BOY TE
BAO CAO KET QUA NGHIEN CUU DE TAI CAP BO
NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT THUỐC
LIPIDAN DIEU TRI ROI LOẠN LIPID MAU
Chủ nhiệm đẻ tài: PGS TS Phạm Vũ Khánh
Co quan chủ trì đề tài: Học viện Y - Dược học cổ truyền Việt Nam
8444,
Trang 2BAO CAO KET QUA NGHIEN CUU DE TAI CAP BO
Trang 3cAc CHU VIET TAT
ALT aspartate amino transferase
AST alanin amino transferase BC bạch cầu BCTT bạch cầu trung tính CCT chuột cống trắng, CNT chuột nhắt trắng dd dung dich
DĐVNII Dược 'Việt Nam lần xuất bản thứ 3 DĐVNIV Dược điển Việt Nam lần xuất bản thứ 4 Hb hemoglobin Hc hồng cầu Het hematocrit hd hén dich HDL-C _ high density lipoprotein cholesterol KQ két qua LDL-C _ low density lipoprotein cholesterol LPD LIPIDAN
MN micronucleus (vi nhan)
MN/CE_ tỷ lệ vinhan/té bao héng cầu đa sắc
NC nghiên cứu
NCE normochromatic erythrocyte: héng cau don sac (héng cau trưởng thành)
PCE polychromatic erythrocyte: héng cau da sic (héng cdu non)
Trang 4MỤC LỤC
ĐẶT VẤN ĐÈ CHUONG 1
TONG QUAN TAI LIEU
1 Sự chuyển hóa và tác dụng của lipid trong co thé 2 Nguyên nhân và cơ chế bệnh sinh rối loạn lipid máu
3 Tình hình nghiên cứu bào chế thuốc điều trị hội chứng rối loạn lipid máu
3.1 Ngoài nước 3.2 Trong nước
4 Quan niệm của y học cổ truyền về hội chứng rối loạn lipid máu 4.1 Nguyên tắc điễu trị chứng đàm am 4.2 Phương pháp điều trị đảm 5 VềthuốcLIPIDAN St Trần bi 3.2 Bán hạ nam 33 Bach linh 3.4 Mộc hương nam 3.5 Hậu phác nam 3.6 Nefigia bi chan chim 37 Somtra 5.8 Xutiển từ 3.9 Binh thương CHƯƠNG 2
NGUYÊN LIỆU, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 1 _ Nguyên liệu nghiên cúu
dd Công thực bài thuốc LIPIDAN
1.2 Hỗn dịch và dung dịch sử dụng trong nghiên cứu 2 — Đối tượng nghiên cứu
3 Phương pháp nghiên cứu
3.1 Nghiên củ bào chế viên nang LIPIDAN
3.2 Đứnh giá các chỉ số kỹ thuật của viên nang LIPIDAN
3.3 Theo đõi độ én dinh ctia thud
Trang 55 Xtrly s6 lia 28 6 _ Cách chọn mẫu, cố mẫu 28 6.1 Cách chọn mẫu 28 6.2 Cỡmẫu 28 7 Các biện pháp khống chế sai s 29 8 _ Vấn đề đạo đức trong nghiên cứu 29 CHUONG 3 30 KET QUA NGHIEN CUU 30 1 _ Quy trình sản xuất viên nang LIPIDAN 30
id, Tiêu chuẩn nguyên liệu 30
1.2 Sơ chế nguyên liệu 30
1.3 Phương pháp bào chế cao khô LIPIDA 31 1.4 Quy trinh bao chế viên nang LIPIDAN 34 ae 1S X8y dựng tiêu chuẩn thành phẩm
16 Theo đối độ Ôn định của thuốc 37
2 Độan toàn của thud 38 2.1 Độc tính cấp 38 2.2 Độc tinh ban cd 39 2.3 Ảnh hướng lâu dài của thuốc trên di truyền và sinh sản 46
3 Tac dụng của thuốc LIPIDAN trên thực nghiệm 49 3.1 Tác dụng điểu chỉnh nối loạn lipid mau cilia LIPIDAN theo co che ngoai sinh 49 3.2 Tác dụng điều chỉnh rồi loạn lipid máu của LIPIDANtheo cơ chế nội sinh 32 CHƯƠNG 4 34 BÀN LUẬN 34
1 _ Nghiên cứu bào chếthuốcLIPIDAN 34 id, Kiểm nghiệm thuốc nguyên liệu, bản thành phẩm 34
1.2 Nghiên cứu bào chế thuốc LIPIDAN, 34
2 _ Độc tính của thuốc LIPIDAN 35
2.1 Độc tính cấp và độc tính bản cấp 5S
2.2 Ảnh hưởng lâu dài của thuốc trên di truyền và sinh sản 56
Trang 6ĐẶT VẤN ĐỀ
Hội chứng rối loạn chuyển hóa lipid máu là một trong những tình trạng thường gặp ở các nước phát triển, có xu hướng tăng ngày càng nhanh ở các nước đang phát triển Đây là một trong những yếu tố nguy cơ quan trọng trong việc hình thành bệnh vữa xơ động mạch Ở nước ta, bệnh vữa xơ động mạch - với các biến chứng như suy động mạch vành, đột tử, nhỏi máu cơ tim, nhỏi máu não trước đây ít gặp - đang có xu hướng tăng nhanh theo nhịp độ phát triển của xã hội, dự báo sẽ trở thành một bệnh đáng lo ngại cho sức khỏe của người cao tuổi Ngoài bệnh vữa xơ động mạch, rồi loạn lipid máu cũng được coi là yếu tố nguy cơ quan trọng của một số bệnh tim mạch khác như: tăng huyết áp, đái tháo đường [1]2][9] Theo tài liệu của Tổ chức Y tế thế giới, ở các nước phát triển, tử vong nhiều nhất là do bệnh tim (32%) mà chủ yếu là do vữa xơ động mạch, 10i dén tai biến mạch máu não (139), nhiều hơn hẳn các loại bệnh khác [9] Giải quyết rối loạn chuyển hóa lipid máu đã trở thành một mục tiêu trong các biện pháp dự phòng tiên phát và thứ phát của các bệnh đó
Công thức thuốc LIPIDAN được thành lập dựa trên cơ sở lý luận của y học cổ truyền Đây là bài thuốc kinh nghiệm đã được sử dụng dưới dạng thuốc sắc, đùng để điều trị hội chứng rối loạn lipid máu trong nhiều năm cho kết quả khả quan
Để có thể sản xuất các chế phẩm thuốc cổ truyền trên đây chuyền công
nghiệp đạt tiêu chuẩn chất lượng theo quy định của Bộ Y tế, tạo điều kiện dễ
đàng trong việc bảo quản và sử dụng thuốc, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài với mục tiêu:
1 Xây đựng quy tình sẵn xuất thuốc & quy mé pilot 2 Xây đựng tiêu chuẩn cia thudc LIPIDAN
3 Thử tác đụng điều chink roi loan lipid mau cia thuốc trên súc vật thi nghiệm
Nội dung nghiên cứu chủ yếu:
~ Nghiên cứu quy trình sản xuất thuốc LIPIDAN quy mô pilot
~ Xác định độ an toàn của thuốc (độc tính cấp, bán cấp, ảnh hưởng của thuốc trên di truyền và sinh sản)
Trang 7CHUONG 1
TONG QUAN TAI LIEU
1 Sự chuyển hóa và tác dụng của lipid trong co thé
Trong cơ thể, lipid được chuyển hóa theo hai chu trình: ngoại sinh và nội sinh
-_ Chu trình ngoại sinh: lipid sau khi được đưa vào cơ thể qua đường thức ăn, một phần được tiêu hóa ngay từ tá tràng; tại đây, dưới tác dụng của men lipase, các acid béo được chuyển thành các dang tir do, từ đó hấp thu vào cơ thể theo đường tính mạch cửa để vào gan, tham gia vào chu trình nội sinh Còn lại, phần lớn lipid từ thức ăn kết hợp với muối mật thành đạng nhũ tương (sợi là chylomicron) rồi được hấp thu qua đường bạch mạch ruột để vào tuần hoàn chung
-_ Chu trình nội sinh: đây là chu trình tạo ra phần lớn lượng lipid trong cơ thể Tại gan, các sản phẩm chuyển hóa của cơ thể như: acetyl Co-enzym A, slycerol-3-phosphate sẽ tham gia vào quá trình tổng hợp thành acid béo và glycerin, từ đó tạo thành lipid trong cơ thể
Lipiđ được hấp thu vào cơ thể qua đường thức ăn và lipid được hình thành từ cơn đường nội sinh tại gan đều được đưa vào tuần hoàn chung bằng cách gắn với các apoprotein để tạo thành lipoprotein ty trong rat thap (VLDL - Very low density lipoprotein) ma thanh phan chi yéu 1a triglycerid
'VLDL theo đường tuần hồn tới mơ mỡ, sau khi trao phần lớn triglycerid cho mô mỡ, tỷ trọng tăng lên và lần lượt biến thành lipoprotein tỷ trọng trung gian (DL - Intermediate density lipoprotein) réi lipoprotein ty trong thap (LDL - Low density lipoprotein) gém da s6 18 cholesterol va phospholipid
Sau khi trao cholesterol cho các tế bào theo nhu cầu, LDL chuyển thành
lipoprotein ty trong cao (HDL - High density lipoprotein) HDL c6 tac dung vận chuyên cholesterol ra khỏi các mô ngoại vi về gan nếu mô thừa chất này [10]
Tác dụng của lipid trong cơ thể:
- _ Triglycerid được sử dụng vào việc cung cấp năng lượng cho cơ thể
-_ Cholesferol, phospholipid và một số ít triglycerid tham gia cấu tạo nên màng tế bào, màng các bào quan ở bào tương, thực thi một số chức năng trong tế bào Cholesterol còn là nguyên liệu ban đầu để tạo vitamin D, hormon sinh dục, hormon thượng thận và muối mật
Một người được cơi là có chỉ số lipid máu bình thường khi: - _ Cholesterol: < 5,2mmol (200mg/đL)
Trang 8- HDL-C: 20,9mmol/l (35mg/đL) - LDL-C: <3,4mmol/l (130mg/dL)
- Triglycemid: 17mmol/l - 2,3mmoll (150mg/dL - 200mg/dL) [2], [14], [15], [24]
2 Nguyên nhân và cơ ché bénh sinh réi loan lipid mau
Khi quá trình chuyển hóa lipid theo hai chu trình ngoại sinh và nội sinh diễn ra bình thường thì sẽ không xảy ra tình trạng rối loạn lipid máu Tình trạng này chỉ xảy ra khi các yếu tố tạo nên hai chu trình này bị tác động gây thừa hoặc thiếu [10] Các yếu tố đó bao gồm:
- _ Ăn quá nhiều chất béo bão hòa sẽ trực tiếp làm tăng li
làm tăng acetyl Co-enzym A (là nguyên liệu để tổng hợp lipid tại gan) Chất béo bão hòa có trong thức ăn có mỡ, đặc biệt là sữa và các sản phẩm từ sữa, thịt mỡ, bơ động vật, dầu đừa, dầu cọ, các loại bánh như bích quy, ga tô
- _ Ăn quá nhiều chất béo không bão hòa và không sử dụng các thức ăn chứa id máu, đồng thời chất béo bão hòa trong thời gian đài sẽ làm giảm nồng độ cholesterol trong máu nay chưa rõ, Cơ chế làm hạ lipid máu của các acid béo không bão hòa h
nhưng chất xơ sợi của thức ăn làm acid mật không thể tái hấp thu từ ruột vào máu; thiếu acid mật, gan sẽ đùng cholesterol tạo acid mật, do đó làm giảm cholesterol
- _ Ít vận động dẫn tới tình trạng béo phì: theo Tổ chức Y tế thế giới, béo phì là tình trạng tích lữy mỡ quá mức và không bình thường tại một vùng cơ thé hay toàn thân đến mức ảnh hưởng tới sức khỏe Tình trạng này gây nên sự tăng lipid một cách bất thường trong máu
-_ Uống rượu, hút thuốc lá cũng là những nguyên nhân gây rối loan lipid máu
-_ Rối loạn lipid máu thứ phát: đái tháo đường, rối loạn chức năng một số tuyến nội tiết (tuyến yên, tuyến giáp, tuyến thượng thận )
+ Đái tháo đường có kèm theo rối loạn lipid máu thường gặp ở người mắc đái tháo đường typ 2: do lượng glucose được đưa vào cơ thể quá nhiều, lượng insulin đo tụy bài tiết ra không đủ để đáp ứng cho việc vận chuyển slucose trong cơ thể, gây nên tình trạng đái tháo đường; đồng thời, glucose được vận chuyển vào cơ thể quá nhiều sẽ tới gan để tham gia vào quá trình tạo thành acid béo và triglycerid, từ đó gây rồi loạn lipid mau
+ Rối loạn chức năng một số tuyến nội tiết: một số tuyến nội tiết như
Trang 9chuyén héa lipid trong co thé Sự rối loạn chức năng của các tuyến nội tiết sẽ gây nên tình trạng rồi loạn lipid mau
-_ Ngoài ra, tình trạng rối loạn lipd máu còn có tính chất gia đình hoặc liên quan đến gen di truyền [2], [4], [14], [15], [24]
3 Tình hình nghiên cứu bào chế thuốc điều trị hội chứng rối loan lipid
máu
34 Ngodd nude
Hiện nay y học hiện đại có nhiều công trình nghiên cứu sản xuất thuốc điều trị hội chứng rối loạn lipid máu và đã tạo ra được các sản phẩm có tác dụng như: 3.1.1 Resin - bản chất là các nhựa trao đổi ion (Cholestyramin, Cholestipol) [1.1.9], [14], 15], [17], [24]
Một số nghiên cứu tiến hành với nhựa trao đổi ion như LRC (Lipid Research Clinic Coronary Primary Prevention Trial, 1984), CLAS (Cholesterol Lowering Atherosclerosis Study, 1987), SCOR (San Francisco Specialized Center of Research, 1990), STARS (St Thomas Atherosclerosis Regression Study, 1992) đã chứng minh hiệu lực của thuốc
- _ Tác đựng: thuốc uống không bị hấp thụ qua niêm mạc ruột, không bị các men tiêu hoá tác động, có khả năng trao đổi ion CÍ' với acid mật, làm cho acid mật ở dạng liên kết không bị hắp thu trở lại mà theo phân để thải ra ngoài; cắt chu trình ruột - gan của acid mật và làm giảm cholesterol, LDL-C, tăng nhẹ HDL-C Thuốc có thể làm tăng triglycerid và VLDL
- Tác dụng không mong muốn:
lễ gây đầy bụng, buồn nôn, táo bón, cản trở hấp thu các vitamin tan trong lipid và một số thuốc khác (đigitalis, thuốc chống đông máu, hormon tuyến giáp) khi qua ruột
3.1.2, Acid nicotinic (Dilexpal, Novacyl) [1], [2], [10], [14], 115], 117], [24] Các nghiên cứu chứng mỉnh tác dụng của thuốc: Coronary Drug Protect (1975), CLAS (Cholesterol Lowering Atherosclerosis Study, 1987), FATS (Familial Atherosclerosis Treatment Study, 1990)
- Téc đựng: với liều cao 2 - 6g/ngay, acid nicotinic lam giém VLDL; giém triglycerid đo ức chế quá trình tiêu lipid 6 tổ chức mỡ, làm giảm lượng acid béo cần thiết cho gan tổng hợp VLDL; tăng chuyển hoá VLDL, qua đó giảm LDL Ngoài ra, thuốc còn làm giảm lipoprotein(a), ting nhe HDL
- _ Tác dụng không mong muốn: dễ gây rối loạn tiêu hoá, cảm giác nóng rát dạ dày, suy thận, tăng nhãn áp
Trang 103.1.3 Cúc acid béo không no omega-3 (Maxepa) [1], [2], [10], [14], [15], [17], 24]
Nghiên cứu DART (Diet and Reinfaction Trial, 1989) dùng chế
cá hoặc Maxepa trong 2 năm thấy giảm 16% tái phát nhồi máu cơ tim, 299% tử vong so với placebo
- _ Tác đụng: các acid béo không no họ omega-3 được chiết xuất từ cá biển, có tác dụng làm giảm triglycerid và VLDL máu là chính; giảm nhẹ cholesterol, LDL; ting nhẹ HDL (hiệu lực chưa bằng Fibrat); làm giảm nguy cơ huyết khối
ăn nhiều
do tác động đến chuyển hoá của prostaglandin - _ Thuốc ít có tác dụng không mong muốn 3.1.4 Fibrat [1], [2], [10], [14], [15], 17], 24]
- Clofibrat (Misclerduon, Lipavion), benzafibrat (Bezalip), fenofibrat (Lipanthyl), gemfibrozil (Lopid)
-_ Các nghiên cứu về ñbrat: BECAIT (Bezafibrat Coronary Atheroclerosis Intervention Trial, 1996) vi bezafibrat; nghiên cứu của Hahmamn với fenofibrat (1991); HHS (Helssinski Heart Study, 1987) véi gemfibrozil Cac thuéc nay hiện nay đang lưu hành phổ biến ở nước ta
- Tác dụng: giảm dòng acid béo về gan, giảm tổng hợp VLDL, tăng độ thanh thải VLDL, giảm hình thành LDL nhỏ và đặc đễ gây vữa xơ động mạch, giảm oxy hoá LDL Kết quả là làm giảm cả triglycerid và cholesterol, giảm
VLDL va LDL, ting HDL; cdc fibrat con lam gidm két tập tiểu cầu, giảm
fibrinogen, acid uric mau Cac fenofibrat con 1am giảm lượng lipoprotein(a) gemfibrozil còn làm tăng tổng hop apoproteinAl va AIL
- Téc dung không mong muốn: đầy bụng, buồn nôn, ỉa lỏng, mẫn ngứa, có
thể tăng men gan, yếu cơ, sỏi mật
3.1.5 Statin [1], [2], [10], [14], [15], 117], 24]
- Fluvastatin (Lescol), lovastatin (Mevacor), pravastatin (Elisor), simvastatin (Zocor)
- C&c nghién cifu vé statin: 48 (Scandinavian Simvastatin Survival Study, 1994), MASS (Multicentre Anti-Atheroma Study, 1994), PLAC (Pravastatin Limitation of Atheroclerosis in the Coronary Arteries, 1993 - 1995) I va II, WOSCOPS (The West of Scotland Coronary Prevention Statin Study, 1995), REGRESS (The Regression Growth Evaluation Statin Study, 1995)
- _ Tác đụng: ức chế men HMGCoA reductase làm cản trở quá trình nội sinh cholesterol trong tế bào, tăng tổng hợp các cảm thụ cho LDL để tăng thoái giáng LDL theo con đường các cảm thụ Các statin làm giảm cholesterol là chính, làm
Trang 11
gidm nhe triglycerid va tăng nhẹ HDL
- Téc dụng không mong muốn: rối loạn tiêu hoá, đau đầu, nổi mẫn, đôi khi tăng các men gan, yếu cơ
Tuy nhiên, đa số các sản phẩm trên đều có những tác dụng không mong muốn, đặc biệt là khi người bệnh cần điều trị trong một thời gian đài [1], [2], [10], [14], [15], [17], 24]
Để hạn chế tác dụng không mong muốn của thuốc, giúp cho người bệnh yên tâm khi sử dụng, các nhà khoa học đã hướng đến việc nghiên cứu các thuốc có nguồn gốc từ thiên nhiên, trong đó có nghiên cứu sản xuất và sử dụng quả hướng thiên (Sky fruit) cia Larry Brookes (Mỹ) Một số nghiên cứu về việc sử dung céc sin phim cia sky fruit kết hợp với tân dược cho thấy hiệu quả hạ lipid máu, giảm được các hiện tượng lâm sàng gây khó chịu cho người bệnh khi chỉ đùng tân dược điều trị [18]
"Trong lĩnh vực y học cỗ truyền, có một số công trình nghiên cứu của Trung Quốc sử dụng công nghệ bào chế hiện đại dé bào chế thuốc cổ truyền điều trị hội chứng này như: nấu cao, chế thành viên “Giáng chỉ linh phương”; “Trà đa phân”
do tinh An Huy, Trung Quốc sản xuất [49], [50]
Đa số các trường hợp dùng thuốc y học cổ truyền điều trị hội chứng rồi loạn lipid máu dưới đạng cao lỏng hoặc thang sắc, không tiện lợi cho người sử dụng
3.2 Trong nưức
Nước fa có nguồn được liệu tự nhiên phong phú, có nền y học cổ truyền lâu đời và nhiều kinh nghiệm Đồng thời, liệu trình điều trị hội chứng rối loạn lipid máu thường kéo dài, các thuốc điều trị có nguồn gốc tổng hợp thường gây nhiều tác dụng không mong muốn, tạo tâm lý không yên tâm cho người bệnh Do đó, việc nghiên cứu sử dụng các vị thuốc, bài thuốc có nguồn gốc từ thiên nhiên, có tác dụng điều trị hội chứng rối loạn lipid máu, hạn chế các tác dụng không mong muốn của thuốc và phạm vi chỉ định rộng rãi là một việc hết sức cần thiết
Tại Việt Nam đã có nhiều công trình nghiên cứu đánh giá tác dụng điều trị rối loạn lipid máu của thuốc cổ truyền Tuy nhiên, đa số các nghiên cứu mới đừng lại ở việc đánh giá tác dụng của các bài thuốc trên thực nghiệm và lâm sàng như:
3.2.1 Nghiên cứu độc vị
-_ Nghiên cứu tác dụng dược lý cây ngưu tát về tác dụng hạ cholesterol máu và hạ huyết áp [22]
- Bước đầu đánh giá tác đụng hạ cholesterol máu của alliso (tdi) [18]
-_ Nghiên cứu tác dụng hạ cholesterol máu trên chế phẩm Bidentin bào chế
Trang 12
từ rễ cây ngưu tắt [2]
- Bước đầu đánh giá tác dụng điều trị cholesterol máu cao của ngưu tắt [26]
- _ Nghiên cứu ứng dụng củ nghệ làm thuốc hạ cholesterol máu [20]
- _ Nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết và chống tăng lipid máu của cây câu kỷ tử và nấm linh chỉ [24]
-_ Đánh giá tính an toàn và hiệu quả điều trị hội chứng rối loạn lipid máu của nám Hồng chi Đà Lat (Ganoderma lucidum) [32]
- Nghién ctu tac dung ha lipid mau cia nim Hồng chi Da Lat (Ganoderma lucidum) trén thre nghiém [33]
3.2.2 Nghiên cứu bài thuốc
- _ Nghiên cứu bài thuốc Giáng chỉ âm trong điều trị hội chứng rồ máu [15]
-_ Nghiên cứu tác dụng của bài thuốc THB94 trong điều chỉnh rồi loan lipid II
-_ Nghiên cứu tác đụng điều chỉnh hội chứng rối loạn lipid máu thể phong, đàm của Bán hạ bạch truật thiên ma thang [30]
-_ Nghiên cứu tác dụng của bài thuốc HHKV lên một số chỉ số lipid máu ở thỏ và chuột [25]
-_ Nghiên cứu fác dụng điều chỉnh hội chứng rối loạn lipid máu của bài thuốc Nhị trần thang gia giảm [14]
-_ Nghiên cứu tác đụng điều trị hội chúng rối loạn lipid máu của viên BKC [24]
- _ Đánh giá tác đụng hạ lipid máu và tăng lực của viên Curpenin trên một số chỉ tiêu lâm sàng và cận lâm sàng [2]
-_ Nghiên cứu tác dụng của bài thuốc TTT trên bệnh nhân tăng huyết áp có rối loạn lipid máu [1]
-_ Nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng tác dung của chế phẩm “RUVINTAT” trên bệnh nhân tăng huyết áp và bệnh nhân rối loạn lipid máu [32]
- _ Nghiên cứu tác dụng điều trị rồi loan lipid mau cia viên cholestin [2]
Vé các công trình nghiên cứu sản xuất thuốc: hiện nay chỉ có một vài công, trình nghiên cứu sản xuất thuốc hạ lipid máu từ được liệu như: viên BIDENTTN
của Viện được liệu, viên Cholestin của công ty Dược phẩm Trung ương V được cấp số đăng ký sản xuất lưu hành toàn quốc
loạn lipid
máu thể đàm
Trang 134 Quan niệm của y học cổ truyền về hội chứng rối loạn lipid mán
Hội chứng rối loạn lipid máu không có trong y văn của y học cổ truyền Cho đến nay nhiều nhà chuyên môn vẫn quan niệm đàm ẩm như là một trong những, yếu tố chính gây nên hội chứng này [1], [2], [14], [15]
Dựa trên nhiều nghiên cứu lâm sàng và cận lâm sàng, người ta thấy giữa hội chứng rối loạn lipid máu và chứng đàm tháp nội trở có nhiều điểm tương đồng [2], 10}
- _ Yếu tổ thể chất do tiên thiên quyết định, thường là tiên thiên bắt túc, yếu tổ này có thể hiểu tương tự như yếu tố dĩ truyền của y học hiện đại
-_ Yếu tố ăn uống (ẩm thực): do ăn quá nhiễu các chất cao lương, thức ăn ngọt béo làm tổn thương tỷ vị, khiến vận hoá thất điều, đàm thấp nội sinh mà
dan dén bệnh tật Yếu tố này tương tự như việc ăn quá nhiều thức ăn giàu mỡ
động vật chứa nhiều acid béo no theo y học hiện đại
- _ Yếu tố ít vận động thể lực: sách Tổ ván thiên "Tuyên minh ngũ khí luận", "Cửu ngọa thương khí, cửu tọa thương nhục" (nằm nhiều hại khí, ngồi nhiều hại cơ nhục) Thương khí dẫn đến khí hư, thương nhục dẫn đến tỷ hư, tỳ khí hư suy mà gây ra bệnh Y học hiện đại đã chứng minh vận động luyện tập
thể lực làm giém LDL-C, ting HDL-C
- Yéu t6 tinh thn (that tình): lo nghĩ quá hại tỷ, giận dữ quá hại can, can mộc vượng khắc tỷ thổ làm tỷ vị rối loạn, hư yếu, cơng năng vận hố suy giảm, đàm trọc ứ trệ kinh mạch mà sinh bệnh Đây chính là yếu tố căng thẳng tinh thần (stress) của y học hiện đại
4.1 Nguyên tắc điều trị chứng đầm Âm
-_ Vì bệnh có đặc điểm "bản hư tiêu thực" cho nên trong điều trị phải chú ý
cả tiêu lẫn bản
-_ Phải chú trọng phép chữa đàm vì đàm trọc có vai trò quan trọng trong cơ chế bệnh sinh
Trang 14-_ Đầm ở một chỗ không ra phải dùng phép điều đàm Vi dim 6 hi
huyết mạch nên khi điều trị, dùng phép hoá đàm để điều trị nguyên nhân sinh ra đầm, làm cho đàm tự hết chứ không dùng đến phép tiêu và điều đàm
Theo y hoc cổ truyền, hội chứng rồi loạn lipid máu là một chứng do nội đàm gây ra nên có đặc điểm là "bản hư tiêu thực" Tuỳ theo thế bệnh cấp hay hoãn mà lầy phù chính làm chủ, khứ tà là phụ; hoặc khứ tà làm chủ, phù chính là phy; hoặc vừa phù chính vừa khứ tà, tiêu bản đồng trị Bản hư chủ yếu là tỷ thận hư tổn, tiêu thực chủ yếu là đầm trọc, huyết ứ Trị bản phải chú ý bổ tỷ, ích thận, trị tiêu phải chú ý các phép khứ đàm trừ thấp, thanh lý thông hạ, hoạt
chứng rồi loạn lipid máu là đàm vô hình, lưu hành và ứ đọng ở
huyết hóa ứ Dựa vào nguyên nhân người ta chia đàm ra làm năm loại: thấp đàm, táo đàm, nhiệt đàm, phong đàm, hàn đàm Từ đó tuỳ theo từng loại đàm mà có pháp điều trị khác nhau [1], [2], [14], [15], [22], [24], [30, [32]
5 Về thuốc LIPIDAN
Công thức thuốc LIPIDAN được thành lập dựa trên cơ sở lý luận của y học cổ truyền, đã sử dụng điều trị hội chứng rối loạn lipi d máu trên lâm sàng trong nhỉ ều năm cho kết quả khả quan
Với mục đích sản xuất thuốc cỗ truyền trên dây chuyền công nghiệp đạt tiêu
chuẩn chất lượng theo quy định của Bộ Y tế, tạo điều kiện dễ dàng trong việc
bảo quản và sử dụng thuốc, chúng tôi tiến hành nghiên cứu cải dạng thuốc, xây đựng quy trình sản xuất thuốc ở quy mô pilot đạt tiêu chuẩn và xây dụng tiêu
chuẩn của thuốc LIPIDAN
'Bài thuốc LIPIDAN bao gồm các vị sau:
SA Tran bi [6], [7], [23]
- Tên khoa học: Pericarpium Citri reticulatae
- Bộ phận dùng: vỏ quả chín đã phơi hoặc sấy khô của cây quýt (Cữwx reticulata Blanco), ho Cam (Rutaceae)
- Hoat chat chinh: tinh dau, flavonoid, vitamin A,B
- Tinh vị: vị cay, đắng, tính ôn - Quy kinh: can, thận
- Téc dung: kién ty, ly khí, táo thấp, hoá đàm - Ung dung lim sing:
+ Chữa chứng đau do khí trệ + Kích thích tiêu hóa
+ Chữa nôn mửa đo lạnh + Chữa ỉa chảy do tỷ hư
Trang 15
+ Chita ho, long dom do han thấp gây ra 5.2 Bán hạ nưn[7], [23], [31]
- Tên khoa học: Rhizoma Typhonii trilobati
-_ Bộ phận đùng: thân rễ già được chế biến thành phiến khô của cây chóc chuột 7yphonium frilobafum (L.)Schott, họ Rây (Araceae) -_ Hoạt chất chí nh bột, alcaloid - Tính vị: sau khi bào chế còn ít cay, ít ngứa, tính ôn Quy kinh: tỳ, vị Tac dung: sau khi chế với gừng có tác dụng: trị ho có đàm, hạ Khí Ung dụng lâm sàng:
+ Táo thấp hóa đàm: do tỳ vị không vận hóa thành đàm ẩm gay ho, dom
nhiều, tức ngực, gầy, hoa mắt
+ Chữa nôn mửa do lạnh, phụ nữ nôn do có thai + Chữa đau họng
+ Nhuận trường chữa táo bón đo hư chứng, do hàn + Tiêu viêm, trừ mủ
5.3 Bach link[6], [7], [23] -_ Tên khoa học: Poria
- Bộ phận đùng: thể quả nấm đã phơi hay sấy khô của nắm phục linh (Pori4 cocos (Schw.) Wolf, họ Nắm lỗ (Polyporaceae), mọc ký sinh trên rễ một số lồi Thơng -_ Hoạt chất chính: đường, chất khoáng, triterpenoid i: vị ngọt, nhạt, tính bình : tâm, phế, thận, tỳ, vị : lợi tiểu, nhuận táo, bổ tỳ, ích khí, sinh tân, chỉ khát - _ Ứng dụng lâm sàng:
+ Lợi niệu thông lâm
+ Cầm ỉa chảy mạn tính do tỳ hư + An than, đêm ngủ ít, vật vã $4 Mộc hương nam [23] - _ Bộ phận dùng: vỏ rễ phơi khô của cây rụt Hex, ho Bui (Aquifoliaceae) ¡ ngọt, đắng - Quy kinh: tỳ, vị, đại trường - _ Tác đụng: lý khí, hoá thấp - Ung dung lim sing:
Trang 165S
+ Trừ đờm nhiều do đàm thấp
+ Chữa cơn đau dạ dày do tỷ vị hư hàn + Chữa nôn mửa do tỷ vị hư
Hậu phác nam [23]
Bộ phận dùng: vỏ phơi khô của cây qué rimg Cinnamonum, ho Long nao (Lauraceae)
5.6
Tinh i cay, ngot, tinh 4m
Quy kinh: tỳ, vị, đại trường
Tac dụng: hạ khí tán mãn, ôn trung táo thấp
Ung dụng lâm sàng:
+ Chữa chứng khí trệ gây đầy bụng, trướng, tức ngực, khó thở + Tri dom nhiều do đàm thá
+ Chita con dau da day do ty vi hu han + Chữa nôn mửa đo tỳ vị hư
Ngũ gia bì chân chữm [6], [7 ], [23]
Ten khoa hoc: Cortex Scheflerae heptaphyllae
Bộ phận đùng: vỏ thân và vỏ cành đã phơi hay sấy khô của cây Ngũ gia bì chân chỉm (Shefffera hepfaplylla (L.) Frodin), họ Nhân sâm (Araliaceae) 57 tra Hoat chat chinh: saponin, tanin, tinh dau Tinh vi
Quy kinh: can, thận
Tac dụng: trừ phong thắp, tráng gân cốt Ứng dụng lâm sàng:
+ Lợi niệu
+ Chữa đau khớp, đau dây than kinh, đau các cơ do lạnh + Chữa phù do thiếu vitamin Bị
Sơn tra [6], [7 ], [23]
Ten khoa hoc: Fructus Mali
Bộ phận dùng: quả chín đã thái phiến được phoi hay sấy khô của cây sơn
: vị cay, đắng, thơm, tính ôn
(Malus doumeri Bois A Chev.) ho Hoa héng (Rosaceae)
Hoat chat chính: đường, acid hữu co, vitamin, tanin
Trang 17+ Cầm ỉa chảy do ứ đọng thức ăn, ảnh hưởng đến tỳ vị gây ỉa chảy, bụng
trướng đầy
5% Xatién tir[6], [7], [23]
Ten khoa hoc: Semen Plantaginis
Bộ phận dùng: hạt đã phơi hay sấy khô của cây mã đề (Pizrriago major
L,), ho Ma dé (Plantaginaceae)
Hoạt chất chính: chất nhây, acid uronic, dầu béo Tinh vi: vị ngọt, tính hàn
Quy kinh: can, thận, tiểu trường
Tac đụng: lợi niệu, thanh nhiệt, thanh can, hoạt thai Ung dụng lâm sàng:
+ Chữa viêm bàng quang, đái buốt, đái rắt, chữa phù đo viêm thận
+ Cẩm ỉa chảy + Chữa đái 46, it
+ Hoạt thai chữa phụ nữ đề khó
5.9 Sônh khương [6], [7], [23]
- _ Tên khoa học: Rhizoma Zingiberis
-_ Bộ phận đùng: thân rễ tươi của cây Gùng (Zngiber offieinale Rose.), họ Gimg (Zingiberaceae) Hoạt chất chính: tỉnh dầu Tác dụng: giải biểu, phát hãn, chữa nôn do lạnh, chỉ khái, giải độc Ứng dụng lâm sàng:
+ Chữa cảm mạo, nôn mửa, ho do lạnh + Kích thích tiêu hóa, chống đầy, ợ hơi
+ Giải độc và hạn chế độc tính của các vị thuốc bán hạ, nam tỉnh, phụ tử
Trang 18CHUONG 2
NGUYEN LIEU, DOI TUQNG VA PHUONG PHAP NGHIEN CUU 1 Nguyén ligu nghién cứu
LL Công thức bài thude LIPIDAN (dimg trong 2 ngiy - theo kinh nghiệm điều trị)
Tran bi 08g Bán hạ chế 08g
Bạch linh l6g Hậu phácnam 06g Mộc hươngnam 10g Sơn tra 08g Ngũ gia bì 08g Sinhkhương 02g Xa tiền tử 08g Các tá dược sử đụng trong nghiên cứu: - BétTale - Tricalciphosphat - PVP K30 - Cén 96%
1.2 Hỗn địch và đung địch sử đụng trong nghiên cứu
1.2.1 Hỗn dịch thuốc từ công thức bài thuốc LIPIDAN
Từ công thức bài thuốc LIPIDAN đã nêu ở trên, tiến hành sắc theo phương pháp cỗ truyền
- _ Trần bì, hậu phác tán bột - _ Sinh khương: ép lấy nước
-_ Các vị thuốc còn lại: đỗ 300ml nước, sắc còn 100ml Làm ba lần như vậy
rồi tiến hành hoà chung nước sắc của ba lần với nhau, ta có 300ml nước sắc
Như vậy, 1ml nước sắc chứa 0,19g dược liệu
- Hoa bét tran bì, hậu phác, nước sinh khương vào nước sắc ở trên, ta được hỗn dịch thuốc (tạm gợi là hỗn địch Lipidan) Hỗn địch này dùng để đối chiếu tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu với viên nang LIPIDAN
Do lượng thuốc sử dụng điều trị trên lâm sàng (theo kinh nghiệm) là 150ml/ngày nên chúng tôi tiến hành tính toán và đề ra lượng thuốc sử dụng trên
động vật thí nghiệm 1a 2,5ml/kg thé trong
1.2.2 Dụng dịch cholesterol 10%
Cân 10g cholesterol Đun nóng cách thuỷ 50ml đầu lạc Cho cholesterol vào,
khuấy đều cho fan hết cholesterol Để nguội, thêm dầu lạc vừa đủ 100ml Như vậy, 1ml dầu chứa 0,1g cholesterol
1.2.3 Dung dich Tween80 ndng độ 20%
Cân 20g Tween80, cho vào cốc có mỏ Cho 50ml dung dịch NaCl 99%o vào Dun cach thuỷ, khuấy đều cho tan hết Tween80, sau đó đỗ vào cốc có chân
Trang 19
100ml Thêm NaCl 9%o vào cho vừa đủ 100ml, lắc đều Như vậy ta được dung địch Tween80 néng độ 20%
2 Đối tượng nghiên cứu
Súc vật nghiên cứu:
- _ Thở: cả hai giống, khoẻ mạnh, nặng từ 1,8kg - 2,5kg/con
- _ Chuột cống trắng: chuột đực khoẻ mạnh, trọng lượng 180g - 240g/con
-_ Chuột nhắt trắng chủng Swiss: cả hai giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 20g + 2g/con
Chuột do Trung tâm nghiên cứu ứng đụng y sinh được, Học viện Quân y
cung cấp
Súc vật được nuôi trong phòng thí nghiệm với cùng điều kiện nhiệt độ, độ ẩm, thời gian sáng - tối 12/12h Thức ăn do Ban chăn nuôi động vật thí nghiệm Học viện Quân y sản xuất, đảm bảo theo đúng tiêu chuẩn đỉnh dưỡng Nước
trống được cung cấp đầy đủ
3 Phương pháp nghiên cứu
3.1 Nghiên cứu bào ché vién nang LIPIDAN 3.1.1, Bào chế cao khô LIPIDAN [6], [7], [8]
-_ Giai đoạn 1: sắc với nước đã khử khoáng (tỷ lệ nước:dược liệu = 4:1) theo phương pháp truyền thống, thuốc được sắc 3 lần:
+ Lần 1, đun sôi (kể từ lúc sôi) 20 - 30 phút, lọc nóng qua ray 150 + Lan 2, dun sôi 40 phút, lọc nóng qua rây 150
+ Lần 3, đun sôi 1 giờ, lọc nóng qua rây 150 -_ Giai đoạn
+ Dịch chiết lần 2 và lần 3 được gộp lại, cô trực tiếp thành cao lỏng (cao lỏng lần 1)
+ Gộp dịch chiết lần 1 và cao lỏng lần 1, cô trực tiếp thành cao lỏng (cao lỏng lần 2) rồi đùng cồn cao độ với tỉ lệ 1:1 để loại tap
+_ Sau đó cao lỏng lần 2 đã loại tạp được cô đặc để đạt được thể chất quy định, quá trình cô đặc và sấy khô dịch chiết được tiến hành trong các thiết bị đưới áp suất giảm ở nhiệt độ không quá 60C
3.1.2, Bào chế viên nang LIPIDAN[6], [7], [8] [91
Bao chề viên nang LIPIDAN theo phương pháp xát hạt ướt:
Trang 203.1.3 Các thiết bị dùng trong nghiên cứu bào ché thude LIPIDAN -_ Mofor vạn năng Kalweka VDM 4SP
-_ Đầu nghiền bột -_ Đầu trộn bột -_ Đầu tạo hạt ướt
- Máy đóng nang tự động NIP 1200 -_ Máy ép vỉ tự động DPP-150C -_ Máy đo độ rã Erweka DT
- _ Cân phân tích điện tử XB 220A Precisa - _ Cân kỹ thuật điện tử Sartorius TE 31028
- _ Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao Agilent 1100 - _ Tủ vi khí hậu Climen
- _ Cân xác dinh d6 4m Sartorius MA 30
3.2 Đánh giá các chỉ số Kỹ thuật của viên nang LIPIDAN [6], [7] 3.2.1 Tỉnh chất: cảm quan
3.2.2 Độ rã: thử theo phụ lục 11.6, DĐVN IV
3.2.3 Độ động đầu khối lượng: thử theo phụ lục 11.3, DĐVN IV
3.2.4 Mất khối lượng do làm khô: trộn đều bột thuốc của 20 nang Cân chính
xác 1g bột thuốc, tiến hành thử theo phụ lục 9.6, DĐVN IV, phương pháp sấy trong tủ sấy ở 85”C, áp suất thường trong 5 giờ 3.2.5 Định tính Chế phẩm phải thể hiện phép thử định tính của trần bì, ngũ gia bì chan chim, bán hạ chế * Tran bì: Phương pháp sắc ký lớp mỏng (phy luc 5.4, DDVN IV) -_ Dụng cụ, thuốc thử: + Bản mỏng silicagel G tráng sẵn của Merck, hoat héa 6 110°C trong 30 phút
+ Ethyl acetat, ethanol (TT)
+ Dung mdi trién khai sic ky: Toluen - ethyl acetat - acid formic (5:4:1) + Đèn tử ngoại UV 366nm
-_ Cách thử:
+ Dung dich mẫu thử: lấy bột thuốc của 5 nang, thêm 70ml nước nóng,
khuấy kỹ, để nguội, ly tâm Chuyển dịch ly tâm vào bình gạn, lắc kỹ với 30ml ethyl acetat Sau khi tách lớp, gạn lấy dịch chiết ethyl acetat, cô trên cách thủy đến cạn Hòa cắn trong 1ml ethanol được dung địch chấm sắc ký
+ Dụng dịch mẫu đối chiếu: lấy 2g trần bì đã cắt nhỏ, thêm 10ml nước,
đun sôi nhẹ 1 giờ, dé nguội, lọc Chuyển địch lọc vào bình gạn, lắc kỹ với 30ml
ethyl acetat Gạn lấy dịch chiết ethyl acetat, cô trên cách thủy đến cạn Hòa cắn
Trang 21
trong 1ml ethanol được dung địch chấm sắc ký
Chấm riêng biệt lên bản mỏng 20pl mỗi dung địch thử và dung địch đối chiếu tại hai điểm A và B Triển khai sắc ký cho đến khi dung môi đi chuyển được khoảng 12 - 13cm Lấy bản mỏng ra, để khô ở nhiệt độ phòng, quan sát bản mỏng dưới đèn tử ngoại, bước sóng 366nm
Kết quả: mẫu thử phải có các vết phát quang cùng màu, cùng R; với các vết của mẫu đ * Ngii gia bì chân chữn: phương pháp sắc ký lớp mỏng (phụ lục 5.4, DĐVNIV) -_ Dụng cụ, thuốc thử: + Bản mỏng silicagel G tráng sẵn của Merck, hoat héa 6 110°C trong 30 phút + Cloroform, ethanol (TT)
+ Dung dich acid hydroclotic dic (TT)
+ Dung mỗi triển khai sắc ký: Cloroform, methanol (9:1)
+ Hiện màu: dung địch vanilin 1% trong hỗn hợp acid phosphoric- methanol (1:1)
-_ Cách thử:
+ Dung dich mẫu thủ: lấy bột thuốc của 5 nang, thêm 30ml hỗn hợp methanol - nước (4:1), đun sôi hổi lưu trên cách thủy 30 phút, để nguội, lọc Cô
địch lọc trên cách thủy đến cạn Hòa cắn trong 25ml nước, thêm 25ml acid
hydrocloric dic, dun s6i héi lưu trong 3 giờ, để nguội, lọc Rửa cắn bằng nước cho hết acid và sấy khô 6 60°C Hoa cắn trong 20ml cloroform bằng cách đun nóng nhẹ trên cách thủy, lọc Cô dịch lọc trên cách thủy đến cạn Hòa cắn trong 1ml ethanol được dung địch chấm sắc ký
+ Đừng dịch mẫu đối chiếu: lấy 2g ngũ gia bì chân chim đã cắt nhỏ, thêm 100ml nước cát, đun sôi nhẹ 1 giờ, để nguội, lọc Cô địch lọc đến cạn, hòa cắn trong 30ml hén hop methanol - nước (4:1), đun sôi hỏi lưu trên cách thủy 30
phút, để nguội, lọc Cô dịch lọc trên cách thủy đến cạn Hòa cắn trong 25ml
nước, thêm 25nm acid hydrodloric đặc, đun sôi hỏi lưu trong 3 giờ, để nguội, lọc Rửa cắn bằng nước cho hết acid và sấy khô ở 60°C Hòa cắn trong 20ml cloroform bằng cách đun nóng nhẹ trên cách thủy, lọc Cô địch lọc trên cách thủy đến cạn Hòa cắn trong 1ml ethanol được dung dịch chấm sắc ký
Trang 22Ké qua: miu thir phai có các vết cùng màu, cùng R; với các vết của mẫu đối chiếu * Bán hạ chế: phương pháp sắc ký lớp mỏng (phụ lục 5.4, DĐVN IV) -_ Dụng cụ, thuốc thử: + Bản mỏng silicagel G tráng sẵn của Merck, hoat hoa 6 110°C trong 30 phút
+ Cột sắc ký trao đổi ion (cột thủy tỉnh hình trụ, đường kính trong 1,5 -
2cm, đài 20 - 25cm, phía đưới có vời khóa, bên trong đá được nhỏi nhựa trao đổi cation loại H”
+ Ethanol 50% (TT)
+ Dung môi triển khai sắc ký: n-butanol - acid acetic - nước (4:1:5) + Hién mau: dung dich ninhydrin 3% ethanol
-_ Cách thử:
+ Dung dich mẫu thử: lấy bột thuốc của 5 nang, thêm 50ml nước nóng,
khuấy kỹ, để nguội, ly tâm Gạn lấy địch ly tâm cho chảy qua cột sắc ký trao đổi ion (da được xử lý theo DĐVN [, tập 1 - Phương pháp định lượng bằng trao đổi ion, trang 692), tốc độ chảy 20 - 25 giot/phút Bỏ phan dung dịch chảy qua cột Thêm nước cất để giữ cho cột không bị khô Tiếp tục rửa cột bằng nước cất cho tới khi nước chảy qua cột có phản ứng trung tính (thử bằng chỉ thị Heliantin) Cho dung địch amoniac 10% chảy qua cột với tốc độ như trên Khi dung địch chảy qua cột bắt đầu có phản ứng kiềm thì hứng và bỏ đi khoảng 10ml dịch chiết đầu tiên Hứng lấy 30 - 40ml dịch chiết tiếp theo, cô trên cách thủy đến cạn Hòa cắn trong 2ml ethanol 50% được dung dich cham sắc ký
+ Dùng dịch mẫu đối chiếu: lấy 1g bán hạ nam đã cắt nhỏ, thêm 100ml
nước, đun sối nhẹ 1 giờ, để nguội, lọc Lấy địch lọc cho chảy qua cột sắc ký trao đổi ion (đã được xử lý theo DĐVN [, tập 1 - Phương pháp định lượng bằng trao đổi ion, trang 692) rồi tiến hành tiếp như với dung dịch mau thử, bắt đầu từ “tốc độ chảy 20 - 25 giot/phit Hoa cin trong 2ml ethanol 50% được dung dich
chấm sắc ký.”
Chấm riêng biệt lên bản mỏng 20pl mỗi dung địch thử và dung địch đối chiếu tại hai điểm A và B Triển khai sắc ký cho đến khi dung môi đi chuyển được khoảng 12 - 13em Lấy bản mỏng ra, để khô ở nhiệt độ phòng, phun dung
dich ninhydrin 3% efhanol, sấy ở 120”C cho đến khi hiện rõ vết
Kết quả: mẫu thử phải có các vết cùng màu, cùng R; với các vết của mẫu đối
chiếu
3.2.6 Độ nhiễm khuẩn
Cân 5g bột thuốc vào bình nón nút mài 200ml đã được tiệt trùng và đã biết
khối lượng Thêm một lượng vừa đủ dung dịch natri clorid 0,9% vô trùng để thu
Trang 23durgc dung dich c6 néng 46 10", lắc đều Từ dung dịch trên, pha loãng thành các nông độ 10”, 10” và tiếp tục tiền hành thử theo phụ lục 13.6, DĐVN IV
3.3 Theo déi độ ẫn định của thuốc [6], [7], [L1]
'Theo dõi tuổi thọ của 3 lô sản phẩm lưu ở điều kiện tủ vi khí hậu
- Thời gian lưu: 4 tháng tính từ ngày sản xuất
- _ Điều kiện bảo quản: + Nhiệt độ: 40°C + 2C + Độ âm: 70%6+ 5% - _ Chu kỳ lấy mẫu (tính cho mỗi lô sản phẩm): trước nghiên cứu, sau đó lấy mẫu 1 tháng/lần x 4 lần Đánh giá độ ổn định của thuốc theo các tiêu chí sau: cảm quan, độ rã, định tính, độ nhiễm khuẩn + Hình thức cảm quan (theo TCCS) + D6 ri (theo phy luc 11.6, DDVN IV) + Định tính bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng (phụ lục 5.4, DĐVN TV), chế phẩm phải có phản ứng định tính của trần bì, ngũ gia bì chân chim, bán hạ chế
+ Độ nhiễm khuẩn (theo phụ lục 13.6, DĐVN IV)
Cách xác định và dự đoán tuổi thọ của thuốc bằng phương pháp lão hóa cấp tốc: thực hiện theo nguyên lý Vant-Hoff với cách tính tuổi thọ thuốc như sau:
C=OrxK Trong đó:
-_ C: tuổi thọ (tính bằng ngày) ở nhiệt độ bảo quản bình thường (f;y= 20C)
-_ Cụ: tuổi thọ thực nghiệm ở nhiệt độ nâng cao (tạ= 40°C)
-_ K:hệ số, K=2wytt
34 Xác định độ an toàn cũa thuốc [5], [37], [46], [47] 3.4.1, Xác định độc tính cấp [5], [37], [38], [43]
Xác định liều LD.) của thuốc LIPIDAN trên chuột bằng đường uống theo
phương pháp Lichfield - Wilcoxon
Chuột nhắt trắng nhịn đới 16 giờ, được chia thành 12 lô, mỗi lô 10 con
Chuột được cho uống thuốc với các liều khác nhau tăng dân, từ liễu cao nhất không gây chết (g/kg) đến liều thấp nhất gây chết 100% chuột nhắt trắng, trong
cùng một thể tích là 2ml thuốc/100g trọng lượng cơ thể chuột, cho uéng 3 lần
trong 24 giờ
Chuột được theo dõi tình trạng chung trong suốt 7 ngày và tỷ lệ chết trong 72 giờ của từng Lô dé xác định liều LDso
Trang 24
3.4.2 Thử độc tỉnh ban cấp [5], [34]
LIPIDAN đã được dự kiến liều điều trị sử dụng trên người, nên chúng tôi đã
ngoại suy từ liều trên người cho các thử nghiệm độc tính, có tham khảo liều chết
50% (LDan)
Thỏ được chia ngẫu nhiên thành 3 Lô khác nhau, mỗi - _ Lô chứng uống nước lọc
- Léuéng vién nang LIPIDAN liều I: 100mg/100g trọng lượng co thé/ngay
(gấp 10 lan liéu diéu tri theo LD.)
- Léuéng vién nang LIPIDAN liều II: 150mg/100g trọng lượng co thé/ngay (gấp 15 lần liều điều trị theo LDsp)
- _ Thuốc được nghiền mịn và hòa trong nước lọc Các thỏ uống cùng một thể tích là 0,5ml/100g TLCT thỏ, liên tục trong 42 ngày, tiến hành quan sát tất cả các thỏ, đánh giá các chỉ tiêu gồm :
-_ Bfnh lý - được iý: tình trạng chung, hoạt động, ăn uống, trọng lượng cơ
thể, ghi điện tim
- _ Hiuyết học: hồng cầu, hemoglobin, bạch cầu, công thức bạch cầu, tiêu cầu -_ Sinh hóa: AST, ALT, ure, creatinin,
-_ Mô bệnh học: vào ngày thứ 42 thỏ được phẫu thuật, quan sát hình ảnh đại thể gan, lách, thận Sau đó sinh thiết các tạng để nghiên cứu hình ảnh mô bệnh học của 5 thỏ thực nghiệm ở mỗi lô Các mẫu mô bệnh học được nhuộm H.E, đọc trên kính hiển vi ánh sáng thường với độ phóng đại HE 400
* Thời điểm xét nghiệm: lấy máu xét nghiệm các chỉ số sinh hóa, huyết
học, ghi điện tim, tại 3 thời điểm: xuất phát điểm, sau 3 tuần, sau 6 tuần nghiên cứu lô 12 con 3.4.3 Ảnh hưởng lâu dài của thuốc trên di truyền và sinh sản [5], [34], [35], [40], [41], [42], [48]
3.4.3.1 Anh huéng cia LIPIDAN dén quá trình sinh sản
Chuét nhit tring Mus musculus L 500 con, đòng Swiss, trọng lượng từ 20 -
25g, khoẻ mạnh, đủ tiêu chuẩn thí nghiệm
Trong quá trình thí nghiệm, chuột được nuối dưỡng, chăm sóc và theo dõi hàng ngày
Thế hệ chuột nhắt trắng bố mẹ gọi là thé hé P
Các chuột nhắt trắng con sinh ra từ thế hệ P gọi là thế hệ F
Chuột nhắt trắng con được sinh ra từ thế hệ F, gọi là thế hệ F;
Dùng LIPIDAN nghiền mịn, hòa trong nước lọc, cho chuột nhắt trắng thí
nghiệm uống qua kim cong tày đầu, mỗi con chuột nhắt trắng uống với thể tích giống nhau là 2ml/100g trọng lượng cơ thể
Trang 25
Căn cứ vào kết quả nghiên cứu độc tính cấp (LDar), chúng tôi đã sử dụng mức liều cho chuột nhắt trắng là 30mg/100g trọng lượng co thé/24h (gấp 3 lần
liều điều trị theo LD;n)
Quy trình cho uống LIPIDAN: chuột nhất trắng 160 con (gồm 40 con đực và 120 con cái), tách riêng đực - cái, nuôi 2 tuần trước khi nghiên cứu Khi trọng,
lượng cơ thể chuột nhắt trắng đạt đến 30g + 3,0, các chuột nhắt trắng được chia
một cách ngẫu nhiên vào các lô, đánh đấu, cân trọng lượng cơ thể và vẫn tách riêng đực - cái, cho uống LIPIDAN vào buổi sáng hàng ngày trong 14 ngày, thuốc được đưa vào dạ dày chuột qua kim cong tay
+ Lô chứng: cả chuột nhắt trắng đực và cái đều uống nước lọc
+ Lô nghiên cứu I: chuột đực được uống LIPIDAN liều 30mg/100g trọng lượng cơ thể chuột/24h, chuột cái không uồng thuốc
+ Lô nghiên cứu II: chuột đực không uống thuốc, chuột cái được uống LIPIDAN liều 30mg/100g trọng lượng cơ thể chuột/24h
+ Lô nghiên cứu II: cả chuột đực và chuột cái đều được uống LIPIDAN
liều 30mg/100g trọng lượng cơ thể chuột/24h
Sau 14 ngày, ghép chuột ở các lô vào một chuồng theo tỷ lệ 1 chuột đực : 3 chuột cái, tiếp tục cho uống nước lọc hoặc uống thuốc LIPIDAN trong 16 ngày Theo đối sự thụ thai của chuột Khi thụ thai thành công (chuột nhắt trắng cái có chửa), nuôi đến 2 tuần (14 ngày) và chia thành 2 nhóm:
-_ 1⁄3 số chuột nhất trắng cái được phẫu thuật để đánh giá số thai phát triển bình thường, số thai chết sớm/chết muộn
-_ Còn 2/3 số chuột nhắt trắng cái được nuôi đến khi chuột đẻ, đánh giá số chuột nhắt trắng con trong mỗi lứa đẻ, trọng lượng trung bình trong mỗi lứa đẻ, đếm số chuột con có di tật bẩm sinh
- Thế hệ F4 sinh ra được nuôi lớn đến 20g + 2,0g/chuột nhắt trắng Tach riêng đực, cái Nuôi tiếp đến khi đạt trọng lượng cơ thể 30g + 3,0g/chuột nhắt
trắng, tiến hành ghép đôi như trên
- _ Thế hệ F; sinh ra cũng được xử lý hoàn toàn tương tự
Các chỉ tiêu đánh giá tác đụng trên sinh sản - phát triển - _ Tỷ lệ chuột nhắt trắng thụ thai so với tổng số (tính bằng 9) - _ Số thai của mỗi chuột mẹ có chửa đá được phẫu tích (autopsy) - _ Số thai chết (sớm/muộn), số thai dị tật (nếu có)
- _ Số chuột nhắt trắng con trung bình trong một lứa đẻ - _ Trọng lượng trung bình một con (tính bằng gam)
-_ Số ngày trung bình cân thiết nuôi để đạt trọng lượng cơ thể là 20g +2,0g,
-_ Các loại dị tật bẩm sinh quan sát được
Trang 26Mô hình thiết kế thử nghiệm đánh giá tác dụng trên sinh sản - phát triển Thể hệ P + và 120 con cái, tách riêng đực - cái 180 chuột nhất trắng gồm 40 con đực ¥ Nuôi tới khi đạt trọng lượng cơ thẻ 30,0 + 3,09 +
Đánh đầu, phân ngầu nhiên vào các lô, tách riêng đực - cái
trổ hà LôNC L chuột đực | | Lô NCI: chuột cái |, | LÔNG II cả chuột
gee en: uống LIPIDAN uống LIPIDAN lực và cái uồng
Uống nước lọc x Sonate 30ng100g LIPIDAN 14 ngày gi0ng 30mg/100g TLCT/24h x 14 ngày TLCT/24h x 14 ngày TLCT/24h x 14 ngày ee Ghép đôi theo tỷ lệ 1 đực : 3 cái ở mỗi nhóm ¥ trong 16 ngay Tiếp tục cho nước lọc hoặc uồng thuốc I Thu thai thành công, nuôi đền 14 ngày 1/3 số chuột n được phẫu thuật — „ ———— g 2/3 số chị được nuôi cho đến khi chuột để nhắt trắng cái I +
Đềm số thai phát triễn bình thường,
Trang 27Thể hệ F;
¥
Nuôi tới khi đạt tr:
20g + 2,09 ong lượng cơ thế ¥ Tach rién g đực, cái + Nuôi tới khi dat tr ong lượng cơ thế 30,0 + 3,09 ¥ Banh dau, phan ngdu nhién có chọn lọc vào các lô aaa OES Lô ©ó chuột bơ m uống nước lọc [Lá nghiên cứu To sš cối 1 đực :3 cái
Lô nghiên cứu II
1 đực : 3 cái Lô nghiên cứu III 1 đực : 3 cái oe Be Thụ thai thành công, nuôi đến 14 ngày i ag 1/3 số chuột nhất trắng cái được phẫu thuật được nuôi cho đến khi chuột đẻ 2/3 số chuột nhắt trắng cái I + Đềm số thai phát triển bình thường, số thai chết sớm/chết muộn ắt trắng con trong mỗi lứa đẻ, trọng lượng trung bình,
số chuột con có dị tật bắm sinh 24 Thế hệ F; ¥
Chuột nhắt trắng con nuôi tới khi dat trọng lượng cơ thế 20 - 25g
Trang 28
Thế hệ F; + Nuôi tới khi đạt trọng lượng cơ thế 20g + 2,00 ¥ Tach rién g đực, cái + Nuôi tới khi đạt trọng lượng cơ thế 30,0 + 3,0g + Banh dau, phan ngdu nhién có chọn lọc vào các lô ee le, ee Lô có chuột thê hệ| P uống nước lọc
1 đực : 3 cái Trấo¿3 cái
Lô nghiên cứu I
Lô nghiên cứu II
1 đực : 3 cái Lô nghiên cứu Ill 1 đực : 3 cái ==x ——= Thụ thai thành công, nuôi đền 14 ngày ee, 1⁄3 số chuột nhắt trắng cái được phẫu thuật được nuôi cho đền khi chuột đẻ 2/3 số chuột nhắt trắng cái ‡ ‡ Đềm số thai phát triển bình thường, số thai chết sớr/chết muộn
số chuột nhắt trắng con trong mỗi lứa đẻ, trọng lượng trung bình,
số chuột con có dị tật bam sinh
3.4.3.2 Ảnh hưởng của LIPIDAN đến đột biến nhiễm sắc thể
Cơ sở của phương pháp là tăng tạo thể nhiễm sắc chất nhé (micronuclei) ở tế bào hồng cầu đa sắc trong tuỷ xương của động vật khi đùng thuốc thử nghiệm so với động vật ở nhóm chứng Vi nhân là những nhân nhỏ trong tế bào hồng cầu
Trang 29đang phân chia, nằm chìm trong bào tương, bắt màu đậm hơn màu bào tương tế bao
Trước thí nghiệm: 11 chuột thí nghiệm được cho uống LIPIDAN với mức liều 30mg/100g trọng lượng cơ thể chuột/24h trong thời gian 30 ngày, thuốc
được hòa trong nước lọc với mức 2ml/100g trong lượng co thé
Nhóm chứng gồm 11 con, cho ăn chế
bình thường, cho uống nước lọc 24 giờ sau khi cho uống mỗi loại thuốc lần cuối, xương đùi của chuột từ mỗi nhóm chứng và nhóm uống thuốc được bóc tách Tế bào tuỷ xương được bơm rửa từ xương đùi, rửa bằng BSA, ly tâm 100g/phút/10 phút, hút địch nổi đàn lên lam kính sạch, nhuộm May - Grul Wald - Giemsa trong 5-10 phút, đọc và phân tích kết quả
Các chỉ tiêu đánh giá về chất liệu đi truyền
1 Tỷ lệ hồng cầu đa sắc/hỗng cầu đơn sắc (PCE:NCE)/1000 tế bào/ chuột 2 Tỷ số (tính bằng %) vi nhân trên tế bào hồng cầu đa sắc (MN/PCE)
3.5 Nghiên cứu tac dung diéu chink réi loan lipid mau trên động vật thí nghiém [36], [37], [39], [44], [45]
3.5.1 Tác dụng của LIPIDAN trên mô hình gây rồi loạn lipid máu theo cơ chế ngoại sinh
Áp dụng phương pháp của Trovafo A và cộng sự (1996)
Chuột cống trắng (CCT) được uống dung dịch cholesterol 109% với liều lượng, 3ml/1kg thể trọng chuột, mỗi ngày vào buổi sáng, trong 6 tuần (42 ngày) để gây tăng cholesterol máu
Chuột cống trắng được chia thành 6 lô, mỗi lô 10 con
-_ Lô 1 (lô trắng, chuột bình thường): chuột chỉ uống nước lọc với thể tích
0,5ml/100g thể trọng chuột
-_ Lô2 (lô chứng): gây tăng cholesterol máu bằng cách cho chuột uống dung
dich cholesterol 10%, sau đó 2 giờ cho uống nước lọc 0,5 ml/100g thể trọng
- Lô 3 (ô uống hỗn Lipidan trong 6 tuần): chuột uống dung dịch cholesterol 10%; sau đó 2 giờ cho uống hỗn dich Lipidan 0,25ml/100g thé trong
-_ Lô4 (lô uống hỗn dịch Lipidan trong 3 tuần):
+ Từ tuần thứ nhất đến tuần thứ 3 của đọt thí nghiệm: uống dung dịch
cholesterol 10%; sau đó 2 giờ được uống nước lọc 0,5ml/100g thể trọng
+ Từ tuần thứ 4 đến tuần thứ 6: uống dung dich cholesterol 10%, sau d6 2
giờ được uống hỗn địch Lipidan 0,25ml/100g thé trong
Trang 30
- L65 (16 diéu tri LIPIDAN trong 6 tuan): uéng dung dich cholesterol 10%, sau đó 2 giờ được uống LIPIDAN liều 10mg/100g thể trong (thuốc được hoà trong 0,5ml nước lọc/100g thé trong)
-_ Lô6 (lô điều trị LIPIDAN trong 3 tuần):
+ Từ tuần thứ nhất đến tuần thứ 3 của đọt thí nghiệm: uống dung dịch
cholesterol 10%; sau đó 2 giờ được uống nước lọc 0,5ml/100g thể trọng
+ Từ tuần thứ 4 đến tuần thứ 6: uống dung dịch cholesterol 109%, sau đó 2
giờ được uống LIPIDAN liều 10mg/100g thể trọng (thuốc được hoà trong 0,5ml nước lọc/100g thể trọng)
Cân kiểm tra trọng lượng chuột ở tất cả các lô trước, trong và sau thí nghiệm 2 tuan/lan
'Vào cuối đợt thí nghiệm (ngày thứ 42), chuộ 1ô cho nhịn ăn qua đêm
Đến ngày thứ 43, tất cả chuột đều bị giết Lầy máu từ động mạch cảnh CCT vào
ống nghiệm Tiến hành định lượng cholesterol toàn phan(CT), HDL-C, LDL-C và trislyceri đ (TG) trong huyết thanh trên máy phân tích SCOUT của Italy
Mô hình nghiên cứu điều trị rối loạn lipid máu theo cơ chế ngoại sinh: Lô 1 Lô 2 Lô 3 Lô4 Lô 5 Lô 8 4 Uống 4 Uống #
, ale guns dich dửa đến gung dich ata
‘ Uống 9 cholesterol | 9 cholesterol | g
Tuân 29 |Ícholesterol, 2n | cholesterol, 2n | cholesterol,
1-3 4 | "ước |[ sau2n || O28 lọc fe uống sau2n || Tân P uống sau 2h i
điệu hồn dịch tiểu thuộc tiếu
nước lọc || Tpaan || nước lọc || tpIDAN || nước lọc
8 Uống Uống Uống Uống
: NI || dung dich |} dung dịch || dung dịch || dung dịch
Tuân Uống ho šslan | oholesterol Eholesterol | [cnolesterol.| [tnolesterel
4-6 nue | eee }P sau 2h sau 2h sau 2h sau 2h
loc Seu nồng g uống uống
ni hến dịch |[ hỗn dịch thuộc thuộc
MUSE INE: Lipidan Lipidan LIPIDAN |} LIPIDAN
Ngày { Định lượng cholesterol toàn phản, HDL-C, LDL-C và triglycerid máu
Trang 313.5.2 Tác dụng của LIPIDAN trên mô hình gây rồi loan lipid mau theo cơ chế nội sinh
Áp dụng phương pháp của Kell, Correll va Ladd (1988) Gay ting cholesterol máu ở thỏ bằng cách tiêm Tween 80 dung dich 20%
Thỏ đực 18 con tiêm tính mạch vành tai Tween 80 dung địch 20% x 0,25ml/100g thể trọng thỏ trong dung dịch natriclorid 0,9% Tiếp đó tiêm cùng một thể tích dung địch Natriclori đ0,9% Thỏ được chia thành 3 16:
-_ Lô1 (lô chứng - 6 con): chỉ tiêm Tween 80
-_ Lô2 (ô điều trị I, uống hỗn dịch Lipidan - 6 con): cho thỏ uống hỗn dich 1ipidan liều 0,25ml/100g thể trọng thỏ vào thời gian trước khi tiêm Tween 80 là 24 giờ và ngay trước khi tiếm
- Lô3 (lô điều trị II - 6 con): thỏ được uống thuốc LIPIDAN liều điều trị
10mg/100g thể trọng (thuốc được hòa trong 0,5ml nước lọc/100g thể trọng thỏ) vào thời gian trước khi tiêm Tween 80 là 24 giờ và ngay trước khi tiêm
* Lấy máu tính mạch vành tai thỏ trước thực nghiệm và sau khi tiêm Tween 80 4 giờ 30 phút Định lượng cholesterol toàn phẩn(CT), HDL-C, LDL-C và triglycerid (TG) huyết thanh
4 Địa điểm và thời gian nghiên cứu
41 Địadểm
4.1.1 Bộ môn Dược liệu, Học viện Y - Dược học cổ truyền Việt Nam 4.1.2 Bộ môn Bào chế, Đại học Dược Hà Nội
Bộ môn Dược liệu, Đại học Dược Hà Nội Bộ môn Dược lý, Học viện Quân y
'Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương 42 Thời gian
'Từ tháng 11 năm 2007 đến tháng 12 năm 2010
5 Xử lý số liệu
Số liệu được xử lý theo thuật toán Student Test va 7° bằng phin mém Epi Tnfo 6.04 của Tổ chức Y tế Thế giới [12]
6 Cách chọn mẫu, cỡ mẫu [12]
6.1 Cách chọn mẫu
Mẫu của các nghiên cứu thực nghiệm và được lý được chọn theo phương pháp chọn mẫu ngẫu nhiên
62 Cỡ mẫu
6.2.1 Xúc định độ ồn định của thuốc
3 1ô sản phẩm sản xuất trên dây chuyền pilot 6.2.2, Cúc nghiên cứu thực nghiệm
Cỡ mẫu cho mỗi nghiên cứu được xây dựng trên cơ sở các mô hình nghiên cứu thực nghiệm của Việt Nam và thé giới
Trang 32
7 Các biện pháp khống chế sai số
-_ Động vật thực nghiệm dim bảo tiêu chuẩn do cơ sở chuyên trách cung
cấp
- _ Kỹ thuật đảm bảo đúng quy cách
- Mẫu được lựa chọn đảm bảo tính ngẫu nhiên
8 Vấn để đạo đức trong nghiên cứu
Các số liệu được thu thập, xử lý và đánh giá một cách trung thực, khách quan
Trang 33CHUONG 3
KET QUA NGHIEN CUU
1 Quy trình sản xuất viên nang LIPIDAN
11 Tiêu chuẩn nguyên liệu
Tên Việt Nam Tên được liệu Tiêu chuẩn
'Trần bì Citrus refi culata Rutaceae [Dược điển Việt Nam TV Bạch linh Poria cocos Polyporaceae Dược điển Việt Nam TV
INgũ gia bì Scheffera heptaphylla Araliaceae | Dược điển Việt Nam IV Sơn tra Malus doumeri Rosaceae Dược điển Việt Nam IV [Xa tién tử Plantago major Plantaginaceae | Dược dién Viét Nam IV Sinh khuong Zingiber officinale Zingiberaceae | Duge dién Viét Nam IV
[Bán hạ nam Typhonium triobatum Schott [Dược điển Việt Nam IV
IMộc hươngnam | Ilex Aquifoliaceae Tiêu chuẩn cơ sở
[Hậu phác nam Cinnamonum Lauraceae 'Tiêu chuẩn cơ sở
Tale Talcum Dược điển Việt Nam TV
'Tricalciphosphat | Tricalcii phosphas USP32 PVP K30 Polyvinyl pyrrollidon K30 USP32
Con 96% Ethanolum 96% Dược điển Việt Nam TV 12 Sơ chế nguyên liệu 1.2.1, Trân bì [6], [7], [16], [23], [28], [31] Rửa sạch, thái nhỏ, phơi âm can đến khô 1.2.2, Bach linh [6], [7], [16], [23], [28], [31]
Thé qua ném bach linh đem ngâm một ngày, rửa sạch, đồ mềm, gọt bỏ lớp vỏ bên ngoài Phản còn lại thái phiến dày, phơi khô
1.2.3, Som tra [6], [7], [16], [23], [28], [31]
Rửa sạch, thái lát 0,5cm, phơi khô Sao vàng cháy cạnh 1.2.4 Ngũ gia bi chan chim [6], [7], [16], [23], [28], [31]
Rita sach tap chất, ủ nềm, thái nhỏ, phơi âm can đến khô 1.2.5 Xa tiên tử [6], [7], [16], [23] [28], [31]
Trang 341.2.6, Sinh khwong [6], [7], [16], [23], [28], [31]
Rita sach tap chất, thái lát 0,2 - 0;3cm (dùng củ tươi) 1.2.7 Bán hạ chế [6], [7], [16] [31]
Rita sach tap chất, ngâm nước 3 ngày, hàng ngày thay nước, rửa sạch
em ngâm nước phèn và nước gừng trong 24 giờ (cứ 1kg củ chóc đùng 300g sừng tươi ép lấy nước và 50g phèn, đổ ngập nước) Rửa sạch Đồ (không đậy kín, để cho hơi bay ra) Tâm nước gừng một đêm (cứ 1kg củ chóc dùng 150g sừng tươi ép lấy nước, hòa với 50ml nước) Sao vàng
1.2.8 Hậu phác nam
Rita sach tap chất, ủ nềm, thái nhỏ, phơi âm can đến khô 1.2.9 Mộc hương nam
Rita sach tap chất, ủ nằm, thái nhỏ, phơi âm can đến khô 30% lượng trần bì và hậu phác nam tán bột mịn qua rây 250 13 Phương pháp bào chế cao khô LIPIHDAIN
Để có quy trình bào chế cao khô LIPIDAN, chúng tôi tiền hành thí nghiệm bào chế trên 7 mẫu cao Lượng được liệu sử dụng để bào chế cho mỗi mẫu cao được tính như sau:
Bán hạ chế 264,0g Tran bi 237,0g
Bạch linh 33408 Mộchươngnam 336,0g Xa tiền tử 26408 Sơn tra 26408 Ngũ gia bì 26408 Hậu phánam 176,4g
Sinhkhương 66/0g
Do bài thuốc kinh nghiệm được sử dụng dưới dạng thuốc sắc theo phương, pháp truyền thống cho hiệu quả điều trị tốt nên nhóm nghiên cứu tiếp tục tiến hành bào chế cao khô LIPIDAN theo phương pháp sắc truyền thống
- Giai đoạn 1: sắc với nước đã được khử khoáng (tỷ lệ nước:được liệu = 4:1) theo phương pháp truyền thống, thuốc được sắc 3 lần:
+ Lần 1, đun sôi (kể từ lúc sôi) 20 - 30 phút, lọc nóng qua ray 150 + Lan 2, dun sôi 40 phút, lọc nóng qua rây 150
+ Lần 3, đun sôi 1 giờ, lọc nóng qua rây 150
Trang 35-_ Giai đoạn 2:
+ Dịch chiết lần 2 và lần 3 được gộp lại, cô trực tiếp thành cao lỏng, thể tích 16000ml (cao lỏng lần 1)
+ Gộp địch chiết lần 1 và cao lỏng lần 1, cô trực tiếp thành cao lỏng, thể tích 16000ml (cao lỏng lần 2) rồi đùng cồn cao độ với tỉ lệ 1:1 để loại tạp
+ Sau đó cao lỏng lần 2 đã loại tạp được cô đặc để đạt được thể chất quy định, quá trình cô đặc và sấy khô dịch chiết được tiến hành trong các thiết bị đưới áp suất giảm ở nhiệt độ không quá 60C
Lượng cao khô (hàm ẩm ~ 3%) thu được ở các mẫu thí nghiệm như sau: - Mau 1: 2700g - Mau 2: 270,67g - Mau 3: 2700g - Mau 4: 2693g - Mau 5: 272,0g - Mau 6: 268,0g - Mau 7: 2700g Như vậy, lượng cao khé trung binh dé bao ché 600 vién LIPIDAN là 269,99g + 1,28g
Cao thé chat khô, hàm ẩm 3%, có màu nâu đen, vị chua sau hơi đắng, thơm
mùi được liệu 1g cao khô tương đương 8,91g dược liệu (bán hạ chế 0,98g; trần
bì 0,88g; bạch linh 1,98g; mộc hương nam 124g; xa tiền fir 0,98g; son tra 0,98g, ngũ gia bì 0,98g; hậu phác nam 0,65g; sinh khương 0,24g)
Từ kết quả trên, có công thức bào chế cao khô sử dụng để bào chế 6000 viên LIPIDAN/1 lô sản phẩm sản xuất trên quy mô pilot như sau:
Ban hạ chế 2640g Tran bi 2370g
Bạch linh 3340g Mộchươngnam 3360g Xa tiền tử 2640g Sơn tra 2640g Ngũ gia bì 2640g Hậu phác nam 1764g
Sinhkhương 660g
Như vậy, tổng lượng cao khô LIPIDAN cần có cho 1 lô sản phẩm sản xuất trên quy mô pilot là 2700g, tương đương 24054g được liệu
Trang 36Sơ đỗ 1 Chiết cao khé LIPIDAN Cân các dược liệu trong công thức đã được chế biền đạt tiêu chuẩn dược liệu lệ nước: ft Nước khử khoáng be Chiét néng 20° - 30° Chiết néng 40° Chiết nóng 1h Nước khử khoáng tỷ lệ nước: dược liệu Ht Nước khử khoáng ý lệ nước:dược liệu S Ss 2 = a Dich chiét 2 Dich chiét 3 ¥ i ‡ Lọc nóng qua rây 150 || Lọc nóng qua rây 150 | | Loe nóng qua rây 150 EE Gộp dịch chiết † Cô trực tiếp tới thể tích 16000ml (cao lỏng lằn 1) + T Gộp dịch chiết 1 và cao lỏng lần † Ỷ Cô trực tiếp tới thể tích 16000ml (cao lỏng lần 2) Côn 96” + Loại tạp Ỷ Cô cách thủy thành cao mém +
Sáy khô dưới áp suất giảm
ở nhiệt độ không quá 60%C
Trang 37
+4 Quy trình bào chế viên nang LIPIDAIV
1.4.1, Kết quả khảo sát một số công thức bào chế viên nang LIPIDAN
Thanh phan của viên nang LIPIDAN chủ yếu là cao dược liệu, dễ tan trong
nước nên khả năng hút ẩm tương đối cao nên trong quá trình bào chế cần sử dụng tá dược độn là loại tá được vô cơ, không hút ẩm, trơn chảy tốt Qua quá trình khảo sát, chúng tôi nhận thấy tricalciphosphat phù hợp trong trường họp này
TTỊ _ Thành phân (tính cho 1 viên nang) Kết quả sản phẩm Cao khô LIPIDAN 0,458 Bột trần bì 0,045 1 | Bột hậu phác nam 0,036g | Hạt quá tơi xốp Tricalciphosphat 0,002g Côn PVP 5% 0,1ml Cao khé LIPIDAN 0,458 Bột trần bì 0/0458 »
Hat chic, qua ray dé ding, 2 | Bộthậu phácnam 0/0368 Không cổ bi lượng đến ft Tricalciphosphat 00028 Cén PVP 10% 0,1ml Cao khé LIPIDAN 0,458 Bột trần bì 0,045 3 | Bộthậu phácnam 0,036g | Bột dính bết, khó qua rây Tricalciphosphat 00028 Cén PVP 15% 0,1ml
Kết quả khảo sát cho thấy: công thức 2 là thích hợp nhất Vì vậy, chúng tôi
chọn công thức này để tiến hành bào chế viên nang LIPIDAN
Trang 381.4.2 Công thức bào chế viên nang LIPIDAN:
Bảng 3.1 Công thức bào chế 6000 viên LIPIDANI1 lô sản phẩm sản xuất
trên quy mô pilot
Thanh phan Chứcnăng | Tiểu chuẩn | lviên | 6000 vien CaokhôLIPIDAN |Cao đượcliệu |TCCS 0.4508 27008 Tran bi (bot) Dược liệu DĐVNIV 0/0458 270g [Hậu phác nam (bộp_ | Dược liệu TCCS 0,036g, 216g Bot Tale Tá đượctrơn |DĐVNIV 0,003g 18g Thicalciphosphat Tá được độn |USP32 0,002g, 12g
PVP K30 Tá được đính |USP32 001g 60g
Côn 96% Dung môi DĐVNIV 01ml 600ml
- _ Cân bột được liệu, tricalciphosphat, trộn đều thành bột kép
- _ Cao khô được liệu được xay mịn, qua rây số 250 (ray có cỡ mắt 0,25mm)
- _ Tiến hành trộn cao được liệu với bột kép trong thời gian 10 phút
-_ Trong quá trình trộn, thêm dung dịch cồn PVP 59% để giúp phân tán đều cao được liệu vào khối bột
- _ Xát hạt ướt qua rây 1,2mm, sấy hạt ở nhiệt độ 40"C trong 15 phút Sửa hạt qua ray Imm
- Say hạt ở nhiệt độ 55C đến khô (hàm 4m ~ 3%)
- Ray Talc qua rây số 250
- _ Trộn hạt với tá dược Talc trong thời gian 5 phút
- _ Đóng nang LIPIDAN trong nang số 0 bằng máy đóng nang tự động - _ Nang sau đó được làm sạch bột, đánh bóng và ép vỉ
Trang 39Sơ đồ 2 Các giai đoạn sản xuất viên nang LIPIDAN
Trang 401ã Xây đựng tiêu chuẩn thành phẩm
-_ Hình thức: viên nang cứng, bên trong chứa bột thuốc màu nâu đen, mùi thơm được liệu, vị chua sau hơi đắng
is đêu: khối lượng: khối lượng trung bình thuốc trong nang + 7,5%
- Độ
- Độ rã: không quá 30 phút
- Mắt khối lượng do làm khô: không quá 9,0%
-_ Định tính: chế phẩm phải thể hiện phép thử định tính của trần bì, ngũ gia bì chân chim, bán hạ -_ Độ nhiễm khuẩn: đạt yêu cầu mức 4, phụ lục 13.6, DĐVN IV 16 Theo đối độ ân định của thuốc Bảng 32 Độ ổn định của lô LPD08032010
Chi tê Tiêu chuẩn oe mT1 Thời điểm lấy mẫu (hán; = Ÿ 8)
Viên nang cúng LIPIDAN gồm Gạp [hai phần hình trụ lồng khí: vào
quan | nhau, bên Hong chứa bột thuốc | Đạt | Đạt | Đạt | Đạt | Đạt màu nêu đen, mùi thơm dược
liệu, vị chua sau hơi đắng
Độ rã_ | Không quá 30 phút Đạt [Đạt |Đạt |Đạt |Đạt bạn, _| Chế phẩm phải có phản ứng định
° |tính của bán hạ, trần bì, ngũ gia | Đúng | Đúng | Đúng | Đúng | Đúng tir bi chin chim |e gs
a Dat yéu cdu mite 4, phy luc 13.6, pa | aoa | ses | sem | Bae
oe DDVNIV a a 3 3 a
Bảng 3.3 Độ ôn định củalô LPD10032010
Chỉ ti Tiêu chuẩn an chad mT1 Thai diem lay mau (than; ~ : Ð) i
Viên nang cứng LIPIDAN gồm Cm [Bai phần hình trụ lông khít vào
quan | nhau, bên Hong chứa bột thuốc | Đạt | Đạt | Đạt | Đạt | Đạt màu nâu đen, mùi thơm dược
liệu, vị chua sau hơi đắng
Độ rã_ | Không quá 30 phút Đạt | Đạt | Đạt | Đạt | Đạt nạn, | Chế phẩm phải có phản ứng định
8! - | tính của bán hạ, trần bì, ngũ gia _ | Đúng | Đúng | Đúng | Đúng | Đúng tinh | bi chin chim chỉ
a Dat yéu cdu mite 4, phy luc 13.6, ite | Bui | Bat | Be: || BH
Thận DĐVNIV a a a a 2