Khóa luận nghiên cứu đặc điểm hình thái, vi phẫu và dna barcode của loài macrosolen tricolor (lecomte) dans thu thập tại hưng yên và hà nội

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC ˗˗˗˗˗˗˗˗˗˗˗˗˗˗ VŨ HỒNG NGỌC NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, VI PHẪU VÀ DNA BARCODE CỦA LOÀI MACROSOLEN TRICOLOR (LECOMTE) DANS THU THẬP TẠI HƯNG YÊN VÀ HÀ NỘI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội - 2023 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC ˗˗˗˗˗˗˗˗˗˗˗˗˗˗ Người thực hiện: VŨ HỒNG NGỌC NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, VI PHẪU VÀ DNA BARCODE CỦA LOÀI MACROSOLEN TRICOLOR (LECOMTE) DANS THU THẬP TẠI HƯNG YÊN VÀ HÀ NỘI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa QH2018Y Người hướng dẫn: ThS Nguyễn Quỳnh Nga PGS TS Đinh Đoàn Long Hà Nội - 2023 LỜI CẢM ƠN Trước tiên, cho phép em xin bảy tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Đinh Đồn Long, phó Hiệu trưởng Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc Gia Hà Nội, người tận tình hướng dẫn, quan tâm, bảo tạo điều kiện tốt cho em suốt q trình học tập hồn thành khoá luận Em muốn gửi lời cảm ơn chân thành đến ThS Nguyễn Quỳnh Nga, Viện Dược liệu, vô quan tâm hướng dẫn sát sao, giúp đỡ nhiệt tình tạo điều kiện thuận lợi, hỗ trợ tối đa kiến thức, kỹ thuật để em hoàn thành nghiên cứu Trung tâm thời gian thực khoá luận Em xin cảm ơn TS Phạm Thị Hồng Nhung, môn Y Dược sở hỗ trợ em nhiều phương diện, truyền thụ cho em kiến thức kinh nghiệm quý báu thời gian em học tập trường Em xin cảm ơn anh chị Trung tâm Tài nguyên dược liệu, Viện Dược liệu bạn sinh viên hỗ trợ, giúp đỡ em hết mình, nhanh chóng hoàn thiện thu thập số liệu đầy đủ cho khóa luận Cho phép em gửi lời cảm ơn đến Ban Giám hiệu toàn thể thầy cô giáo Trường Đại học Y dược - Đại học Quốc gia Hà Nội dạy dỗ tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt năm năm em học tập trường Cảm ơn gia đình, người thân bạn bè bên ủng hộ, động viên giúp đỡ em suốt thời gian học tập nghiên cứu Trong trình nghiên cứu, thực hành hồn thành khóa luận Viện Dược liệu, em cố gắng học hỏi trau dồi kiến thức với giúp đỡ của người Tuy nhiên, với thiếu kinh nghiệm cịn có hạn chế của thân sai sót điều khơng thể tránh khỏi Em kính mong nhận góp ý của thầy, anh, chị để khóa luận của em hồn thiện Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội ngày 21 tháng năm 2023 Sinh viên Vũ Hồng Ngọc MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan họ Loranthaceae 1.2 Tổng quan chi Macrosolen 1.2.1 Vị trí phân loại thực vật 1.2.2 Nghiên cứu chi Macrosolen giới 1.2.3 Nghiên cứu chi Macrosolen Việt Nam 1.3 Khái quát nghiên cứu loài Macrosolen tricolor 1.3.1 Phân bố 1.3.2 Vị trí phân loại đặc điểm hình thái 1.3.3 Thành phần hóa học giá trị sử dụng 1.3.4 Nghiên cứu DNA barcode CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.2 Phương pháp nghiên cứu 15 2.2.1 Phương pháp kế thừa tài liệu 15 2.2.2 Phương pháp thu thập xử lý mẫu vật 15 2.2.3 Phương pháp nghiên cứu hình thái so sánh 16 2.2.4 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm vi phẫu 16 2.2.5 Phương pháp sinh học phân tử 17 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 19 3.1 Xác định tên khoa học 19 3.2 Đặc điểm hình thái 19 3.3 Đặc điểm vi phẫu 25 3.3.1 Đặc điểm vi phẫu thân 25 3.3.2 Đặc điểm bột dược liệu 27 3.4 Xác định loài dựa thị rbcL 29 3.4.1 Kết tách chiết DNA tổng số khuyếch đại vùng gen rbcL 29 3.4.2 Kết giải trình tự 31 3.4.3 Kết xác định lồi dựa cơng cụ BLAST 32 3.5 Bàn luận 33 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT A Kí hiệu chữ viết tắt thuật ngữ bp = base pair CTAB = Cetrimonium bromide DNA= deoxyribonucleic acid EtOH = Ethanol: Cồn ITS = Internal transcribed spacer: vùng đệm trình tự phiên mã Loci = vị trí gen Loc class = Locus classicus: địa điểm thu mẫu chuẩn kb = kilobase pair = 1000 bp matK = Maturase K PCR = Polemerase Chain Reaction: phản ứng chuỗi trùng hợp rbcL = Ribulose bisphosphate carboxylase synonym: danh pháp đồng nghĩa typus = mẫu, mẫu danh pháp DANH MỤC BẢNG Bảng Danh sách mẫu thu thập 14 Bảng So sánh đặc điểm khác hình thái của lồi Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans Scurrula parasitica L 24 Bảng Kết xác định loài dựa gen rbcL 32 DANH MỤC HÌNH Hình Phân bố của lồi Macrosolen tricolor [27] Hình Lồi Đại cán ba màu Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans 20 Hình Mẫu lồi Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans thu thập 21 Hình Hình thái của 21 Hình Hoa mọc thành cụm nách 22 Hình Giải phẫu hoa 22 Hình Cấu trúc của hoa: Nhị nhụy 23 Hình Lá bắc (Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans.) 23 Hình Quả hạt (Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans.) 24 Hình 10 Vi phẫu thân (Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans.) 26 Hình 11 Vi phẫu (Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans.) 27 Hình 12 Bột thân Đại cán ba màu (Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans.) 28 Hình 13 Bột Đại cán ba màu (Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans.) 29 Hình 14 Kết điện di tách chiết DNA tổng số 30 Hình 15 Kết điện di sản phẩm PCR rbcL của mẫu nghiên cứu 31 Hình 16 Một đoạn trình tự rbcL mẫu 32 Hình 17 So sánh trình tự gen rbcL mẫu QN04 với trình tự ON331649 công bố 32 ĐẶT VẤN ĐỀ Với vị trí nằm đới khí hậu nhiệt đới gió mùa, hệ sinh thái phong phú, thiên nhiên Việt Nam sở hữu lượng tài nguyên động thực vật đồ sộ, bao gồm nhóm tài nguyên thuốc – phận quan trọng của hệ sinh thái đóng góp lớn vào công bảo vệ sức khỏe người Gần 6000 loài thực vật sử dụng làm thuốc nhiều dạng thuốc dân gian, thang thuốc y dược học cổ truyền, hay bào chế thành sản phẩm đại, nghiên cứu chiết xuất hoạt chất, … Nghiên cứu, phân tích lồi dùng dân gian hay loài chưa hiểu biết đầy đủ phương thuốc để chữa bệnh, phòng chống bệnh Họ Tầm gửi (Loranthaceae) bao gồm phần lớn chủ yếu sống ký sinh, dân gian hay gọi chung giống ký sinh khác Tầm gửi mà phân định loài Tuy vậy, loài Tầm gửi khác với đặc điểm khác từ hình thái hoạt chất chứa bên chúng, điều ảnh hưởng lớn đến khả đóng góp của chúng phương diện y dược học Cùng loài Tầm gửi ký sinh loài khác tạo nên khác biệt hoạt chất Trong số loại Tầm gửi, Tang ký sinh vị thuốc sử dụng phổ biến y học cổ truyền để điều trị bệnh xương khớp Dược điển Việt Nam V (2017) quy định dược liệu Tang ký sinh lấy từ loài Scurrula parasitica L ký sinh Dâu (Morus alba L.) Tuy nhiên thực tế người dân thu hái lẫn số loài Tầm gửi khác Dâu làm dược liệu Tang ký sinh đó có loài Đại cán ba màu - Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans Loài Đại cán ba màu ghi chép y học dân gian với tác dụng bó vùng gãy xương, trị số bệnh tiêu hóa Các nghiên cứu thêm loài nhận thấy tác dụng chống viêm, bảo vệ gan, hay phát hợp chất cho thấy tiềm của Đại cán ba màu để phát triển làm thuốc Vì vậy, chúng tơi tiến hành thực đề tài: Nghiên cứu đặc điểm hình thái, vi phẫu DNA barcode loài Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans thu thập Hưng Yên Hà Nội nhằm xây dựng liệu đặc điểm hình thái, vi phẫu DNA barcode giúp nhận dạng phân biệt loài Góp phần xác định tính của dược liệu làm thuốc phục vụ công tác kiểm nghiệm dược liệu lồi đóng góp thêm vào liệu vơ quan trọng cho hoạt động nghiên cứu tiến hành loài Đề tài thực với mục tiêu cụ thể sau: - Nghiên cứu xác định đặc điểm hình thái, vi phẫu, bột dược liệu của loài Đại cán ba màu (Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans.) - Xác định DNA barcode của loài Đại cán ba màu (Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans.) thu thập địa điểm Hưng Yên Hà Nội so sánh với trình tự cơng bố Genbank Hình 16 Một đoạn trình tự rbcL mẫu 3.4.3 Kết xác định lồi dựa cơng cụ BLAST Các trình tự sau ghép nối tìm kiếm hệ thống BLAST Kết xác định loài lần lượt của mẫu sau tìm kiếm thành cơng cổng liệu NCBI trình bày phụ lục Hình 17 So sánh trình tự gen rbcL mẫu QN04 với trình tự ON331649 cơng bố Bảng Kết xác định loài dựa gen rbcL Mẫu QN04 QN05 QN30 QN42 Loài tương đồng Macrosolen tricolor (ON331649, MH161425, MG999440, HQ317771) Độ tương đồng 100% 100% 100% 100% Kết định danh loài sơ của gen cho kết tương đối tốt rbcL gen bảo thủ, khơng có sai khác trình tự mẫu lồi, với trình tự của gen rbcL thu tương đồng Nhưng khác biệt số lượng nucleotide nhỏ trình tự giúp phân biệt 32 định danh lồi Các mẫu thu thập có trình tự rbcL có độ tương đồng với trình tự của lồi Macrosolen tricolor công bố Genbank giống đến 100% đoạn trình tự Trong 100 kết gần giống mà BLAST trả khơng có Scurrula parasitica L nên rbcL thị hữu ích việc phân biệt loài 3.5 Bàn luận Loài Đại cán ba màu Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans dùng y học dân gian với tác dụng bó nơi gãy xương [14,28], số nghiên cứu đại hoạt chất hóa học [33] dịch chiết xuất từ [34,35] cho thấy tiềm làm thuốc của loài Tuy nhiên, việc loài Đại cán ba màu bị người dân thu hái nhầm lẫn với loài sử dụng phổ biến Tang ký sinh Scurrula parasitica L chưa có nhiều nghiên cứu sâu nhận dạng, phân biệt lồi bao gồm hình thái, vi phẫu, bột dược liệu thị phân tử DNA barcode Do vậy, khóa luận thực với mục tiêu xây dựng liệu nhận diện loài bao gồm đặc điểm hình thái thực vật, đặc điểm vi phẫu phận sinh dưỡng (thân, lá) bột dược liệu, DNA barcode giúp nhận diện loài Đề tài tiến hành xác định đặc điểm hình thái của lồi Đại cán ba màu thu thập địa điểm Hưng Yên Hà Nội Kết cho thấy đặc điểm hình thái khớp với miêu tả chi tiết của LeComte [31] sống ký sinh, thân chia đốt; mọc đối hình trứng ngược kích thước 2,8 - 7,5 x 0,5 - 3,6cm mép nguyên; hoa mọc thành cụm gồm hoa, hoa lưỡng tính dài 1,2 – 2,2cm, tràng có màu đỏ gốc, xanh giữa, xanh vàng đỉnh, nở xẻ thành thùy đỉnh; gốc nhị đính tràng, nhị màu vàng, nhị dài 1,5cm; nhụy dài 1,7cm, đầu nhụy tròn, màu đỏ; bắc mọc đối diện gốc bầu, tròn đỉnh; mọng tròn, nhớt bên trong, chín có màu đỏ đậm, đường kính 7mm, đỉnh lưu lại vòng đài, hạt màu xanh So sánh đặc điểm hình thái với lồi dễ thu hái lẫn Scurrula parasitica L nhận thấy có khác biệt quan sinh dưỡng lồi Macrosolen tricolor hình trứng, dày lồi Scurrula parasitica có mỏng, hình bầu dục; phận của Macrosolen tricolor khơng có lơng bảo vệ đặc điểm xuất Scurrula parasitica, hoa có màu sắc số lượng tràng khác nhau, bắc lồi Đại cán ba màu trịn, bắc ghép lại, 33 hình dạng có khác biệt Những đặc điểm hình thái đó giúp phân biệt loài Bên cạnh đặc điểm hình thái, xác định đặc điểm vi phẫu của thân, bột dược liệu của loài Macrosolen tricolor bổ sung vào liệu của loài Cụ thể, vi phẫu thân thiết diện tròn, gồm lớp bần có phủ lớp cutin, mơ mềm vỏ chứa tinh thể canxi oxalat, mơ cứng, bó sợi, libe bao ngồi gỗ, phần gỗ phía xếp thành dải tỏa trịn, mơ mềm ruột Bột dược liệu từ thân có thành phần mảnh bần, mô cứng, mô mềm, tinh thể canxi oxalat, bó sợi, mạch vịng, hạt tinh bột Vi phẫu có cấu trúc biểu bì phủ lớp cutin, mô mềm có đám mô cứng tinh thể canxi oxalat, bó sợi bao mặt mặt bó libe-gỗ, cung libe bao quanh bó gỗ phía dưới, phẫn gỗ xếp thành hàng Bột dược liệu có biểu bì có lỗ khí khổng, mơ mềm, mơ cứng, mảnh mạch vịng, tế bào sợi, mảnh mơ mềm mang màu, tinh thể canxi oxalat, hạt tinh bột Nghiên cứu DNA barcode của lồi Macrosolen tricolor khóa luận sử dụng mã vạch nhận diện gen rbcL Hiệu suất tách DNA tổng số cho nghiên cứu DNA barcode cịn thấp, khắc phục cách sử dụng mẫu tươi thay mẫu lưu trữ silicagel Sản phẩm PCR điện di cho hình ảnh băng có chiều dài dự kiến, sản phẩm giải trình tự thu đỉnh tín hiệu đều, rõ ràng có vị trí tín hiệu bị nhiễu làm thêm giải trình tự hai chiều để xác định rõ Kết xác định DNA barcode loài Macrosolen tricolor cụ thể sử dụng gen rbcL làm mã vạch cho kết khả quan so sánh với trình tự cơng bố của lồi ngân hàng gen tương đồng 100% Dược điển Việt Nam chưa có mô tả đặc điểm hình thái, vi phẫu bột dược liệu của loài Đại cán ba màu Bài nghiên cứu của bổ sung cho mô tả chi tiết đặc điểm hình thái, vi phẫu bột dược liệu của loài Đại cán ba màu Macrosolen tricolor, bổ sung hình ảnh minh hoạ chi tiết, dễ quan sát đặc điểm hình thái, vi phẫu, bột dược liệu Đồng thời xác nhận thị rbcL DNA barcode đáng tin cậy cơng tác kiểm định lồi Macrosolen tricolor 34 Cho đến nay, nghiên cứu lồi Đại cán ba màu cịn chưa đầy đủ bước đào sâu nghiên cứu, khai thác tiềm của loài thực vật Để làm đối tượng nghiên cứu điều đầu tiên cần phải nhận biết đối tượng loài sử dụng, từ đó tiến hành bước thu thập mẫu, kiểm nghiệm nghiên cứu dược liệu Xác định tên khoa học của gắn liền với đặc điểm hình thái, vi phẫu, bột dược liệu DNA barcode có ý nghĩa quan trọng trình nghiên cứu phát triển thuốc Những kết của nghiên cứu sở liệu hữu ích, góp phần vào cơng tác tiêu chuẩn hố kiểm nghiệm dược liệu 35 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận Qua trình thu thập mẫu nghiên cứu đặc điểm hình thái, đặc điểm vi phẫu, DNA barcode của loài Đại cán ba màu số chủ Hưng Yên Hà Nội, đạt kết sau: - Xây dựng liệu đặc điểm hình thái kèm hình ảnh chi tiết của loài Đại cán ba màu Loài Đại cán ba màu Macrosolen tricolor phân biệt với loài khác đặc điểm: hoa mọc thành cụm hoa, bắc tròn gồm bắc ghép vào nhau, hoa màu đỏ - xanh - tím, trịn, nhẵn bóng màu đỏ Xây dựng liệu đặc điểm vi phẫu thân, lá, bột dược liệu kèm liệu hình ảnh chi tiết Qua đó bổ sung liệu đặc điểm vi phẫu phận bột dược liệu của loài - Xây dựng liệu DNA barcode vùng gen rbcL giúp định danh, xác định tính của lồi Trình tự DNA barcode có độ dài khoảng 600 bp Kết giải trình tự cho thấy trình tự vùng rbcL thị tiềm năng, có khả ứng dụng mã vạch phân tử (Barcode) nhận diện loài phân biệt với lồi khác Đề xuất Phân tích nhiều mẫu Đại cán ba màu thu thập nhiều vùng địa lý khác nhằm có kết hình thái tốt thực phương pháp sử dụng thị sinh học mẫu tươi để thu DNA với hiệu suất tốt 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nickrent DL, Malécot V, Vidal-Russell R, Der JP A revised classification of Santalales Taxon 2010;59(2):538-558 L JA Loranthaceae Annales du Muséum National d’Histoire Naturelle 12 1808:292 C L Species Plantarum vol 1753 Don G A general history of the dichlamydeous plants vol JG and F Rivington; 1834 Wiens D, Barlow BA The cytogeography and relationships of the viscaceous and eremolepidaceous mistletoes Taxon 1971;20(2-3):313-332 Barlow B Biogeography of Loranthaceae and Viscaceae 1983; Group AP An update of the Angiosperm Phylogeny Group classification for the orders and families of flowering plants: APG III Botanical journal of the Linnean Society 2009;161(2):105-121 Group AP, Chase MW, Christenhusz MJ, et al An update of the Angiosperm Phylogeny Group classification for the orders and families of flowering plants: APG IV Botanical journal of the Linnean Society 2016;181(1):1-20 Group TAP An ordinal classification for the families of flowering plants Annals of the Missouri botanical Garden 1998:531-553 10 Ii A An update of the Angiosperm Phylogeny Group classification for the orders and families of flowering plants: APG II Botanical Journal of the Linnean Society 2003;141(4):399-436 11 Flora of China Accessed 5/5/2023, http://www.efloras.org/ 12 Nguyễn Tiến Bân Họ Tầm gửi (Loranthaceae Juss.) hệ thực vật Việt Nam Tạp chí Sinh học 1994 1994;47-54 13 Nguyễn Tiến Bân Danh lục loài thực vật Việt Nam Tập 2003;1(2):3 14 Lê Ngọc Hân Nghiên cứu phân loại họ Tầm gửi (Loranthaceae Juss.) Việt Nam 2014 15 Blume CL Flora Javae, nec non insularum adjacentium 1830 16 Reichenbach HGL Das Herbarienbuch : Erklärung des natürlichen Pflanzensystems, systematische Aufzählung, Synonymik und Register der bis jetzt bekannten Pflanzengattungen = Repertorium herbarii, sive, Nomenclator generum plantarum systematicus synonymicus et alphabeticus ad usum practicum accommodatus In der Arnoldischen Buchh; 1841 17 Miquel FAW Flora van Nederlandsch Indieă vol v no.1 C G van der Post; [etc.]; 1855 18 Bentham G, Hooker JD Genera plantarum :ad exemplaria imprimis in Herberiis Kewensibus servata definita vol v.1:pt.1 (1862) A Black; 1862 19 Hooker JD The flora of British India vol v.1 (1875) L Reeve; 1875 20 Engler A, Krause K, Pilger R, Prantl K Die Natürlichen Pflanzenfamilien nebst ihren Gattungen und wichtigeren Arten, insbesondere den Nutzpflanzen, unter Mitwirkung zahlreicher hervorragender Fachgelehrten begründet vol Teil 1,Abt.1 W Engelmann; 1897 21 Van Tieghem PÉL Sur La Classification Des Loranthacées Bulletin de la Société botanique de France 1894;41:138-144 22 Van Tieghem PÉL Sur Le Groupement Des Espèces En Genres Dans La Tribu Des Élytranthées De La Famille Des Loranthacées Bulletin de la Société botanique de France 1895;42:433-449 23 Engler A, Prantl K Die natürlichen Pflanzenfamilen III, 1900:177 24 Danser BH Bulletin du Jardin Botanique de Buitenzorg vol 10 1929 25 The Gardens' bulletin, Singapore vol [ser.4]:v.11:pt.4 Govt Print Off [etc.]; 1947 26 Zhongguo ke xue yuan Kunming zhi wu yan jiu s yun nan zhi wu zhi vol ke xue chu ban she; 1983 27 Plant of the World Online RBG, Kew Accessed 5/5/2023, https://powo.science.kew.org/ 28 Phạm Hoàng Hộ Cây cỏ Việt Nam - An Illustrated Flora of Vietnam vol II 2000 29 Tagane S, Dang VS, Ngoc NV, et al Macrosolen bidoupensis (Loranthaceae), a new species from Bidoup Nui Ba National Park, southern Vietnam PhytoKeys 2017;80 30 Toan LC Molecular phylogeny of Macrosolen(Blume) Rchb (Loranthaceae) from Vietnam based on molecular data TNU Journal of Science and Technology 2022:227(05): 261-267 31 Lecomte PH Notulae Systematicae Herbier du Museum de Paris 1914;(3):91-94 32 Hung LK, Minh PN, Dat BT, et al Phytochemical components of Macrosolen tricolor (L.) Dans whole plant Vietnam Journal of Chemistry 2021;59(3):326-330 33 Hung LK, Minh PN, Dat BT, et al Macrotricolorin A, a new diarylpropanoid from the Vietnamese plant Macrosolen tricolor (Lecomte) Danser Nat Prod Res Jan 2022;36(1):165-170 34 Giang VX, Kỳ PT, Thông NTT, Anh PTVA Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan của tầm gửi gạo - Taxillus chinensis (DC) Dans tầm gửi na - Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans Tạp chí Dược học 2011;425:41-45 35 Vũ Xuân Giang, Phạm Thanh Kỳ, Nguyễn Trọng Thông, Phạm Thị Vân Anh Nghiên cứu tác dụng chống viêm của tầm gửi gạo (Taxillus chinensis (DC) Dans.) tầm gửi na (Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans) Tạp chí Dược học 2011;426:40-43 36 Jarman S, Elliott N DNA evidence for morphological and cryptic Cenozoic speciations in the Anaspididae,'living fossils' from the Triassic Journal of Evolutionary Biology 2000;13(4):624-633 37 Stoeckle MY, Hebert PD Barcode of life Scientific American 2008;299(4):82-89 38 Systems TBoLD Accessed 5/5/2023, https://www.boldsystems.org/ 39 GenBank Accessed 5/5/2023, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/ 40 Chen S, Yao H, Han J, et al Validation of the ITS2 region as a novel DNA barcode for identifying medicinal plant species PloS one 2010;5(1):e8613 41 Ting G, Hui Y, Jingyuan S, et al Identification of medicinal plants in the family Fabaceae using a potential DNA barcode ITS2 Journal of ethnopharmacology 2010;130(1):116-121 42 Group CPW A DNA barcode for land plants Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 2009:1279412797 43 Kress WJ, Wurdack KJ, Zimmer EA, Weigt LA, Janzen DH Use of DNA barcodes to identify flowering plants Proceedings of the National Academy of Sciences 2005;102(23):8369-8374 44 Gaut BS Molecular clocks and nucleotide substitution rates in higher plants Evolutionary biology 1998:93-120 45 Vidal-Russell R, Nickrent DL The biogeographic history of Loranthaceae Darwiniana 2007;45(Sup):52-54 46 Li Y, Ruan J, Chen S, et al Authentication of Taxillus chinensis using DNA barcoding technique J Med Plants Res 2010;4(24):2706-9 47 Zhang D, Yang Y, Jiang B, Lizhen D, Zhou N How to correctly identify herbal materials in market: a case study based on DNA barcodes African Journal of Traditional, Complementary and Alternative Medicines 2014;11(6):66-76 48 Muttaqin Z, Budi SW, Wasis B, Corryanti C, Siregar IZ DNA barcode characterization of mistletoe infestation in teak clonal seed orchard (CSO) in Padangan, East Java Province, Indonesia BIOTROPIA-The Southeast Asian Journal of Tropical Biology 2017;24(2):140-152 49 Bell KL, Loeffler VM, Brosi BJ An rbcL reference library to aid in the identification of plant species mixtures by DNA metabarcoding Applications in plant sciences 2017;5(3):1600110 50 Fazekas AJ, Burgess KS, Kesanakurti PR, et al Multiple multilocus DNA barcodes from the plastid genome discriminate plant species equally well PloS one 2008;3(7):e2802 51 Kress WJ, Erickson DL, Jones FA, et al Plant DNA barcodes and a community phylogeny of a tropical forest dynamics plot in Panama Proceedings of the National Academy of Sciences 2009;106(44):18621-18626 52 Nguyễn Nghĩa Thìn Các phương pháp nghiên cứu thực vật NXB Đại học Quốc gia Hà Nội; 2007 53 Wilkie P, Poulsen AD, Harris D, Forrest LL The collection and storage of plant material for DNA extraction: the teabag method Gardens’ Bulletin Singapore 2013;65(2):231-234 54 Nguyễn Viết Thân Kiểm nghiệm dược liệu phương pháp hiển vi Hà Nội Nhà xuất Khoa học kỹ thuật 2003; 55 Doyle JJ Isolation of plant DNA from fresh tissue Focus 1990;12:13-15 56 Bộ Y Tế Dược điển Việt Nam V Y Học; 2018 PHỤ LỤC HÌNH ẢNH MẪU TIÊU BẢN CỦA LOÀI ĐẠI CÁN BA MÀU TẠI BẢO TÀNG TRÊN THẾ GIỚI Hình A Tiêu mẫu Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans – Đại cán ba màu lưu trữ Royal Botanic Gardens (K000844671) [27] PHỤ LỤC KẾT QUẢ GIẢI TRÌNH TỰ GEN RBCL TỪNG MẪU Hình A Kết giải trình tự mẫu QN04 Hình B Kết giải trình tự mẫu QN05 Hình C Kết giải trình tự mẫu QN30 Hình D Kết giải trình tự mẫu QN42 PHỤ LỤC KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH LOÀI CỦA MẪU NGHIÊN CỨU Bảng A Kết giám định loài mẫu QN04 Bảng B Kết giám định loài mẫu QN05 Bảng C Kết giám định loài mẫu QN30 Bảng D Kết giám định loài mẫu QN42