ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆN KHOA HỌC KỸ THUẬT NÔNG NGHIỆP MIỀN NAM BÁO CÁO NGHIỆM THU Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng ngày 05/08/2010 KHẢO SÁT TẦN SUẤT GEN BLAD TRÊN ĐÀN BÒ SỮA CHUNG ANH DŨNG THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 08/ 2010 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆN KHOA HỌC KỸ THUẬT NÔNG NGHIỆP MIỀN NAM BÁO CÁO NGHIỆM THU Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng ngày 05/08/2010 KHẢO SÁT TẦN SUẤT GEN BLAD TRÊN ĐÀN BỊ SỮA Cơ quan chủ trì (Ký tên đóng dấu) Chủ nhiệm đề tài (Ký tên) Cơ quan quản lý (Ký tên đóng dấu) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 08/ 2010 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa TÓM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU BLAD (Bovine Leukocyte Adhesion Deficiency) bệnh di truyền tác động đặc hiệu lên giống bò Holstein Bệnh kiểu gen đồng hợp lặn (autosomal recessive disease) nằm nhiễm sắc thể thường gây BLAD làm giảm khả miễn dịch gia súc giảm đáng kể thiếu hoàn toàn phức hợp protein 2-intergrin bề mặt bạch cầu Bò mang kiểu gen , thường xuyên bị nhiễm bệnh vi khuẩn, bị nhiễm trùng da, viêm dày, viêm đường hô hấp thể trạng Bê thường chết vòng từ 2-4 tháng tuổi, sống sót sau năm tuổi, khả tăng trưởng không cao Đây dạng bệnh di truyền, khó phát kiểu gen dạng dị hợp, ảnh hưởng nhanh rộng trường hợp tinh bị đực giống cao sản sử dụng thơng qua kỹ thuật gieo tinh nhân tạo Mục tiêu nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật PCR-RFLP để xác định tần suất xuất gen BLAD đàn bò sữa TP.HCM, để có biện pháp quản lý phù hợp Kết nghiên cứu: Quy trình ly trích DNA từ máu theo Laura-Lee Boodram (2004), quy trình ly trích DNA từ sữa theo F d’Angelo ctv có cải biên theo điều kiện phịng thí nghiệm quy trình ly trích DNA từ tinh theo Luciana A Ribeiro có cải biên theo điều kiện phịng thí nghiệm, thích hợp cho việc ly trích DNA để thực kỹ thuật PCR-RFLP đánh giá kiểu gen BLAD Việc ứng dụng thành công quy trình ly trích DNA, quy trình PCR-RFLP để phân tích xác định kiểu gien BLAD mẫu thu thập tái xác nhận quy trình PCR-RFLP Kriesgman thích hợp cho đánh giá kiểu gen BLAD bò điều kiện Việt Nam Từ kết phân tích kiển gen BLAD 970 mẫu máu, sữa tinh đông lạnh thu thập cho thấy: Tỷ lệ bò mang gien BLAD 0,21% tần suất xuất gien BLAD 0,0010 số mẫu điều tra Tỷ lệ bò mang gien BLAD tần suất xuất gien BLAD có đàn bị lai HF có tỷ lệ máu HF cao ≥ 87,5% đàn bê Chưa thấy xuất gen BLAD tinh đơng lạnh bị đực giống khảo sát SUMMARY BLAD is an autosomal recessive genetic disease that affects Holstein-Friesian (HF) cattle worldwide It is a disease characterized by a reduced expression of the adhesion molecules on neutrophils The disease is caused by a mutation that replaces adenine at 383 with guanine, which causes an amino acid change from aspartic acid to glycine The research aims to apply PCR-RFLP for detecting BLAD genotype on dairy herd in Ho Chi Minh city 452 blood samples, 500 milk samples and 18 frozen semen samples were collected from 970 phenotypically normal individuals, including 50% HF (27 heads), 75% HF (241 heads), 87.5% HF (684 heads) and pure HF bull (18 heads) PCR-RFLP was performed to detect a point mutation in CD18, surface molecules of neutrophils The results indicated that out of 964 cattle tested for BLAD, two 87.5% HF cows appeared to be BLAD carriers In the HF crossbred population, the percentage of BLAD carriers was estimated as 0.21% Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa BÁO CÁO NGHIỆM THU Đề tài: KHẢO SÁT TẦN SUẤT GEN BLAD TRÊN ĐÀN BÕ SỮA Chủ nhiệm đề tài: Cán thực hiện: TS Chung Anh Dũng ThS Lê Công Thiện, ThS Hồ Quế Anh, KS Đậu Thị Kim Dung Cơ quan chủ trì: Viện Khoa học Kỹ thuật Nơng nghiệp miền Nam Thời gian thực hiện: 12 tháng, từ tháng 02/2009 đến tháng 02/2010 Kinh phí duyệt: 329.000.000đ Kinh phí cấp: 300.000.000đ (TB số 31/ TB-SKHCN ngày 26/02/2010) Mục tiêu: (Theo đề cương duyệt Phụ lục Hợp đồng số 50/HĐ-SKHCN 27/03/08) Ứng dụng kỹ thuật PCR-RFLP để khảo sát tần suất xuất kiểu gen BLAD quần thể bò lai Holstein-Friesian số trại bò sữa thuộc địa bàn TPHCM Nội dung: (Theo đề cương duyệt) Nội dung Nghiên cứu ứng dụng quy trình xác định kiểu gen BLAD kỹ thuật PCR-RFLP Nội dung Xác định tần suất xuất gen BLAD đàn bò lai HF Những nội dung thực (đối chiếu với hợp đồng ký): Công việc dự kiến Công việc thực Nghiên cứu ứng dụng quy trình xác định Đã xây dựng quy trình thực kỹ thuật kiểu gien BLAD kỹ thuật PCR- PCR-RFLP dùng để xác định kiểu gien RFLP BLAD loại mẫu khác Sản phẩm dự kiến: Quy trình kỹ thuật PCR-RFLP Xác định tần suất xuất gien BLAD Đã thu thập 452 mẫu máu, 500 mẫu sữa đàn bò lai HF 18 mẫu tinh bị đơng lạnh bị Sản phẩm dự kiến: Số lượng mẫu thu đực giống Việt Nam, bò đực giống Mỹ thập 980 mẫu máu, sữa, tinh dịch; bò đực giống Israel Xác định kiểu đánh giá tỷ lệ cá thể bò mang gien gien BLAD tất mẫu thu thập BLAD theo trại, nhóm giống, tính toán tần suất xuất gien đối tượng lấy mẫu BLAD đàn bò lai HF Sản phẩm: - Báo cáo tổng kết: khoa học, đầy đủ nội dung thực (tài liệu + CD) - Báo cáo phân tích: đánh giá tần suất xuất gien BLAD dòng tinh bò sử dụng đàn bò số trại, từ dự báo khả xuất kiểu gien BLAD bất lợi đàn bò sữa hệ - Quy trình thực kỹ thuật PCR-RFLP xác định kiểu gien BLAD cá thể bò sữa - Bài báo khoa học: đăng Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Chăn ni (ISSN 0868-3417) số tháng 08-2010 Báo cáo trình bày theo mẫu Sở KHCN TPHCM–Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng 05/08/2010 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa MỤC LỤC TT I 1.1 1.2 1.3 1.4 II 2.1 2.2 III 3.1 3.1.1 3.1.2 3.1.3 3.1.4 3.2 IV 4.1 4.2 Phụ lục Nội dung Các thơng tin chung đề tài Tóm tắt nội dung nghiên cứu Summary Danh sách chữ viết tắt Danh sách bảng Danh sách hình Bảng tốn kinh phí Thẩm tra tốn năm 2009 Tổng quan Giới thiệu bệnh BLAD Cơ chế sinh học phân tử bệnh BLAD Các phương pháp xác định bệnh BLAD Các nghiên cứu nước bệnh BLAD Nội dung phương pháp Nội dung nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Kết thảo luận Nghiên cứu ứng dụng quy trình xác định kiểu gen BLAD kỹ thuật PCR-RFLP Kết ly trích DNA từ máu Kết ly trích DNA từ sữa Kết ly trích DNA từ tinh Kết phản ứng PCR-RFLP Xác định tần suất xuất gen BLAD đàn bò lai HF Kết luận đề nghị Kết luận Đề nghị PL Danh sách hộ cung cấp mẫu máu cho thử nghiệm PL Danh sách hộ cung cấp mẫu sữa cho thử nghiệm PL Danh sách đơn vị cung cấp mẫu tinh cho thử nghiệm kết phân tích bổ sung mẫu tinh bị đơng lạnh Tài liệu tham khảo Trang II III III V V VI VII VIII 01 02 04 10 13 19 21 21 22 23 24 25 31 31 32 43 55 56 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT VIẾT TẮT BLAD THUẬT NGỮ TIẾNG VIỆT Bovine Leukocyte Adhension Deficiency (Bệnh) thiếu kết dính bạch cầu bò GF Gene frequency - Tần suất gen PCR-RFLP Polymerase Chain Reaction – Restriction Fragment Length Polymorphism Phản ứng PCR xác định tính khác di truyền điểm tương ứng với enzyme phân cắt hạn chế HF Holstein Friesian - Bò Hà lan GTNT Gieo tinh nhân tạo DANH SÁCH BẢNG SỐ TÊN BẢNG SỐ LIỆU TRANG Bảng Kết tổng hợp nghiên cứu BLAD 18 giới Bảng Kế hoạch thu thập mẫu để phân tích BLAD từ 26 nhóm bị khác Bảng Số lượng mẫu thu thập từ nhóm bò khác để 32 thực BLAD Bảng Kết xác định kiểu gien BLAD từ nhóm bị 33 lai HF khác Bảng Kết xác định kiểu gien BLAD từ nhóm bò khác 37 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa DANH SÁCH HÌNH SỐ 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 TÊN HÌNH ẢNH TRANG Hình Cơ chế đột biến điểm vị trí amino acid 128 dẫn đến 10 tình trạng BLAD Hình Phân đoạn 1618 bp gen CD 18 10 Hình Trình tự gen CD18 (Kriegesmann ctv, 1997) 11 Hình Các biểu lâm sàng bị bị bệnh BLAD 11 Hình Phân tích mức biện CD18 tế bào bạch cầu trung 12 tính phương pháp miễn dịch huỳnh quang Hình Kết phân tích Northern Blot (Shuster ctv) 13 Hình Sản phẩm phân cắt sau điện di gel (Shuster, 14 1992) Hình So sánh vị trí bắt cặp primers thiết kế Shuster 15 Tammen Hình Sản phẩm phân cắt sau điện di (Tammen, 16 1996) Hình 10 Kết điện di sau cắt enzym TaqI 16 (Kriegesmann, 1997) Hình 11 Sơ đồ huyết thống chứng minh ảnh hưởng gien 19 BLAD Hình 12 Kết ly trích DNA từ máu theo tác giả Laura-Lee 28 Boodram Hình 13 Quy trình ly trích DNA từ máu theo I Tammen có cải 28 biên theo điều kiện phịng thí nghiệm Hình 14 Kết ly trích DNA từ sữa cải biên dựa 29 quy trình ly trích tác giả F d’Angelo Hình 15 Quy trình ly trích sữa thực theo quy trình 29 F d’Angelo ctv có cải biên theo điều kiện phịng thí nghiệm Hình 16 Kết điện di sản phẩm ly trích DNA từ tinh theo 30 Shuster ctv Hình 17 Quy trình ly trích tinh thực theo quy trình 31 tác giả Luciana A Ribeiro cộng có cải biên theo điều kiện phịng thí nghiệm Hình 18 Kết điện sản phẩm PCR gel agarose 2% 31 Hình 19 Kết sản phẩm phân cắt enzym TaqI 32 Hình 20 Kết phân tích kiểu gien BLAD / mẫu máu – 34 khơng mang gien BLAD Hình 21 Kết phân tích kiểu gien BLAD/ mẫu máu – 34 mẫu số 421 235 có mang alen đột biến dạng dị hợp tử Hình 22 Kết phân tích kiểu gien BLAD / mẫu sữa – không 34 mang gien BLAD Hình 23 Kết phân tích kiểu gien BLAD / mẫu tinh – không 34 mang gien BLAD Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bị sữa Bảng tốn kinh phí Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 Đông-Củ Chi Lê Thanh Phong Ấp 3B Tân Thạnh Đông-Củ Chi Lê Thanh Thảo Ấp 3B Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn hữu Danh Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn Văn út Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Lê Văn Kẽm Ấp 3B Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn Văn Cƣờng Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Lê Minh Hiếu Ấp Hòa Phú-Củ Chi Trang 44 02.4829 9431 9432 02.867 02.4450 6484 5306 02.2271 02.6155 02.676 6487 03.0453 6489 02.2524 02.2525 không số không số 18.196 9793 02.3892 02.1170 1424 1416 02.4063 1419 A2213 1420 6687 02.990 02.2535 6678 không số 02.2950 02.2553 02.2040 1435 02.7638 1438 02.1484 04.920 không số 04.50 F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F2 HF F2 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F4 HF F2 HF F3 HF F3 HF F4 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F3 HF F2 HF F2 HF F4 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 Trƣơng Văn Quyên Ấp 3B Tân Thạnh Đông-Củ Chi Huỳnh Quyết Chiến Ấp 3A Tân Thạnh Đông-Củ Chi Lê Thanh Nhã Ấp Hòa Phú-Củ Chi Lê Văn Trai Ấp Hòa Phú-Củ Chi Nguyễn Minh Khoa Ấp Hòa Phú-Củ Chi Trang 45 9632 04.921 04.11 04.12 A2473 02.2529 A2475 A2476 02.4651 02.2550 6472 6470 02.4791 0069 không số 4773 1460 04.113 4769 A0594 không số 4758 không số 4764 4762 01.112 4761 4765 04.120 04.116 04.115 04.109 không số 04.44 A.2336 04.157 04.139 04.154 04.140 7060 04.77 06.682 F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F2 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F2 HF F4 HF F2 HF F2 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F1 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F3 HF F4 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F3 HF F2 HF F3 HF 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 Trần Văn Sơn Ấp Hòa Phú-Củ Chi Nguyễn Văn An Ấp Hòa Phú-Củ Chi Dƣơng Minh Dũng Ấp Hòa Phú-Củ Chi Trần Văn Quang Ấp Hòa Phú-Củ Chi Nguyễn Văn Hịa Ấp Tân Thạnh Đơng-Củ Chi Trang 46 04.132 04.1308 4980 7055 04.135 04.955 04.133 04.241 7033 04.239 7037 7035 A2243 04.754 không số 04.38 không số không số 04.743 04.27 05682 04.745 04.744 04.929 04.240 04.246 7026 7023 04.245 không số 02.1651 02.1567 không số không số không số 02.6198 10.333 02.4661 10.0016 02.1187 02.561 02.2078 F2 HF F2 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F4 HF F3 HF F3 HF F4 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F1 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F2 HF F2 HF F3 HF F2 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F3 HF F1 HF F1 HF F3 HF F2 HF F2 HF 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa 167 168 169 170 171 172 173 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 Huỳnh Mẫn Đạt Ấp Hòa Phú-Củ Chi Trần Văn Hảo Ấp Hòa Phú-Củ Chi Phan Văn liễu Ấp Hòa Phú-Củ Chi Nguyễn Văn Sơn Ấp Hòa Phú-Củ Chi Nguyễn Văn Nghĩa Ấp 11 Tân Thạnh Đông-Củ Chi Trang 47 02.272 không số 04.243 04.242 7030 7027 7031 04.903 04.907 04.1378 04.509 7019 04.248 không số 04.1339 04.909 0012 6673 T193 3070 02.22.04.60 02.22.04.51 02.22.04.1279 4835 04.58 4838 04.578 04.57 04.52 04.56 4852 04.63 4854 4956 04.68 4958 04.62 4957 6782 6781 02.6080 không số F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F4 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F3 HF F2 HF F2 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F3 HF F2 HF F4 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F1 HF F2 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F2 HF 167 168 169 170 171 172 173 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 Hồ Văn Nơi Ấp 10 Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn Văn khuynh Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn Thái Ngọc Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Dƣơng Thị Mỹ Hiền Ấp 11 Tân Thạnh Đông-Củ Chi Dƣơng Văn Dũng Ấp 11 Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn Văn Em Ấp 10 Tân Thạnh Đông-Củ Chi Trần Văn Hài Ấp 10 Tân Thạnh Đông-Củ Chi Trang 48 205 7408 02.2223 204 02.8394 02.5958 02.8356 02.2298 02.4375 02.4372 8716 8714 8720 8713 02.731 02.3176 02.724 6789 6792 02.1941 02.1938 02.1937 02.1936 02.1933 7756 6858 7158 6398 6391 6392 A0432 A0329 A0330 A0331 A0332 A0341 02.4523 02.2790 02.4524 02.2787 A0337 A0336 F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F3 HF F2 HF F4 HF F3 HF F3 HF F1 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F4 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa 252 253 254 255 256 257 258 259 260 261 262 263 264 265 266 267 268 269 270 271 272 273 274 275 276 277 278 279 280 281 282 283 284 285 286 287 288 289 290 291 292 293 Nguyễn Văn Chiến Ấp 11 Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn Văn Lớn Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn Văn Thanh Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Trần Minh Hùng Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Trần Văn Hịa Ấp 11 Tân Thạnh Đơng-Củ Chi Phan Hồi Tâm Ấp 11 Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn Tấn Nên Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Trang 49 A0340 02.8661 A0093 02.2221 02.2220 02.6257 17.33 07.611 6136 6137 6139 không số 02.4131 07.766 A1911 3333 02.6634 6999 02.4610 0919 22 06.329 6167 02.4809 không số 02.4810 02.4261 03.0814 6822 6824 6819 04.1946 không số 08.422 7473 04.477 02.3495 6107 6108 6105 02.3494 6103 F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F3 HF F2 HF F3 HF F2 HF F2 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF 252 253 254 255 256 257 258 259 260 261 262 263 264 265 266 267 268 269 270 271 272 273 274 275 276 277 278 279 280 281 282 283 284 285 286 287 288 289 290 291 292 293 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa 294 295 296 297 298 299 300 301 302 303 304 305 306 307 308 309 310 311 312 313 314 315 316 317 318 319 320 321 322 323 324 325 326 327 328 329 330 331 332 333 334 335 Trần Văn Cải Ấp 11 Tân Thạnh Đông-Củ Chi Đặng Văn Cu Ấp 11 Tân Thạnh Đông-Củ Chi Hồ Văn Thanh Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn Văn Nhám Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Phan Thị Thúy Hằng Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Trang 50 6102 04.134 6897 6887 02.4298 03.2889 không số 02.4293 6896 02.8643 02.4295 09.2164 02.4797 6872 không số 6873 02.2670 02.2669 02.2668 02.2667 02.2662 02.2663 02.2664 7149 02.3854 023.3851 không số 02.3853 02.4552 02.3948 02.4553 02.3949 02.3947 6262 6264 6261 6263 6257 02.3881 02.3882 5981 02.2989 F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F1 HF F2 HF F2 HF F1 HF F3 HF F2 HF F2 HF F2 HF F3 HF F2 HF F2 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF 294 295 296 297 298 299 300 301 302 303 304 305 306 307 308 309 310 311 312 313 314 315 316 317 318 319 320 321 322 323 324 325 326 327 328 329 330 331 332 333 334 335 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa 336 337 338 339 340 341 342 343 344 345 346 347 348 349 350 351 352 353 354 355 356 357 358 359 360 361 362 363 364 365 366 367 368 369 370 371 372 373 374 375 376 377 Nguyễn Văn Là Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Lê Văn kính Ấp Tân Thạnh Đơng-Củ Chi Trần Văn lý Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Phan Văn Anh Khoa Ấp 10 Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn Văn Chung Ấp 10 Tân Thạnh Đông-Củ Chi Trang 51 04.3599 02.3230 5990 02.8686 02.8685 02.795 02.796 02.3221 5995 5992 5991 5993 7238 02.3248 3959 A1584 02.6305 02.794 6020 3218 không số 6019 6014 6015 02.3213 02.3219 6017 không số không số không số 02.2277 không số 02.408 02.411 02.412 02.406 02.410 A0462 13.0011 06.1998 02.2889 02.8350 F2 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F2 HF F2 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F2 HF 336 337 338 339 340 341 342 343 344 345 346 347 348 349 350 351 352 353 354 355 356 357 358 359 360 361 362 363 364 365 366 367 368 369 370 371 372 373 374 375 376 377 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa 378 379 380 381 382 383 384 385 386 387 388 389 390 391 392 393 394 395 396 397 398 399 400 401 402 403 404 405 406 407 408 409 410 Lê Thị Ơi Ấp 11 Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn thị Lệ Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn Văn Hậu Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Dƣơng Văn La Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Lƣơng Thị Mỹ Phƣợng Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi 411 412 413 414 415 416 417 418 Trang 52 A0467 03.1180 6860 6861 02.79 02.77 02.3068 02.3069 9487 02.4702 9485 T822 02.3067 02.3070 9490 9484 9180 9179 9178 9177 9176 8794 02.1545 8795 02.1543 8792 8798 8791 không số 8797 02.1317 không số 8841 F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F2 HF F2 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F4 HF 378 379 380 381 382 383 384 385 386 387 388 389 390 391 392 393 394 395 396 397 398 399 400 401 402 403 404 405 406 407 408 409 410 8843 8842 8839 02.3798 8840 02.3791 02.3796 02.3794 F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF 411 412 413 414 415 416 417 418 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa 419 420 421 422 423 424 425 426 427 428 429 430 431 432 433 434 435 436 437 438 439 440 441 442 443 444 445 446 447 448 449 450 451 452 453 454 455 456 457 458 459 460 Mai Thị Diễm Ấp Tân Thạnh Đơng-Củ Chi Nguyễn Đình Minh Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn Văn Túc Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn Thị Lan Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Trang 53 02.3793 44.3 4416 4401 không số 05.0603 4417 05.0604 4404 02.7886 4399 15.1534 4420 4402 02.5647 02.1472 7215 7978 1408 03.0285 03.153 02.7649 03.659 02.5792 02.1470 không số 02.6400 05.0431 04.2640 02.5649 A.1232 7984 không số không số không số 8372 8371 02.1354 02.193 4722 A0216 F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F4 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F1 HF F2 HF F4 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F1 HF F3 HF F2 HF F3 HF F1 HF F2 HF F2 HF F2 HF F2 HF F3 HF F1 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F4 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF 419 420 421 422 423 424 425 426 427 428 429 430 431 432 433 434 435 436 437 438 439 440 441 442 443 444 445 446 447 448 449 450 451 452 453 454 455 456 457 458 459 460 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa 461 462 463 464 465 466 467 468 469 470 471 472 473 474 475 476 477 478 479 480 481 482 483 484 485 486 487 488 489 491 492 493 494 495 496 497 498 499 500 Nguyễn Văn Sạn Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn Văn Thoan Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn Văn Hon Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Nguyễn Văn Nhuẫn Ấp Tân Thạnh Đông-Củ Chi Trang 54 4726 8148 0613 4727 6612 6602 8947 841 8943 02.5896 8948 02.3959 A0320 023.5886 12.0024 8942 02.3957 8946 02.3958 02.3956 không số 02.2601 không số A1580 02.4911 02.3906 02.924 02.2895 02.923 A1550 02.673 02.6535 9659 4845 08.1003 02.3550 03.531 A2272 9917 F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F1 HF F3 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F2 HF F2 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F3 HF F4 HF F3 HF 461 462 463 464 465 466 467 468 469 470 471 472 473 474 475 476 477 478 479 480 481 482 483 484 485 486 487 488 489 491 492 493 494 495 496 497 498 499 500 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa Phụ lục Danh sách mẫu tinh bò dùng cho thử nghiệm TT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Chủ hộ XN truyền giống gia súc & phát triển chăn nuôi miền Nam Trung tâm Chuyển giao Tiến Kỹ thuật Chăn nuôi – Viện Chăn Nuôi Trung tâm Quản lý & Kiểm định giống trồng, vật nuôi – Sở Nông nghiệp TP.HCM Địa 42/18 Nguyễn Bỉnh Khiêm, Phƣờng 1, quận Gò Vấp, TP.HCM Tên mẫu HF 297 HF 295 HF 296 HF 231 HF 298 HF 282 HF 292 HF 294 HF 279 7231-1 7231-2 U 076 BR8016 9094 8579 97293 21800 H240106 IL Kết phân tích bổ sung dịng tinh bị đực giống Trang 55 Đối tƣợng Giống bò Bò đực giống HF VN Bò đực giống Bò đực giống Bò đực giống Bò đực giống Bò đực giống Bò đực giống Bò đực giống Bò đực giống Bò đực giống Bò đực giống Bò đực giống Bò đực giống Bò đực giống Bò đực giống Bò đực giống Bò đực giống Bò đực giống HF VN HF VN HF VN HF VN HF VN HF VN HF VN HF VN HF Mỹ HF Mỹ HF Mỹ HF Mỹ HF Mỹ HF Mỹ HF Mỹ HF Mỹ HF Israel Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa Tài liệu tham khảo Ackermann, M R., Kehrli, M E Jr., Laufter, J A and Nusz, L T 1996 Alimentary and respiratory tract lesions in eight medically fragile Holstein cattle with Bovine leukocyte adhesion deficiency Veterinary Pathology 273-281 Akyuz, B., Ertugrul, O 2006 Detection of bovine leukocyte adhesion deficiency (BLAD) in Turkish native and Holstein cattle Acta Veterianaria Hungarica Arrayet, J L., Oberbauer, A M., Famula, T R., Garrett, I., Oltjen, J W., Imhoof, J., Kehrli, M E Jr and Graham, T W 2002 Growth of Holstein calves from birth to 90 days: the influence of dietary zinc and BLAD status J Anim Sci 80:545–552 Czarnik U., 2000 Breeding and genetic population aspects of the occurrence of BLAD (Bovine leukocyte adhesion deficiency) in Holstein-Friesian cattle (In Polish) Dissertation and monographs 32: 1–44 Czarnik, U., Grzegorz Grzybowski, Stanisaw Kamiñski, Beata Prusak, Tadeusz Zabolewicz 2007 Effectiveness of a programm aimed at the elimination of BLAD-carrier bulls from Polish Holstein-Friesian cattle 2007 Polish Academy of Sciences F d’Angelo, A Santillo, A Sevi, and M Albenzio 2007 Technical Note: A Simple Salting-Out Method for DNA Extraction from Milk Somatic Cells: Investigation into the Goat CSN1S1 Gene J Dairy Sci 90:3550– 3552 doi:10.3168/jds.2007-0149 Fozia Nasreen, Naveed Altaf Malik, Muhammad Naeem Riaz and Javed Anver Qureshi 2009 Detection and screening of bovine leukocyte adhesion deficiency in Pakistan using molecular methods Abstract Paper received 21 August 2008; manuscript accepted 13 February 2009 Hagemoser, W A., Roth, J A., Lofstedt, J and Fagerland, J A 1983 Granulocytopathy in a Holstein heifer J Am Vet Med Assoc 183: 1093–1094 Huang YC, Chang HL, Lin DY, Liaw RB, ctv 2001 Gene frequencies of Bovine Leukocyte Adhesion Deficiency of Holstein in Taiwan J Taiwan Livest Res 33: 37–47 10 Jorgensen, C B., Agerholm, J S., Pedersen, J., and Thomsen, P D 1993 Bovine leukocyte adhesion deficiency in Danish Holstein-Friesian cattle PCR screening and allele frequency estimation Acta Vet Scand 34: 231–236 11 Kehrli, M E Jr., Schmalstieg, F C., Anderson, D C., Van Der Maaten, M J., Hughes, B J., Ackermann, M R., Wilhelmsen, C L., Brown, G B., Stevens, M G and Whetstone, C A 1990 Molecular definition of the bovine granulocytopathy syndrome: Identification of eficiency of the Mac-1 (CD11b/CD18) glycoprotein.Am J Vet Res 51: 1826–1836 12 Kostetkii, I.E., Kirilenko, S.M., Glazko, V.I and Sonizov, A.A 1996 A diagnosis analysis of a genetic mutation associated with defficience of leukocyte adhesion in cattle Tsitol Genet., 30 (2): 61-64 PMID: 9281202 Trang 56 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa 13 Kriegesmann, B., Stephan Jansen, Bernhard Gregor Baumgartner, Bertram Brenig 1997 Partial Genomic Structure of the Bovine CD18 Gen and the Refinement of Test for Bovine Leukocyte Adhession Deficiency Institute of Veterinary Medicine, University of Goettingen 14 Laura-Lee Boodram 2004 Extraction of genomic DNA from whole blood Department of Life Sciences, The University of the West Indies 15 Luciana A.Ribeiro, Eruca E Barron, Mario L Martinez and Luiz L Coutinho 2006 PCR screeening and alen frequency estimation of bovine leukocyte adhesion deficiency in Holstein and Gir cattle in Brazil Gentic and Molecular Biology 16 Marcus E Kehrli Bovine Leukocyte Adhesion Deficiency in Holstein Cattle 17 Ma, J Z., Y D Cui, Z B Zhu, H W Cao, and F Z Piao 2006 Investigation on bovine leukocyte adhesion deficiency Yi Chuan 28:1233–1236 18 Nagahata, H., Takeo Miura, Kenji Tagaki, Megumi Ohtake, Hiroshi Noda, Taichi Yasuda And Kotose Nioka 1996 Prevalence and Allele Frequency Estimation of Bovine Leukocyte Adhesion Deficiency (BLAD) in Holstein-Friesian Cattle in Japan Received 18 September 1996/Accepted 12 December 1996 19 Nagahata, H 2004 Bovine Leukocyte Adhesion Deficiency (BLAD): A Rewiew Deparment of Animal Heath, Rakuno Gakuen University, Hokkaido Japan 20 Norouzy, A., Nassiry, M.R., Eftekhari Shahrody, F., Javadmanesh, A., Mohammad Abadi, M.R and Sulimova G.E 2005 Identification of Bovine Leucocyte Adhesion Deficiency (BLAD) Carriers in Holstein and Brown Swiss AI Bulls in Iran Russian Journal of Genetics, Vol 41, No 12, 2005, pp 1409–1413 From Genetika, Vol 41, No 12, 2005, pp 1697–1701 21 Powell, R.L., Norman, H.D., Cowant, C.M 1996 Gentic, breeding and modelling Journal of dairy science 22 Poli, M.A., Dewey, R., Semorile, L., Lozano, M.E., Albarino, C.G., Romanowski, V and Grau, O 1996 PCR screening for carriers of Bovine Leukocyte Adhesion Defficiency (BLAD) and Uridine Monophosphate Synthase (DUMPS) in Argentina Holstein cattle Zentralbl Veterinarmed A., 43 (3): 163-168 PMID: 8693839 23 Rajesh K.Patel, Krishna M Singh, Kalpesh J Soni, Jenabhai B Chuhan, Krothapalli R.S Sambasiva Rao 2007 Low incidence of bovine leukocyte adhesion deficiency carrier in Indian cattle and buffalo breeds J Appl gent 24 Ribeiro, Luciana A., Erica E Baron, Mário L Martinez and Luiz L Coutinho 2000 PCR screening and allele frequency estimation of bovine leukocyte adhesion deficiency in Holstein and Gir cattle in Brazil Genetics and Molecular Biology, 23, 4, 831-834P 25 Schütz, E., Scharfenstein, M and Brenig, B 2008 Implication of Complex Vertebral Malformation and Bovine Leukocyte Adhesion Deficiency DNA-Based Testing on Disease Frequency in the Holstein Population J Dairy Sci 91:4854–4859 doi:10.3168/jds.2008-1154 © American Dairy Trang 57 Báo cáo nghiệm thu – Khảo sát tần suất gen BLAD bò sữa 26 27 28 29 30 31 32 Science Association, 2008 Shuster, D E., Kehrli, M E Jr., Ackermann, M R and Gil-bert, R O 1992 Identification and prevalence of a genetic defect that causes leukocyte adhesion deficiency in Holstein cattle Proc Natl Acad Sci (USA) 89: 9225–9229 Suomalainen, H A.; Gahmberg, C G.; Patarroyo, M.; Beatty, P G.; Schroder, J.: Genetic assignment of GP90, leukocyte adhesion glycoprotein to human chromosome 21 Somat Cell Molec Genet 12: 297-302, 1986 Suomalainen, H A.; Gahmberg, C G.; Patarroyo, M.; Schroder, J.: GP90 (LeuCAM antigen) is coded for by genes on chromosome 21 (Abstract) Cytogenet Cell Genet 40: 755 only, 1985 Takahashi, K., Miyagawa, K., Abe, S., Kurosawa, T., Sonoda, M., Nakade, T., Nagahata, H., Noda, H., Chihaya, Y and Isogai, E 1987 Bovine granulocytopathy syndrome of Holstein Freisian calves and heifers Japan Journal Veterinary Science 49 733-736 Tammen, I., Klippert, H., Kuczka, A., Treviranus, A., Pohlenz, J., Stober, M., Simon, D., Harlizius, B 1996 An improved DNA test for bovine leucocyte adhesion deficiency Research in Veterinary Science 1996, 60, 218-221 Víctor, M., Riojas-Valdes, Barbara Carballo-Garcia, Luis E Rodriguez-Tovar, Martha V Garza-Zermeno, Rafael Ramirez-Romero, Juan ZarateRamos, Ramiro Ávalos-Ramirez and Guilermo Dávalos-Aranda 2009 Absence of Bovine Leukocyte Adhesion Defficiency (BLAD) in Holstein Cattle from Mexico Journal of Animal & Veterinary Advances (9):1870-1872 ISSN: 1680-5593 Van Doormaal, B 2008 Understanding genetic recessives in Holsteins Canadian Dairy Network http://www.cdn.ca/articles.php June 2008 Accessed Oct 21, 2008 Trang 58