Nghiên cứu hoàn thiện quy trình nhân giống in vitro và phân tích một số trịnh tự dna barcode cho dòng lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai (dendrobium anosmum)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT TRƯỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP PHÙNG THỊ LY NGHIÊN CỨU HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO VÀ PHÂN TÍCH MỘT SỐ TRÌNH TỰ DNA BARCODE CHO DỊNG LAN PHI ĐIỆP NĂM CÁNH TRẮNG MẮT NAI (Dendrobium anosmum) CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ NGÀNH: 8420201 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Nguyễn Văn Việt TS Nguyễn Thị Hồng Gấm Hà Nội, 2021 i CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan, cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình nghiên cứu khác Nếu nội dung nghiên cứu tơi trùng lặp với cơng trình nghiên cứu cơng bố, tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm tuân thủ kết luận đánh giá luận văn Hội đồng khoa học Hà Nội, ngày 30 tháng năm 2021 Người cam đoan Phùng Thị Ly ii LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Thầy Cô Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp, Trường Đại học Lâm nghiệp trang bị kiến thức tạo điều kiện cho suốt q trình học tập hồn thiện luận văn Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Văn Việt TS Nguyễn Thị Hồng Gấm tận tình bảo hướng dẫn tơi suốt q trình nghiên cứu đề tài hoàn chỉnh Luận văn Thạc sĩ Đề tài nhận trợ giúp vật liệu, hóa chất học thuật từ Đề tài NAFOSTED mã số 106.06 - 2019.27 TS Lê Thọ Sơn, Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp, Trường ĐH Lâm nghiệp làm Chủ nhiệm Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè đồng nghiệp ln sát cánh hỗ trợ, động viên tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 30 tháng năm 2021 Học viên Phùng Thị Ly iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN GIỚI THIỆU 1.1 Giới thiệu chi lan Hoàng Thảo (Dendrobium) 1.1.1 Hệ thống phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.2 Giới thiệu lan Phi điệp năm cánh trăng mắt nai (dendrobium anosmum) 1.2.1 Đặc điểm thực vật Phi điệp năm cánh trắng mắt nai 1.2.2 Cách trồng chăm sóc 1.3 Tình hình nghiên cứu nhân giống lan dendrobium phương pháp nuôi cấy in vitro 1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 1.3.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 1.4 Tổng quan DNA barcode thực vật 12 1.4.1 Giới thiệu DNA barcode 12 1.4.2 Các vùng gen sử dụng phân loại thực vật nghiên cứu 13 1.4.3 Tình hình nghiên cứu ứng dụng DNA barcode giám định loài Dendrobium 13 Chương VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Vật liệu nghiên cứu 16 2.2 Nội dung nghiên cứu 16 2.2.1 Nghiên cứu xác định thị DNA-barcode cho dòng lan Phi điệp năm cánh trắng Mắt Nai 16 iv 2.2.2 Nghiên cứu nhân giống dòng lan Phi điệp năm cánh trắng mắt nai kỹ thuật nuôi cấy mô in vitro 16 2.3 Phương pháp nghiên cứu 17 2.3.1 Phương pháp xác định thị DNA - barcode 17 2.3.2 Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống mẫu lan Phi điệp năm cánh trắng mắt nai kỹ thuật nuôi cấy in vitro 19 2.3.3 Phương pháp thu thập xử lí số liệu 24 Ghương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 26 3.1 Kết xác định thị dna barcode giống lan phi điệp năm cánh tắng mắt nai 26 3.1.1 Kết tách chiết DNA 26 3.1.2 Kết khuếch đại PCR mẫu lan nghiên cứu 26 3.1.3 Kết xác định phân tích trình tự nucleotide vùng gen nghiên cứu 27 3.1.4 So sánh khả phân biệt vùng gen 36 3.2 Kết nghiên cứu kỹ thuật nuôi nuôi cấy in vi tro lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai 37 3.2.1 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu 37 3.2.2 Kết ảnh hưởng chất ĐHST ánh sáng đến khả nhân nhanh thể chồi lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai 39 3.2.3 Kết ảnh hưởng chất ĐHST ánh sáng đến khả nhân nhanh chồi lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai 43 3.2.4 Kết ảnh hưởng chất ĐHST ánh sáng đến khả rễ tạo lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai in vitro hoàn chỉnh 48 3.2.5 Kết huấn luyện trồng in vitro vườn ươm lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai 52 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 PHỤ LỤC v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Nghĩa đầy đủ Chữ viết tắt BAP C CT Benzyl amino purine-6 Nhân nhanh chồi Công thức CTAB Cetyl trimethyl ammonium bromide CTTN Cơng thức thí nghiệm ĐC Đối chứng ddNTP Dideoxy nucleotide tri phosphate ĐHST Điều hòa sinh trưởng DNA Deoxyribonucleic acid EBA Extraction bufer A EBB Extraction bufer B IAA Indol acetic acid IBA Indole-3- butyric acid LED Light emitting diode MS Murashige& Skoog, 1962 NAA Naphthyl acetic acid NCBI National Center for Biotechnology Information PCR Polymerase Chain Reaction RR Ra rễ TC Nhân nhanh thể chồi vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số nhóm chi Lan Hoảng thảo Bảng 2.1 Trình tự cặp mồi sử dụng nghiên cứu 18 Bảng 2.2 Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến kết tạo mẫu lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai 20 Bảng 2.3 Ảnh hưởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh thể chồi phi điệp năm cánh trắng mắt nai 21 Bảng 2.4 Ảnh hưởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi phi điệp năm cánh trắng mắt nai 22 Bảng 2.5 Ảnh hưởng chất ĐHST đến khả rễ lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai 23 Bảng 3.1 Kết so sánh trình tự vùng gen ycf ngân hàng gen NCBI 29 Bảng 3.2 Kết so sánh trình tự vùng gen rbcL ngân hàng gen NCBI 32 Bảng 3.3 Kết so sánh trình tự vùng gen trnH-psbA ngân hàng gen NCBI 35 Bảng 3.4 So sánh khả phân biệt vùng gen ycf, trnH-psbA rbcL với loài Dendrobium tosaense 36 Bảng 3.5 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai 37 Bảng 3.6 Kết ảnh hưởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh thể chồi lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai 40 Bảng 3.7 Kết ảnh hưởng ánh sáng đến khả nhân nhanh thể chồi lan phi điệp năm cánh trắng 42 Bảng 3.8 Kết ảnh hưởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai 44 Bảng 3.9 Kết ảnh hưởng ánh sáng đến khả nhân nhanh chồi lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai 47 vii Bảng 3.10 Kết ảnh hưởng chất ĐHST đến khả rễ chồi lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai 49 Bảng 3.11 Kết ảnh hưởng ánh sáng đến khả rễ lan phi điệp năm cánh trắng 51 viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1 Kết tách DNA tổng số lan Phi điệp năm cánh trắng mắt nai 26 Hình 3.2 Kết khuếch đại vùng gen mẫu lan Phi điệp năm cánh trắng mắt nai 27 Hình 3.3 Trình tự vùng gen ycf lan Phi điệp năm cánh trắng mắt nai 28 Hình 3.4 Cây phân loại dựa vào trình tự vùng gen ycf tạo NCBI 29 Hình 3.5 Trình tự nucleotide vùng gen rbcL mẫu phi điệp năm cánh trắng mắt nai 31 Hình 3.6 Cây phân loại dựa vào trình tự vùng gen rbcL tạo NCBI 32 Hình 3.7 Trình tự nucleotide vùng gen trnH-psbA mẫu phi điệp năm cánh trắng mắt nai 34 Hình 3.8 Cây phân loại dựa vào trình tự vùng gen trnH-psbA tạo NCBI 35 Hình 3.9 Thể chồi lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai tái sinh môi trường nuôi cấy khởi đầu sau tuần 39 Hình 3.10 Thể chồi lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai môi trường nhân nhanh thể chồi 41 Hình 3.11 Thể chồi lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai nuôi cấy điều kiện ánh sáng khác 43 Hình 3.12 Chồi lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai sau 8-10 tuần nuôi cấy môi trường nhân nhanh chồi 46 Hình 3.13 Chồi lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai sau 6-8 tuần nuôi cấy với điều kiện ánh sáng khác 48 Hình 3.14 Cây lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai rễ hồn chỉnh mơi trường rễ RR4 50 Hình 3.15 Cây lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai trồng vào giá thể sau khoảng thời gian 52 Sơ đồ 3.1 Sơ đồ hóa quy trình nghiên cứu Nhân giống lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai phương pháp nuôi cấy in vitro 53 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Từ xưa đến nay, hoa lan sử dụng làm cảnh quý, đẹp màu sắc mà hình dáng từ đường nét cánh hoa hình dáng thân Phải nói có lồi hoa sánh vẻ đẹp mùi hương quyến rũ, tao chúng Chính vậy, hoa lan xem biểu tượng khiết, cao quý vương giả [16] Chi lan Hoàng thảo (Dendrobium) chi quan trọng họ Orchidaceae với số lượng lớn, đa dạng hình dáng, màu sắc kích thước với 1148 loài khác nhau, đứng sau chi lan Lọng (Bulbophyllum) [26] Hoàng thảo phân bố vùng Châu Úc Châu Á, khu vực Đông Nam Á xem quê hương chi lan với hàng trăm lồi riêng Việt Nam có 100 loài phân bố rộng khắp vùng miền nước [7,9,5,20] Lan Phi điệp hay gọi lưỡng điểm hạc, lan giả hạc hay lan giả hạc tím lồi thuộc chi lan Hồng thảo người chơi u thích Ngồi dịng thơng thường lan phi điệp đột biến săn lùng khắp nơi để sở hữu giỏ lan đặc sắc giá từ vài trăm triệu đến hàng tỷ đồng Một số dòng lan đột biến gen, lạ hình dáng độc mặt hoa lôi hấp dẫn người chơi như: năm cánh trắng mắt nai, năm cánh trắng Trường Sa, năm cánh trắng Hịa Bình, năm cánh trắng đại ngàn, năm cánh trắng kim,… Cơng tác nhân giống dịng lan đột biến quý việc làm vô quan trọng phục vụ cho việc cung cấp giống trì nguồn gen Tuy nhiên, tự nhiên nội nhũ phôi hạt lan thường bị tiêu giảm muốn nảy mầm phải có xuất nấm cộng sinh Rhiroctonia nên khả tự nảy mầm thấp Bên cạnh đó, nhân giống đường sinh dưỡng 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Huỳnh Hữu Đức, Nguyễn Hoàng Cẩm Tú, Nguyễn Hoàng Duy Linh, Nguyễn Thị Từ Vy, Nguyễn Thị Xuân Hiền, Nguyễn Trường Giang, Lâm Vỹ Nguyên, Dương Hoa Xô (2020), “Nghiên cứu ảnh hưởng loại đèn led khác lên sinh trưởng lan Dendrobium Caesar white in vitro”, Hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc, Tr 947-953 Vũ Kim Dung, Nguyễn Văn Việt, Bùi Văn Thắng (2016), “Nhân giống lan Hoàng thảo ý thảo ba màu (Dendrobium gratiosissimum Reichenb.f) kỹ thuật ni cấy in vitro”, Tạp chí Khoa học cơng nghệ lâm nghiệp, số 6, Tr 156-161 Vũ Đình Duy (2019), “Sử dụng trình tự nucleotide vùng gen nhân (ITSrRNA) để xác định loài lan thuộc chi lan Hoàng thảo (Dendrobium)”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ nhiệt đới, số 18, Tr 3-12 Nguyễn Thị Mỹ Duyên (2009), Nhân giống lan Dendrobium anosmum, Dendrobium mini phương pháp nuôi cấy mô, nghiên cứu loại giá thể trồng lan Dendrobium thích hợp cho hiệu cao, Đề tài nghiên cứu khoa học cấp trường, Đại học An Giang Trần Hợp (1998), Phong lan Việt Nam, Nxb Nơng nghiệp, Tp Hồ Chí Minh Bùi Thị Mai Hương, Nguyễn Văn Việt, Hà Văn Huân (2021), “Xác định mã vạch DNA phục vụ giám định loài lan Phi điệp tím Hịa Bình (Dendrobium sp.)”, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nông thôn, kỳ tháng 4/2021, tr 40-45 Dương Đức Huyến (2007), Thực vật chí Việt Nam-Flora of VietNam, Nxb Khoa học kĩ thuật, Hà Nội 67 Nguyễn Thị Lài , Phạm Hương Sơn , Vũ Mạnh Hải , Tống Xuân Trung (2018) “Nghiên cứu nhân giống lan Hoàng thảo Nghệ tâm (Dendrobium loddigesii Rolfe) phương pháp nuôi cấy lát mỏng tế bào”, Tạp chí Khoa học cơng nghệ Việt Nam, 60 (5) Nguyễn Xuân Linh, (2002), Điều tra thu thập, đánh giá bảo tồn nguồn gen hoa cảnh khu vực miền Bắc Việt Nam, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 10 Nguyễn Thị Hà Phượng Loan (2020), “Xác định thị DNA-barcode nhân giống in vitro loài lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai (Dendrobium anosmum)” Khóa luận tốt nghiệp – Đại học Lâm nghiệp 11 Lê Thị Mận, Nguyễn Hoàng Tùng, Nguyễn Thị Hồng Gấm (2019), “Ảnh hưởng ánh sáng đơn sắc nuôi cấy mơ lan Hồng thảo kèn (Dendrobium lituiflorum) in vitro”, Tạp chí Khoa học cơng nghệ lâm nghiệp số 3, tr 20-26 12 Phạm Minh Quang, Dương Công Kiên, Qch Ngơ Diễm Phương, Hồng Thị Thanh Minh, (2018) “Vi nhân giống vườn ươm lan nắng Dendrobium caesar”, Science And Technology Development Journal: Natural Sciences, số (3) 13 Nguyễn Thị Sơn, Nguyễn Thị Lý Anh, Vũ Ngọc Lan, Trần Thế Mai (2011), “Nhân giống in vitro giống lan Dendrobium fimbriatum (Lan Hoàng Thảo Long nhãn)”, Tạp chí Khoa học Phát triển Nơng nghiệp, tập 10 (2), tr 263 - 271 14 Nguyễn Văn Song (2011), “Nhân nhanh in vitro lan Kim Điệp (Dendrobium chrysotoxum) - lồi lan rừng có nguy tuyệt chủng”, Tạp chí khoa học Đại học Huế, số 64, tr 127 - 136 15 Lê Thị Thúy, Trần Thị Anh Thoa (2017), “Ảnh hưởng ánh sáng đèn led lên sinh trưởng Dendrobium lituiflorum Lindl Dendrobium Shavin White”, Tạp chí Khoa học cơng nghệ Thực phẩm, tập 13 (1), tr 68-73 68 16 Nguyễn Quỳnh Trang, Vũ Thị Huệ, Khuất Thị Hải Ninh, Nguyễn Thị Thơ (2013), “Nhân giống in vitro Lan Phi điệp tím (Dendrobium anosmum)”, Tạp chí Khoa học cơng nghệ lâm nghiệp, Kỳ I (3), tr 16-21 17 Đỗ Thành Trí, Trần Duy Dương, Trần Hoàng Dũng, Trần Lệ Trúc Hà, Vũ Thị Huyền Trang (2012), “Ứng dụng công nghệ DNA để phân loại nhận diện lan hoàng thảo trầm rừng (Dendrobium parishii) phi điệp (Dendrobium anosmum) Việt Nam”, Tạp chí Nơng Nghiệp Phát Triển Nơng Thơn, kỳ tháng 9/2012, tr 3-18 18 Nguyễn Thanh Tùng, Lê Văn Điệp, Nguyễn Minh Trung, Trương Thị Bích Phượng (2010), “Áp dụng phương pháp nuôi cấy lát mỏng tế bào nhân giống in vitro Hoàng lan thân gãy (Dendrobium aduncum)”, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, (3), tr 361 - 367 Tài liệu Tiếng Anh 19 Asahina H., Shinozaki J., Masuda K., Morimitsu Y., and Satake M (2010), “Identification of medicinal Dendrobium species by phylogentic analyses using matK and rbcL sequences”, J Nat Med, 64(2), tr 133-138 20 Averyanow L.V (2004), “Dendrobium tuanahii Aver Orchid”, American Orchid Scoiety, tr 134-136 21 Bijaya Pant, Deepa Thapa (2012), “In vitro mass propagation of an epiphytic orchid, Dendrobium primulinum Lindl through shoot tip culture”, African Journal of Biotechnology Vol 11 (42), tr 9970 - 9974 22 Chase M.W, Robyn S Cowan , Peter M Hollingsworth , Cassio van den Berg , Santiago Madriñán , Gitte Petersen , Ole Seberg , Tina Jørgsensen , Kenneth M Cameron6 , Mark Carine , Niklas Pedersen , Terry A.J Hedderson , Ferozah Conrad , Gerardo A Salazar, James E Richardson , Michelle L Hollingsworth , Timothy G Barraclough, Laura Kelly & Mike Wilkinson (2007), “A proposal for a st and ardised protocol to barcode all DNA plants”, Taxon, 56 (2), tr 295-299 69 23 Hebert, P.D., Cywinska A., and Ball S.L (2003), “Biological identifications through DNA barcodes”, Proceedings of the Royal Society of London B: Biological Sciences, 270 (1512), tr 313-321 24 Hollingsworth M.L, and Clark A., et al (2009), “Selecting barcoding loci for plants: evaluation of seven candidate loci with species-level sampling in three divergent groups of land plants”, Molecular Ecology Resources, (2), tr 439-457 25 Hollingsworth, P.M (2011), “Refining the DNA barcode for DNA plants”, Proceedings of the National Academy of Sciences, 108 (49), tr 19451-19452 26 Leitch I.J, Kahandawala I, Suda J, Hanson L, Ingrouille M.J, Chase M.W and Fay M.F (2009), “Genome size diversity in orchids: consequences and evolution”, Annals of Botany, (104), tr.469-481 27 Logacheva, M., Penin A., Samigullin T., Vallejo-Roman C., DNA Antonov A (2007), “Phylogeny of flowering plants by the chloroplast genome sequences: in search of a “lucky gene” Biochemistry (Moscow), 72 (12), tr 1324-1330 28 Maridass M., Mahesh R., Raju G.A., Muthuchelian K (2010), “In vitro propagation of Dendrobium nanum through rhizome bud culture”, International Journal of Biological Technology, 1(2), tr 50 - 54 29 Mortensen L M., Stromme E.(1987), “Effects of light quality on some greenhouse crops”, Scientia Horticulturae, 33, tr 27-36 30 Peter M Hollingsworth, Laura L Forrest, John L Spouge, Mehrdad Hajibabaei, Sujeevan Ratnasingham,et al (2009), “A DNA barcode for land plants”, Proceedings of the National Academy of Sciences, 106 (31), tr 12794-12797 31 Sana A., Touqeer A., Ishfaq A H., Mehwish Y(2011), “In vitro propagation of orchid (Dendrobium nobile) var Emma white”, African Journal of Biotechnology 10(16), tr 3097 – 3103 70 32 Taberlet P., Eric C., Franỗois P., Ludovic G., Christian M., Alice V., Thierry V., Gérard C., Christian B., and Eske W (2007), “Power and limitations of the chloroplast trnL (UAA) intron for plant DNA barcoding”, Nucleic Acids Res, 35(3), tr 14 33 Wang D-Y, Wang Q, Wang Y-L, Xiang X-G, Huang L-Q, Jin X-H (2017) “Evaluation of DNA barcodes in Codonopsis (Campanulaceae) and in some large angiosperm plant genera”, PLoS ONE, 12(2) 34 Yao H., Song J.Y., Ma X.Y., Liu C., Li Y., Xu H.X., Han J.P., Duan L.S., Chen S.L (2009), “Identification of Dendrobium species by a candidate DNA barcode sequence: the chloroplast psbA-trnH intergenic region”, Planta Med., 75(6), tr 667-669 PHỤ LỤC Phụ biểu 01: Môi trường MS (MURASHIGE & SKOOG, 1962) Các thành phần môi trường Hàm lượng (mg/l) KNO3 1900 NH4NO3 1650 MgSO4.7H2O 370 KH2PO4 170 CaCl2 332 H3BO5 6,2 MnSO4.H2O 22,3 ZnSO4 8,6 Na2MoO4 0,25 CuSO4 7H2O 0,025 CoCl2 0,025 FeSO4.7H2O 27,8 Na2EDTA 37,3 Glycin Myo-Inositol 100 Thiamine HCl 0,1 Axit nicotinic 0,5 Pyridoxine HCl 0,5 Phụ biểu 02 Phân tích phương sai nhân tố ảnh hưởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh thể chồi lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai Test of Homogeneity of Variances Hesonhannhanhthechoi Levene Statistic df1 6.611 df2 Sig 14 002 ANOVA Hesonhannhanhthechoi Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square F 38.955 6.492 1.452 14 104 40.407 20 Sig 62.591 000 Hesonhannhanhthechoi Duncan Subset for alpha = 0.05 Congthuc N Sig TC1 TC2 TC3 4.4067 TC6 4.8167 TC4 TC5 1.5600 2.4800 3.2200 4.8167 5.0000 5.0000 5.5533 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 1.000 141 497 054 Phụ biểu 03 Phân tích phương sai nhân tố ảnh hưởng ánh sáng đến khả nhân nhanh thể chồi lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai Test of Homogeneity of Variances Hesonhanthechoi Levene Statistic df1 df2 005 Sig 995 ANOVA Hesonhanthechoi Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 1.883 942 227 038 2.110 F 24.921 Hesonhanthechoi Duncan Subset for alpha = 0.05 Anhsang N AS1 AS3 AS2 Sig 6.4433 6.8900 7.5567 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Sig .001 Phụ biểu 04 Phân tích phương sai nhân tố ảnh hưởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi lan Test of Homogeneity of Variances Hesonhannhanhchoi Levene Statistic df1 3.180 df2 Sig 14 035 ANOVA Hesonhannhanhchoi Sum of Squares Between Groups Mean Square F 41.837 6.973 445 14 032 42.281 20 Within Groups Total df Sig 219.600 000 Hesonhannhanhchoi Duncan Subset for alpha = 0.05 congthuc N ĐC C1 C2 C3 4.7433 C4 4.9267 C5 C6 Sig 1.3700 2.5167 3.7800 4.9267 5.1833 5.1833 5.4033 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 .228 100 153 Phụ biểu 05 Phân tích phương sai nhân tố ảnh hưởng ánh sáng đến khả nhân nhanh chồi lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai Test of Homogeneity of Variances Hesonhanchoi Levene Statistic df1 df2 005 Sig 995 ANOVA Hesonhanchoi Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 4.156 2.078 227 038 4.383 F 54.991 Hesonhanchoi Duncan Subset for alpha = 0.05 Anhsang N AS3 AS1 AS2 Sig 5.7800 6.5567 7.4433 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 1.000 Sig .000 Phụ biểu 06 Phân tích phương sai nhân tố ảnh hưởng chất ĐHST đến khả rễ tạo lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai hoàn chỉnh Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic df1 df2 Sig Tylerare 3.200 12 046 SoreTB 626 12 683 1.042 12 437 ChieudaireTB ANOVA Sum of Squares Between Groups Tylerare 1655.874 36.963 12 3.080 8316.333 17 16.969 3.394 075 12 006 17.044 17 7.524 1.505 118 12 010 7.642 17 Within Groups Total Between Groups ChieudaireTB F Between Groups SoreTB Mean Square 8279.370 Within Groups Total df Within Groups Total Sig 537.578 000 541.085 000 153.296 000 Tylerare Duncan Congthuc Subset for alpha = 0.05 N ĐC RR2 RR1 RR3 RR5 RR4 Sig 28.8900 57.7800 67.7800 71.1100 77.7800 100.0000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 1.000 1.000 1.000 1.000 SoreTB Duncan Subset for alpha = 0.05 Congthuc N ĐC RR2 RR1 RR3 RR5 RR4 3 1.9633 3.3667 3.9200 4.1100 4.4567 5.0467 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 ChieudaireTB Duncan Subset for alpha = 0.05 Congthuc N ĐC RR1 4.3833 RR5 4.4900 RR2 RR3 RR4 Sig 3.4700 4.6967 4.9400 5.6233 1.000 212 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 1.000 1.000 1.000 Phụ biểu 07 Phân tích phương sai nhân tố ảnh hưởng ánh sáng đến khả rễ tạo lan phi điệp năm cánh trắng mắt nai hoàn chỉnh Test of Homogeneity of Variances SoreTB ChieudaireTB SolaTB Levene Statistic df1 df2 Sig .848 459 682 2 6 474 653 541 ANOVA Sum of Squares Between Groups SoreTB SolaTB Mean Square 3.094 1.547 033 005 3.127 Between Groups 196 098 Within Groups 006 001 Total 202 Between Groups 691 345 Within Groups 010 002 Total 700 Within Groups Total ChieudaireTB df SoreTB Duncan Anhsang N AS3 AS1 AS2 Sig 3 Subset for alpha = 0.05 4.9300 5.2100 1.000 1.000 6.2900 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 F Sig 283.024 000 102.802 000 217.406 000 ChieudaireTB Duncan Anhsang Subset for alpha = 0.05 N AS3 AS1 AS2 3 5.8700 5.9533 6.2167 Sig 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 SolaTB Duncan Anhsang Subset for alpha = 0.05 N AS1 AS3 AS2 Sig 5.7000 6.1433 6.3667 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000