Hoàn thiện quy trình định lượng sự có mặt ngô biến đổi gen gmo trong thức ăn chăn nuôi bằng phương pháp realtime pcr

BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP HCM TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG NGHIỆP CƠNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU HỒN THIỆN QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG SỰ CĨ MẶT NGƠ BIẾN ĐỔI GEN (GMO) TRONG THỨC ĂN CHĂN NUÔI BẰNG PHƯƠNG PHÁP REALTIME PCR CN Nguyễn Văn Lượng ThS Nguyễn Phạm Trúc Phương Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 01/2018 BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP HCM TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đờng nghiệm thu) HỒN THIỆN QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG SỰ CĨ MẶT NGƠ BIẾN ĐỔI GEN (GMO) TRONG THỨC ĂN CHĂN NUÔI BẰNG PHƯƠNG PHÁP REALTIME PCR CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên, đóng dấu xác nhận) CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI (Ký tên) Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 01/2018 ba dịng ngơ zSSllb, Q-GA21- zSSll-1/2 300nM/45 1F/2R 600nM/600nM cho ngô GA21, Q-Bt11-1F/2R 300nM/450nM cho ngô Bt11 E176 2-5/2-3 450nM/150nM cho ngô Bt176; 20 ngô zSSllb, 300nM cho ngô GA21, 200nM cho ngô Bt11 150nM cho ngơ plasmid pUCIDT-AMP zSSllb dịng ngơ ngơ (LOQ) 60 copy , (RSD) Bt11 Bt176 ngô xác ba dịng ngơ chuy , II II .III V VI ÁC HÌNH IX .1 3 5 5 1.5.1 Ph m vi: 1.5.2 M i v i vi c dán nhãn thành ph n bi i gen: 10 10 .13 13 13 13 13 14 2.2.3 Thí 14 15 15 III Bt176 20 22 26 GA21, Bt11 Bt176 26 zSSllb Error! Bookmark not defined zSSllb, GA21, Bt11 Bt176 26 30 3.2 2: ngô GA21, Bt11 Bt176 32 zSSllb 32 3.2.2 37 3.2.3 38 42 43 3.3 45 48 4.1 48 4.2 48 .49 52 IV LOD Limit of Detection LOQ Limit of Quatification NAC Non Amplified Control NTC Non Template Control PCR Polymerase Chain Reaction SD Standard Deviation RSD Relative Standard Deviation TAE Tris Acetate EDTA V T 1.1 Trang Lo i hình sách dán nhãn m hi u l c k t 2/2007 1.2 2.1 15 time PCR 2.2 -1/2 2.3 2.7 16 -Bt11-1F/2R 2.5 15 15 -GA21-1F/2R 2.4 2.6 16 -3/2-5 Chu trình 17 Bt176 zSSllb 18 plasmid 2.8 18 2.9 19 2.10 19 2.11 10 probe 2.12 19 2.13 - 2.14 3.1 -1/2 20 21 -1/zSSlltiêu zSSllb VI 27 T 3.2 3.3 3.4 -GA21- 3.7 3.8 28 tiêu ngô GA21 -Bt11- 29 tiêu ngô Bt11 -5/2- 30 tiêu ngô Bt176 3.5 3.6 Trang probe zSSll- -1/2 -GA21- 31 - GA21-1F/2R -Bt11- -Bt11- 1F/2R - - 5/2-3 - 3.9 32 33 zSSllb - 3.11 31 32 - 3.10 31 36 zSSllb zSSllb, 3.12 37 GA21, Bt11 Bt176 3.13 3.14 38 Bt11 Bt176 39 CTAB 3.15 41 VII T 3.16 Trang 44 Bt11 Bt176 GA21, Bt11 Bt176 3.17 44 3.18 45 3.19 47 VIII Tên hình Trang pUCIDT3.1 3.2 Bt176 zSSllb (ID number: 99558673) 26 zSSllb, GA21, Bt11 time PCR plasmid pUCIDT104 34 108 copy zSSllb 3.3 34 -AMP 3.4 34 -AMP 3.5 35 -AMP 3.6 35 -AMP 3.7 40 pháp CTAB 3.8 40 zSSllb 3.9 42 - 3.10 43 zSSllb, GA21, Bt11 Bt176 IX zSSlllb 10^5 copy zSSlllb 10^5 copy zSSlllb 10^5 copy zSSlllb 10^6 copy zSSlllb 10^6 copy zSSlllb 10^6 copy 22.97 23.04 23.09 20.31 20.01 20.03 23.8 23.76 23.78 20.42 20.15 20.17 23.54 23.55 23.59 20.52 20.23 20.25 23.385 23.4 23.435 20.365 20.08 20.1 40.32 42.49 40.65 36.52 37.10 37.20 33.29 33.30 33.20 29.69 29.74 29.64 26.13 26.08 25.94 22.53 22.72 22.58 mean 40.315 42.49 40.645 36.515 37.1 37.2 33.29 33.295 33.2 29.69 29.74 29.635 26.13 26.08 25.94 22.525 22.715 22.575 0.060 0.02 0.03 0.04 0.168 0.15 0.16 0.16 3.2 GA21 Well Name Ct (dRn) zSSlllb 10^1 copy 41 zSSlllb 10^1 copy 43.56 zSSlllb 10^1 copy 40.43 zSSlllb 10^2 copy 36.51 zSSlllb 10^2 copy 36.98 zSSlllb 10^2 copy 37.22 zSSlllb 10^3 copy 33.4 zSSlllb 10^3 copy 33.56 zSSlllb 10^3 copy 33.52 zSSlllb 10^4 copy 29.52 zSSlllb 10^4 copy 29.63 zSSlllb 10^4 copy 29.47 zSSlllb 10^5 copy 26.35 zSSlllb 10^5 copy 26.21 zSSlllb 10^5 copy 26.09 zSSlllb 10^6 copy 22.14 zSSlllb 10^6 copy 22.49 zSSlllb 10^6 copy 22.35 39.63 41.42 40.86 36.52 37.22 37.18 33.18 33.03 32.88 29.86 29.85 29.8 25.91 25.95 25.79 22.91 22.94 22.8 SDr 1.667 SDR 0.92 SDr3 1.17 SDR 1.25 0.361 0.39 0.37 0.37 0.083 0.15 0.05 0.10 0.082 0.03 0.05 0.06 0.130 0.08 0.10 0.10 0.176 0.07 0.10 0.12 3.3 Bt11 Well Name Ct (dRn) zSSlllb 10^1 copy 37.16 zSSlllb 10^1 copy 37.26 zSSlllb 10^1 copy 37.42 zSSlllb 10^2 copy 34.33 zSSlllb 10^2 copy 34.76 zSSlllb 10^2 copy 34.85 zSSlllb 10^3 copy 31.42 zSSlllb 10^3 copy 31.46 zSSlllb 10^3 copy 31.49 zSSlllb 10^4 copy 27.78 zSSlllb 10^4 copy 27.83 zSSlllb 10^4 copy 27.75 zSSlllb 10^5 copy 23.7 zSSlllb 10^5 copy 23.84 zSSlllb 10^5 copy 23.75 zSSlllb 10^6 copy 20.56 zSSlllb 10^6 copy 20.51 37.23 39.02 38.46 34.12 34.82 34.78 30.78 30.63 30.48 27.46 27.45 27.4 23.51 23.55 23.39 20.51 20.54 mean 37.195 38.14 37.94 34.225 34.79 34.815 31.1 31.045 30.985 27.62 27.64 27.575 23.605 23.695 23.57 20.535 20.525 37.20 38.14 37.94 34.23 34.79 34.82 31.10 31.05 30.99 27.62 27.64 27.58 23.61 23.70 23.57 20.54 20.53 90 SDr 0.131 SDR 0.92 SDr3 0.50 SDR 0.51 0.278 0.39 0.33 0.33 0.035 0.15 0.06 0.08 0.040 0.03 0.03 0.04 0.071 0.08 0.06 0.07 0.055 0.07 0.06 0.06 zSSlllb 10^6 copy 20.45 20.4 20.43 20.425 3.4 Bt176 Ph l c xác: xác m u chu n GA21: ZS-0.1 ZS-0.1 ZS-0.1 ZS-0.5 ZS-0.5 ZS-0.5 ZS-1 ZS-1 ZS-1 ZS-1.7 ZS-1.7 ZS-1.7 ZS-4.3 ZS-4.3 ZS-4.3 ZS-0.1 ZS-0.1 ZS-0.1 ZS-0.5 30.68 28.69 29.23 32.33 31.77 31.78 28.65 28.42 28.5 28.61 29.28 30.04 29.54 28.99 28.64 GA21-0.1 GA21-0.1 GA21-0.1 GA21-0.5 GA21-0.5 GA21-0.5 GA21-1 GA21-1 GA21-1 GA21-1.7 GA21-1.7 GA21-1.7 GA21-4.3 GA21-4.3 GA21-4.3 39.56 36.67 39.43 39.56 39.02 38.89 35.12 34.67 34.88 34.23 35.02 35.75 33.98 33.4 33 0.21% 0.40% 0.09% 0.67% 0.66% 0.72% 1.13% 1.31% 1.20% 2.03% 1.87% 1.91% 4.61% 4.70% 4.87% bias -112% -296% 15% -33% -31% -45% -13% -31% -20% -2% 6% 4% 8% 6% 3% bias mean -131% SD 0.16% RSD 67.67% mean % 0.23% -36% 0.04% 5.32% 0.68% -21% 0.09% 7.71% 1.21% 3% 0.08% 4.37% 1.94% 5% 0.13% 2.81% 4.73% 0.23% 0.30% 0.37% 0.78% bias -127% -200% -275% -55% bias mean -201% SD 0.07% RSD 24.47% mean % 0.30% -55% 0.09% 11.04% 0.78% xác m u chu n Bt11: 28.22 28.14 28.04 28.11 B176-0.1 B176-0.1 B176-0.1 B176-0.5 37 36.52 36.1 35.12 91 ZS-0.5 ZS-0.5 ZS-1 ZS-1 ZS-1 ZS-2 ZS-2 ZS-2 ZS-5 ZS-5 ZS-5 28.16 23.84 23.99 23.78 23.85 23.87 31.22 31.3 31.05 31.25 31.11 B176-0.5 B176-0.5 B176-1 B176-1 B176-1 B176-2 B176-2 B176-2 B176-5 B176-5 B176-5 35.02 31.02 30.12 30.23 30.41 29.3 36.62 36.52 35.23 35.17 35.15 0.86% 0.69% 1.43% 1.14% 1.06% 2.32% 2.37% 2.68% 5.52% 6.61% 6.08% -72% -38% -43% -14% -6% -16% -18% -34% -10% -32% -22% -21% 0.19% 15.93% 1.21% -23% 0.20% 8.03% 2.46% -21% 0.54% 8.98% 6.07% xác m u chu n Bt176: bias ZS-0.1 ZS-0.1 ZS-0.1 ZS-0.5 ZS-0.5 ZS-0.5 ZS-1 ZS-1 ZS-1 ZS-2 ZS-2 ZS-2 ZS-5 ZS-5 ZS-5 23.35 23.36 23.54 24.68 24.35 24.49 23.4 23.45 23.37 24.36 24.46 24.41 23.93 23.88 23.79 B176-0.1 B176-0.1 B176-0.1 B176-0.5 B176-0.5 B176-0.5 B176-1 B176-1 B176-1 B176-2 B176-2 B176-2 B176-5 B176-5 B176-5 32.23 31.89 31.63 31.56 31.02 31.45 29.23 29.33 29.44 29.45 29.74 29.56 27.92 27.89 27.56 0.21% 0.27% 0.37% 0.85% 0.98% 0.80% 1.76% 1.70% 1.49% 2.94% 2.57% 2.82% 6.29% 6.21% 7.33% -112% -171% -267% -70% -96% -61% -76% -70% -49% -47% -29% -41% -26% -24% -47% bias mean -183% SD RSD 0.08 27.59% -76% 0.09 10.58% -65% 0.14 8.58% -39% 0.18 6.65% -32% 0.63 9.46% Ph l c K t qu so sánh liên phòng zS-GA zS-GA zS-GA zS-GA2 zS-GA2 zS-GA2 zS-GA3 zS-GA3 zS-GA3 GA-1 GA-1 GA-1 GA-2 GA-2 Ct 24.8 24.71 24.63 24.02 24 24.04 23.95 24.08 24.02 31.9 32.15 32.59 30.9 32.01 Ct 25.04 25.12 25.2 24.57 24.76 24.72 23.86 23.8 24.08 20.6 20.55 20.58 19.87 19.64 zS-Bt11-1 zS-Bt11-1 zS-Bt11-1 zS-Bt11-2 zS-Bt11-2 zS-Bt11-2 zS-Bt11-3 zS-Bt11-3 zS-Bt11-3 Bt11-1 Bt11-1 Bt11-1 Bt11-2 Bt11-2 92 zS-Bt176-1 zS-Bt176-1 zS-Bt176-1 zS-Bt176-2 zS-Bt176-2 zS-Bt176-2 zS-Bt176-3 zS-Bt176-3 zS-Bt176-3 Bt176-1 Bt176-1 Bt176-1 Bt176-2 Bt176-2 Ct 23.83 26.03 24.65 25.56 25.53 25.91 25.16 25.49 25.65 30.63 30.18 30.04 29.54 32.05 GA-2 GA-3 GA-3 GA-3 31.86 32.75 33.05 32.7 Bt11-2 Bt11-3 Bt11-3 Bt11-3 19.97 19.66 19.26 19.04 Ph l c Danh sách m u thu th p th Stt 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 B C D E F G H I J K M N B C D E F G H I B C D E F G H I J (ng/ ) 164.2 77.3 81.2 105.7 174.8 189.7 92.5 169.1 22.8 24.3 38.9 53.6 81.2 11.3 108.5 12.7 130.4 78 721.8 415 298 569.9 20 12.5 21.8 17.5 27.3 12.3 28.4 12.5 12.1 14.3 525 14.3 93 Bt176-2 Bt176-3 Bt176-3 Bt176-3 ng OD260/ OD280 1.81 1.83 1.77 1.9 1.72 1.81 1.87 1.71 1.57 1.49 1.9 1.29 1.43 1.28 1.27 1.36 1.25 1.22 137 1.54 1.72 1.44 1.57 2.42 2.27 2.27 1.3 1.14 1.93 2.42 1.8 1.57 1.7 1.25 ly trích GM Quicker CTAB 30.4 31.17 32.05 31.32 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 B C D E F B C C B C D E F G H 80.6 109.3 192 17.2 550.8 666.6 630.7 199.9 60.8 17.5 60.8 45.9 12.5 9.9 45.9 17.5 94 1.44 1.76 1.07 1.41 1.81 1.88 1.77 1.67 1.43 1.71 1.43 1.47 1.23 1.58 1.47 1.71 GM Quicker Ph l c ng ngô bi i gen GA21, Bt11 Bt176 95 - (µL) qPCRBIO Probe Mix 2X zSSll-1 10 µM zSSll-2 10 µM Probe zSSll-P 10 µM 10 0,6 0,9 0,4 6,1 1,0 20 DNA 50ng/µL 2.2 : (µL) qPCRBIO Probe Mix 2X Q-GA21-1F 10 µM Q-GA21-2R 10 µM Probe Q-GA21-P 10 µM 10 1,2 1,2 0,6 4,0 1,0 20 DNA 50ng/µL 2.3 (µL) qPCRBIO Probe Mix 2X Q-GA21-1F 10 µM Q-GA21-2R 10 µM Probe Q-GA21-P 10 µM 10 0,6 0,9 0,4 6,1 1,0 20 DNA 50ng/µL 2.4 (µL) qPCRBIO Probe Mix 2X Q-Bt11-1F 10 µM Q-Bt11-2R 10 µM Probe Q-Bt11-P 10 µM 10 0,9 0,3 0,3 5,5 1,0 20 DNA 50ng/µL 96 C) 95 95 60 120 05 30 50 - 107 copy, zSSllb - zSSllb zSSllb zSSllb zSSllb zSSllb Ph c l c 8: Quy trình phân tích GMO b i NG D N TH C HI N QUY TRÌNH A Chu n b m u DNA Các m u th c ph m nguyên v t li u c n thi t ph c chu n b tách chi t DNA v pháp thích h cung c s ng ch ng cho ph n ng real-time PCR DNA tách chi t c nh ng b c sóng pha lỗng v n làm vi c (40 ti n hành th c hi n ph n ng real-time PCR Quy trình tách chi t DNA b ng b AccuRive Plant/Food sDNA Prep Kit: Quy trình tách chi t DNA s t hi u qu t t m ng nh t t t, m u tách chi t nên c có d ng b t m i dùng có th nghi n m u b ng c i chày, máy xay ho c ng nh im t o d ng b t m n Quy trình có th c lên t i 200 mg m u Ph thu c vào t ng lo i m u cách thu m u theo i dùng áp d ng sàng l c có th tách chi t lên t i 1-2 g m u v i t l dung d ch Khuy n cáo s d ng 300 µl d ch ly gi cho qua c t silica trình tách chi t B ng Các lo i m c th c hi n v i quy trình 97 u nành, b p, g o, tiêu, hành lá, cà r ng M u th c ph m thô b t) Các lo i h t gi ng S n ph m t u h , s u Các lo i bún, ph kh M u th c ph m ch bi n Các lo i bán B c B ng ng c sau 200 mg m u vào eppendorf 2,0 ml Cho 100 c c t vào m t làm ng ch ng âm tách chi i tr ng v i ng Th c hi Cân 100 eppendorf m u) B t b n nhi t kh 70oC Hút ml dung d ng có th dùng cho 20 m u) c 70oC Cho dung d ch KTL13 vào eppendorf v i th tích tùy vào t ng n n m u M uh u nành, b p, g d ng 700 µl KTL13 M u khô bi n: bún g o, mì gói s d ng 1.000 µl KTL13 Cho ti p 10 µl KTL4 Vorte m nh 10 giây 10 phút t i 70oC Cho vào 100 µl dung d u ng nhi u l n ho c vortex nh Ly tâm 12.000 vòng/phút (ho c 15.000 g) phút Chuy n 300 µl d ch n i sang m t eppendorf 1,5 ml m i Cho vào 200 µl dung d ch KTC1 10 Cho vào 200 µl dung d ch KTC2 Vortex u Chuy n toàn b h n h p sang c t silica có ng 11 Ly tâm c t 10.000 vòng/phút (ho c 10.000 g) phút Chuy n c t sang eppendorf 2,0 ml m i 12 Cho vào 600 µl dung d ch KTC3 13 Ly tâm 10.000 vòng/phút (ho c 10.000 g) phút Chuy n c t sang eppendorf 2,0 ml m i 14 Cho vào 600 µl dung d ch KTC4 15 Ly tâm 10.000 vòng/phút (ho c 10.000 g) phút Chuy n c t sang eppendorf 2,0 ml m i 16 Ly tâm 13.000 vòng/phút (ho lo i b h t d u v t KTC4 17 Chuy n c t sang eppendorf 1,5ml m ng v i m u 18 Cho vào 50 µl dung d ch KTL2 ( c 70 oC) phút t i nhi phòng 19 Ly tâm 13.000 vòng/phút (ho thu nh n DNA N u không ti n hành ph n ng PCR ngày, b o qu n DNA tách chi t 2-8 C vòng 298 ngày, ho c -20 C vòng tháng B Th c hi n ph n ng PCR ng MasterMix, PrimobeMix Ch t nhi phòng t (3.000-4.000 vòng/phút) t vào rack l nh Vorte m nh ng PrimobeMix hút 200 µl chuy n vào ng MasterMix Tr u h n h p có ng MasterMix b ng micropipette Hút l t 20 µl h n h p cho vào t ng eppendorf PCR 0,2 ml (ho c ghi s n tên m u Tr u dung d ch DNA t nghi m, Ch ng âm tách chi t, dung d ch Ch b ng cách vortex nh Cho l dung d ch DNA t nghi m, Ch ng âm tách chi t (khuy n cáo), dung d ch Ch ng cc t2l nl t vào c3 y n p eppendorf PCR/ strip th t k , ly tâm nh (3.000-4.000 vòng/phút) t vào máy PCR Khai báo v trí màu hu nh quang FAM cho m c tiêu, HEX cho ch ng n i cho m u theo ng d n v n hành c a nhà s n u t máy real-time PCR -time PCR chung cho b kit phát hi o chu k 95 C 15 phút 40 chu k 95oC 20 giây 600C c tín hi u FAM, HEX) PHÂN TÍCH K T QU S có m t hay khơng c a trình t m nh d a s có hay kh ng có s n ph m PCR thông qua vi ng bi u di n hu nh quang FAM, HEX thi t b Ki m tra tín hi u c a m u ch ng: M u ch ng âm PCR, ch ng âm tách chi t: ch ng hu t lên kh i ng tín hi u M u ch ng hu t lên kh i ng tín hi u Ki m tra m u xét nghi m: M ng phát hi n v i trình t m c tiêu: ch ng bi u di n hu nh quang HEX c t lên kh ng tín hi u M i trình t m ng bi u di n hu nh quang FAM HEX t lên kh ng tín hi u (Hình 2A) Trong m t s ng h p m tính m nh v i trình t m ng bi u di n hu nh quang HEX có th n i ng tín hi u Khơng xu t hi n tín hi u nào, k c màu HEX Ph n ng real-time PCR b c ch , không k t lu cm 99 Ph l c nh m c kinh t TT - time PCR TT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 cái cái cái cái cái cái cái cái cái kW TT cái cái cái cái Bàn máy vi tính 100 (tháng) 60 48 24 12 24 24 24 24 60 24 36 36 36 36 6 24 12 48 36 36 12 60 (tháng) 72 72 48 48 48 12 0,50 0,25 0,60 0,60 0,80 0,20 0,20 0,07 0,80 0,06 0,40 0,40 0,40 0,40 0,02 0,40 0,10 0,10 0,10 0,10 0,02 0,02 0,02 0,02 0,80 0,05 0,01 0,13 0,13 1,39 0,40 0,15 0,15 0,15 0,04 0,20 0,20 0,40 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Lị vi sóng 0,5 kW 21 22 23 24 25 26 2.1.3 cái cái cái cái cái cái kW TT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 Bàn máy vi tính cái cái cái cái cái cái cái cái kW 24 24 24 60 36 36 36 36 6 24 36 48 36 36 12 60 (tháng) 72 72 48 48 24 36 24 24 72 36 36 36 36 6 48 48 36 36 12 60 0,20 0,20 0,20 0,02 0,05 0,05 0,05 0,05 0,02 0,02 0,02 0,02 0,40 0,02 0,01 0,06 0,06 0,75 -time PCR 0,96 0,96 0,18 0,18 0,18 0,05 0,24 0,48 0,10 0,48 0,48 0,03 0,12 0,12 0,12 0,12 0,03 0,03 0,03 0,96 0,06 0,01 0,16 0,16 1,67 2.2.1 Tách TT a 101 2,20 0,13 Máy ly tâm Cân phân tích cái cái cái cái kW 2,00 1,00 0,10 0,30 0,01 0,02 cái cái cái cái cái kW 2,20 2,00 1,00 0,10 0,30 0,01 0,02 0,10 0,02 0,40 0,40 0,03 0,03 0,03 0,40 0,40 6,85 b c Máy ly tâm Cân phân tích 10 11 TT 10 12 cái cái cái cái cái kW Máy ly tâm Cân phân tích Máy vi tính Máy in laser A4 2.23 TT 0,10 0,10 2,20 0,10 0,30 0,03 0,05 0,05 0,01 0,05 0,40 0,40 0,13 0,03 0,40 0,40 0,03 0,03 0,03 0,40 0,40 0,03 7,05 0,06 0,20 0,01 0,01 0,05 0,01 0,01 0,08 0,08 0,01 1,67 -time PCR cái cái cái cái kW Máy real-time PCR Máy ly tâm -20°C) Máy vi tính Máy in laser A4 Máy photocopy 102 2,20 0,45 0,10 0,30 0,15 0,40 0,40 1,50 0,16 0,18 0,48 0,03 0,48 0,18 0,02 0,05 6,40 TT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 TT 10 11 12 13 14 15 16 17 TT lít RNase (25 mg) Na2 TrisCloroform 2-isopropanol lít lít lít Proteinase K (25 mg) Alpha amylase (100 mg) Ethanol NaCl HCl 37% NaOH lít kg lít kg túi túi túi túi túi túi lít eppendorf ml (1000 cái/túi) TrisNa2 H3BO3 lít lít Parafilm (0,1 x 38m) túi túi túi túi (500 cái/túi) (Primers) nucleotide 103 0,50 0,001 0,02 0,002 0,0002 0,01 0,0015 0,02 0,05 0,005 0,01 0,0011 0,005 0,001 0,20 0,04 0,08 0,02 0,02 0,03 0,005 0,01 0,02 0,001 0,002 0,005 0,0005 1,00 0,05 0,05 0,005 0,01 0,04 0,001 0,05 0,02 0,05 5,00 0,025 - 0,005 0,05 0,005 0,10 0,08 0,002 0,0005 Bromophenol blue 10 11 12 13 14 15 16 17 18 lít lít túi túi túi túi TT nucleotide nucleotide lít 0,0005 1,50 0,01 0,1 0,05 0,08 0,08 0,05 0,04 0,05 0,01 0,005 0,005 0,005 LightCycle® Taqman Master CAT.No 04535286001 (bao kít 0,17 LightCycle® Uracil N6 10 11 12 13 14 kít túi túi túi 0,02 0,02 0,02 0,02 0,18 0,10 0,06 0,02 0,004 0,008 cái/túi) - lít ram 104