Nghiên Cứu Tính Đa Hình Gen Stat5B Và Stat6 Ở Bệnh Nhân Ung Thư Biểu Mô Tế Bào Gan Có Hbsag (+) (Full Text).Docx

1. ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư biểu mô (UTBM) tế bào gan là loại ung thư gan nguyên phát thường gặp đứng hàng thứ 6 trong tổng số các bệnh lý ác tính trên toàn thế giới với tỷ lệ tử vong đứng hàng thứ ba trong tổng số các ca tử vong liên quan đến ung thư chỉ sau ung thư phổi và ung thư đại trực tràng [1]. Có nhiều yếu tố nguy cơ dẫn đến UTBM tế bào gan, trong đó hay gặp nhất là nhiễm virus viêm gan B (Hepatitis B virus - HBV) chiếm khoảng 54% số trường hợp xét trên phạm vi toàn cầu, sau đó đến nhiễm virus viêm gan C chiếm 31% và 15% còn lại là các yếu tố nguy cơ khác (lạm dụng rượu, sử dụng thức ăn có Aflatoxin, bệnh gan nhiễm mỡ không do rượu…) [2], [3]. Tại Việt Nam, tỷ lệ UTBM tế bào gan liên quan đến nhiễm HBV cũng chiếm đa số (62,3%) [4]. Tuy nhiên, không phải tất cả bệnh nhân nhiễm HBV đều tiến triển thành UTBM tế bào gan. Nhiễm HBV có thể gây viêm gan cấp tính tự hồi phục, hoặc tiến triển viêm gan mạn tính, xơ gan, thậm chí chỉ trở thành người mang HBV mạn không triệu chứng [5]. Nguyên nhân dẫn đến sự khác biệt hiện nay vẫn còn nhiều tranh luận. Do đó, nghiên cứu cơ chế gây bệnh của HBV, sự tương tác giữa HBV với các yếu tố liên quan của cơ thể vật chủ để trên cơ sở đó giúp tiên lượng và tìm ra phương pháp điều trị hiệu quả vẫn là một chủ đề hấp dẫn hiện nay. Trong cơ chế hình thành, tiến triển của ung thư nói chung và UTBM tế bào gan nói riêng có sự hoạt hóa bất thường của nhiều con đường tín hiệu nội bào như con đường Wnt/β-catenin, PI3K/Akt/mTOR, Ras/Raf/MAPK, JAK/STAT, Ubiquitin-Proteasome [6]. Đáng chú ý, con đường tín hiệu Janus kinase/signal transducer and activator of transcription (JAK/STAT) đóng vai trò quan trọng trong dẫn truyền tín hiệu của nhiều cytokine và yếu tố tăng trưởng, chịu trách nhiệm cho các hoạt động chức năng tế bào như tăng trưởng tế bào, duy trì tế bào gốc, biệt hóa tế bào, cũng như điều hòa đáp ứng miễn dịch và đáp ứng viêm [7], [8]. Do vậy con đường tín hiệu này có liên quan mật thiết với nhiều bệnh truyền nhiễm, dị ứng và ung thư [7], [9], [10]. Trong số 7 thành viên của gia đình STAT, nhiều nghiên cứu chỉ ra STAT1, STAT2 và STAT4 thể hiện tác động ức chế hình thành ung thư (trong đó có UTBM tế bào gan) cả in vitro và in vivo; ngược lại STAT3 được chứng minh là tác nhân sinh ung thư, kích thích tăng sinh mạch, duy trì quần thể tế bào gốc ung thư, từ đó thúc đẩy sự phát triển, xâm lấn và di căn UTBM tế bào gan [11]. Với STAT5 (gồm STAT5a và STAT5b), STAT6 gần đây đã có một số nghiên cứu công bố về mức độ tăng biểu hiện các gen này trong mô UTBM tế bào gan cao hơn so với mô gan không u [12], [13]. Tuy nhiên, nghiên cứu về tính đa hình của gen STAT5 (nhất là STAT5b) và đặc biệt STAT6 trong mối liên quan với UTBM tế bào gan thì còn khá ít. Về tính đa hình gen STAT5b, tổng quan y văn trên thế giới ghi nhận một điểm đa hình nucleotide đơn (SNP) rs6503691 có liên quan đến bệnh ung thư vú và một số bệnh ung thư máu (bệnh bạch cầu tủy cấp, bạch cầu tủy mạn…) [14], [15]. Trong khi đa hình gen STAT6 chủ yếu được nghiên cứu trên bệnh nhân có bệnh lý liên quan dị ứng như hen phế quản, eczema... và chưa có điểm đa hình nào của gen STAT6 được ghi nhận rõ ràng trong bệnh lý ung thư nói chung và UTBM tế bào gan nói riêng [16], [17] (mới chỉ nghiên cứu mức độ biểu hiện gen STAT5b, STAT6 trong mẫu mô UTBM tế bào gan [12], [13]). Do đó, vai trò của đa hình gen STAT5b và STAT6 trong UTBM tế bào gan ở bệnh nhân có HBsAg (+) cần thiết phải được nghiên cứu làm rõ. Xuất phát từ lý do trên chúng tôi tiến hành đề tài “Nghiên cứu tính đa hình gen STAT5b và STAT6 ở bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan có HBsAg (+)” với 2 mục tiêu: 1. Xác định tỷ lệ kiểu gen của đa hình gen STAT5b rs6503691 và một số đa hình gen STAT6 ở bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan có HBsAg (+). 2. Đánh giá mối liên quan giữa đa hình gen STAT5b rs6503691, một số đa hình gen STAT6 với nguy cơ ung thư và một số yếu tố của bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan có HBsAg (+).

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y LÊ QUANG NHỰT NGHIÊN CỨU TÍNH ĐA HÌNH GEN STAT5b VÀ STAT6 Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ BIỂU MƠ TẾ BÀO GAN CĨ HBsAg (+) LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Hà Nội - 2023 MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Dịch tễ học ung thư biểu mô tế bào gan 1.1.1 Trên giới 1.1.2 Tại Việt Nam 1.2 Chẩn đốn ung thư biểu mơ tế bào gan 1.2.1 Lâm sàng 1.2.2 Xét nghiệm dấu ấn ung thư 1.2.3 Các phương pháp chẩn đốn hình ảnh .8 1.2.4 Phương pháp mô bệnh học tế bào học 10 1.2.5 Đánh giá giai đoạn ung thư biểu mô tế bào gan .11 1.3 Cơ chế bệnh sinh ung thư biểu mô tế bào gan nhiễm virus viêm gan B 12 1.3.1 Cơ chế bệnh sinh chung 12 1.3.2 Cơ chế bệnh sinh nhiễm virus viêm gan B gây ung thư biểu mô tế bào gan 14 1.4 Con đường tín hiệu JAK/STAT 17 1.4.1 Cấu trúc phân tử STATs 18 1.4.2 Hoạt động đường tín hiệu JAK/STAT 19 1.4.3 Vai trò STAT ung thư biểu mô tế bào gan 22 1.5 Gen STAT5b STAT6 25 1.5.1 Gen STAT5b 25 1.5.2 Gen STAT6 30 1.6 Tình hình nghiên cứu đa hình gen STAT5b, STAT6 bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan giới Việt Nam 38 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 39 2.1 Đối tượng nghiên cứu .39 2.1.1 Nhóm nghiên cứu .39 2.1.2 Nhóm chứng 39 2.2 Phương pháp nghiên cứu 40 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 40 2.2.2 Cỡ mẫu phương pháp chọn mẫu 40 2.2.3 Địa điểm, thời gian nghiên cứu .41 2.2.4 Thiết bị, hóa chất dùng nghiên cứu .41 2.3 Các bước tiến hành nghiên cứu 44 2.3.1 Lựa chọn đối tượng nghiên cứu 44 2.3.2 Chuẩn bị mẫu máu cho phân tích đa hình gen 47 2.3.3 Phân tích đa hình gen 47 2.4 Các số nghiên cứu tiêu chuẩn chẩn đoán .51 2.4.1 Đặc điểm nhóm nghiên cứu .51 2.4.2 Đặc điểm đa hình gen STAT5b rs6503691 gen STAT6 53 2.4.3 Mối liên quan đa hình gen STAT5b rs6503691, STAT6 với nguy ung thư biểu mô tế bào gan số yếu tố UTBM tế bào gan 54 2.5 Phân tích xử lý số liệu .55 2.6 Đạo đức nghiên cứu 56 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 58 3.1 Đặc điểm nhóm nghiên cứu 58 3.1.1 Đặc điểm tuổi giới đối tượng nghiên cứu .58 3.1.2 Đặc điểm nhóm tuổi bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan 58 3.1.3 Đặc điểm lâm sàng bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan 59 3.1.4 Một số xét nghiệm bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan 60 3.1.5 Một số đặc điểm hình thái u gan .61 3.2 Đặc điểm phân bố kiểu gen đa hình gen STAT5b rs6503691 số đa hình gen STAT6 62 3.2.1 Đặc điểm phân bố kiểu gen alen đa hình gen STAT5b rs6503691 62 3.2.2 Đặc điểm phân bố kiểu gen alen đa hình gen STAT6 65 3.3 Mối liên quan đa hình gen STAT5b rs6503691, số đa hình gen STAT6 với nguy ung thư biểu mơ tế bào gan số yếu tố 73 3.3.1 Mối liên quan đa hình gen STAT5b rs6503691 với nguy ung thư biểu mô tế bào gan 73 3.3.2 Mối liên quan số đa hình gen STAT6 với nguy ung thư biểu mô tế bào gan 74 3.3.3 Mối liên quan đa hình gen STAT5b, STAT6 với số yếu tố bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan 78 3.3.4 Liên quan tổ hợp hai đa hình gen STAT6 rs703817 rs1059513 với ung thư biểu mô tế bào gan .84 CHƯƠNG BÀN LUẬN 93 4.1 Một số đặc điểm nhóm nghiên cứu 93 4.1.1 Đặc điểm tuổi giới 93 4.1.2 Đặc điểm số triệu chứng lâm sàng 96 4.1.3 Đặc điểm số xét nghiệm máu 98 4.1.4 Một số đặc điểm khối u gan .99 4.1.5 Đánh giá chức gan giai đoạn bệnh 103 4.2 Tỷ lệ kiểu gen đa hình gen STAT5b rs6503691 số đa hình gen STAT6 bệnh nhân ung thư biểu mơ tế bào gan có HBsAg (+) 105 4.2.1 Tỷ lệ kiểu gen alen đa hình gen STAT5b rs6503691 106 4.2.2 Tỷ lệ kiểu gen alen số đa hình gen STAT6 111 4.3 Mối liên quan đa hình gen STAT5b rs6503691, số đa hình gen STAT6 với nguy ung thư biểu mơ tế bào gan số yếu tố 117 4.3.1 Mối liên quan đa hình gen STAT6 rs1059513 rs703817 với nguy ung thư biểu mô tế bào gan .117 4.3.2 Mối liên quan đa hình gen STAT6 rs1059513 rs703817 với số yếu tố bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan 122 KẾT LUẬN 127 KIẾN NGHỊ .129 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH SÁCH CÁC ĐỐI TƯỢNG THAM GIA NGHIÊN CỨU DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Viết tắt AASLD Viết đầy đủ American Association for the Study of Liver AFP AFP-L3 ALT APASL Diseases (Hiệp hội nghiên cứu bệnh gan Hoa Kỳ) Alpha fetoprotein Alpha fetoprotein L3 Alanine transaminase The Asian-Pacific Association for the Study of the Liver (Hiệp hội nghiên cứu gan châu Á-Thái Bình 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 AST BCLC Dương) Aspartate transaminase Barcelona clinic liver cancer (Hệ thống phân loại Bilirubin TP Bilirubin TT CHT CLVT CS DCP DNA EASL lâm sàng ung thư gan Barcelona) Bilirubin toàn phần Bilirubin trực tiếp Cộng hưởng từ Cắt lớp vi tính Cộng Des-gamma-Carboxyprothrombin Deoxyribonucleic acid European Association for the Study of Liver (Hiệp HBsAg hội nghiên cứu bệnh gan Châu Âu) Hepatitis B surface antigen (Kháng nguyên bề mặt HBV HBx HCV IFN IL JAK miR PCR virus viêm gan B) Hepatitis B virus (Virus viêm gan B) Hepatitis B X protein Hepatitis C virus (Virus viêm gan C) Interferon Interleukin Janus kinase MicroRNA Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi RNA SNP polymerase) Ribonucleic acid Single nucleotide polymorphisms (Đa hình STT 27 28 29 30 31 32 33 34 35 Viết tắt Viết đầy đủ STAT TALTMC TBE nucleotide đơn) Signal transducer and activator of transcription Tăng áp lực tĩnh mạch cửa Tris base/boric acid/ethylenediaminetetraacetic TĐHT TLR TMC UTBM UTR WHO acid Thay đổi hình thái Toll-like Tĩnh mạch cửa Ung thư biểu mơ Untranslated region (khu vực không dịch mã) World Health Organization (Tổ chức y tế giới) DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 2.1 2.2 2.3 2.4 Tên bảng Trang Vai trò STAT5 số loại ung thư người 28 Thành phần phản ứng PCR mồi STAT5b .48 Thành phần phản ứng PCR mồi STAT6 50 Đánh giá chức gan theo Child-Pugh 52 Bảng phân loại giai đoạn ung thư biểu mô tế bào gan theo Barcelona 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 53 Đặc điểm tuổi giới đối tượng nghiên cứu .58 Đặc điểm nhóm tuổi bệnh nhân UTBM tế bào gan 58 Triệu chứng lâm sàng bệnh nhân UTBM tế bào gan .59 Kết số xét nghiệm máu bệnh nhân UTBM tế bào gan 60 Nồng độ AFP huyết tương 60 Một số đặc điểm u gan chẩn đốn hình ảnh 61 Đánh giá chức gan giai đoạn bệnh theo BCLC 62 Tỷ lệ kiểu gen, alen đa hình gen STAT5b rs6503691 nhóm 3.9 UTBM tế bào gan 63 Tỷ lệ kiểu gen, alen số đa hình gen STAT6 nhóm UTBM tế bào gan 67 3.10 Đa hình gen STAT5b rs6503691 với nguy UTBM tế bào gan 73 3.11 Đa hình gen STAT6 rs703817 rs1059513 với nguy UTBM tế bào gan (nhóm chứng người khỏe mạnh) .75 3.12 Đa hình gen STAT6 rs703817 rs1059513 với nguy UTBM tế bào gan (nhóm chứng xơ gan) 76 3.13 Đa hình gen STAT6 rs703817 rs1059513 với nguy UTBM tế bào gan (nhóm chứng khơng UTBM tế bào gan) 77 3.14 Mối liên quan đa hình gen STAT5b rs6503691, STAT6 rs703817, rs1059513 với tuổi 78 3.15 Mối liên quan đa hình gen STAT5b rs6503691 STAT6 rs703817, rs1059513 với gánh nặng khối u bệnh nhân UTBM tế bào gan 79 3.16 Mối liên quan đa hình gen STAT5b rs6503691 STAT6 rs703817, rs1059513 với số kết xét nghiệm máu 81 3.17 Mối liên quan đa hình gen STAT5b rs6503691 STAT6 rs703817, rs1059513 với giai đoạn UTBM tế bào gan theo BCLC 83 3.18 Phân bố tổ hợp đa hình gen STAT6 rs703817 rs1059513 Bảng Tên bảng Trang nhóm UTBM tế bào gan so với người khỏe mạnh 85 3.19 Phân bố tổ hợp đa hình gen STAT6 rs703817 rs1059513 nhóm UTBM tế bào gan so với nhóm xơ gan 86 3.20 Phân bố tổ hợp đa hình gen STAT6 rs703817 rs1059513 nhóm UTBM tế bào gan so với nhóm khơng ung thư 87 3.21 Tổ hợp đa hình gen STAT6 rs703817 rs1059513 với nguy UTBM tế bào gan (nhóm chứng người khỏe mạnh) 88 3.22 Tổ hợp đa hình gen STAT6 rs703817 rs1059513 với nguy UTBM tế bào gan (nhóm chứng xơ gan) .88 3.23 Tổ hợp đa hình gen STAT6 rs703817 rs1059513 với nguy UTBM tế bào gan (nhóm chứng khơng UTBM tế bào gan) 89 3.24 Tổ hợp đa hình gen STAT6 rs703817 rs1059513 với tuổi bệnh nhân UTBM tế bào gan 89 3.25 Tổ hợp đa hình gen STAT6 rs703817 rs1059513 với gánh nặng khối u bệnh nhân UTBM tế bào gan 90 3.26 Tổ hợp đa hình gen STAT6 rs703817 rs1059513 với số kết xét nghiệm máu bệnh nhân UTBM tế bào gan .91 3.27 Tổ hợp đa hình gen STAT6 rs703817 rs1059513 với giai đoạn UTBM tế bào gan theo BCLC 92 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ Tên biểu đồ Trang 3.1 So sánh phân bố kiểu gen đa hình gen STAT5b rs6503691 3.2 nhóm UTBM tế bào gan, xơ gan người khỏe mạnh 64 So sánh phân bố kiểu alen đa hình gen STAT5b rs6503691 3.3 nhóm UTBM tế bào gan, xơ gan người khỏe mạnh 65 So sánh phân bố kiểu gen đa hình gen STAT6 rs324015 nhóm 3.4 UTBM tế bào gan, xơ gan người khỏe mạnh 69 So sánh phân bố kiểu alen đa hình gen STAT6 rs324015 3.5 nhóm UTBM tế bào gan, xơ gan người khỏe mạnh 69 So sánh phân bố kiểu gen đa hình gen STAT6 rs4559 nhóm 3.6 UTBM tế bào gan, xơ gan người khỏe mạnh 70 So sánh phân bố kiểu alen đa hình gen STAT6 rs4559 nhóm 3.7 UTBM tế bào gan, xơ gan người khỏe mạnh 70 So sánh phân bố kiểu gen đa hình gen STAT6 rs703817 nhóm 3.8 UTBM tế bào gan, xơ gan người khỏe mạnh 71 So sánh phân bố kiểu alen đa hình gen STAT6 rs703817 3.9 nhóm UTBM tế bào gan, xơ gan người khỏe mạnh 71 So sánh phân bố kiểu gen đa hình gen STAT6 rs1059513 3.10 nhóm UTBM tế bào gan, xơ gan người khỏe mạnh 72 So sánh phân bố kiểu alen đa hình gen STAT6 rs1059513 nhóm UTBM tế bào gan, xơ gan người khỏe mạnh 72