Nam Á, Ấn Độ
1.2.3 Nghiên cứu về chi Macrosolen tại Việt Nam
Tài liệu Cây cỏ Việt Nam vào năm 2000 [28] đã liệt kê 8 loài thuộc chi
Macrosolen bao gồm Macrosolen annamicus, Macrosolen adpressus, Macrosolen avenis, Macrosolen bibracteolatus, Macrosolen cochinchinensis, Macrosolen dianthus, Macrosolen robinsonii, Macrosolen tricolor Tác giả
Phạm Hoàng Hộ đã sử dụng các đặc điểm hình thái như lá, hoa lưỡng tính, cánh hoa dính liền thành ống, hoa có 6 phần và lá bắc nhỏ không bao lấy đài để phân biệt các loài thuộc chi Macrosolen Tuy nhiên, loài Macrosolen adpressus không có tranh minh họa hay mô tả trong tài liệu này, và các nghiên cứu sau cũng không đề cập đến Năm 2014, Lê Ngọc Hân đã nghiên cứu về họ Tầm gửi (Loranthaceae) và xác nhận 7 loài thuộc chi Macrosolen đã được phát hiện ở Việt Nam, tương tự như ghi chép trước đó của Phạm Hoàng Hộ.
Vào năm 2017, một nhóm nghiên cứu gồm các nhà khoa học Nhật Bản và Việt Nam đã công bố một loài mới thuộc chi Macrosolen, được phát hiện tại Vườn Quốc gia Bidoup Núi Bà Loài mới này đã được đặt tên chính thức.
Macrosolen bidoupensis là một loài mới có hình thái tương tự như Macrosolen tricolor Nhóm nghiên cứu đã xây dựng DNA barcode cho M bidoupensis bằng hai gen rbcL và matK Nghiên cứu gần đây của tác giả Lê Chí Toàn chỉ ra rằng chi Macrosolen (Blume) Rchb có hai nhánh phát sinh, thay vì chỉ một nhánh như trước đây Tác giả cũng đề xuất cần nghiên cứu thêm để làm rõ các ranh giới và phân loại chính xác ba chi trong nhóm này.
Elytranthe, Lepidaria và Macrosolen khi 3 chi này có tương đồng về hình thái, phân tử.
Khái quát nghiên cứu về loài Macrosolen tricolor
Loài Macrosolen tricolor phân bố tự nhiên ở các vùng: Đông Nam Trung Quốc, Lào, Campuchia, Việt Nam [27] Ở Việt Nam cây đã được tìm thấy ở
Bài viết đề cập đến 7 vùng địa lý quan trọng tại Việt Nam, bao gồm Hòa Bình (Lương Sơn), Quảng Ninh (Tiên Yên, Uông Bí), Hải Phòng, Hà Nội, Ninh Bình (Phúc Nhạc, Ninh Thái, Tam Điệp: Chợ Ghềnh), Khánh Hòa (Nha Trang, Đông Bo), Ninh Thuận (Ninh Hải) và Bình Thuận (Hàm Thuận Nam).
Hình 1 Phân bố của loài Macrosolen tricolor [27]
1.3.2 Vị trí phân loại và đặc điểm hình thái
Khóa định loại của loài Macrosolen tricolor dựa trên hệ thống phân loại Angiosperm Phylogeny Group IV [8] đã xác định: Loài Macrosolen tricolor
(Lecomte) Dans thuộc chi Macrosolen (Blume) Rchb nằm trong họ Loranthaceae Juss
Ngành: Angiosperms (Thực vật hạt kín)
Loài: Macrosolen tricolor (Đại cán ba màu)
Loài này lần đầu tiên được mô tả đầy đủ vào năm 1914 dưới tên
Elytranthe tricolor, được mô tả bởi LeComte, được xếp vào chi Elytranthe, tách biệt khỏi hai nhánh Macrosolen và Elytranth dựa trên đặc điểm gân lá và tràng hoa không rõ ràng Năm 1929, Danser đã ghi chép và minh họa các bộ phận của loài này, đồng thời công nhận tên gọi chính thức là Macrosolen tricolor thuộc chi Macrosolen Đến nay, các mô tả về loài này vẫn giữ nguyên theo những ghi chép ban đầu của LeComte.
Macrosolen tricolor, theo ghi chép của LeComte, là một loài cây bụi cao khoảng 0,5m với cành màu xám và thường có giác mút Lá có cuống dài 2-3 mm, phiến lá hình trứng ngược đến hẹp, kích thước từ 3,5 - 5,5 × 1,3 - 2 cm, nhẵn nhụi và có 2 hoặc 3 cặp gân bên, với gốc hình nêm và đỉnh tròn Hoa của cây thường mọc đơn độc hoặc từng cặp ở nách lá, với xim 2 hoa, cuống dài 1 mm và lá bắc nhỏ hình bán nguyệt, kích thước 1 mm Đài hoa có hình elip, kích thước 2,5 - 3 mm, trong khi các cánh hoa hình khuyên dài khoảng 1 mm Tràng hoa có màu đỏ với dải màu lục ở đầu ống, hơi cong, với ống phồng lên và các thùy màu lục nhạt, hình mác, dài từ 6 - 9 mm Sợi hoa dài 3 - 4 mm và bao phấn có 2.
Quả mọng màu tím đậm, hình cầu với đường kính khoảng 7 mm, có bề mặt nhẵn Thời gian sinh trưởng của hoa và quả diễn ra từ tháng 8 đến tháng 3 năm sau Loài này được Phạm Hoàng Hộ mô tả trong cuốn "Cây cỏ Việt" tại Việt Nam.
Cây bụi bán ký sinh, không lông và có vỏ xám, có lá phiến bầu dục rộng 2-2,5 cm, dai với đầu tròn và cuống dài 2-3 mm Hoa mọc từng cặp, với lá hoa dài 1,5 mm, đài cao 4 mm, và vành hình ống dài 3-4 mm, có 6 thuỳ màu đỏ và 6 tiểu nhụy Quả của cây có hình tròn.
1.3.3 Thành phần hóa học và giá trị sử dụng
Nghiên cứu về hợp chất hóa học trong loài này đang được thúc đẩy tại Việt Nam, với những phát hiện quan trọng về các hóa chất thực vật như quercetin 3-rhamnoside, methyl brevifolilin carboxylate, và lupeol Đặc biệt, vào năm 2020, các nhà khoa học Việt Nam đã lần đầu tiên tách được Macrotricolorin A, một hợp chất hoàn toàn mới thuộc nhóm diarylalkanoid.
9 từ loài Macrosolen tricolor thu thập tại Núi Lớn, thành phố Vũng Tàu, tỉnh Bà Rịa-Vũng Tàu [33]
Loài Macrosolen tricolor, hay còn gọi là Đại cán ba màu, được sử dụng trong y học cổ truyền Việt Nam để điều trị các bệnh như ho, tiêu chảy, đầy bụng, gãy xương, lợi tiểu, trị phong thấp và nhuận tràng Nghiên cứu hiện đại cũng chỉ ra rằng chiết xuất từ loài thực vật này có tác dụng hạ đường huyết, chống viêm và bảo vệ gan.
1.3.3.1 Ứng dụng DNA barcode trong nghiên cứu định danh thực vật
Phương pháp phân loại hình thái, với lịch sử phát triển lâu dài, đã xây dựng một hệ thống phân loại sinh vật khá đầy đủ và toàn diện, đặc biệt trong lĩnh vực thực vật Phương pháp này chủ yếu dựa vào sự khác biệt về hình thái của các cơ quan trong cơ thể thực vật, đặc biệt là cơ quan sinh sản như hoa Tuy nhiên, việc phân loại bằng hình thái cũng gặp nhiều khó khăn khi xác định các mẫu vật trong giai đoạn phát triển chưa ra hoa, những mẫu có đặc điểm tương đồng do thích nghi với môi trường, hoặc khi có nhiều điểm tương đồng gây khó khăn trong nhận diện.
Từ giữa những năm 1990, phương pháp phân loại học phân tử đã xuất hiện nhờ sự phát triển của sinh học phân tử, sử dụng dữ liệu gen (DNA) và protein để nghiên cứu Phương pháp này cho phép lựa chọn các gen hoặc sản phẩm của hệ gen tùy thuộc vào mục đích nghiên cứu Các kỹ thuật trong phân loại phân tử được áp dụng để khám phá tính đa dạng sinh học, mối quan hệ tiến hóa giữa các loài, xây dựng cây chủng loại phát sinh và hỗ trợ nhận dạng ở cấp phân loại loài hoặc chi.
Vào năm 2003, Paul Hebert đã giới thiệu khái niệm "mã vạch DNA" (DNA Barcode) như một phương pháp xác định loài Mã vạch này sử dụng một đoạn DNA ngắn từ một phần của hệ gen đặc trưng cho từng loài, giúp nhận diện các loài một cách chính xác Sự phát triển của mã vạch DNA đã trở thành một công cụ quan trọng trong việc nhận dạng loài trên quy mô lớn.
Theo The Barcode of Life Data Systems, đến năm 2011, đã có hơn 1.100.000 mã vạch DNA được lưu trữ từ hơn 95.000 loài sinh vật khác nhau Trong 10 năm qua, Ngân hàng gen Quốc tế (GenBank) đã lưu giữ hơn 180.000 trình tự DNA barcode của thực vật, liên kết với hơn 2.000 bài báo Để chuẩn hóa việc sử dụng DNA barcode trên toàn cầu, cộng đồng khoa học đã nỗ lực tìm kiếm các vùng trình tự DNA có thể phân biệt nhiều loài Một mã vạch DNA điển hình cần đáp ứng các yêu cầu: tính phổ biến cao để áp dụng trên nhiều loài thực vật, trình tự đặc hiệu và hiệu suất nhân bản cao, cùng khả năng phân biệt nhiều loài đồng thời.
Hệ gen của các loài thực vật bậc cao bao gồm ba thành phần chính: DNA nhân, DNA ti thể và DNA lục lạp DNA ti thể có kích thước từ 300-2000 kb và sự tái cấu trúc diễn ra nhanh chóng, gây khó khăn trong việc xây dựng bản đồ gen Kích thước và cấu trúc của DNA nhân thay đổi tùy thuộc vào lịch sử giao phối, đa bội và sự sắp xếp nhiễm sắc thể qua các giai đoạn tiến hóa Ngược lại, DNA lục lạp giữ tính bảo tồn cao về cả kích thước lẫn tổ chức.
Các vùng rời rạc trong hệ gen lục lạp, như exon của các gen rbcL, atpB, ndhF và matK, cùng với intron của gen trnL và trnL-F, đã được áp dụng trong nghiên cứu phát sinh loài nhờ tính đa hình giữa các loài Ngoài ra, ribosome ITS nhân cũng được sử dụng, nhưng không hiệu quả cao ở một số nhóm thực vật do các yếu tố tiến hóa phức tạp Tính đến năm 2009, đã có khoảng 8 locus gen được sử dụng làm mã vạch DNA cho các loài thực vật, bao gồm cả hệ gen nhân và lục lạp.
Các ứng dụng của DNA barcode trên thực vật được phân thành hai loại chính Thứ nhất, chúng cung cấp cái nhìn sâu sắc về phân loại học ở cấp độ loài, giúp nhận diện và xác định ranh giới giữa các loài.
Mã vạch DNA thực vật giúp nhận diện các mẫu vật chưa xác định hoặc không rõ loài, cung cấp cái nhìn sâu sắc vào phân loại cấp độ loài, đặc biệt trong các nhóm có hình thái đơn giản, phân bố rộng, hoặc kích thước nhỏ Phương pháp này hữu ích cho những nhóm đã được phân loại nhưng chưa đầy đủ, không tương xứng với sự đa dạng của chúng Ngoài ra, DNA mã vạch còn nâng cao hiểu biết về các loài thực vật có hạt và góp phần khám phá các loài ẩn danh.
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Đối tượng nghiên cứu
Loài Đại cán ba màu - Macrosolen tricolor sống bán ký sinh thu thập ở
Trong nghiên cứu tại Hà Nội và Hưng Yên, chúng tôi đã thu thập tổng cộng 7 mẫu tiêu bản tươi và khô trong các chuyến đi thực địa Các mẫu nghiên cứu DNA barcode được bảo quản bằng lá cây trong silicagel, như trình bày trong bảng 1.
Bảng 1 Danh sách các mẫu thu thập
Nơi thu Thời gian thu
Phương pháp nghiên cứu
2.2.1 Phương pháp kế thừa tài liệu
Với đề tài khóa luận này, chúng tôi tập trung tham khảo tài liệu để nắm được các thông tin cơ bản về:
- Vị trí phân loại và danh pháp của loài
- Nguồn gốc và vùng phân bố của loài
- Đặc điểm hình thái và sinh thái của loài
- Giá trị sử dụng loài
Kế thừa các số liệu và phương pháp nghiên cứu
- Kế thừa số liệu, kết quả từ các bài báo, các nghiên cứu trong và ngoài nước
- Các phương pháp nghiên cứu đặc điểm hình thái
- Các tiêu bản được lưu giữ tại các phòng tiêu bản và bảo tàng
Mục đích nhằm xây dựng cơ sở xác định tên khoa học và danh pháp, so sánh hình thái
2.2.2 Phương pháp thu thập và xử lý mẫu vật
Phương pháp thu mẫu: Thu thập mẫu vật (thu cả cây) làm tiêu bản, mẫu tươi theo nguyên tắc và phương pháp thu mẫu của Nguyễn Nghĩa Thìn (2007)
Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích đặc điểm hình thái và giải phẫu của mẫu sinh học, trong đó lá non được ưu tiên lựa chọn Các mẫu này được bảo quản trong silicagel bằng phương pháp "Túi trà" (Teabag method) để đảm bảo tính chính xác và độ tin cậy của kết quả nghiên cứu.
Trong quá trình thu thập mẫu cây Đại cán ba màu, chúng tôi đã thu thập đầy đủ các bộ phận như thân, lá, hoa và quả Mỗi mẫu đều được đánh số hiệu và ghi chép các đặc điểm nhận diện của cây trong môi trường tự nhiên, những đặc điểm này có thể bị mất sau khi cây khô Sau khi hoàn tất việc thu thập và ghi chép, chúng tôi cho các mẫu vào túi đựng để mang về phục vụ cho nghiên cứu.
Phương pháp túi trà bao gồm việc đặt mẫu nghiên cứu vào túi trà, sau đó ghi nhãn và niêm phong Tiếp theo, túi trà được đặt trong hộp kín khí và hoàn toàn ngập trong silicagel cho đến khi mẫu khô hoàn toàn.
2.2.3 Phương pháp nghiên cứu hình thái so sánh
Phương pháp nghiên cứu dựa vào đặc điểm hình thái của cơ quan sinh dưỡng và sinh sản, tập trung vào cơ quan sinh sản do tính chất bảo thủ và ít phụ thuộc vào môi trường Để thực hiện phương pháp này hiệu quả, chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu và phân loại các mẫu tiêu bản khô tại các phòng lưu trữ mẫu Các bước thực hiện được tiến hành một cách hệ thống và khoa học.
- Tập hợp, phân tích các tài liệu trong và ngoài nước về các loài cần nghiên cứu
Nghiên cứu và phân tích các mẫu tiêu bản được thu thập và lưu trữ tại phòng tiêu bản của Viện Dược Liệu (NIMM) cùng với các mẫu từ các đề tài nghiên cứu Đồng thời, tham khảo các ảnh tiêu bản đang được lưu trữ tại các phòng tiêu bản nổi tiếng trên thế giới như Royal Botanic Gardens, Kew.
- Mô tả các đặc điểm hình thái
- Tổng hợp kết quả nghiên cứu và hoàn thành khóa luận
2.2.4 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm vi phẫu
Nghiên cứu hình thái vi phẫu được thực hiện dựa trên tài liệu Kiểm nghiệm dược liệu bằng phương pháp hiển vi Phương pháp vi học bao gồm quan sát các đặc điểm vi học trên vi phẫu, cắt và nhuộm kép một vi phẫu dược liệu để tạo tiêu bản có thể phân biệt các mô, tổ chức dưới kính hiển vi Các nhà nghiên cứu nhận biết và mô tả những đặc điểm này, chụp ảnh và ghi chú các đặc điểm quan sát được Phân tích được thực hiện ở phần thân và lá của các mẫu nghiên cứu.
Cố định mẫu trên thớt và sử dụng dao lam để cắt thành những lát mỏng qua thân và lá Đối với thân, cắt ngang với thiết diện phù hợp, trong khi lá được cắt ngang gân giữa và một phần phiến lá hai bên, khoảng 1/3 từ cuống lá, cần chọn lá không quá già hoặc quá non Mẫu tươi nên được cắt trực tiếp mà không qua xử lý Ngay sau khi cắt, ngâm mẫu trong dung dịch nước Javen trong 20-30 phút và rửa kỹ bằng nước.
Ngâm mẫu trong dung dịch acid acetic 1% trong 10-15 phút để trung hòa các mẫu còn sót lại Sau đó, rửa mẫu với nước và nhuộm bằng xanh methylene 1% cho đến khi mẫu bám màu xanh (khoảng 10-15 giây) Cuối cùng, rửa mẫu với nước trước khi tiếp tục quá trình nhuộm.
Trong quá trình thực hiện, sử dụng 17 mẫu bằng đỏ carmin 0,5% trong khoảng thời gian 5 phút Khi quan sát thấy có sự bám màu đỏ, tiến hành đậy lamen và soi mẫu dưới kính hiển vi với các vật kính 4x, 10x, 20x và 40x Cuối cùng, chụp ảnh lại bằng phần mềm cellSens Entry.
Mô tả đặc điểm bột dược liệu bằng cảm quan: màu sắc, mùi vị Theo
“Kiểm nghiệm dược liệu bằng phương pháp hiển vi” của Nguyễn Viết Thân
Để tiến hành làm tiêu bản bột dược liệu, cần tách riêng phần thân và lá của mẫu, sau đó sấy khô ở nhiệt độ 60°C và tán thành bột mịn Bột mịn được rây và lấy một lượng nhỏ để đặt lên phiến kính đã có một giọt nước cất, sau đó đậy lamen và quan sát dưới kính hiển vi Quá trình này giúp xác định các đặc điểm vi học của bột phần thân và lá, đồng thời chụp lại hình ảnh bằng máy ảnh.
2.2.5 Phương pháp sinh học phân tử
2.2.5.1 Phương pháp tách chiết DNA
Sử dụng phương pháp tách chiết Doyle&Doyle (1990), quy trình được tối ưu hóa như sau: Nghiền 100mg mẫu lá với nitơ lỏng trong cối sứ để thu được bột mịn Sau đó, cho phần bột đã nghiền vào ống tuýp chứa 1ml đệm CTAB và 20 μl β-mercapthoethanol, ủ ở 65°C trong 1h30’, đảo đều sau mỗi 15 phút Tiếp theo, thêm 500μl chloroform và đảo nhẹ, cuối cùng ly tâm ở 13500 rpm trong 15 phút.
Chuyển dịch chiết vào ống tuýp 2ml mới và bổ sung 500μl Chloroform, sau đó đảo nhẹ và ly tâm để thu dịch chiết Chuyển dịch chiết vào ống tuýp 1,5ml, thêm isopropanol với tỷ lệ 1:1 để kết tủa DNA Ly tâm ở 13500 rpm trong 15 phút để thu DNA kết tủa dưới đáy ống Loại bỏ phần dịch nổi, rửa kết tủa bằng 500μl EtOH 70%, có thể ngâm nếu có màu Sau khi loại bỏ dịch, để kết tủa khô và thêm 50μl TE để bảo quản Để đánh giá chất lượng DNA, tiến hành điện di DNA tổng số trên gel agarose 1% trong đệm TBE 1x với marker λDNA đã biết, và kiểm tra kết quả trên máy soi gel UVP Transilluminator PLUS Nồng độ DNA được định lượng dựa trên nồng độ λDNA.
2.2.5.2 Khuyếch đại vùng trình tự rbcL bằng phương pháp PCR
Cặp mồi được sử dụng trong phản ứng PCR vùng trình tự rbcL là rbclaF có trình tự nucleotide 5’-ATGTCACCACAAACAGAGACTAAAGC-3’ và rbcLaR là 5’-GTAAAATCAAGTCCACCRCG-3’ Chiều dài gen sản phẩm
Phản ứng PCR dự kiến thu được sản phẩm khoảng 600 bp, với thành phần bao gồm 12,5μl DreamTaq 2X Master Mix (nồng độ phản ứng 1X), 2 mồi rbcLaF và rbcLaR (mỗi mồi 1,25μl, nồng độ 0,5μM), 2,5μl mẫu DNA đã tách và 7,5μl H2O Tổng thể tích cho phản ứng PCR là 25μl.
Chu trình nhiệt tối ưu để nhân bản vùng rbcL bao gồm các giai đoạn sau: biến tính ở 95°C trong 30 giây, bắt cặp ở 54°C trong 30 giây, và kéo dài ở 72°C trong 45 giây Chu trình này được lặp lại 35 lần và sản phẩm PCR được bảo quản ở 4°C.
Kết quả PCR được kiểm tra trên gel agarose 1% với marker PCR 1k bp DNA Ladder và chụp ảnh bằng máy soi gel UVP Transilluminator PLUS Nếu băng DNA đích có kích thước đúng, các sản phẩm PCR sẽ được tinh sạch và giải trình tự.
2.2.5.3 So sánh trình tự DNA sử dụng công cụ BLAST
KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
Xác định tên khoa học
Qua việc phân tích các đặc điểm hình thái của mẫu Tầm gửi, chúng tôi đã thu thập và so sánh các đặc điểm này với khóa định loại của chi Việc này không chỉ giúp làm rõ các đặc tính riêng biệt của mẫu mà còn hỗ trợ trong việc xác định và phân loại chính xác hơn các loài Tầm gửi trong hệ thực vật.
Nghiên cứu của Lê Ngọc Hân (2014) về phân loại họ Loranthaceae ở Việt Nam đã chỉ ra sự quan trọng của việc kiểm tra các mẫu tiêu bản của loài Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans, hiện đang được lưu trữ tại một số bảo tàng và phòng tiêu bản.
Mẫu thu thập được tại phòng tiêu bản Trung tâm Tài nguyên Dược liệu - Viện Dược Liệu (NIMM) có tên khoa học là Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans, mã số Kew (K000844671).
Qua kết quả thu được, chúng tôi đưa ra một số thông tin kèm theo các loài được định danh mẫu như sau:
Tên khoa học: Macrosolen tricolor (Lecomte) Danser
Tên Việt Nam: Đại cán ba màu, Đại quản hoa ba màu, Tầm gửi bò Synonym: E lytranthe tricolor Lecomte, 1914 Not Syst (Paris), 3: 94 Loc Class.: Vietnam Typus : Syntypus Pierre 6354 (K, K000844671)
Sinh học và sinh thái: Sống bán ký sinh trên cành các cây thân gỗ, thường trên cây Dâu (Morus alba L.)
Giá trị sử dụng: Lá giã nát dùng để bó chân tay bị gãy xương
Mẫu nghiên cứu: QN03, QN04, QN05, QN29, QN30, QN42, QN44
Đặc điểm hình thái
Tiến hành mô tả đặc điểm hình thái chi tiết của loài Đại cán ba màu
Macrosolen tricolor đã thu thập được
Dạng sống: Cây gỗ, sống bán ký sinh, vỏ màu xám với nhiều vết nứt dọc, thân tròn, mảnh, các đốt không xếp trùng với nhau
Hình 2 Loài Đại cán ba màu Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans
Lá cây có đặc điểm mọc đối, nhẵn, dày và dai, với mặt trên màu sắc đậm hơn mặt dưới Phiến lá có hình dạng trứng ngược hoặc trứng thuôn, kích thước dao động từ 2,8 - 7,5 cm chiều dài và 0,5 - 3,6 cm chiều rộng, mép lá nguyên và đỉnh tù Gân lá hình lông chim, không rõ ràng ở mặt trên nhưng nổi bật hơn ở mặt dưới, đặc biệt là gân chính Cuống lá có chiều dài từ 1 - 3 mm.
Hình 3 Mẫu loài Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans đã thu thập
Hình 4 Hình thái của lá a- Mặt trên lá b- Mặt dưới lá
Hoa mọc thành cụm gần nách lá, mỗi cụm gồm 2 hoa với 2 lá bắc đối diện, thường có đỉnh tròn Hoa lưỡng tính với 6 nhị, dài từ 1,2 đến 2,2cm Tràng hoa hợp thành hình ống, miệng chia thành 6 thùy; có màu đỏ ở gốc, xanh ở giữa và xanh vàng ở đỉnh, màu sắc có thể chuyển từ xanh vàng sang đỏ tím khi hoa nở và gần rụng Các thùy xẻ đến 1/3 chiều dài tràng hoa, để lộ nhị và nhụy bên trong Nhị màu vàng, dài 1,5cm, gốc đính vào tràng hoa.
Chỉ nhụy có hình trụ tròn, màu vàng nhạt, dài 1,7cm, với đầu nhụy tròn màu đỏ Bầu dưới có hình trụ tròn, nhẵn, màu vàng xanh, dài 0,4cm, gốc nhụy được đính ở đỉnh bầu Ngoài ra, trên đỉnh bầu còn có một vòng đài và bầu có một ô.
Hình 5 Hoa mọc thành cụm ở nách lá
Hình 6 Giải phẫu hoa a– Toàn bộ hoa b- Tràng hoa c- Nhị đính tràng d- Bầu và nhụy
Hình 7 Cấu trúc của hoa: Nhị và nhụy a- Nhị b- Nhụy
Hình 8 Lá bắc ( Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans.) a– Lá bắc gắn với bầu b- Lá bắc riêng lẻ
Quả mọng, tròn và có lớp nhớt bên trong, khi chín sẽ có màu đỏ đậm với đường kính khoảng 7mm Trên đỉnh quả còn lưu lại vòng đài nhỏ, trong khi hạt có màu xanh và hình dạng thuôn nhọn ở một đầu.
Hình 9 Quả và hạt ( Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans.) a- Quả chín b- Quả bổ dọc c- Hạt
Dựa vào đặc điểm hình thái của loài Scurrula parasitica L được mô tả trong Dược điển Viện Nam và các nghiên cứu tại Việt Nam, cùng với mô tả đặc điểm hình thái của loài Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans, chúng tôi đã xây dựng bảng so sánh giúp phân biệt hai loài này.
Bảng 2 So sánh đặc điểm khác nhau về hình thái của loài
Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans và Scurrula parasitica L Đặc điểm Macrosolen tricolor
Lông bảo vệ Không có lông Lông hình sao
Lá Hình trứng ngược hoặc trứng thuôn, dày, dài 2,8 – 7,5 x 0,5 – 3,6cm
Hình bầu dục, mỏng, dài 3,5 – 9,5 x 1,0 – 6,0 cm
Lá bắc 2 lá bắc đính đối diện với nhau ở gốc bầu, lá bắc thường tròn ở đỉnh
1 lá bắc hình tam giác, có lông ở mép
Hoa Mọc thành cụm gồm 2 hoa, ở sát nách lá, hoa mẫu 6 Tràng hoa màu đỏ ở gốc – xanh ở giữa – xanh vàng/đỏ tím ở đỉnh
Mọc thành cụm gồm 4-5 hoa, sát nách lá, hoa mẫu 4-
5, có lớp lông Tràng hoa màu đỏ-xanh
Quả Quả tròn, mọng, nhẵn, khi chín có màu đỏ sậm
Quả hình trái hình lê, gốc quả thót lại, có lông bảo vệ khi chín màu hồng.
Đặc điểm vi phẫu
3.3.1 Đặc điểm vi phẫu thân và lá
Hình ảnh vi phẫu cho thấy mặt cắt của thân cây có thiết diện tròn, với cấu trúc từ ngoài vào trong Lớp bần màu xanh bao gồm nhiều hàng tế bào xếp thành vòng đồng tâm và dãy xuyên tâm, bề mặt được phủ bởi lớp cutin Mô mềm vỏ có các tế bào hình trứng hoặc đa giác, mỏng và bắt màu hồng, chứa các tinh thể canxi oxalate hình đa giác Mô cứng phân bố rải rác trong mô mềm vỏ.
Bó sợi xếp thành cung tròn bao quanh libe, với phần libe-gỗ phát triển mạnh mẽ và mang màu hồng Libe tạo thành hình cung tròn bao lấy phần gỗ, trong khi phần gỗ bên trong được xếp thành dải tỏa tròn Ở giữa là mô mềm ruột, có cấu trúc mỏng và hình dạng tròn hoặc đa giác.
Hình 10 Vi phẫu thân ( Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans.)
1- Bần 2- Mô mềm vỏ 3- Bó sợi 4- Libe
5- Gỗ 6- Mô mềm ruột 7- Tinh thể canxi oxalate
Hình ảnh vi phẫu của lá cho thấy mặt trên hơi lồi, trong khi mặt dưới lồi nhiều hơn Cấu trúc lá bao gồm biểu bì trên và dưới với các tế bào hình chữ nhật nhỏ, xếp đều, bắt màu xanh và được phủ lớp cutin bên ngoài Mô mềm có tế bào thành mỏng, hình đa giác hoặc hình trứng, bắt màu hồng, xen kẽ là các đám mô cứng màu xanh và tinh thể canxi oxalate hình khối Bó sợi nằm ở mặt trên và dưới, bao quanh các bó libe-gỗ, với 1-5 bó libe-gỗ, trong đó libe bao quanh bó gỗ phía dưới Cấu trúc gỗ được hình thành từ các mạch gỗ xếp thành hàng.
Hình 11 Vi phẫu lá ( Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans.)
1- Biểu bì trên 2- Mô mềm 3- Bó sợi 4- Gỗ
5- Libe 6- Mô cứng 7- Biểu bì dưới
3.3.2 Đặc điểm bột dược liệu
Bột màu nâu, không mùi, có thể quan sát dưới kính hiển vi với các thành phần chính như mảnh bần màu nâu cam, mô cứng màu nâu dày, mô mềm màu vàng nhạt chứa nhiều tinh thể canxi oxalat, bó sợi, mạch vòng và hạt tinh bột.
Hình 12 Bột thân Đại cán ba màu ( Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans.)
1- Mảnh bần 2- Mô cứng 3- Mô mềm với tinh thể Canxi oxalat
4- Bó sợi 5- Mạch vòng 6- Hạt tinh bột
Bột lá có màu vàng và mùi thơm nhẹ, khi quan sát dưới kính hiển vi, ta thấy các mảnh biểu bì màu vàng với lỗ khí khổng, mô mềm màu vàng không rõ thành tế bào, cùng với các tế bào mô cứng, mảnh mạch vòng, tế bào sợi và mảnh mô mềm mang màu sắc đặc trưng Ngoài ra, trong bột còn có tinh thể canxi oxalat và hạt tinh bột.
Hình 13 Bột lá Đại cán ba màu ( Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans.)
1- Biểu bì với lỗ khí khổng 2- Mô mềm 3- Mô cứng
4,5- Mạch vòng 6- Tế bào sợi 7- Mảnh mô mềm mang màu
8- Tinh thể canxi oxalat 9- Hạt tinh bột
Xác định loài dựa trên chỉ thị rbcL
3.4.1 Kết quả tách chiết DNA tổng số và khuyếch đại vùng gen rbcL
3.4.1.1 Kết quả tách chiết DNA tổng số
Xem xét tình trạng bảo quản mẫu và tính đa dạng giữa các mẫu, chọn ra
4 mẫu QN04, QN05, QN30, QN42 để tiến hành tách DNA
Hình 14 Kết quả điện di tách chiết DNA tổng số
Kết quả tách chiết DNA từ các mẫu lá được thể hiện trong hình 14 Sử dụng phương pháp tách chiết DNA của Doyle&Doyle [55], mẫu DNA sau khi điện di cho thấy băng trên gel nhưng có độ mờ So với băng λDNA có nồng độ đã biết, ước tính nồng độ DNA thu được dưới 10ng Mẫu lá được làm khô bằng silicagel, tuy nhiên, lớp cutin dày bên ngoài có thể làm giảm hiệu suất thu DNA Do đó, mẫu bảo quản bằng silicagel không hiệu quả, và cần cải thiện bằng cách sử dụng lá tươi để tách chiết DNA.
Từ kết quả điện di với cả 4 mẫu tách DNA thành công, đem cả 4 mẫu tiến hành gắn mồi và PCR
3.4.1.2 Kết quả khuyếch đại vùng
Hình 15 trình bày kết quả điện di sản phẩm PCR của vùng trình tự rbcL từ các mẫu nghiên cứu Các băng DNA hiển thị rõ ràng, không có băng phụ và đạt chiều dài thiết kế khoảng 600bp.
Hình 15 Kết quả điện di sản phẩm PCR rbcL của các mẫu nghiên cứu
3.4.2 Kết quả giải trình tự
Sản phẩm PCR rbcL đã giải trình tự thành công cả 4 mẫu, với hiệu suất giải trình tự ổn định nhờ vào tính bảo thủ và di truyền đơn dòng của các gen lục lạp Kết quả cho thấy các đỉnh tín hiệu rõ ràng, không bị nhiễu và không có đỉnh phụ xuất hiện.
Hình ảnh giải trình tự của 4 mẫu Macrosolen tricolor được trình bày trong phụ lục 2
Hình 16 Một đoạn trình tự rbcL trên 4 mẫu
3.4.3 Kết quả xác định loài dựa trên công cụ BLAST
Các trình tự sau khi ghép nối đã được tìm kiếm trên hệ thống BLAST, và kết quả xác định loài của các mẫu được trình bày trong phụ lục 3 sau khi tìm kiếm thành công trên cổng dữ liệu NCBI.
Hình 17 So sánh trình tự gen rbcL mẫu QN04 với trình tự ON331649 đã công bố Bảng 3 Kết quả xác định loài dựa trên gen rbcL
Mẫu Loài tương đồng Độ tương đồng
Kết quả định danh loài sơ bộ của gen cho kết quả tương đối tốt rbcL là
Các gen rbcL trong cùng loài thể hiện sự bảo thủ cao, với trình tự giữa các mẫu không có sự khác biệt đáng kể Tuy nhiên, sự khác biệt nhỏ về số lượng nucleotide giữa các trình tự này vẫn có thể được sử dụng để phân biệt các mẫu.
Các mẫu thu thập được có trình tự rbcL tương đồng 100% với loài Macrosolen tricolor đã được công bố trên Genbank Trong 100 kết quả gần giống nhất mà BLAST trả về, không có kết quả nào khác.
Scurrula parasitica L nên rbcL là một chỉ thị hữu ích trong việc phân biệt 2 loài này.
Bàn luận
Loài Đại cán ba màu Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans đã được sử dụng trong y học dân gian với tác dụng hỗ trợ liền xương gãy Nghiên cứu hiện đại về hoạt chất hóa học và dịch chiết xuất từ cây cũng chỉ ra tiềm năng làm thuốc của loài này Tuy nhiên, tình trạng thu hái nhầm lẫn với loài Tang ký sinh phổ biến hơn đang gây ra những lo ngại về sự bảo tồn và sử dụng hiệu quả của Đại cán ba màu.
Khóa luận này nhằm xây dựng bộ dữ liệu nhận diện loài Scurrula parasitica L thông qua đặc điểm hình thái, vi phẫu và DNA barcode Nghiên cứu được thực hiện tại hai địa điểm Hưng Yên và Hà Nội, cho thấy đặc điểm hình thái của loài này khớp với mô tả của LeComte, với cây sống ký sinh, thân chia đốt, lá mọc đối hình trứng ngược, hoa lưỡng tính có màu sắc đặc trưng và quả mọng tròn màu đỏ khi chín So sánh với loài dễ nhầm lẫn Macrosolen tricolor, Scurrula parasitica có lá mỏng, hình bầu dục và xuất hiện lông bảo vệ, trong khi Macrosolen tricolor có lá dày, hình trứng và không có lông Sự khác biệt này cùng với màu sắc và số lượng tràng hoa cũng được ghi nhận.
34 hình dạng quả cũng có sự khác biệt Những đặc điểm hình thái đó này giúp phân biệt được 2 loài này
Bên cạnh các đặc điểm hình thái, nghiên cứu đã xác định các đặc điểm vi phẫu của lá và thân cây Macrosolen tricolor, cung cấp thêm dữ liệu cho loài Vi phẫu thân có thiết diện tròn với lớp bần phủ cutin, mô mềm vỏ chứa tinh thể canxi oxalat, mô cứng, bó sợi, libe bao ngoài gỗ, và phần gỗ bên trong xếp thành dải tròn Bột dược liệu từ thân chứa các thành phần như mảnh bần, mô cứng, mô mềm, tinh thể canxi oxalat, bó sợi và hạt tinh bột Vi phẫu lá có cấu trúc biểu bì phủ lớp cutin, mô mềm với các đám mô cứng và tinh thể canxi oxalat, bó sợi bao quanh libe-gỗ, và phần gỗ xếp thành hàng Bột dược liệu lá có biểu bì với lỗ khí khổng, mô mềm, mô cứng, mảnh mạch vòng, tế bào sợi, và hạt tinh bột.
Nghiên cứu DNA barcode của loài Macrosolen tricolor trong khóa luận này sử dụng gen rbcL làm mã vạch nhận diện Hiệu suất tách DNA tổng số còn thấp, có thể cải thiện bằng cách sử dụng mẫu tươi thay vì mẫu lưu trữ trong silicagel Sản phẩm PCR cho hình ảnh băng đúng chiều dài như mong đợi, trong khi sản phẩm giải trình tự cho các đỉnh tín hiệu rõ ràng, tuy nhiên có một vị trí tín hiệu bị nhiễu, cần thực hiện giải trình tự hai chiều để xác định chính xác hơn Kết quả xác định DNA barcode ở loài này.
Macrosolen tricolor sử dụng gen rbcL làm mã vạch, cho kết quả so sánh với trình tự đã công bố trên ngân hàng gen đạt độ tương đồng 100%.
Bài nghiên cứu này cung cấp mô tả chi tiết về đặc điểm hình thái, vi phẫu và bột dược liệu của loài Đại cán ba màu Macrosolen tricolor, điều mà Dược điển Việt Nam chưa đề cập Nghiên cứu bổ sung các hình ảnh minh họa rõ ràng, giúp dễ dàng quan sát các đặc điểm này Đồng thời, nghiên cứu cũng xác nhận chỉ thị rbcL là một DNA barcode đáng tin cậy cho việc kiểm định loài Macrosolen tricolor.
Các nghiên cứu về loài Đại cán ba màu vẫn còn hạn chế và đang tiếp tục được khai thác để phát hiện tiềm năng của thực vật này Để tiến hành nghiên cứu, việc xác định đúng loài là rất quan trọng, từ đó mới có thể thu thập mẫu, kiểm nghiệm và nghiên cứu dược liệu Việc xác định tên khoa học của cây dựa trên các đặc điểm hình thái, vi phẫu, bột dược liệu và DNA barcode có vai trò then chốt trong nghiên cứu và phát triển cây thuốc Kết quả nghiên cứu cung cấp cơ sở dữ liệu hữu ích, góp phần vào tiêu chuẩn hóa và kiểm nghiệm dược liệu.
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT
Qua quá trình thu thập mẫu và nghiên cứu đặc điểm hình thái, vi phẫu, cũng như DNA barcode của loài Đại cán ba màu trên một số cây chủ ở Hưng Yên và Hà Nội, chúng tôi đã đạt được những kết quả đáng kể.
Đại cán ba màu (Macrosolen tricolor) là một loài đặc biệt với các đặc điểm hình thái độc đáo Loài này được phân biệt bởi hoa mọc thành cụm 2 hoa và lá bắc tròn Dữ liệu về đặc điểm hình thái của loài này kèm theo hình ảnh chi tiết sẽ giúp nhận diện và nghiên cứu sâu hơn về Đại cán ba màu.
Hai lá bắc ghép lại với nhau, hoa có màu đỏ, xanh và tím, quả tròn, nhẵn bóng và màu đỏ Bài viết đã xây dựng dữ liệu chi tiết về đặc điểm vi phẫu của thân, lá và bột dược liệu, kèm theo hình ảnh minh họa Qua đó, cung cấp thêm thông tin về đặc điểm vi phẫu của các bộ phận và bột dược liệu của loài này.
Xây dựng dữ liệu DNA barcode vùng gen rbcL là phương pháp hiệu quả để xác định và định danh loài, với trình tự DNA barcode dài khoảng 600 bp Kết quả giải trình tự cho thấy vùng rbcL có tiềm năng lớn trong việc ứng dụng mã vạch phân tử để nhận diện và phân biệt các loài khác nhau.
Phân tích các mẫu Đại cán ba màu từ nhiều vùng địa lý khác nhau giúp cải thiện hình thái của cây Việc áp dụng phương pháp chỉ thị sinh học khi mẫu lá còn tươi sẽ tối ưu hóa hiệu suất thu DNA.
1 Nickrent DL, Malécot V, Vidal-Russell R, Der JP A revised classification of Santalales Taxon 2010;59(2):538-558
2 L JA Loranthaceae Annales du Muséum National d’Histoire Naturelle 12 1808:292
4 Don G A general history of the dichlamydeous plants vol 3 JG and F Rivington; 1834
5 Wiens D, Barlow BA The cytogeography and relationships of the viscaceous and eremolepidaceous mistletoes Taxon 1971;20(2-3):313-332
6 Barlow B Biogeography of Loranthaceae and Viscaceae 1983;
7 Group AP An update of the Angiosperm Phylogeny Group classification for the orders and families of flowering plants: APG III
Botanical journal of the Linnean Society 2009;161(2):105-121
8 Group AP, Chase MW, Christenhusz MJ, et al An update of the Angiosperm Phylogeny Group classification for the orders and families of flowering plants: APG IV Botanical journal of the Linnean Society
9 Group TAP An ordinal classification for the families of flowering plants Annals of the Missouri botanical Garden 1998:531-553
10 Ii A An update of the Angiosperm Phylogeny Group classification for the orders and families of flowering plants: APG II Botanical
Journal of the Linnean Society 2003;141(4):399-436
11 Flora of China Accessed 5/5/2023, http://www.efloras.org/
12 Nguyễn Tiến Bân Họ Tầm gửi (Loranthaceae Juss.) trong hệ thực vật Việt Nam Tạp chí Sinh học 1994 1994;47-54
13 Nguyễn Tiến Bân Danh lục các loài thực vật Việt Nam Tập
14 Lê Ngọc Hân Nghiên cứu phân loại họ Tầm gửi (Loranthaceae
15 Blume CL Flora Javae, nec non insularum adjacentium 1830
16 Reichenbach HGL Das Herbarienbuch : Erklọrung des natỹrlichen Pflanzensystems, systematische Aufzọhlung, Synonymik und Register der bis jetzt bekannten Pflanzengattungen = Repertorium herbarii, sive, Nomenclator generum plantarum systematicus synonymicus et alphabeticus ad usum practicum accommodatus In der Arnoldischen Buchh;
17 Miquel FAW Flora van Nederlandsch Indie¨ vol v 1 no.1 C G van der Post; [etc.]; 1855
18 Bentham G, Hooker JD Genera plantarum :ad exemplaria imprimis in Herberiis Kewensibus servata definita vol v.1:pt.1 (1862) A
19 Hooker JD The flora of British India vol v.1 (1875) L Reeve;
20 Engler A, Krause K, Pilger R, Prantl K Die Natürlichen Pflanzenfamilien nebst ihren Gattungen und wichtigeren Arten, insbesondere den Nutzpflanzen, unter Mitwirkung zahlreicher hervorragender Fachgelehrten begründet vol Teil 1,Abt.1 W Engelmann; 1897
21 Van Tieghem PÉL Sur La Classification Des Loranthacées
Bulletin de la Société botanique de France 1894;41:138-144
22 Van Tieghem PÉL Sur Le Groupement Des Espèces En Genres Dans La Tribu Des Élytranthées De La Famille Des Loranthacées Bulletin de la Société botanique de France 1895;42:433-449
23 Engler A, Prantl K Die natürlichen Pflanzenfamilen III, 1 1900:177
24 Danser BH Bulletin du Jardin Botanique de Buitenzorg vol 10
25 The Gardens' bulletin, Singapore vol [ser.4]:v.11:pt.4 Govt
26 Zhongguo ke xue yuan Kunming zhi wu yan jiu s yun nan zhi wu zhi vol 3 ke xue chu ban she; 1983
27 Plant of the World Online RBG, Kew Accessed 5/5/2023, https://powo.science.kew.org/
28 Phạm Hoàng Hộ Cây cỏ Việt Nam - An Illustrated Flora of Vietnam vol II 2000
29 Tagane S, Dang VS, Ngoc NV, et al Macrosolen bidoupensis (Loranthaceae), a new species from Bidoup Nui Ba National Park, southern Vietnam PhytoKeys 2017;80
30 Toan LC Molecular phylogeny of Macrosolen(Blume) Rchb (Loranthaceae) from Vietnam based on molecular data TNU Journal of Science and Technology 2022:227(05): 261-267
31 Lecomte PH Notulae Systematicae Herbier du Museum de Paris 1914;(3):91-94
32 Hung LK, Minh PN, Dat BT, et al Phytochemical components of Macrosolen tricolor (L.) Dans whole plant Vietnam Journal of Chemistry
33 Hung LK, Minh PN, Dat BT, et al Macrotricolorin A, a new diarylpropanoid from the Vietnamese plant Macrosolen tricolor (Lecomte) Danser Nat Prod Res Jan 2022;36(1):165-170
34 Giang VX, Kỳ PT, Thông NTT, Anh PTVA Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan của tầm gửi cây gạo - Taxillus chinensis (DC) Dans và tầm gửi cây na - Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans Tạp chí Dược học 2011;425:41-45