Nghiên cứu nuôi cấy rễ tơ cây ké hoa đào urena lobata l nhằm thu nhận nguyên liệu sản xuất hoạt chất điều trị tiểu đường tuýp 2

ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TP.HCM TRƯỜNG ĐH KHOA HỌC TỰ NHIÊN, ĐH QUỐC GIA TP.HCM CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ NGHIÊN CỨU NUÔI CẤY RỄ TƠ CÂY KÉ HOA ĐÀO (Urena lobata L.) NHẰM THU NHẬN NGUYÊN LIỆU SẢN XUẤT HOẠT CHẤT ĐIỀU TRỊ TIỂU ĐƯỜNG TUÝP (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày ) Chủ nhiệm nhiệm vụ (ký tên) Quách Ngô Diễm Phương Cơ quan chủ trì nhiệm vụ (ký tên đóng dấu) Trần Văn Mẫn TRƯỜNG ĐH KHOA HỌC TỰ NHIÊN, CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐH QUỐC GIA TP.HCM Độc lập - Tự - Hạnh phúc TP.HCM, ngày 10 tháng 04 năm 2020 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KH&CN I THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Thuộc: Công nghệ sinh học y dược Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: QUÁCH NGÔ DIỄM PHƯƠNG Ngày, tháng, năm sinh: 01/10/1980 Nam/ Nữ: Nữ Học hàm, học vị: PGS TS Chức danh khoa học: Phó giáo sư Chức vụ: Phó Trưởng Khoa SH-CNSH, Trưởng Bộ môn CNSHTV & CHSH Điện thoại: Tổ chức: Nhà riêng: Mobile: 0767011080 Fax: E-mail: qndphuong@hcmus.edu.vn Tên tổ chức công tác: Khoa SH-CNSH, Trường ĐH KHTN, ĐHQG TPHCM Địa tổ chức: 227 Nguyễn Văn Cừ, Phường 04, Quận 05, TP.HCM Địa nhà riêng: Tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: TRƯỜNG ĐH KHOA HỌC TỰ NHIÊN, ĐHQG TP.HCM Điện thoại: 84.8.38353193 Fax: 84.8.73089899 E-mail: Website : www.hcmus.edu.vn Địa chỉ: 227 Nguyễn Văn Cừ, Phường 04, Quận 05, TP.HCM Họ tên thủ trưởng tổ chức: TRẦN LINH THƯỚC Số tài khoản: 3713.0.1056908.00000 Kho bạc: Kho bạc nhà nước Quận 05, TP.HCM a Tên quan chủ quản đề tài: Sở Khoa học Công nghệ TP.HCM II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: từ tháng 10/ năm 2017 đến tháng 10/ năm 2019 - Thực tế thực hiện: từ tháng 10./ năm 2017 đến tháng 04 / năm 2020 - Được gia hạn (nếu có): - Lần từ tháng 10 năm 2019 đến tháng 04 năm 2020 - Lần … Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 840 tr.đ, đó: + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học: 840.tr.đ + Kinh phí từ nguồn khác: ……………….tr.đ b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Số TT Theo kế hoạch Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) 420 336 84 Thực tế đạt Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) 420 336 Ghi (Số đề nghị tốn) c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đối với đề tài: Đơn vị tính: đồng T T Nội dung khoản chi Trả công lao động (khoa học, phổ thông) Nguyên, vật liệu, lượng Thiết bị, máy móc Xây dựng, sửa chữa nhỏ VPP, thông tin liên lạc, in ấn Hội đồng ĐG KQ Theo kế hoạch Thực tế đạt Tổng NSKH 524.172.000 Nguồn khác Tổng NSKH 524.172.000 450.579.800 450.579.800 244.200.000 244.200.000 243.400.000 243.400.000 20.000.000 20.000.000 20.000.000 20.000.000 5.778.000 5.778.000 3.020.200 3.020.200 6.850.000 6.850.000 0 Nguồn khác b Quản lý nhiệm vụ 39.000.000 KH & CN Chi khác Tổng cộng 840.000.000 39.000.000 39.000.000 39.000.000 840.000.000 756.000.000 756.000.000 - Lý thay đổi (nếu có): Do nghiệm thu trễ hạn nên khơng tốn số tiền đợt theo hợp đồng số 177/2017/HĐ-SKHCN Các văn hành q trình thực đề tài/dự án: (Liệt kê định, văn quan quản lý từ công đoạn xét duyệt, phê duyệt kinh phí, hợp đồng, điều chỉnh (thời gian, nội dung, kinh phí thực có); văn tổ chức chủ trì nhiệm vụ (đơn, kiến nghị điều chỉnh có) Số TT Số, thời gian ban hành văn 1023/QĐ-SKHCN 20/10/2017 177/2017/HĐSKHCN 20/10/2017 Tên văn Ghi Quyết định phê duyệt nhiệm vụ khoa học công nghệ Hợp đồng thực nhiệm vụ nghiên cứu khoa học công nghệ … Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: không Số TT Tên tổ chức Tên tổ chức Nội dung Sản phẩm đăng ký theo tham gia thực tham gia chủ chủ yếu đạt Ghi chú* Thuyết minh yếu - Lý thay đổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, khơng q 10 người kể chủ nhiệm) c Số TT Sản phẩm Nội dung tham Ghi chủ yếu đạt gia chú* Chủ nhiệm đề Thiết kế tồn tài thí Nội dung 1,2,3 nghiệm, chịu trách nhiệm cho tồn ấn phẩm khoa học đề tài Vũ Thị Bạch Vũ Thị Bạch Nội dung 1,2,3 Triển khai Phượng Phượng thực tồn thí nghiệm thuộc nội dung 1, hỗ trợ thực nội dung Cao Minh Đại Cao Minh Đại Nội dung 1,2,3 Triển khai thực tồn thí nghiệm thuộc nội dung 3, hỗ trợ thực nội dung Bùi Lan Anh Bùi Lan Anh Nội dung Hỗ trợ thực vài thí nghiệm thuộc nội dung Hồng Thị Hoàng Thị Thư ký Triển khai Thanh Minh Thanh Minh Nội dung chịu trách nhiệm thực tồn nội dung Trà Đơng Trà Đơng Nội dung Hỗ trợ thực Phương Phương Xử lý số liệu nội dung Tên cá nhân đăng ký theo Thuyết minh Quách Ngô Diễm Phương Tên cá nhân tham gia thực Quách Ngô Diễm Phương d Nguyễn Vy Thụy Nguyễn Vy Thụy Nội dung Bùi Văn Lệ Phạm Thị Ánh Phạm Thị Ánh Nội dung Hồng Hồng Bùi Văn Lệ Nội dung 2 chịu trách nhiệm xử lý toàn kết Hỗ trợ thực vài thí nghiệm thuộc nội dung Đề xuất kỹ thuật áp dụng thực nội dung Đề xuất phương pháp kiểm nghiệm thực nội dung - Lý thay đổi ( có): khơng thay đổi Tình hình hợp tác quốc tế: khơng Số TT Theo kế hoạch (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số Ghi chú* đoàn, số lượng người tham gia ) - Lý thay đổi (nếu có): Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: không Số TT Theo kế hoạch Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, (Nội dung, thời gian, kinh Ghi chú* địa điểm ) phí, địa điểm ) - Lý thay đổi (nếu có): e Tóm tắt nội dung, cơng việc chủ yếu: (Nêu mục 15 thuyết minh, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngoài) Số TT Các nội dung, công việc chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) Thời gian (Bắt đầu, kết thúc - tháng … năm) Theo kế Thực tế đạt hoạch 10/2017Đạt thời 4/2018 gian ngoại trừ thí nghiệm dịng tế bào β đảo tụy không thực Nội dung 1: Chứng minh khả sử dụng rễ Ké hoa đào điều trị tiểu đường tuýp sàng lọc nhóm hoạt chất định hoạt tính chúng Nội dung 2: Nuôi cấy rễ tơ Ké 10/2017hoa đào có khả điều trị tiểu 4/2019 đường tuýp cao so với chứng dương Acarbose sử dụng phổ biến thị trường Đạt thời gian ngoại trừ thí nghiệm mơ hình bioreactor lỗi kỹ thuật thiết bị Nội dung 3: Tiêu chuẩn hóa rễ 2/2019tơ tạo thành theo dược điển Việt 9/2019 Nam với hoạt tính điều trị tiểu đường tuýp 8/2019 bắt đầu thực sản phẩm rễ không kịp tạo thành từ bioreactor dự tính Người, quan thực Quách Ngô Diễm Phương, Vũ Thị Bạch Phượng, Cao Minh Đại Trường ĐH KHTN TPHCM Quách Ngô Diễm Phương, Vũ Thị Bạch Phượng, Cao Minh Đại, Hoàng Thị Thanh Minh, Bùi Lan Anh, Trà Đông Phương, Bùi Văn Lệ Trường ĐH KHTN TPHCM Quách Ngô Diễm Phương, Vũ Thị Bạch Phượng, Cao Minh Đại, Nguyễn Thụy f Vy, Phạm Thị Ánh Hồng Trường ĐH KHTN TPHCM - Lý thay đổi (nếu có): g MỤC LỤC MỤC LỤC h DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT xiii DANH MỤC BẢNG xiv DANH MỤC HÌNH xvii MỞ ĐẦU 1 TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Ké hoa đào 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Phân bố 1.1.3 Đặc điểm hình thái 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Giá trị dược tính tầm quan trọng 1.2 Nuôi cấy rễ thực vật nhằm thu nhận hoạt chất 12 1.2.1 Giá trị tích lũy hoạt chất rễ thực vật 12 1.2.2 Kỹ thuật ni cấy rễ tơ/rễ tóc nhằm thu nhận hoạt chất 12 1.3 Kỹ thuật tăng sinh hoạt chất nuôi cấy rễ thực vật in vitro 14 1.3.1 Tạo nguồn rễ in vitro 15 1.3.2 Sàng lọc dòng rễ cho suất cao 16 1.3.3 Các kỹ thuật tăng sinh khối nuôi cấy rễ thực vật in vitro 16 1.3.4 Các kỹ thuật tăng tổng hợp hợp chất thứ cấp nuôi cấy rễ thực vật in vitro… 17 1.4 Kỹ thuật tăng sinh khối rễ nuôi cấy thủy canh 26 1.4.1 Các yếu tố tác động đến sinh khối rễ nuôi cấy thủy canh 26 1.4.2 Sự chuyển gen tự nhiên thông qua vi khuẩn A rhizogenes 27 VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP 30 h 2.1 Nội dung 1: Chứng minh khả sử dụng rễ Ké hoa đào điều trị tiểu đường sàng lọc nhóm hoạt chất định hoạt tính chúng 30 2.1.1 Định danh rễ Ké hoa đào thu hái tự nhiên 30 2.1.2 Điều chế cao ethanol tổng cao phân đoạn 31 2.1.3 Khảo sát khả ức chế hoạt động α-glucosidase cao chiết tổng ethanol với cao phân đoạn 32 2.1.4 Chứng minh diện nhóm hoạt chất có hoạt tính ức chế α-glucosidase rễ Ké hoa đào 32 2.1.5 Khảo sát mối tương quan nhóm hợp chất với hoạt tính ức chế α-glucosidase rễ Ké hoa đào tự nhiên 34 2.2 Nội dung 2a: Nuôi cấy rễ tơ Ké hoa đào có khả điều trị tiểu đường tuýp cao so với chứng dương Acarbose sử dụng phổ biến thị trường điều kiện in vitro-bioreactor 38 2.2.1 Vật liệu nuôi cấy thực vật 38 2.2.2 Vật liệu nuôi cấy vi khuẩn 39 2.2.3 Khử trùng nguyên liệu nuôi cấy 39 2.2.4 Khảo sát yếu tố tác động đến khả cảm ứng tạo rễ tơ điều kiện nuôi cấy in vitro 39 2.2.5 Khảo sát yếu tố tác động đến khả tăng sinh sinh khối tăng hoạt tính ức chế αglucosidase rễ Ké hoa đào điều kiện nuôi cấy in vitro 41 2.2.6 Mở rộng quy mô nuôi cấy bioreactor 45 2.3 Nội dung 2b: Ni cấy rễ tơ Ké hoa đào có khả điều trị tiểu đường tuýp cao so với chứng dương Acarbose sử dụng phổ biến thị trường điều kiện thủy canh 46 2.3.1 Vật liệu nuôi cấy thực vật 46 2.3.2 Vật liệu ni cấy vi khuẩn: trình bày mục 2.2.2 47 2.3.3 Khảo sát yếu tố tác động đến khả cảm ứng tạo rễ tơ điều kiện nuôi cấy thủy canh 47 i 15 ngày 20 ngày 25 ngày 30 ngày 35 ngày 40 10 ngày 15 ngày Sự ức chế α- 20 ngày glucosidase (%) 25 ngày 30 ngày 35 ngày 40 ngày 0,4493 ± 0,3095 ± 0,2728 ± 0,2779 ± 0,0773 0,0040 0,0301 0,0787 0,1011 0,0007 0,5768 ± 0,5003 ± 0,5288 ± 0,4928 ± 0,1362 0,0033 0,0282 0,0476 0,0292 0,0048 0,6604 ± 0,5894 ± 0,6175 ± 0,5466 ± 0,4364 0,0045 0,0825 0,0355 0,0800 0,0054 0,6019 ± 0,5922 ± 0,5894 ± 0,5714 ± 0,5319 0,0158 0,0655 0,0749 0,0141 0,0021 0,5925 ± 0,5935 ± 0,6017 ± 0,5783 ± 0,5102 0,0306 0,0680 0,0397 0,0463 0,0017 0,5988 ± 0,5671 ± 0,5379 ± 0,5264 ± 0,5691 0,0123 0,0547 0,0517 0,0981 0,0008 4,5688 ± 0,0000 ± 0,0000 ± 0,0000 ± 0,0000 0,2267 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 5,0933 ± 0,0000 ± 0,0000 ± 0,0000 ± 0,0000 0,3706 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 9,1744 ± 0,0000 ± 0,0000 ± 0,0000 ± 0,0000 0,5066 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 ± 0,0000 ± 0,0000 ± 0,0000 ± 0,0000 0,0000 0,0000 0.0000 0.0000 ± 0,0000 ± 0,0000 0,0000 0,0000 20,4076 0,6058 92,4428 1,2152 99,6950 0,2177 99,1245 0,1597 98,6594 0,6785 ± 47,9557 ± 32,2464 8,0994 ± 55,3480 0,4681 ± 31,6014 8,0272 ± 65,2307 1,8533 ± 71,3515 3,5598 ± 99,1757 ± 31,4261 6,9458 ± 65,6963 2,7343 ± 99,3773 0,1541 1,1313 ± 93,8529 0,5779 1,4280 ± 0,0000 ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 0,0000 ± 0,0000 ± 0,0000 ± 92,6340 ± 1,1382 Phụ lục 4.8: Ảnh hưởng chitosan đến tăng trưởng rễ tơ Chỉ tiêu Thời gian Nồng độ chitosan theo dõi nuôi cấy mg/l 50 mg/l 100 mg/l 150 mg/l Sinh ngày 0,5768 ± 0,0033 0,5977 ± 0,0048 0,4936 ± 0,0265 0,5387 ± 0,0145 khối khô ngày 0,6186 ± 0,0008 0,5962 ± 0,0066 0,5603 ± 0,0232 0,5425 ± 0,0190 (g) 0,6604 ± 0,0045 0,7544 ± 0,0189 0,7740 ± 0,0262 0,6520 ± 0,0195 ngày TÀI LIỆU THAM KHẢO ngày 0,6311 ± 0,0097 0,8782 ± 0,0205 0,8720 ± 0,0245 0,6547 ± 0,0320 Sự ức ngày 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 chế α- ngày 14,1618 ± 1,7847 61,6450 ± 1,9013 27,7706 ± 2,2872 0,0000 ± 0,0000 glucosid ngày 28,4951 ± 1,4299 34,2851 ± 1,1311 18,4003 ± 1,2157 18,1602 ± 1,4595 ase (%) ngày 36,2851 ± 0,8712 25,1738 ± 2,4511 16,4823 ± 1,8363 9,7104 ± 1,7181 Phụ lục 4.9: Ảnh hưởng methyl jasmonate đến tăng trưởng rễ tơ Chỉ tiêu Thời gian Nồng độ methyl jasmonate theo dõi ni cấy µM 25 µM 50 µM 100 µM Sinh ngày 0,5768 ± 0,0033 0,4231 ± 0,0315 0,4199 ± 0,0299 0,5282 ± 0,0245 khối khô ngày 0,6186 ± 0,0008 0,5281 ± 0,0232 0,4254 ± 0,0152 0,5293 ± 0,0556 (g) ngày 0,6604 ± 0,0045 0,7633 ± 0,0277 0,4626 ± 0,0206 0,6520 ± 0,0269 ngày 0,6311 ± 0,0097 0,8613 ± 0,0225 0,7527 ± 0,0285 0,4137 ± 0,0086 Sự ức ngày 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 chế α- ngày 14,8285 ± 2,6691 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 glucosid ngày 28,1618 ± 3,6673 24,9791 ± 5,3012 6,4528 ± 0,7415 5,3145 ± 0,5369 ase (%) ngày 36,2851 ± 0,8712 15,2152 ± 0,4889 2,3567 ± 0,6951 0,0000 ± 0,0000 Phụ lục 4.10: Ảnh hưởng acid salicylic đến tăng trưởng rễ tơ Chỉ tiêu Thời gian Nồng độ acid salicylic theo dõi nuôi cấy µM 25 µM 50 µM 100 µM Sinh ngày 0,5768 ± 0,0033 0,5343 ± 0,0232 0,4722 ± 0,0253 0,4954 ± 0,0065 khối khô ngày 0,6186 ± 0,0008 0,5582 ± 0,0292 0,4803 ± 0,0186 0,5301 ± 0,0256 (g) ngày 0,6604 ± 0,0045 0,5606 ± 0,0227 0,6672 ± 0,0299 0,6736 ± 0,0238 ngày 0,6311 ± 0,0097 0,7887 ± 0,0470 0,6396 ± 0,0296 0,4836 ± 0,0107 Sự ức ngày 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 chế α- ngày 14,8285 ± 2,6691 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 glucosid ngày 28,1618 ± 3,6673 16,4727 ± 1,4814 14,4982 ± 1,5328 0,0000 ± 0,0000 ase (%) ngày 36,2851 ± 0,8712 2,0233 ± 0,9128 1,6900 ± 0,6402 0,0000 ± 0,0000 Phụ lục 4.11: Ảnh hưởng cao nấm men đến tăng trưởng rễ tơ Chỉ tiêu Thời gian Nồng độ cao nấm men theo dõi nuôi cấy mg/ml 0,25 mg/ml 0,5 mg/ml mg/ml Sinh ngày 0,5768 ± 0,0033 0,5424 ± 0,0237 0,5603 ± 0,0386 0,5626 ± 0,0270 khối khô ngày 0,6186 ± 0,0008 0,5603 ± 0,0365 0,6687 ± 0,0474 0,6437 ± 0,0209 (g) ngày 0,6604 ± 0,0045 0,7010 ± 0,0220 0,6826 ± 0,0195 0,7743 ± 0,0204 ngày 0,6311 ± 0,0097 0,6627 ± 0,0281 0,7898 ± 0,0182 0,8100 ± 0,0157 ngày 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 TÀI LIỆU THAM KHẢO Sự ức ngày 14,8285 ± 2,6691 13,7273 ± 1,5971 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 chế α- ngày 28,1618 ± 3,6672 5,0233 ± 0,8504 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 36,2851 ± 0,8712 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 0,0000 ± 0,0000 glucosid ase (%) ngày Phụ lục 4.12: Ảnh hưởng tiền chất (L-phenylalanine) kết hợp với elicitor (chitosan) đến tăng trưởng rễ tơ Chỉ tiêu theo dõi Sinh khối khô (g) Sự ức Thời gian nuôi cấy Phenylalanine µM Phenylalanine µM + chitosan 50 mg/l ngày 0,5439 ± 0,0144 0,5498 ± 0,0034 ngày 0,6249 ± 0,0081 0,6242 ± 0,0072 ngày 0,7246 ± 0,0808 0,7676 ± 0,0051 ngày 0,7214 ± 0,0096 0,7087 ± 0,0124 chế α- ngày 24,6389 ± 0,7901 24,5767 ± 0,8013 glucosidase (%) ngày 52,8749 ± 1,2960 72,5883 ± 1,0316 ngày 95,7031 ± 1,2239 32,1050 ± 1,5628 ngày 96,3530 ± 1,1076 23,9079 ± 1,1353 Phụ lục 5.1: Đuờng tương quan % ức chế α-glucosidase cao chiết Sự ức chế… loại rễ Ké hoa đào nồng độ acarbose Rễ trồng đất 625 Nồng độ cao rễ… TÀI LIỆU THAM KHẢO Sự ức chế… Sự ức chế αglucosidase… Sự ức chế αglucosidase (%) Rễ tơ thủy canh 39.0625 Nồng độ cao rễ tơ… Acarbose Rễ tơ in vitro 375 Nồng độ cao rễ tơ… Nồng độ acarbose… Giá trị OD544 nm nồng độ diosgenin khác Nồng độ Diosgenin (µg/ml) Giá trị OD544 nm 0,400 ± 0,027 100 0,504 ± 0,027 200 0,618 ± 0,024 300 0,694 ± 0,013 400 0,800 ± 0,018 500 0,932 ± 0,021 600 0,997 ± 0,023 TÀI LIỆU THAM KHẢO Giá trị OD544 nm y = 0.001x + 0.4033 R² = 0.9962 Nồng độ diosgenin (µg/ml) Đồ thị thể tương quan nồng độ diosgenin giá trị OD544nm Giá trị OD510 nm nồng độ quecetin khác Nồng độ quecetin (µg/ml) Giá trị OD510 nm 0,005 ± 0,002 40 0,035 ± 0,006 80 0,057 ± 0,007 120 0,088 ± 0,004 160 0,119 ± 0,007 200 0,145 ± 0,009 TÀI LIỆU THAM KHẢO Giá trị OD510 nm y = 0.0007x + 0.0048 R² = 0.9982 Nồng độ quecetin (µg/ml) Đồ thị thể tương quan nồng độ quercetin giá trị OD510nm Giá trị OD490nm nồng độ sucrose khác Nồng độ sucrose (μg/ml) Giá trị ΔOD490 nm TÀI LIỆU THAM KHẢO 0,000 ± 0,000 20 0,221 ± 0,005 40 0,505 ± 0,015 60 0,671 ± 0,028 80 0,864 ± 0,058 100 1,083 ± 0,041 Đồ thị thể tương quan nồng độ sucrose giá trị OD490nm Giá trị OD765nm nồng độ acid gallic khác Nồng độ acid gallic (μg/ml) Giá trị ΔOD765 nm TÀI LIỆU THAM KHẢO 0,016 ± 0,001 10 0,168 ± 0,001 20 0,334 ± 0,004 30 0,527 ± 0,005 40 0,714 ± 0,002 50 0,900 ± 0,007 Đồ thị thể tương quan nồng độ acid gallic giá trị OD765nm Giá trị OD544 nm nồng độ diosgenin khác Nồng độ Diosgenin (µg/ml) Giá trị OD544 nm 0,400 ± 0,027 100 0,504 ± 0,027 200 0,618 ± 0,024 300 0,694 ± 0,013 400 0,800 ± 0,018 500 0,932 ± 0,021 600 0,997 ± 0,023 TÀI LIỆU THAM KHẢO Giá trị OD544 nm y = 0.001x + 0.4033 R² = 0.9962 Nồng độ diosgenin (µg/ml) Đồ thị thể tương quan nồng độ diosgenin giá trị OD544nm Giá trị OD510 nm nồng độ quecetin khác Nồng độ quecetin (µg/ml) Giá trị OD510 nm 0,005 ± 0,002 40 0,035 ± 0,006 80 0,057 ± 0,007 120 0,088 ± 0,004 160 0,119 ± 0,007 200 0,145 ± 0,009 TÀI LIỆU THAM KHẢO Giá trị OD510 nm y = 0.0007x + 0.0048 R² = 0.9982 Nồng độ quecetin (µg/ml) Đồ thị thể tương quan nồng độ quercetin giá trị OD510nm Giá trị OD490nm nồng độ sucrose khác Nồng độ sucrose (μg/ml) Giá trị ΔOD490 nm TÀI LIỆU THAM KHẢO 0,000 ± 0,000 20 0,221 ± 0,005 40 0,505 ± 0,015 60 0,671 ± 0,028 80 0,864 ± 0,058 100 1,083 ± 0,041 Đồ thị thể tương quan nồng độ sucrose giá trị OD490nm Giá trị OD765nm nồng độ acid gallic khác Nồng độ acid gallic (μg/ml) Giá trị ΔOD765 nm TÀI LIỆU THAM KHẢO 0,016 ± 0,001 10 0,168 ± 0,001 20 0,334 ± 0,004 30 0,527 ± 0,005 40 0,714 ± 0,002 50 0,900 ± 0,007 Đồ thị thể tương quan nồng độ acid gallic giá trị OD765nm TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHỤ LỤC