Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan của cao chiết ethanol từ tỏi (allium sativum l ) trên mô hình gan chuột nhắt trắng (mus musculus var albino) bị gây độc cấp tính và mạn tính bằng carbon tetrachloride

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA SINH - MÔI TRƢỜNG PHẠM THỊ DIỆU NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN CỦA CAO CHIẾT ETHANOL TỪ TỎI (Allium Sativum L.) TRÊN MƠ HÌNH GAN CHUỘT NHẮT TRẮNG (Mus musculus Var Albino) BỊ GÂY ĐỘC CẤP TÍNH VÀ MẠN TÍNH BẰNG CARBON TETRACHORIDE Đà Nẵng – Năm 2017 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA SINH - MÔI TRƢỜNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN CỦA CAO CHIẾT ETHANOL TỪ TỎI (Allium Sativum L.) TRÊN MƠ HÌNH GAN CHUỘT NHẮT TRẮNG (Mus musculus Var Albino) BỊ GÂY ĐỘC CẤP TÍNH VÀ MẠN TÍNH TÍNH BẰNG CARBON TETRACHORIDE Ngành: Sƣ phạm Sinh học Ngƣời hƣớng dẫn: ThS NCS Nguyễn Cơng Thùy Trâm Niên khóa: 2013 – 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi hướng dẫn ThS NCS Nguyễn Công Thùy Trâm Các kết trình bày khóa luận trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Đà Nẵng, ngày 02 tháng 05 năm 2017 Sinh viên PHẠM THỊ DIỆU LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, em xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến ThS NCS Nguyễn Công Thùy Trâm – ngƣời trực tiếp hƣớng dẫn, bảo tận tình cho em suốt trình thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến quý thầy cô giáo khoa Sinh – Mơi trƣờng tận tình giảng dạy tạo nhiều điều kiện để em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Cuối em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình bạn bè, ngƣời ln bên cạnh quan tâm giúp đỡ em suốt thời gian vừa qua Đà Nẵng, ngày 02 tháng 05 năm 2017 Sinh viên PHẠM THỊ DIỆU MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài Ý nghĩa khoa học đề tài CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ GAN VÀ CÁC BỆNH LÝ VỀ GAN 1.1.1 Cấu tạo chức gan a Cấu tạo gan .3 b Chức gan 1.1.2 Bệnh lý gan 1.2 TỔNG QUAN VỀ MƠ HÌNH NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH BẢO VỆ GAN IN VIVO VÀ CÁC CHỈ SỐ SỬ DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU 1.2.1 Mơ hình nghiên cứu hoạt tính bảo vệ gan in vivo .6 1.2.2 Các số sử dụng nghiên cứu 1.3 TỔNG QUAN VỀ TỎI (Allium sativum L.) 1.3.1 Đặc điểm thực vật học .8 1.3.2 Một số thuốc chữa bệnh dân gian 1.3.3 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 NGUYÊN LIỆU NGHIÊN CỨU .12 2.1.1 Nguyên liệu thực vật 12 2.1.2 Đối tƣợng động vật 12 2.1.3 Nguyên liệu hóa học 12 2.1.4 Phạm vi nghiên cứu 12 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 12 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.3.1 Phƣơng pháp xác định mẫu thực vật .13 2.3.2 Phƣơng pháp chiết dịch nghiên cứu 13 2.3.3 Phƣơng pháp thử độc tính cấp 13 2.3.4 Phƣơng pháp xác định hoạt tính bảo vệ gan 13 a Phƣơng pháp xác định hoạt tính bảo vệ gan cấp tính 13 b Phƣơng pháp xác định hoạt tính bảo vệ gan mạn tính 14 2.3.5 Phƣơng pháp xử lí số liệu 15 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .16 3.1 KẾT QUẢ KHẢO SÁT LIỀU LƢỢNG GÂY ĐỘC CẤP TÍNH CẤP CỦA CAO CHIẾT TỎI TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG 16 3.2 KẾT QUẢ ĐỊNH LƢỢNG GOT, GPT TRONG MÁU TĨNH MẠCH ĐUÔI CHUỘT NHẮT TRẮNG 17 3.3 KẾT QUẢ QUAN SÁT TRỰC QUAN GAN CHUỘT Ở CÁC LÔ THỰC NGHIỆM CỦA CÁC NHÓM CHUỘT 21 3.4 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG MDA TRONG ĐỒNG THỂ GAN CHUỘT GÂY ĐỘC BẰNG CCL4 23 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 27 Kết luận 27 Kiến nghị 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO 28 DANH MỤC VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ CCl3 Trichloromethyl CCl4 Carbon tetrachloride Cs cộng CYP450 Cytochrome P450 EtOH Ethanol GOT Glutamat oxaloacetat transaminase GPT Glutamat pyruvat transaminase LD50 Lethal dose 50% MDA Malonyl dialdehyde NAPQI N- acetyl parabenzoquinoneimin OD Optical Density PAR Paracetamol TBA Acid thiobarbituric TCA Acid tricloacetic AND Axit deoxyribonucleic NADPH Nicotinamid Adenine Dinucleotide Phosphate ATP Adenosine triphosphate DANH MỤC BẢNG Số hiệu bảng Tên bảng Trang 3.1 Độc tính cấp cao chiết tỏi chuột thí nghiệm 16 3.2 Nồng độ GOT, GPT huyết nhóm 17 chuột gây viêm gan cấp tính 3.3 Nồng độ GOT, GPT huyết nhóm 18 chuột gây viêm gan mạn tính 3.4 Quan sát mơ bệnh học đại thể gan chuột 21 3.5 Hàm lƣợng MDA gan chuột nhắt trắng bị gây 23 viêm cấp tính 3.6 Hàm lƣợng MDA gan chuột nhắt trắng bị gây viêm mạn tính 24 DANH MỤC HÌNH ẢNH, ĐỒ THỊ Số hiệu hình vẽ Tên hình vẽ Trang 1.1 Tỏi (Allium Sativum L.) 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 Biểu đồ nồng độ enzyme GOT, GPT huyết nhóm chuột gây viêm gan cấp tính Biểu đồ nồng độ enzyme GOT, GPT huyết nhóm chuột gây viêm gan mạn tính Hình đại thể gan nhóm chuột bị gây viêm gan cấp tính CCl4 Hình đại thể gan nhóm chuột bị gây viêm gan mạn tính CCl4 Biểu đồ hàm lƣợng MDA (nmol/ml) nhóm chuột bị gây viêm gan cấp tính Biểu đồ hàm lƣợng MDA (nmol/ml) nhóm chuột bị gây viêm gan mạn tính 19 19 22 22 24 25 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Gan quan lớn giữ vai trò quan trọng thể, chức gan khử độc chất nội sinh ngoại sinh tạo Trong trƣờng hợp bệnh lý hay tải chất độc gan, tế bào gan bị hủy hoại làm suy giảm chức gan gây nên tổn thƣơng không hồi phục nhƣ viêm gan, xơ gan, ung thƣ gan, làm gan chức giải độc [1] Bệnh gan bệnh thƣờng gặp cộng đồng Khi gan bị tổn thƣơng, chức lọc máu, loại bỏ chất độc gan bị giảm Máu chứa nhiều chất độc hại theo tĩnh mạch đƣa đến quan từ gây loạt biến chứng nguy hiểm, ảnh hƣởng nghiêm trọng đến sức khỏe, tăng mức độ tử vong [1] Do bệnh gan ảnh hƣởng nghiêm trọng đến sống ngƣời bệnh xã hội Do việc tìm kiếm loại thuốc có tác động bảo vệ chữa trị bệnh gan thách thức nhà khoa học Hiện nay, có nhiều loại thuốc đƣợc sử dụng rộng rãi thị trƣờng để điều trị bệnh gan nhƣ: interferon, ribavirin, sofosbuvir, adefovir [1] Và hầu hết loại thuốc có nguồn gốc tổng hợp Những loại thuốc có nguồn gốc tổng hợp bên cạnh tác dụng điều trị gan mang lại tác dụng phụ khơng mong muốn, giá thành cao, hƣớng nghiên cứu giới tìm kiếm sử dụng loại thuốc bảo vệ gan có nguồn gốc từ thảo dƣợc Tuy nhiên, để sử dụng loài thảo dƣợc vào điều trị bệnh cần có q trình nghiên cứu sàng lọc thuốc thông qua các thử nghiệm in vitro in vivo Trong nghiên cứu in vivo, động vật thực nghiệm đƣợc gây bệnh lý chất độc nhƣ CCl 4, rƣợu, aflatoxin, paracetamol, Trong đó, CCl4 đƣợc dùng phổ biến làm chất thử nghiệm để gây tổn thƣơng gan mơ hình động vật Khi hít hay uống phải, CCl4 theo máu đến gan chuyển hóa thành CCl3*(tricloromethyl), Cl* thông qua hệ thống enzyme cytochrome P450 Các gốc tự tác động lấy proton acid béo màng tế bào Điều làm q trình peroxyl hóa lipid tăng lên mạnh mẽ, gây tổn thƣơng màng viêm hoại tử gan [14] 22 Chứng bệnh lý Chứng sinh lý Uống cao chiết 0,1g/kgP Chứng tham khảo Uống cao chiết 0,2g/kgP Hình 3.3 Hình ảnh đại thể gan nhóm chuột bị gây viêm gan cấp tính CCl4 Chứng sinh lý Chứng bệnh lý Uống cao chiết tỏi 0,1g/kgP Chứng tham khảo Uống cao chiết tỏi 0,2g/kgP Hình 3.4 Hình đại thể gan nhóm chuột bị gây viêm gan mạn tính CCl4 23 Kết đƣợc thể bảng 3.4, hình 3.3 3.4 cho thấy lơ chứng bệnh lý gan cấp mạn tính có màu nhạt, nhu mô gan rõ Điều chứng tỏ CCl4 sau đƣợc tiêm vào thể chuột theo máu đến gan gây ức chế trình hình thành lipoprotein từ protein lipid, lipid tế bào đƣợc vận chuyển màng tế bào Khi lƣợng lipid tế bào gan tăng cao dẫn đến tình trạng ứ đọng gây tình trạng gan nhiễm mỡ, nhu mô gan rõ, làm rối loạn chức gan [37] Trong lô uống cao chiết với nồng độ khác gan nhạt màu nhu mô gan to Nhƣ vậy, qua việc quan sát mô bệnh học, lô uống cao chiết tỏi có mức độ tổn thƣơng gan giảm rõ rệt so với nhóm bệnh lí, phù hợp với thay đổi nồng độ enzyme GOT, GPT huyết chuột 3.4 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG MDA TRONG ĐỒNG THỂ GAN CHUỘT GÂY ĐỘC BẰNG CCL4 Tiến hành tách gan, xác định hàm lƣợng MDA tế bào gan Kết hàm lƣợng MDA tế bào gan chuột thí nghiệm đƣợc thể bảng 3.5, bảng 3.6 biểu đồ 3.2 Bảng 3.5 Hàm lƣợng MDA gan chuột nhắt trắng bị gây viêm cấp tính Lơ Hàm lƣợng MDA (nmol/ml) HTCO % Chứng sinh lý 11,8 ± 1,45 Chứng bệnh lý 35,65 ± 5,67 Chứng tham khảo 15,89 ± 2,55 55,42 23,45 ± 1,43 34,22 19,34 ± 1,3 45,75 Uống cao chiết (0,1g/kgP) Uống cao chiết (0,2g/kgP) Giá trị p p