Nghiên cứu ứng dụng hạ cholesterol và bảo vệ gan của bột sấy phun từ đài hoa bụp giấm hibiscus sabdarifa l malvaceae

SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH CHƢƠNG TRÌNH VƢỜN ƢƠM SÁNG TẠO KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ * BÁO CÁO NGHIỆM THU NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG HẠ CHOLESTEROL MÁU VÀ BẢO VỆ GAN CỦA BỘT SẤY PHUN TỪ ĐÀI HOA BỤP GIẤM (Hibiscus sabdariffa L Malvaceae) CHÚ NGHIỆM ĐỀ TÀI: DS.LÊ THỊ LAN PHƢƠNG CƠ QUAN CHỦ TRÌ: TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KH & CN TRẺ TP.Hồ Chí Minh, 05/2013 SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH CHƢƠNG TRÌNH VƢỜN ƢƠM SÁNG TẠO KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ * BÁO CÁO NGHIỆM THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng nghiệm thu ngày 23 tháng 04 năm 2013) NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG HẠ CHOLESTEROL MÁU VÀ BẢO VỆ GAN CỦA BỘT SẤY PHUN TỪ ĐÀI HOA BỤP GIẤM (Hibiscus sabdariffa L Malvaceae) Thủ trƣởng Cơ quan chủ trì đề tài (Họ tên, chữ ký, đóng dấu) Chủ nhiệm đề tài (Họ tên chữ ký) Giám đốc Sở Khoa học Công nghệ Chủ tịch Hội đồng xét duyệt TÓM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU TÓM TẮT ĐỀ TÀI Mở đầu: Bụp giấm (Hibiscus sabdariffa L Malvaceae) chứa anthocyanin có tác dụng chống oxy hóa tốt đƣợc trồng thành công Việt Nam đạt tiêu chuẩn VietGAP Hiện nay, đài hoa Bụp giấm đƣợc nghiên cứu sản xuất dạng chế phẩm bột sấy phun, nhiên, chƣa có cơng trình nghiên cứu tác dụng dƣợc lý chế phẩm Mục tiêu: Xây dựng số tiêu chuẩn hóa lý, đánh giá tác dụng hạ cholesterol bảo vệ gan bột sấy phun từ đài hoa Bụp giấm (BSP) chuột nhắt Nội dung: Tiêu chuẩn BSP: Độ ẩm, tro toàn phần, kim loại nặng, định lƣợng anthocyanin toàn phần Độc tính cấp: Xác định LD50 Dmax Đánh giá tác dụng hạ cholesterol mơ hình tăng lipid tyloxapol (triton WR-1339) tiêm phúc mô 400 mg/kg cholesterol đƣờng uống 25 mg/kg tuần Định lƣợng cholesterol toàn phần, triglycerid, HDL-C LDL-C máu chuột sau thử nghiệm Đánh giá tác dụng bảo vệ gan mơ hình gây tổn thƣơng gan cấp tính ethanol 40%, g/kg x lần 12 giờ, định lƣợng AST, ALT, MDA, GSH sau liều ethanol cuối quan sát vi phẫu gan chuột thử nghiệm Kết quả: BSP đạt độ ẩm 2,83%, tro toàn phần 0,123%, kim loại nặng < 10 ppm (asen, cadimi, chì, thủy ngân), anthocyanin tồn phần 0,215% BSP khơng thể độc tính cấp liều 8,9 g/kg Liều 0,45 g/kg BSP (1/20 Dmax) làm giảm cholesterol 7%, triglycerid 32%, LDL-C 63% (mơ hình tiêm tyloxapol), giảm cholesterol 22%, LDL-C 45% (mơ hình uống cholesterol) Liều 0,9 g/kg BSP (1/10 Dmax) làm giảm triglycerid 78% (mơ hình tyloxapol), giảm cholesterol 11%, LDL-C 39% (mơ hình uống cholesterol) Tuy nhiên, khơng có thay đổi HDL-C nhóm Về tác dụng bảo vệ gan, BSP liều 0,45 g/kg, làm giảm men gan AST 36%, ALT 33%, MDA 42% làm giảm mức độ viêm, hoại tử tế bào gan Kết luận: BSP thể tác dụng hạ cholesterol máu chuột nhắt tăng lipid máu nội sinh ngoại sinh liều 0,45 g/kg 0,9 g/kg, tác dụng bảo vệ gan liều 0,45 g/kg Từ khóa: Tăng lipid máu, Hibiscus sabdarifa L Malvaceae, tyloxapol, cholesterol, LD50 ABSTRACT Background: Hibiscus (Hibiscus sabdarifa L Malvaceae) contains anthocyanin with antioxidant activity which was cultivated in Vietnam and gained VietGAP standard There is a product from dry powder of Hibiscus calyces, however, none research carries about its effects Objective: This study was designed to evaluate the hypolipidemic effect of dry powder from Hibiscus calyces (BSP) in mice Method: Detemine standards of BSP such as, moisture content, total ash, metal (As, Cd, Pb, Hg), qualitified determination of anthocyanin total Determine acute toxicity of BSP (LD50 or Dmax) Study the lowering lipidemic effect of BSP in hyperlipidemic mice by tyloxapol (triton WR-1339), i.p., 400 mg/kg and cholesterol, p.o., 25 mg/kg during weeks Quantify total cholesterol, triglyceride, HDL and LDL after studying Study the protective effect in liver of BSP in acute hepatotoxicity mice by ethanol 40%, p.o., g/kg x times each 12 h, quantify level AST, ALT, MDA, GSH hours after the last dose of ethanol and test histopathological liver of mice Results: BSP gained standards such as, 2.83% moisture content, 0.123% total ash, metal < 10 ppm (As, Cd, Pb, Hg) and 0.215% anthocyanin total BSP did not express acute toxicity in mice at the dose 8.9 g powder/kg The dose 0.45 g/kg BSP (1/20 Dmax) showed significantly reduction in serum cholesterol level by 7% and 22% (p < 0.01), triglyceride level by 32% (p < 0.05), LDL level by 63% (p < 0.05) and 45% (p < 0.01) The dose 0.9 g/kg BSP (1/10 Dmax) also reduced in serum triglyceride level by 78% (p < 0.05) and cholesterol level by 11%, LDL level by 39% (p < 0.01) However, no significant change in HDL level was observed The dose 0.45 g/kg (1/20 Dmax) reduced in AST level by 36%, ALT level by 33%, MDA level by 42% in acute hepatotoxicity mice Conclusion: The results indicate that BSP exhibit the hypolipidemic and protective liver effects, which belong to the used dose in mice MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Rối loạn lipid máu 1.1.1 Nguyên nhân 1.1.2 Biến chứng 1.1.3 Điều trị 1.1.4 Hóa dƣợc điều trị rối loạn lipid máu 1.2 Đặc điểm bệnh học gan 10 1.3 Ethanol 11 1.3.1 Chuyển hoá ethanol thể 11 1.3.2 Cơ chế gây độc cấp tính 12 1.3.3 Các thuốc bảo vệ gan 13 1.4 Dƣợc liệu nghiên cứu (Bụp giấm - Hibiscus sabdariffa L Malvaceae) 15 1.4.1 Đặc điểm thực vật 15 1.4.2 Thành phần hóa học 16 1.4.3 Tác dụng dƣợc lý đài hoa Bụp giấm 17 1.4.4 Công dụng 18 1.5 Mơ hình tăng lipid máu 19 1.5.1 Mơ hình tăng lipid máu tyloxapol (triton WR-1339) 20 1.5.2 Mơ hình tăng lipid máu cholesterol đƣờng uống 23 1.6 Mơ hình gây tổn thƣơng gan 24 1.6.1 Dùng carbon tetrachlorid (CCl4) gây tổn thƣơng gan 24 1.6.2 Dùng acetaminophen (Paracetamol) gây tổn thƣơng gan 25 1.6.3 Dùng ethanol (EtOH) gây tổn thƣơng gan 25 Chƣơng NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 Tiêu chuẩn bột sấy phun đài hoa Bụp giấm 28 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 28 2.1.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 28 2.2 Độc tính cấp bột sấy phun đài hoa Bụp giấm 30 2.2.1 Súc vật thử nghiệm 30 2.2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 30 2.3 Tác dụng hạ cholesterol máu bột sấy phun đài hoa Bụp giấm 34 2.3.1 Súc vật thử nghiệm 34 2.3.2 Hóa chất 34 2.3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 34 2.4 Tác dụng bảo vệ gan bột sấy phun đài hoa Bụp giấm 35 2.4.1 Súc vật thử nghiệm 35 2.4.2 Hóa chất 35 2.4.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 36 2.5 Phƣơng pháp thống kê, xử lý số liệu 38 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 39 3.1 Tiêu chuẩn bột sấy phun đài hoa Bụp giấm 39 3.1.1 Kiểm tra độ màu phƣơng pháp đo quang 39 3.1.2 Định lƣợng anthocyanin phƣơng pháp đo quang 39 3.1.3 Độ ẩm 39 3.1.4 Tro toàn phần 40 3.1.5 Kim loại nặng 40 3.2 Độc tính cấp bột sấy phun đài hoa Bụp giấm 41 3.3 Tác dụng hạ cholesterol bột sấy phun đài hoa Bụp giấm 42 3.3.1 Thử nghiệm tác dụng hạ lipid máu bột sấy phun mơ hình tăng lipid máu tyloxapol (triton WR-1339) 42 3.3.2 Thử nghiệm tác dụng hạ lipid máu bột sấy phun đài hoa Bụp giấm mơ hình uống cholesterol 44 3.4 Tác dụng bảo vệ gan bột sấy phun đài hoa Bụp giấm 46 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 50 4.1 Kết luận 50 4.2 Đề nghị 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Apo : Apoprotein ALT : Alanine aminotransferase AST : Aspartate aminotransferase BSP : Bột sấy phun CETP : Cholesterylester transfer protein DĐVN : Dƣợc Điển Việt Nam Dmax : Dose maximum GSH : Glutathion HCl : Acid hydrocloric HDL-C : High density lipoprotein cholesterol HMG-CoA reductase: 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase HTGL : Hepatic triglyceride lipase IP : Intraperitoneally (tiêm phúc mô) LCAT : Leucithin cholesterol acyltransferase LD50 : Lethal dose 50 LDL-C : Low density lipoprotein cholesterol LPL : Lipoprotein lipase NaOH : Natri hydroxyd PL : Phụ lục SD : Standard Derivatives (độ lệch chuẩn) SEM : Standard Error of Mean (sai số chuẩn số trung bình) TP : Tồn phần TT : Thuốc thử VLDL-C : Very low density lipoprotein cholesterol i DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Một số mơ hình gây tăng lipid máu tyloxapol (triton WR-1339) 22 Bảng 1.2 Một số mơ hình gây tăng lipid máu cholesterol đƣờng uống 23 Bảng 1.3 Một số nghiên cứu mơ hình gây tổn thƣơng gan cấp ethanol 26 Bảng 2.1 Các hành vi chuột cần ý thời gian theo dõi………………33 Bảng 3.1 Kết kiểm tra độ màu phƣơng pháp đo quang BSP………… 39 Bảng 3.2 Kết độ ẩm bột sấy phun đài hoa Bụp giấm 39 Bảng 3.3 Kết tro toàn phần đài hoa Bụp giấm 40 Bảng 3.4 Kết khảo sát bột sấy phun đài hoa Bụp giấm 40 Bảng 3.5 Kết thử nghiệm độc tính cấp BSP 41 Bảng 3.6 Kết định lƣợng cholesterol toàn phần, triglycerid máu, HDL-C LDL-C chuột thử nghiệm (mmol/l) 42 Bảng 3.7 Kết định lƣợng cholesterol toàn phần, triglycerid máu, HDL-C LDL-C chuột thử nghiệm (mmol/l) 44 Bảng 3.8 Kết định lƣợng AST, ALT, MDA, GSH chuột thử nghiệm 46 Bảng 3.9 Kết vi phẫu gan nhóm thử nghiệm (mức độ tăng nhóm so với nhóm chứng uống nƣớc cất) 47 ii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc lipoprotein Hình 1.2 Cây Bụp giấm (Hibiscus sabdariffa L Malvaceae) 15 Hình 1.3 Vị trí Bụp giấm bảng phân loại hệ thống thực vật 16 DANH MỤC PHỤ LỤC PL1 Kết định lƣợng lipid máu nhóm thử nghiệm tác dụng hạ lipid máu BSP với mơ hình tiêm tyloxapol (mmol/l) i PL2 Kết định lƣợng lipid máu nhóm thử nghiệm tác dụng hạ lipid máu BSP với mơ hình uống cholesterol (mmol/l) .iii PL3 Kết định lƣợng men gan AST, ALT nhóm thử nghiệm tác dụng bảo vệ gan BSP chuột gây độc cấp tính ethanol (U/L) v PL4 Kết định lƣợng MDA, GSH nhóm thử nghiệm tác dụng bảo vệ gan BSP chuột gây độc cấp tính ethanol .viii iii BÁO CÁO NGHIỆM THU Tên đề tài: Nghiên cứu tác dụng hạ cholesterol bảo vệ gan bột sấy phun từ đài hoa Bụp giấm (Hibiscus sabdariffa L Malvaceae) Chủ nhiệm đề tài: DS.Lê Thị Lan Phƣơng Cơ quan chủ trì: Trung Tâm Phát Triển Khoa Học Công Nghệ Trẻ Thời gian thực đề tài: Tháng 12 năm 2011 đến tháng 12 năm 2012 Kinh phí đƣợc duyệt: 80.000.000 đ Kinh phí cấp: 72.000.000, theo TB số: 207 TB-SKHCN, ngày 20/12 /2011 Mục tiêu: Định lƣợng hàm lƣợng anthocyanin xây dựng số tiêu chuẩn hóa lý bột sấy phun từ đài hoa Bụp giấm Đánh giá tác dụng hạ cholesterol bảo vệ gan bột sấy phun từ đài hoa Bụp giấm chuột nhắt trắng Nội dung: Công việc dự kiến Định lƣợng anthocyanin xây dựng số tiêu chuẩn hóa lý bột sấy phun Bụp giấm Thử độc tính cấp bột sấy phun Bụp giấm chuột nhắt trắng Đánh giá tác dụng hạ cholesterol máu bột sấy phun Bụp giấm chuột nhắt trắng Đánh giá tác dụng bảo vệ gan bột sấy phun Bụp giấm mơ hình gây độc gan ethanol 40% Xử lý số liệu, báo cáo kết Công việc thực Định lƣợng anthocyanin, kiểm tra độ màu phƣơng pháp đo quang xác định độ ẩm, độ tro toàn phần, kim loại nặng bột sấy phun Bụp giấm Thử độc tính cấp bột sấy phun Bụp giấm chuột nhắt trắng, xác định đƣợc Dmax Đánh giá tác dụng hạ cholesterol máu bột sấy phun Bụp giấm chuột nhắt trắng với liều 1/20 Dmax 1/10 Dmax mơ hình tăng lipid máu nội sinh ngoại sinh Đánh giá tác dụng bảo vệ gan bột sấy phun Bụp giấm với liều 1/20 Dmax 1/10 Dmax mơ hình gây độc gan ethanol 40% Xử lý số liệu, viết báo cáo toàn văn iv MỞ ĐẦU Các bệnh lý oxy hóa có xu hƣớng gia tăng xã hội phát triển Trong số đó, rối loạn chuyển hóa lipid máu, nguyên nhân bệnh xơ vữa động mạch, bệnh mạch vành, viêm tụy, … có tỷ lệ ngày cao [38], [45], [47] Chi phí để điều trị bệnh lý mạn tính gánh nặng khơng cho cá nhân mà cịn mang tính xã hội việc sử dụng hóa dƣợc dài ngày để điều trị đƣa đến nhiều tác dụng phụ nguy hại, đặc biệt nguy gây viêm gan cần đƣợc quan tâm Bên cạnh đó, tình trạng tăng men gan, viêm gan nhiều nguyên nhân khác từ thực phẩm, thuốc…cũng ngày gia tăng Vì thế, việc tìm kiếm liệu pháp, thuốc có hiệu an toàn là vấn đề cấp thiết Trong nguồn nguyên liệu đến từ thiên nhiên vơ phong phú giới nói chung Việt nam nói riêng, có nhiều thuốc, vị thuốc có khả làm giảm lipid máu đƣợc chứng minh qua nghiên cứu thực tế sử dụng [12] Đặc biệt, số có Bụp giấm (Hibiscus sabdarifa L Malvaceae), lồi nhiệt đới có khả thích nghi với nhiều loại đất khác đƣợc trồng thành công Phú Yên, Việt Nam với quy mô rộng đạt tiêu chuẩn VietGAP Đây không nguồn nguyên liệu quý giá cho việc sản xuất chế phẩm mà phƣơng cách xóa đói giảm nghèo cho nơng dân vùng đất khơ hạn Bụp giấm chứa anthocyanin có tác dụng chống oxy hóa tốt, ngồi cịn có alkaloid, chất đƣờng, chất khoáng, acid hữu cơ, Bộ phận thƣờng sử dụng đài hoa, [26] Cho đến nay, giới có nhiều cơng trình nghiên cứu liên quan đến Bụp giấm nhƣ: Tác dụng giảm lipid máu polyphenol thơng qua ức chế q trình tạo mỡ thúc đẩy thải lipid gan, giảm độc tính Paracetamol gan (giảm tế bào số tế bào chết oxy hóa tế bào), hạ huyết áp, [17], [25],[28] Tuy nhiên, Việt Nam cơng trình nghiên cứu tác dụng Bụp giấm cịn ít, chủ yếu số nghiên cứu công dụng Bụp giấm thực phẩm nhƣ dùng làm chất màu lên men làm nƣớc giải khát TÀI LIỆU THAM KHẢO Abramowicz M, editor (1998), “Choice of lipid-lowering drugs”, Med Lett, 40, pp.117-122 Adegunloye, B J., Omoniyi, J O., Owolabi, O A., Ajagbonna, O P., Sofola, O A., Coker, H A (1996), "Mechanisms of the blood pressure lowering effect of the calyx extract of Hibiscus sabdariffa in rats" Afr J Med Sci, 25(3), pp 235-238 Ajay, M., Chai, H J., Mustafa, A M., Gilani, A H., M.R., M (2007), "Mechanisms of the anti-hypertensive effect of Hibiscus sabdariffa L calyces" J Ethnopharmacol, 109(3), pp 388-393 Ali, B H., Mousa, H M., El-Mougy, S (2003), "The effect of a water extract and anthocyanins of Hibiscus sabdariffa L on paracetamol-induced hepatoxicity in rats" Phytother Res, 17(1), pp 56-59 B.Ben Amor, K.Allaf (2009), “Impact of texturing using instant pressure drop treatment prior to solvent extraction of anthocyanins from Malaysian Roselle (Hibiscus sabdariffa)”, Food Chemistry, 115, pp.820-825 Bộ môn dƣợc lý trƣờng đại học y Hà Nội (2007), Dược lý học lâm sàng NXB Y học, Hà Nội, tr 140-145 Bộ môn Miễn dịch – Sinh lý bệnh (2006), “Miễn dịch sinh lý bệnh”, NXB Y học, tr.145-155 Bộ môn sinh lý học - Đại học Y dƣợc TP HCM (2008), Sinh lý học y khoa, Tập NXB Y học, Tp Hồ Chí MInh, tr 335-340 Bộ y tế (2002), Dược điển Việt Nam IV, NXB Y học Hà Nội, PL-110, PL183, PL-179, PL-241, PL-258 10 Chang, Y C., Huang, H P., Hsu, J D., Yang, S F., Wang, C J (2005), "Hibiscus anthocyanins rich extract-induced apoptotic cell death in human promyelocytic leukaemia cells" Toxicol Appl Pharmacol, 205(3), pp 201-212 11 Dahiru, D., Obi, O J., Umaru, H (2003), "Hibiscus sabdariffa extract enhances the recovery from hepatic damage induced by carbon tetrachloride" Biokemistri, 15(1), pp 27-33 12 Đỗ Tất Lợi (2008), “Cây thuốc vị thuốc Việt Nam” NXB Y Học & Thời Đại, tr.48-49, 181-182, 355-357 13 Đỗ Trung Đàm (1996), Phương pháp xác định độc tính cấp thuốc, NXB Y học Hà Nội, Hà Nội, tr.7-20 14 Erl-Shyh Kao et al (2009), “Anthocyanin extracted from Hibiscus attenuate oxidized LDL-C-mediated foam cell formation involving regulation of CD36 gene”, Chemical-Biological Interaction, 179, pp.212-218 15 Fauci, A., Braunwald, E., Kasper, D., Hauser, S., Longo, D., J., J., et al (2008), Harrison's Principles of Internal Medicine, 17th Edition McGrawHill Professional, USA, pp 1925, 1969-1971 16 G.Oboh.J.B.T.Rocha (2008), “Antioxidant and Neuroprotective propertives of Sour tea (Hisbiscus sabdariffa, Calyx) and Green tea (Camellia sinensis) on some Pro-oxidant-induced Lipid peroxidation in brain in vitro”, Food Biophysics, 3, pp.382-389 17 H.A.Wahabi et al (2010), “The effectiveness of Hibiscus sabdariffa in the treatment of hypertension: Asystematic review”, Phytomedicine, 17, pp.83-86 18 Heather M Alger et al (2010), “Inhibition of Acyl-Coenzyme A: Cholesterol Acyltransferase (ACAT2) prevents dietary cholesterol-associated steatosis by enhancing hepatic triglycerid mobilization”, Journal Biology Chemistry, 285 (19), pp.14267-14274 19 Herrera-Arellano, A., Flores-Romero, S., Chavez-Soto, M A., Tortoriello, J l (2004), "Effectiveness and tolerability of a standardized extract from Hibiscus sabdariffa in patients with mild to moderate hypertension: a controlled and randomized clinical tria" Phytomedicine, 11(5), pp 375-382 20 Hirunpanich, V., Utaipat, A., Noppawan, P M., Bunyapraphatsara, N., Sato, H., Herunsale, A., et al (2006), "Hypocholesterolemic and antioxidant effects of aqueous extracts from the dried calyx of Hibiscus sabdariffa L in hypercholesterolemic rats" J Ethnopharmacol, 103(2), pp 252-260 21 Jingjing Chen MD and Xiangrong Li MD (2007), “Hypolipidemic effect of flavonoids from mulberry leaves in Triton WR-1339 induced hyperlipidemic mice”, Asia Pac J Clin Nutr 2007, 16(1), pp.290-294 22 John S.Millar et al (2005), “Determining hepatic triglycerid production in mice: comparison of poloxamer 407 with Triton WR-1339”, The Journal of Lipid Research, 46, pp.2023-2028 23 Kanuri, G., Weber, A., Volynets, V., Spruss, A., Bischoff, S C., Bergheim, I (2009), "Cinnamon Extract Protects against Acute Alcohol-Induced Liver Steatosis in Mice" J Nutr, 139(3), pp 482-487 24 Kim, S J., Jung, Y S., Kwon, D Y., Kim, Y C (2008), "Alleviation of acute ethanol-induced liver injury and impaired metabolomics of Scontaining substances by betaine supplementation" Biochemical and Biophysical Research Communications, 368, pp 893–898 25 Liang-Chih Liu et al (2009), “Aqueous extract of Hibiscus sabdariffa L decelerates acetaminophen-induced acute damage by reducing cell death and oxidave stress in mouse experimental models”, JSci Food Agric, 90, pp.329-337 26 Mady Cisse et al (2009), “Le bissap (Hibiscus sabdariffa L.): composition et principales utilisations”, Fruits, vol.64, pp 179-193 27 María Jesús Tón, Marcelino Alvarez, Jesús M Culebras, Javier GonzálezGallego (2009), "An overview of animal models for investigating the pathogenesis and therapeutic strategies in acute hepatic failure" World J Gastroenterol, 15(25), pp 3086-3098 28 Mon-Yuan Yang et al (2010), “The Hypolipidemic Effect of Hibiscus sabdariffa Polyphenols via Inhibiting Lipogenesis and Promoting Hepatic Lipid Clearance”, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 58, pp 850-859 29 Nguyễn Thị Thu Hƣơng, Lƣơng Kim Bích, Trần Mỹ Tiên, Trần Cơng Luận, Phạm Khánh Biền (2008), "Nghiên cứu tác dụng dƣợc lý thực nghiệm chế phẩm “Kỷ thƣợc địa hoàng gia vị” theo hƣớng tăng cƣờng thể trạng chức gan" Y học TP.HCM, 12(4), tr 152-158 30 Nguyễn Thị Thu Hƣơng, Nguyễn Thị Ngọc Hằng (2010), "Nghiên cứu chống oxy hoá theo hƣớng bảo vệ gan nấm linh chi đỏ (Ganoderma lucidum)" Y học TP.HCM, 14(2), tr 129-134 31 Ontko, J A (1973), "Effects of ethanol on the metabolism of free fatty acids in isolated liver cells" J Lipid Res, 14(1), pp 78-86 32 Osna, N A (2009), "In vitro and in vivo models of acute alcohol exposure" World J Gastroenterol 15(10), pp 1168-1177 33 Peet, A., Michael, A., Lieberman, Marks, A (2012), Marks’ Basic Medical Biochemistry: A Clinical Approach, 2nd Edition Lippincott Williams & Wilkins, North American, pp 458-476, 697-711 34 Pooja C Ochani and Priscilla D’Mello (2009) “Antioxidant and antihyperlipidemic activity of Hibiscus sabdariffa Linn leaves and calyces extracts in rats”, Indian Journal of Experimental Biology, 47, pp.276-282 35 Phil-sun Oh Kye-Taek Lim (2006), “Glycoprotein (90 kDa) Isolated from Opuntia ficus-indica var saboten Makino Lowers Plasma Lipid Level through Scavenging of Intracellular Radicals in Triton WR-1339-Induced Mice”, Biol Pharm Bull., 29(7), pp.1391-1396 36 Robert H.Knopp (1999), “Drug treatment of lipid disorders”, The New England Journal of Medicine, 341 (7), pp.498-511 37 Saumendu Deb Roy, Sumit Das, Dibyendu Shil, Koushik Nandan Dutta (2012), "Herbal hepatoprotective agents: a review" World Journal of Pharmaceutical Research, 1(2), pp 87-99 38 Shirani S et al (2009), “Awareness, treatment and control of hypertension, dyslipidaemia and diabetes mellitus in an Iranian population: the IHHP study”, 15, pp.1285-1293 39 Song, Z., Deaciuc, I., Song, M., Lee, D Y., Liu, Y., Ji, X., et al (2006), "Silymarin Protects Against Acute Ethanol-Induced Hepatotoxicity in Mice" Alcohol Clin Exp Res, 30(3), pp 407-413 40 Staels B et al (1998), “Mechanism of action fibrats on lipid and lipoprotein metabolism”, Circulation, 98, pp.2088-2093 41 Titilayo O Fakeye (2009), “Toxic effects of oral administration of Extracts of dried calyx of Hibiscus sabdariffa L Malvaceae”, Phytotherapy research, 23, pp.412-416 42 Tseng, T H., Hsu, J D., Lo, M H., Chu, C Y., Chou, F P., Huang, C L., et al (1998), "Inhibitory effect of Hibiscus protocatechuic acid on tumor promotion in mouse skin" Cancer Lett, 126(2), pp 199-207 43 Trần Thị Thu Hằng (2009), “Dược lực học”, NXB Phƣơng Đông, tr.569-583 44 Varsha Kashaw, Amit kumar Nema, Abhinav Agarwal (2011), "Hepatoprotective Prospective Of Herbal Drugs and Their Vesicular Carriers – A Review" International Journal of Research in Pharmaceutical and Biomedical Sciences, 2(2), pp 360-374 45 Victor RG et al (2008), “Factors associated with hypertension awareness, treatment, and control in Dallas County, Texas”, Arch Intern Med, 168, pp.1285-1293 46 Viện Dƣợc liệu (2006), “Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ dược thảo”, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tr 131-138, 367-368 47 Vitoon Prasongwatana et al (2008), “Uricosuric effect of Roselle (Hibiscus sabdariffa) in normal and renal-stone former subjects”, Journal of Ethonopharmacology, 117, pp.491-495 48 Võ Văn Chi (2012), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y Học, tập 1, tr.265 – 266 49 Wada, S., Yamazaki, T., Kawano, Y., Miura, S., Ezaki, O (2008), "Fish oil fed prior to ethanol administration prevents acute ethanol-induced fatty liver in mice" Journal of Hepatology, 49, pp 441–450 50 Weidong-Xie et al (2007), “Hypolipidemic mechanisms of Ananas comosus L leaves in Mice: Different from fibrates but similar to statins”, Journal Pharmacology Science, 103, pp.267-274 51 Wen-Chin Lee et al (2009), “Polyphenol Extracts from Hibiscus sabdariffa Linnaeus Attenuate Nephropathy in Experimental Type I Diabetes”, Journal Agriculture Food and Chemistry, 57, pp.2206-2210 52 Yamada, T., Alpers, D H., Laine, L., Kaplowitz, N., Owyang, C., Powell, D W (2008), Textbook of Gastroenterology, Volume Set, 5th Edition (Vol 1) Wiley-Blackwell, pp 2247-73 53 Yang, R., Han, X., Delude, R L., Fink, M P (2003), "Ethyl pyruvate ameliorates acute alcohol-induced liver injury and inflammation in mice" J Lab Clin Med, 142(5) 54 Yesim ER OZTAS et al (2011), “Plasma LDL-C subtype distribution in patients with or without coronary stenosis”, Turk Journal Medicine Science, 41 (6), pp.959-964 55 Yi-Seong Kwak et al (2010), “Anti-hyperlipidemic Effects of Red Ginseng Acidic Polysaccharide from Korean Red Ginseng”, Biol Pharm Bull, 33(3), pp.468-472 56 Zarrabal, C O., Waliszewski, S M., Dermitz, B D M., O.Z., F., Jones, H P M., Hipolito, N C., et al (2005), "The consumption of dried calyx ethanolic extract of Hibiscus sabdariffa reduced lipid profile in rats" Plant Foods Hum Nutr., 60(4), pp 153-159 57 Zhao, J., Chen, H., Li, Y (2008), "Protective effect of bicyclol on acute alcohol-induced liver injury in mice" European Journal of Pharmacology, 586, pp 322–331 58 Zhou, Z., Sun, X., Lambert, J C., Saari, J T., Kang, Y J (2002), "Metallothionein-independent zinc protection from alcoholic liver injury" Am J Pathol, 160(6), pp 2267-2274 PHỤ LỤC PL1 Kết định lƣợng lipid máu nhóm thử nghiệm tác dụng hạ lipid máu BSP với mơ hình tiêm tyloxapol (mmol/l) STT Chuột Lơ Cholesterol TP Triglycerid HDL-C LDL-C N1 3,00 1,59 1,45 0,14 N2 2,50 1,06 1,39 0,10 N3 3,00 1,11 1,54 0,10 N4 2,54 1,19 1,26 0,09 Nƣớc cất N5 2,82 1,51 1,59 0,16 N6 2,17 1,50 1,14 0,16 N7 2,00 1,70 1,30 0,15 N8 2,10 1,81 1,32 0,17 T1 2,84 2,63 0,80 0,41 10 T2 3,29 2,65 1,10 0,36 11 T3 3,78 1,25 1,54 0,32 12 T4 3,00 2,72 1,50 0,43 13 T5 3,24 1,82 1,64 0,22 14 T6 3,23 1,18 1,32 0,22 15 T7 2,69 3,39 1,38 0,20 16 T8 2,67 2,47 1,09 0,28 17 F1 2,49 0,92 1,31 0,16 18 F2 2,94 1,08 1,48 0,13 19 F3 3,57 1,15 1,83 0,25 20 F4 3,20 0,88 1,62 0,13 Tyloxapol (400mg/kg) Fenofibrat (200mg/kg) + Tyloxapol (400 mg/kg) i 21 F5 2,47 1,26 1,07 0,26 22 F6 3,86 1,28 2,06 0,20 23 F7 2,58 1,31 1,35 0,16 24 F8 3,46 1,43 1,77 0,14 25 B11 3,00 1,74 1,37 0,40 26 B12 2,62 2,43 1,13 0,20 27 B13 3,60 1,93 1,69 0,10 28 B14 2,49 1,73 1,27 0,08 29 B15 2,79 0,70 0,98 0,20 30 B16 3,19 1,18 1,43 0,20 31 B17 2,92 1,22 1,47 0,11 32 B18 2,38 2,71 0,95 0,21 33 B21 3,44 1,56 1,69 0,26 34 B22 3,30 1,02 1,55 0,38 35 B23 3,50 1,99 1,60 0,32 2,77 0,87 1,45 0,14 2,53 1,08 1,33 0,33 BSP1 (0,45 g/kg) + Tyloxapol (400 mg/kg) BSP2 36 B24 37 B25 38 B26 3,49 1,54 1,46 0,35 39 B27 2,80 0,99 1,50 0,25 40 B28 3,01 1,08 1,52 0,26 (0,9 g/kg) + Tyloxapol (400 mg/kg) ii PL2 Kết định lƣợng lipid máu nhóm thử nghiệm tác dụng hạ lipid máu BSP với mơ hình uống cholesterol (mmol/l) STT Chuột Lơ Cholesterol TP Triglycerid HDL-C LDL-C C1 2,00 1,85 1,25 0,15 C2 2,40 1,92 1,50 0,18 C3 3,00 2,58 1,85 0,13 C4 2,00 0,56 1,07 0,16 C5 2,25 1,82 1,35 0,18 C6 1,60 1,55 1,10 0,17 C7 2,20 2,45 1,30 0,18 D1 2,57 1,15 1,39 0,26 D2 3,30 1,46 1,49 0,36 10 D3 3,32 1,20 1,06 0,32 11 D4 2,93 1,31 1,62 0,32 12 D5 2,86 1,61 1,41 0,37 13 D6 2,54 1,05 1,35 0,28 14 D7 2,99 1,41 2,00 0,35 15 A1 2,60 1,10 1,99 0,33 16 A2 3,47 1,34 2,00 0,41 17 A3 2,06 0,80 1,10 0,32 18 A4 3,00 2,47 2,31 0,18 19 A5 2,69 0,67 1,47 0,31 20 A6 2,07 2,36 0,82 0,13 Chứng Cholesterol (25 mg/kg) Atorvastain (10mg/kg) + cholesterol (25 mg/kg) iii 21 A7 2,60 1,26 1,36 0,20 22 B11 2,89 2,09 1,96 0,33 23 B12 2,00 2,06 1,08 0,15 24 B13 BSP1 2,30 2,26 1,34 0,24 25 B14 2,17 2,17 1,60 0,13 26 B15 (0,45 g/kg) + cholesterol (25 mg/kg) 2,79 2,07 1,53 0,23 27 B16 2,25 1,58 1,47 0,24 28 B17 2,40 2,04 1,49 0,25 29 B21 3,24 2,50 1,70 0,22 30 B22 2,17 1,09 1,37 0,25 31 B23 BSP2 2,10 1,18 1,20 0,21 32 B24 (0,9 g/kg) + cholesterol 2,78 1,66 1,70 0,29 33 B25 (25 mg/kg) 3,09 2,35 1,66 0,25 34 B26 2,23 2,16 0,95 0,19 35 B27 2,80 2,05 1,43 0,17 iv PL3 Kết định lƣợng men gan AST, ALT nhóm thử nghiệm tác dụng bảo vệ gan BSP chuột gây độc cấp tính ethanol (U/L) Mã số Khối lƣợng (gram) AST ALT N1 27 85 45 N2 28 136 45 N3 31 64 75 N4 25 107 37 N5 33 83 41 N6 28 133 62 N7 28 101 50 N8 25 106 52 N9 23 104 53 N10 28 99 40 D1 23 216 107 D2 29 154 82 D3 23 285 94 D4 26 172 64 D5 24 189 51 D6 25 166 84 D7 29 127 89 D8 23 213 111 D9 26 169 94 D10 22 223 110 Lô nƣớc - 10 Lô gây độc - 10 v Lô Thử (BSP2) - 10 B21 27 222 118 B22 31 201 110 B23 25 163 63 B24 28 186 86 B25 22 135 60 B26 29 136 96 B27 25 124 78 B28 29 142 82 B29 33 157 55 B30 27 198 73 B11 30 135 74 B12 28 132 68 B13 26 202 78 B14 22 156 44 B15 29 129 96 B16 27 153 61 B17 25 140 54 B18 28 101 68 B19 26 139 76 B20 25 111 49 S1 27 126 59 S2 28 163 102 Lô Thử (BSP1) - 10 Lô Đối chiếu (S) - 10 vi S3 25 201 70 S4 27 162 97 S5 29 110 67 S6 25 139 82 S7 24 218 83 S8 26 109 53 S9 26 121 64 S10 27 97 54 vii PL4 Kết định lƣợng MDA, GSH nhóm thử nghiệm tác dụng bảo vệ gan BSP chuột gây độc cấp tính ethanol Mã số Khối lƣợng (gram) MDA (nM/g protein) GSH (nM/g protein) Lô nƣớc - N1 27 114,818 12339,949 N2 28 105,389 9982,155 N3 31 138,818 10416,486 N4 25 89,531 10552,990 N5 33 99,541 10056,612 N6 28 87,388 9833,242 N7 28 91,245 14461,964 D1 23 185,105 10354,438 D2 29 150,961 11620,202 D3 23 219,821 9920,108 D4 26 114,818 13841,492 D5 24 121,675 13568,484 D6 25 197,963 10863,226 D7 29 114,818 13047,287 Lô gây độc - Lô Thử (BSP2) - B21 27 182,105 9622,281 B22 31 167,105 13245,838 B23 25 99,389 9361,683 B24 28 74,959 14238,594 B25 22 87,388 8095,920 B26 29 109,675 9225,179 viii B27 25 99,389 7041,117 Lô Thử (BSP1) - B11 30 128,532 10157,967 B12 28 123,818 10205,525 B13 30 129,390 8617,117 B14 26 114,818 9833,242 B15 22 78,388 9125,904 B16 29 98,960 10031,793 B17 27 102,389 9125,904 Lô Đối chiếu (S) - S1 27 84,817 10044,202 S2 28 86,317 12780,480 S3 25 72,388 10143,478 S4 27 99,389 8840,487 S5 29 119,961 8939,762 S6 25 73,245 11173,462 S7 24 89,103 14803,220 ix