Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan của cao chiết từ lá chùm ruột (phyllanthus acidus (l ) skeels) trên chuột nhắt trắng dòng swiss (mus musculus var swiss)

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH – MÔI TRƯỜNG ======== VŨ THỊ THÙY LINH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN CỦA CAO CHIẾT TỪ LÁ CHÙM RUỘT (Phyllanthus acidus (L.) Skeels) TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG DỊNG SWISS (Mus musculus Var Swiss) KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP Đà Nẵng - Năm 2016 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH - MÔI TRƯỜNG ======== VŨ THỊ THÙY LINH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN CỦA CAO CHIẾT TỪ LÁ CHÙM RUỘT (Phyllanthus acidus (L.) Skeels) TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG DÒNG SWISS (Mus musculus Var Swiss) Ngành: Sư phạm Sinh học Người hướng dẫn: ThS NCS Nguyễn Cơng Thùy Trâm Niên khóa: 2012- 2016 LỜI CAM ĐOAN Em cam đoan công trình nghiên cứu riêng em Các số liệu, kết nêu khóa luận trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Đà Nẵng, ngày tháng năm 2016 Sinh viên Vũ Thị Thùy Linh LỜI CÁM ƠN Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, em xin bày tỏ lời cám ơn chân thành sâu sắc đến giảng viên ThS NCS Nguyễn Công Thùy Trâm người trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình cho em suốt trình thực đề tài Em xin gửi lời cám ơn đến quý thầy cô giáo khoa Sinh - Mơi trường tận tình giảng dạy tạo nhiều điều kiện để em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Cuối em xin gửi lời cám ơn đến gia đình bạn bè, người bên cạnh quan tâm giúp đỡ em nhiều suốt thời gian vừa qua Đà Nẵng, ngày tháng năm 2016 Sinh viên Vũ Thị Thùy Linh DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ALT Alanin aminotransferase APAP Acetaminophen AST Aspartate aminotransferase CCl4 Cacbon tetraclorua CHCl3 Clorofom Cyt P450 Cytocrom P450 CY3A4 Cytocrom P450 3A4 HSC Hepatic Stellate Cell LD50 Lethal dose MDA Malonyl dialdehyde NAPQI N- acetyl parabenzoquinoneimin TAA Thioacetaminde DANH MỤC BẢNG BIỂU Số hiệu bảng Tên bảng Trang 1.1 Những thuốc gây ngộ độc gan 1.2 3.1 3.2 Những chất độc từ mơi trường gây viêm gan Độc tính cấp PAME chuột thí nghiệm Kết gây độc CCl4 nhóm chuột thử nghiệm sau 48giờ 18 19 3.3 Nồng độ AST ALT huyết 20 3.4 Hàm lượng MDA gan 23 3.5 Kết kiểm tra đại thể gan 24 DANH MỤC HÌNH ẢNH ĐỒ THỊ Số hiệu hình Tên hình Trang 2.1 Cây Chùm ruột (Phyllanthus acidus) 13 2.2 Chuột nhắt trắng (Mus musculus Var Swiss) 13 Tổng thể gan chuột nhóm thử 25 3.1 3.1 3.5 nghiệm Nồng độ AST ALT huyết 21 chuột Kết kiểm tra đại thể gan 25 MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài Ý nghĩa khoa học đề tài CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GAN VÀ CÁC BỆNH VỀ GAN 1.1.1 Cấu tạo chức gan 1.1.2 Một số bệnh lí gan 1.1.3 Các hoạt chất có tác dụng bảo vệ gan 1.2 CÁC PHÉP THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC TRONG NGHIÊN CỨU BẢO VỆ GAN CỦA CÁC HOẠT CHẤT…………………………8 1.3 TỔNG QUAN VỀ CÂY CHÙM RUỘT 10 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 NGUYÊN LIỆU NGHIÊN CỨU 13 2.1.1 Nguyên liệu thực vật 13 2.1.2 Nguyên liệu động vật 13 2.1.3 Hóa chất 14 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 14 2.3 PHẠM VI NGHIÊN CỨU 14 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.4.1 Phương pháp xác định mẫu thực vật 14 2.4.2 Phương pháp tách chiết mẫu thực vật 14 2.4.3 Phương pháp thử độc tính cấp 14 2.4.4 Phương pháp gây độc gan chuột 15 2.4.5 Xác định hoạt tính bảo vệ gan 15 2.4.6 Phương pháp xử lý số liệu 17 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 18 3.1 KẾT QỦA KHẢO SÁT NỒNG ĐỘ CCl4 THÍCH HỢP ĐỂ GÂY ĐỘC GAN CHUỘT 19 3.2 KẾT QUẢ THỬ ĐỘC TÍNH CẤP CỦA CAO CHIẾT PAME 18 3.3 KẾT QUẢ NỒNG ĐỘ AST, ALT TRONG HUYẾT THANH CHUỘT 20 3.4 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG MDA TRONG GAN 23 3.5 HÌNH THÁI GAN 24 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 27 KẾT LUẬN 27 KIẾN NGHỊ 27 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 28 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Gan quan đóng vai trị quan trọng q trình chuyển hóa vật chất thể Một chức gan tham gia vào trình giải độc gây chất nội sinh ngoại sinh Trong trường hợp bệnh lý hay dư thừa mức chất độc gan, tế bào gan bị hủy hoại, dẫn đến tổn thương tạm thời tổn thương khơng hồi phục gan Có nhiều loại bệnh gan, thường gặp tổn thương gan gây bệnh viêm gan dẫn đến xơ gan ung thư gan với nguyên nhân chủ yếu virut bị nhiễm độc gan [13], [19], [47] Mặc dù y học đại tổng hợp nhiều loại thuốc có khả hồi phục chức gan, kích thích tái sinh tế bào gan, bảo vệ gan khỏi tác động có hại khởi động trình tái sinh gan Tuy nhiên, việc sử dụng loại thuốc có nguồn gốc thảo dược để hỗ trợ điều trị bệnh gan nhà khoa học ý đến, nhằm hạn chế tác dụng phụ khơng mong muốn thuốc có nguồn gốc tổng hợp gây hạ giá thành loại thuốc điều trị gan thị trường Dựa sở kế thừa thuốc dân gian, thông qua nghiên cứu theo định hướng thử nghiệm sinh học cho thấy loại thuốc có nguồn gốc thảo dược có tác dụng bảo vệ tế bào gan, giảm viêm, phục hồi chức gan, ức chế xơ gan, ức chế phát triển virut gây bệnh gan tác dụng phụ Vì vậy, việc nghiên cứu thành phần hóa học đánh giá hoạt tính sinh học bảo vệ gan phân đoạn thành phần dịch chiết dược liệu có chùm ruột điều cần thiết Xuất phát từ lí trên, chúng tơi tiến hành chọn đề tài “Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan cao chiết từ chùm ruột (Phyllanthus acidus (L.) Skeels) chuột nhắt trắng dòng Swiss (Mus musculus Var Swiss)” 21 Biểu đồ 3.1: Nồng độ AST ALT huyết chuột Qua bảng 3.3 biểu đồ 3.1, ta thấy nồng độ AST ALT huyết có khác nồng độ: - Ở nhóm (chứng bệnh lí) nồng độ enzyme AST ALT tăng cao so với nhóm 1, đó, nồng độ AST tăng 6,81 lần, nồng độ ALT nhóm tăng 7,81 lần so với nhóm - Ở nhóm 3, 4, nồng độ AST ALT giảm so với nhóm 2, đó: + Nhóm 3: nồng độ AST, ALT giảm 40,65%; 76,19% so với nhóm + Nhóm 4: nồng độ AST, ALT giảm 31,73% ; 24,3% so với nhóm 22 + nhóm 5: nồng độ ALT giảm 18,97%, nồng độ AST tăng 17% so với nhóm - Đánh giá hiệu bảo vệ gan cho thấy chuột uống cao chiết nồng độ 0,1 g/kgP 0,2 g/kgP có tác dụng bảo vệ gan Trong đó, liều 0,1 g/kgP có tác dụng tốt so với liều lượng 0,2 g/kgP Tuy nhiên tác dụng bảo vệ gan liều 0,1 g/kgP thấp so với Silymarin Nồng độ AST ALT huyết nhóm (chứng bệnh lí) cao so với nhóm 1(chứng sinh lí) điều giải thích do: CCl4 tiêm vào thể chuột chuyển hóa thành gốc tự CCl3*; OOCl3*; Cl* thông qua hệ thống enzym Cyt P450 mạng lưới nội chất Các gốc tự đến màng tế bào gây phản ứng peroxi hóa màng tế bào, nguyên nhân dẫn đến tổn thương màng tế bào gan làm thay đổi số sinh hóa gan, với triệu chứng tương tự với viêm gan cấp virut gây [31], [22] Qua kết nghiên cứu nồng độ AST ALT huyết chuột, nhận thấy sử dụng nồng độ cao chiết liều lượng 0,1g/kgP/ngày giúp giảm nồng độ AST ALT huyết điều giải thích cao chiết từ chùm ruột có chứa hợp chất chống lại q trình oxy hóa tế bào gan, giảm khả gây tổn thương gan chất độc hại gây ra.Trong nghiên cứu chùm ruột phân lập hợp chất có như: caroten, axit ascorbic, alkaloid, flavonoid, steroid, phenol… Trong đó, hợp chất flavonoid có khả dập tắt qúa trình peroxi hóa màng lipid gốc tự gây Khi chất độc vào thể chuyển hóa thành gốc tự do, flavonoid nhường nguyên tử H cho gốc tự từ ức chế gốc tự gây tổn hại tế bào gan [7] 23 3.4 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG MDA TRONG GAN Kết xác định hàm lượng MDA gan trình bày qua bảng 3.4: Bảng 3.4 Hàm lượng MDA gan % giảm so Thuốc liều MDA lượng (nM/ml) Chứng sinh lí 5.38 ± 0.543 Chứng bệnh lí 14.1 ± 3.69 Chứng tham khảo 8.61 ± 2.96 38,94 PAME: 0,1 g 9.78 ± 1.747 30,64 PAME: 0,2 g 13.2 ± 6.42 6,38 Nhóm với lơ P bệnh lí p