Chiết xuất và đánh giá hoạt tính sinh học của catechin từ lá trà xanh camellia sinensis

SỞ NƠNG NGHIỆP VÀ PTNT CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Độc lập – Tự – Hạnh phúc TRUNG TÂM CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO TỔNG HỢP CHIẾT XUẤT VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CATECHIN TỪ LÁ TRÀ XANH Camellia sinensis Mã số: TP02/17-19 Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Công nghệ Sinh học Tp Hồ Chí Minh Chủ nhiệm nhiệm vụ: CN Ngơ Thị Phương Dung Thành phố Hồ Chí Minh - 2020 SỞ NƠNG NGHIỆP VÀ PTNT CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Độc lập – Tự – Hạnh phúc TRUNG TÂM CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CHIẾT XUẤT VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CATECHIN TỪ LÁ TRÀ XANH Camellia sinensis Mã số: TP02/17-19 (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày 30.06.20) Chủ nhiệm nhiệm vụ: Ngơ Thị Phương Dung Cơ quan chủ trì nhiệm vụ PGS.TS Dương Hoa Xơ Thành phố Hồ Chí Minh - 2020 SỞ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM CƠNG NGHỆ SINH HỌC CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 07 tháng 07 năm 2020 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KH&CN I THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Chiết xuất đánh giá hoạt tính sinh học Catechin từ trà xanh Camellia sinensis Thuộc: Chương trình/lĩnh vực (tên chương trình/lĩnh vực): Nếu có Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: Ngô Thị Phương Dung Ngày, tháng, năm sinh: 03/01/1990 Nam/ Nữ: Nữ Học hàm, học vị: Cử nhân Chức danh khoa học: Nghiên cứu viên Chức vụ: Nhân viên Điện thoại: Tổ chức: 028 37153792 Nhà riêng: … Mobile: Fax: … E-mail: ngothiphuongdung1116@gmail.com Tên tổ chức công tác: Trung tâm Công nghệ Sinh học Tp Hồ Chí Minh Địa tổ chức: 2374, Quốc Lộ 1, Khu phố 2, Phường Trung Mỹ Tây, Q.12, Tp HCM Tổ chức chủ trì nhiệm vụ: - Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ : Trung tâm Cơng nghệ Sinh học Tp Hồ Chí Minh - Điện thoại: 028 37153792 Fax: 028 38916997 - E-mail : ttcnsh.snn@tphcm.gov.vn hcmbiotech.com.vn Website : - Địa : 2374, Quốc Lộ 1, Khu phố 2, Phường Trung Mỹ Tây, Q.12, Tp HCM - Họ tên thủ trưởng tổ chức: PGS TS Dương Hoa Xô - Số tài khoản: 3714.0.100.7645 - Kho bạc Nhà nước/Ngân hàng: Kho bạc Nhà nước TP.HCM - Tên quan chủ quản đề tài: Sở Nông Nghiệp Phát triển Nông thôn TP.HCM Thời gian thực nhiệm vụ : - Theo Hợp đồng ký kết : từ tháng 01năm 2017 đến tháng 06 năm2019 - Thực tế thực : từ tháng 01năm 2017 đến tháng 06 năm 2020 - Được gia hạn (nếu có) : 12 tháng ( từ tháng 6/2019 đến tháng 6/2020) Kinh phí sử dụng kinh phí : a) Tổng số kinh phí thực : 650.000.000 đ, : + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học : 650.000.000 đ + Kinh phí từ nguồn khác : đ b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học : Theo kế hoạch Thực tế đạt Số Thời gian Kinh phí Thời gian Kinh phí TT (Tháng, năm) (đ) (Tháng, năm) (đ) 1/2017200.000.000 1/2017199.141.660 12/2017 12/2017 1/2018300.000.000 1/2018299.984.370 12/2018 12/2018 1/2019150.000.000 1/2019143.538.560 6/2019 12/2019 c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Ghi (Số đề nghị toán) 199.141.660 299.984.370 143.538.560 Đối với đề tài: Số TT Đơn vị tính: Đồng Thực tế đạt Tổng NSKH Nguồn khác Theo kế hoạch Nội dung khoản Tổng NSKH Nguồn chi khác Trả công lao động (khoa 180.260.080 180.260.080 176.641.920 học, phổ thông) Nguyên, vật liệu, 388.578.920 388.578.920 lượng Thiết bị, máy 0 0 móc Xây dựng, 0 0 sửa chữa nhỏ 81.161.000 81.161.000 37.453.870 Chi khác Tổng cộng 650.000.000 650.000.000 642.664.590 - Lý thay đổi (nếu có): Đối với dự án: 176.641.920 428.568.800 0 0 37.453.870 642.664.590 0 Đơn vị tính: Triệu đồng Số TT Nội dung khoản chi Thiết bị, máy móc mua Nhà xưởng xây dựng mới, cải tạo Kinh phí hỗ trợ cơng nghệ Chi phí lao động Ngun vật liệu, lượng Thuê thiết bị, nhà xưởng Khác Tổng cộng Theo kế hoạch Tổng NSKH Nguồn khác Thực tế đạt Tổng NSKH Nguồn khác - Lý thay đổi (nếu có): Các văn hành q trình thực đề tài/dự án: (Liệt kê định, văn quan quản lý từ công đoạn xét duyệt, phê duyệt kinh phí, hợp đồng, điều chỉnh (thời gian, nội dung, kinh phí thực có); văn tổ chức chủ trì nhiệm vụ (đơn, kiến nghị điều chỉnh có) Số TT Số, thời gian ban hành văn Văn số 120/QĐCNSH ngày 19 tháng năm 2017 Văn số 101/HĐGVCNSH ngày 11 tháng năm 2017 Văn số 349/QĐ-SNN ngày 28 tháng 10 năm 2019 Tên văn Quyết định việc phê duyệt đề tài nghiên cứu khoa học cấp sở năm 2017 Hợp đồng giao việc thực đề tài cấp sở năm 2017 Quyết định việc giao tiếp tục thực nhiệm vụ khoa học công nghệ cấp sở chuyển tiếp từ năm 2016, 2017, 2018 sáng năm 2019, 2020, 2021 Đơn vị: Trung tâm Công nghệ Sinh học Văn số 46/2019/HĐ- Hợp đồng thực nhiệm vụ khoa SNN ngày tháng 12 học công nghệ cấp sở: “Chiết năm 2019 xuất đánh giá hoạt tính sinh học Catechin từ trà xanh Camellia sinensis” (Nhiệm vụ chuyển tiếp năm 2017) Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Ghi Số TT Tên tổ chức Tên tổ chức đăng ký theo tham gia thực Thuyết minh Nội dung tham gia chủ yếu Sản phẩm chủ yếu đạt Ghi chú* … - Lý thay đổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, không 10 người kể chủ nhiệm) Số TT Tên cá nhân đăng ký theo Thuyết minh TS Bùi Thị Kim Lý Tên cá nhân tham gia thực Nội dung tham gia TS Bùi - Chủ nhiệm nhiệm vụ Thị Kim Lý CN Ngô Thị Phương Dung CN - Chủ nhiệm nhiệm vụ Ngô Thị - Thực tách chiết Phương Catechin Dung - Thực định lượng polyphenol tổng Thực thí nghiệm đánh giá khả kháng khuẩn, kháng oxi hóa ThS Lê Thị Huyền ThS Lê - Thành viên thực Thị Thực đánh giá Huyền hoạt tính kháng ung thư Sản phẩm chủ yếu đạt Ghi chú* - Báo cáo đề cương Đã - Đánh giá quy chuyển trình tách chiết cơng tác -Quy trình tách Đổi chiết catechin chủ -Sản phẩm bột nhiệm catechin - Xác định hàm lượng polyphenol tổng catechin thu - Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn E.coli Staphylococcus aureus -Đánh giá hoạt tính kháng oxi hóa catechin - Đã đánh giá hoạt tính kháng tế bào ung thư kháng viêm catechin thu nhận ThS Hồng Thành Chí ThS Nguyễn Thị Dung Ths Đoàn Thị Tám Ths Đoàn Thị Tám ThS Nguyễn Thị Nhật Uyên KS Võ Nguyễn Thanh Thảo K562,HepG2, A549 - Đã đánh giá hoạt tính kháng viêm dịng đại thực bào RAW264.7 Thực đánh giá - Đã đánh giá hoạt tính kháng ung thư hoạt tính kháng tế kháng viêm bào ung thư catechin thu nhận K562, - HepG2, A549 Đã đánh giá hoạt tính kháng viêm dòng đại thực bào RAW264.7 - Thực tách chiết - Thu nhận thu nhận catechin mẫu catechin Định tính, định lượng - Phân tích mẫu catechin thu hàm lượng nhận dẫn xuất catechin Thực đánh giá - Đã đánh giá hoạt tính kháng ung thư hoạt tính kháng tế kháng viêm bào ung thư catechin thu nhận K562,HepG2, A549 Đã đánh giá hoạt tính kháng viêm dịng đại thực bào RAW264.7 - Lý thay đổi ( có): Thay đổi chủ nhiệm nhiệm vụ số thành viên chủ nhiệm cũ thành viên thực nhiệm vụ chuyển công tác tạm ngưng hợp đồng Tình hình hợp tác quốc tế: Số TT Theo kế hoạch (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đồn, số lượng người tham gia ) Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Theo kế hoạch Thực tế đạt Số (Nội dung, thời gian, kinh (Nội dung, thời gian, TT phí, địa điểm ) kinh phí, địa điểm ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tóm tắt nội dung, công việc chủ yếu: (Nêu mục 15 thuyết minh, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngoài) Số TT Thời gian (Bắt đầu, kết thúc - tháng … năm) Theo kế Thực tế hoạch đạt Các nội dung, công việc chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) Người, quan thực - Lý thay đổi (nếu có): III SẢN PHẨM KH&CN CỦA NHIỆM VỤ Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Tên sản phẩm Số Đơn tiêu chất lượng TT vị đo chủ yếu Chế phẩm Catechin kg dạng bột Theo kế hoạch Số lượng 2 Thực tế đạt - Lý thay đổi (nếu có): b) Sản phẩm Dạng II: Số TT Tên sản phẩm Qui trình tách chiết thu Catechin - Lý thay đổi (nếu có): Yêu cầu khoa học cần đạt Theo kế Thực tế hoạch đạt quy trình quy trình Ghi c) Sản phẩm Dạng III: Số TT Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học cần đạt Theo Thực tế kế hoạch đạt Bài báo khoa học cơng bố tạp chí chun ngành nước Hội nghị, hội thảo khoa học nước bài bài Số lượng, nơi cơng bố (Tạp chí, nhà xuất bản) Đăng tuyển tập báo cáo toàn văn Hội nghị Cơng nghệ Sinh học tồn quốc năm 2019, trang 129-133, ISBN: 987-60473-7266-9 Hội nghị cơng nghệ sinh học tồn quốc, báo cáo poster - Lý thay đổi (nếu có): d) Kết đào tạo: Số TT Cấp đào tạo, Chuyên ngành đào tạo Đại học Thạc Sỹ Đồ án ngắn hạn Số lượng Theo kế Thực tế đạt hoạch 0 Ghi (Thời gian kết thúc) - Lý thay đổi (nếu có): Do thay đổi chủ nhiệm đề tài nhiều lần thay đổi thành viên thực đề tài nên tiêu đào tạo đại học thạc sỹ khơng thể hồn thành theo dự kiến đ) Tình hình đăng ký bảo hộ quyền sở hữu cơng nghiệp: Số TT Tên sản phẩm đăng ký Kết Theo Thực tế kế hoạch đạt Ghi (Thời gian kết thúc) - Lý thay đổi (nếu có): e) Thống kê danh mục sản phẩm KHCN ứng dụng vào thực tế Số Tên kết Thời gian Địa điểm Kết TT (Ghi rõ tên, địa nơi ứng dụng) ứng dụng sơ 2 Đánh giá hiệu nhiệm vụ mang lại: a) Hiệu khoa học công nghệ: - Nhiệm vụ đưa quy trình cải tiến cho q trình trích ly Catechin từ trà xanh chưa tiến hành nước b) Hiệu kinh tế xã hội: (Nêu rõ hiệu làm lợi tính tiền dự kiến nhiệm vụ tạo so với sản phẩm loại thị trường…) Tình hình thực chế độ báo cáo, kiểm tra nhiệm vụ: Số Nội dung TT I Thời gian thực Ghi (Tóm tắt kết quả, kết luận chính, người chủ trì…) Báo cáo tiến độ Lần Lần II Nghiệm thu sở Được đánh giá đạt 5/5, tiếp tục thực đề tài Bổ sung thêm phương pháp thống kê, thống cách viết số liệu Bổ sung thêm kết phương pháp tách chiết theo quy trình cải tiến so với quy trình (tltk) quy 24/05/2018 trình chuẩn Bổ sung phương pháp nhằm tăng hiệu suất thu nhận catechin Bỏ nội dung khảo sát men tanase Viết lại phần thảo luận Chỉnh sửa lại kế hoạch thực năm 2018, giảm thời gian thực đánh giá hoạt tính sinh học để tập trung vào quy trình tách chiết Được đánh giá đạt 5/5, tiếp tục thực đề tài Cần bổ sung phần tổng quan phương pháp tách chiết catechin, thống tài liệu tham 01/10/2019 khảo, kết luận viết lại ngắn gọn, so sánh với nghiên cứu công bố, bổ sung kết nội dung thực năm 2019 tới thời điểm báo cáo 30/06/2020 Báo cáo trình bày ngắn gọn, logic rõ ràng Tuy nhiên cần có số điều chỉnh: tỏ catechin tách chiết từ trà xanh không gây độc trêntế bào thường nồng độ 400 µg/ml Dựa kết khảo sát khả tác động dòng tế bào thường, với khoảng nồng độ trên, tiếp tục khảo sát độc tính dịng tế bào ung thư (tế bào ung thư máu K562, tế bào ung thư phổi A549, tế bào ung thư gan HepG2) Kết đánh giá hoạt tính ức chế tế bào ung thư ba dòng tế bào HepG2, A549, K562 catechin cho thấy, catechin ức chế khả tăng sinh tế bào tăng dần theo nồng độ (Hình 3.15) Ở nồng độ 25 µg/ml gần khơng có tác dụng ức chế tăng sinh ba dòng tế bào Tuy nhiên cở nồng độ cao hơn, khả sống sót tế bào giảm đáng kể, có khác biệt nhiều so với đối chứng Từ nồng độ khảo sát 200 µg/ml, tất ba dịng tế bào có ức chế 50% Đối với tế bào A549, đạt tỉ lệ sống 70% từ nồng độ 25-100 µg/ml 117%, 80,2%, 70% tỉ lệ sống bé 50% nồng độ 200 400 µg/ml 40,2% 31,4% Dịng tế bào HepG2, đạt tỉ lệ sống 70% từ nồng độ 25100 µg/ml 96,7%, 85%, 79,7% tỉ lệ sống bé 50% nồng độ 200 400 µg/ml 48,1% 16,1% Tế bào ung thư máu K562 đạt tỉ lệ sống 50% từ nồng độ 25-100 µg/ml 110,8%, 67,5%, 55,7%, ngược lại nồng độ 200 400 µg/ml 44,1% 19,1% Các giá trị IC50 ba dòng tế bào HepG2, A549, K562 đạt 181,1 µg/ml, 186 µg/ml, 137,8 µg/ml Khả ức chế tăng sinh tế bào nồng độ 100 µg/ml dẫn xuất catechin thu xấp xỉ với mẫu chất chuẩn ECCG, đạt 70,02%, 79,7%, 55,74% dòng tế bào HepG2, A549, K562 Như vậy, mởi dạng cao chiết toàn phần catechin thu nhận thể khả ức chế tế bào ung thư gần tương đương với chất chuẩn Do đó, thấy catechin có tiềm ứng dụng hỗ trợ phòng chữa trị ung thư Theo tác giả Liu cộng năm 2017 [77], tách chiết khảo sát hoạt tính ức chế tế bào ung thư A549 K562, IC50 đạt 384 ± 2,11 mg/ml 291,9 ± 18 mg/ml, kết thu nhận cao số cao gấp 1600-2000 lần Có thể nói quy 50 trình tách chiết cải tiến thu nhận dẫn xuất catechin có hoạt tính cao nghiên cứu trước A549 xử lý với Catechin 48H % Tỉ lệ sống tế bào % Tỉ lệ sống tế bào A549 xử lý với Catechin 48H Nồng độ (g/mL) HepG2 xử lý với Catechin 48H % Tỉ lệ sống tế bào % Tỉ lệ sống tế bào HepG2 xử lý với Catechin 48H Nồng độ (g/mL) K562 xử lý với Catechin 48H % Tỉ lệ sống tế bào % Tỉ lệ sống tế bào K562 xử lý với Catechin 48H Nồng độ (g/mL) Hình 3.15 Thử nghiệm độc tính giá trị IC50 dòng tế bào ung thư A549, HepG2, K562 xử lý với catechin nồng độ khác (các nồng độ catechin có khác biệt ý nghĩa mức ****, ***, **, * so với Neg; ns khơng có khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê) 51 Chương Kết luận đề nghị 4.1 Kết luận Căn vào nội dung, mục tiêu nghiên cứu kết đạt trình bày, chúng tơi đưa số kết luận sau: - Trà xanh (Camellia sinensis) tách chiết quy trình tách chiết cải tiến cho hiệu suất cao (6,05%) gấp đơi so với quy trình truyền thống Yukihiko Hara (3,85%) Tuy nhiên sản phẩm tách chiết loại caffeine cho hiệu suất giảm mạnh đạt 2,31% Các quy trình tách chiết có thành phần dẫn xuất catechin thu gồm catechin, ECGC, ECG, EC, EGC caffeine Trong bốn phương pháp khảo sát, phương pháp cải tiến chưa loại caffeine cho hàm lượng tổng dẫn xuất catechin cao 687,23 mg/g thu hàm lượng catechin cao - Bột catechin sau tách chiết, đánh giá hoạt tính sinh học cho kết có khả kháng oxy hóa tốt: qua khả bắt giữ DPPH đạt IC50 = 7,404 µg/ml tương đương vitamin C, khả bắt gốc tự ABTS+ đạt IC50 = 28,67 ± 1,143 µg/ml, nồng độ sử dụng thấp vitamin C - Bột catechin từ trà xanh có khả đối kháng với hai loài vi khuẩn E coli S aureu, với đường kính vịng kháng khuẩn đạt 8,323 ± 0,937 nồng độ 5mg/ml 3,623 ± 0,412 mm nồng độ 50mg/ml nồng độ theo thứ tự Kết MBC chủng S aureu 0,625 mg/ml, E coli 6,25 mg/ml - Bột catechin có khả kháng viêm làm lành nhanh vết thương tế bào Kết khảo sát hoạt tính kháng viêm thu được, nồng độ 45 µg/ml % tăng sinh NO đạt 44,4%, đồng thời thí nghiệm dòng tế bào thường Fibroblast cho thấy khả làm lành catechin chưa rõ ràng Cần có khảo sát sâu để kết luận khả làm lành bột catechin 52 - Catechin tách chiết có khả ức chế tế bào ung thư ba dòng tế bào HepG2, A459, K462 với giá trị IC50 181,1 µg/ml 186 µg/ml; 137,8 µg/ml 4.2 Đề nghị - Đối với quy trình tách chiết, để loại hàm lượng caffeine có bột catechin cần khảo sát loại dung môi phù hợp để không làm giảm hiệu suất tách chiết giảm lượng caffeine nhiều - Cần khảo sát thêm khả kháng khuẩn với phổ kháng khuẩn rộng catechin nhiều dòng vi khuẩn nấm gây bệnh - Để đạt kết khảo sát hoạt tính chống ung thư tối ưu, để thu nhận kết tốt dẫn xuất catechin tổng cần tách chiết dạng tinh khiết - Khảo sát thêm khả ức chế tế bào ung thư nhiều dòng tế bào khác - Tiến hành đánh giá hoạt tính kháng viêm mơ hình chuột (in vivo) để thấy rõ hoạt tính làm lành vết thương rõ - Tiếp tục kế thừa kết đề tài nhằm phát triển số sản phẩm đề tài như: bột catechin ứng dụng làm trà hòa tan, làm thuốc chức năng… 53 Chương Tài liệu tham khảo [1] Liang C C., Park A Y., Guan J L., "In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro," Nat Protoc, vol 2, no 2, pp 329-333, 2007 [2] Mueller M., Hobiger S., Jungbauer A., "Anti-inflammatory activity of extracts from fruits, herbs and spices," Food chemistry, vol 122, no 4, pp 987-996, 2010 [3] Sherwood E R., Toliver-Kinsky T., "Mechanisms of the inflammatory response," Best Pract Res Clin Anaesthesiol, vol 135, no 2, pp 385-405, 2004 [4] Blanco A R., Sudano-Roccaro A., Spoto G C., Nostro A., Rusciano D., "Epigallocatechin gallate inhibits biofilm formation by ocular staphylococcal isolates," Antimicrob Agents Chemother, vol 49, no 10, pp 4339-4343, 2005 [5] Bui Thi Kim Ly, Hoang Thanh Chi , "Role of EGCG in regulation tyrosine kinase onco-proteins in cancer IN Powell, N (Ed.) Green tea and health antioxidant properties, consumption and role in disease prevention.," Nova Science Publishers, Inc., pp 103-115, 2015 [6] Glei M., Pool-Zobel B L., "The main catechin of green tea, (-)epigallocatechin-3-gallate (EGCG), reduces bleomycin-induced DNA damage in human leucocytes," Toxicol In Vitro, vol 20, no 3, pp 295300, 2006 [7] Reygaert W., Jusufi I., "Green tea as an effective antimicrobial for urinary tract infections caused by Escherichia coli," Front Microbiol, vol 4, pp 162-164, 2013 54 [8] Q V Vuong, J B Golding, C E Stathopoulos, M H Nguyen, P D Roach, "Optimizing conditions for the extraction of catechins from green tea using hot water," Journal of Separation Science, vol 34, no 21, pp 3099-3106, 2011 [9] Zaidan M R., Noor Rain A., Badrul A R., Adlin A., Norazah A., Zakiah I., "In vitro screening of five local medicinal plants for antibacterial activity using disc diffusion method," Trop Biomed, vol 22, no 2, pp 165-170, 2005 [10] Lee Y K., Bone N D.,Strege A K ,Shanafeltv T D., Jelinek D F., Kay N E., "VEGF receptor phosphorylation status and apoptosis is modulated by a green tea component, epigallocatechin-3-gallate (EGCG), in B-cell chronic lymphocytic leukemia"," Blood, vol 104, no 3, pp 788-794, 2004 [11] Liang Y C., Lin-shiau S Y., Chen C F., Lin J K., "Suppression of extracellular signals and cell proliferation through EGF receptor binding by (-)-epigallocatechin gallate in human A431 epidermoid carcinoma cells," J Cell Biochem, vol 67, no 1, pp 55-65, 1997 [12] Sanchez-Tena S., Vizan P., Dudeja P K., Centelles J J., Cascante M., "Green tea phenolics inhibit butyrate-induced differentiation of colon cancer cells by interacting with monocarboxylate transporter 1," Biochim Biophys Acta, vol 1832, no 12, pp 2264-2270, 2013 [13] Belsville M D., "U.S Department of Agriculture; USDA Database for the Flavonoid Content of Selected Foods, Prepared by the Nutrient Data Laboratory, Food Composition Laboratory,," Beltsville Human Nutrition Research Center, Agricultural Research Service, 2003 55 [14] Chakrawarti L., Agrawal R., Dang S., Gupta S., Gabrani R., "Therapeutic effects of EGCG: a patent review," Expert Opin Ther Pat, vol 26, no 8, pp 907-916, 2016 [15] Hara Y., "Green Tea: Health Benefits and Applications," Marcel Dekker, New York, 2001 [16] Chuu C P., Chen R Y., Kokontis J M., Hiipakka R A., Liao S., "Suppression of androgen receptor signaling and prostate specific antigen expression by (-)-epigallocatechin-3-gallate in different progression stages of LNCaP prostate cancer cells," Cancer Lett, vol 275, no 1, pp 86-92, 2009 [17] Sirk T W., Brown E F., Sum A K., Friedman M., "Molecular dynamics study on the biophysical interactions of seven green tea catechins with lipid bilayers of cell membranes," J Agric Food Chem, vol 56, no 17, pp 7750-7758, 2008 [18] Sachinidis A., Skach R A., Seul C., Ko Y., Hescheler J., Ahn H Y , Fingerle J., "Inhibition of the PDGF beta-receptor tyrosine phosphorylation and its downstream intracellular signal transduction pathway in rat and human vascular smooth muscle cells by different catechín," FASEB J, vol 16, no 8, pp 893-895, 2002 [19] Henning S M., Fajardo-Lira C., Lee H W., Youssefian A A., Go V L., Heber D., "Catechin content of 18 teas and a green tea extract supplement correlates with the antioxidant capacity," Nutr Cancer, vol 45, no 2, pp 226-235, 2003 [20] Wanasundara P K J P D., Shahidi F., "Antioxidants: Science, Technology, and Applications.," Bailey's Industrial Oil and Fat Products John Wiley & Sons, Inc., 2005 56 [21] Fukushima Y., Ohie T., Yonekawa Y., Yonemoto K., Aizawa H., Mori Y., Watanabe M., Takeuchi M., Hasegawa M., Taguchi C., Kondo K., "Coffee and green tea as a large source of antioxidant polyphenols in the Japanese population," J Agric Food Chem, vol 57, no 4, pp 1253-1259, 2009 [22] Joo T., Sowndhararajan K., Hong S., Lee J., Park S Y., Kim S., Jhoo J W., "Inhibition of nitric oxide production in LPS-stimulated RAW 264.7 cells by stem bark of Ulmus pumila L," Saudi J Biol Sci, vol 21, no 5, pp 427-435, 2014 [23] Yang C S., Wang X., Lu G., Picinich S C., "Cancer prevention by tea: animal studies, molecular mechanisms and human relevance," Nat Rev Cancer, vol 9, no 6, pp 429-439, 2009 [24] Reygaert W C., "The antimicrobial possibilities of green tea," Front Microbiol, vol 5, pp 434-435, 2014 [25] Singh T., Katiyar S K., "Green tea polyphenol, (-)-epigallocatechin-3gallate, induces toxicity in human skin cancer cells by targeting betacatenin signaling," Toxicol Appl Pharmacol, vol 273, no 2, pp 418-424, 2013 [26] Sirk T W., Brown E F., Friedman M., Sum A K., "Molecular binding of catechins to biomembranes: relationship to biological activity," J Agric Food Chem, vol 57, no 15, pp 6720-6728, 2009 [27] Chi H T., Vu H A., Iwasaki R., Thao L B., Hara Y., Taguchi T., Watanabe T., Sato Y., "Green tea (-)-epigalocatechin-3-gallate inhibits KIT activity and causes caspase-dependent cell death in gastrointestinal stromal tumor including imatinib-re," Cancer Biol Ther, vol 8, no 20, pp 1934-1939, 2009 57 [28] Shah S., Stapleton P D., Taylor P W., "The polyphenol (-)-epicatechin gallate disrupts the secretion of virulence-related proteins by Staphylococcus aureus," Lett Appl Microbiol, vol 46, no 2, pp 181-185, 2008 [29] Huang C C., Fang J Y., Wu W B., Chiang H S., Wei Y J., Hung C F., "Protective effects of (-)-epicatechin-3-gallate on UVA-induced damage in HaCaT keratinocytes," Arch Dermatol Res, vol 296, no 10, pp 473481, 2005 [30] Benzie I F., Szeto Y T., "Total antioxidant capacity of teas by the ferric reducing/antioxidant power assay," J Agric Food Chem, vol 47, no 2, pp 633-636, 1999 [31] J F Severino, B A Goodman, C W Kay, K Stolze, D Tunega, T G Reichenauer, K F Pirker , "Free radicals generated during oxidation of green tea polyphenols: electron paramagnetic resonance spectroscopy combined with density functional theory calculations," Free Radic Biol Med, vol 46, no 8, pp 1076-1088, 2009 [32] Sharma A., Gupta S., Sarethy I P., Dang S., Gabrani R., "Green tea extract: possible mechanism and antibacterial activity on skin pathogens," Food Chem, vol 135, no 2, pp 672-675, 2012 [33] Pianetti S., Guo S., Kavanagh K T., Sonenshein G E., "Green tea polyphenol epigallocatechin-3 gallate inhibits Her-2/neu signaling, proliferation, and transformed phenotype of breast cancer cells," Cancer Res, vol 62, no 3, pp 652-655, 2002 [34] Koracevic D., Koracevic G Fau - Djordjevic V., Djordjevic V Fau Andrejevic S., Andrejevic S Fau - Cosic V., Cosic V , "Method for the measurement of antioxidant activity in human fluids" 58 [35] Abe K., Ijiri M., Suzuki T., Taguchi K., Koyama Y., Isemura M., "Green tea with a high catechin content suppresses inflammatory cytokine expression in the galactosamine-injured rat liver," Biomed Res, vol 26, no 5, pp 187-192, 2005 [36] Marinovic M P., Morandi A C., Otton R., "Green tea catechins alone or in combination alter functional parameters of human neutrophils via suppressing the activation of TLR-4/NFkappaB p65 signal pathway," Toxicol In Vitro, vol 29, no 7, pp 1766-1778, 2015 [37] Mocanu M M., Ganea C., Georgescu L., Varadi T., Shrestha D., Baran I., Katona E., Nagy P., Szollosi J., "Epigallocatechin 3-O-gallate induces 67 kDa laminin receptor-mediated cell death accompanied by downregulation of ErbB proteins and altered lipid raft clustering in mammary and epidermoid carcinoma cells," J-Nat-Prod, vol 77, no 2, pp 250-257, 2014 [38] Belguise K., Guo S., Sonenshein G E., "Activation of FOXO3a by the green tea polyphenol epigallocatechin-3-gallate induces estrogen receptor alpha expression reversing invasive phenotype of breast cancer cells," Cancer Res, vol 67, no 12, pp 5763-5770, 2007 [39] Shimizu M., Weinstein I B., "Modulation of signal transduction by tea catechins and related phytochemicals," Mutat Res, vol 591, no 1-2, pp 147-160, 2005 [40] Yang C S., Maliakal P., Meng X., "Inhibition of carcinogenesis by tea," Annu Rev Pharmacol Toxicol, vol 42, pp 25-54, 2002 [41] Yin S T., Tang M L., Su L., Chen L., Hu P., Wang H L., Wang M., Ruan D Y., "Effects of Epigallocatechin-3-gallate on lead-induced oxidative damage," Toxicology, vol 249, no 1, pp 45-54, 2008 59 [42] Yang J., Wei D., Liu J., "Repressions of MMP-9 expression and NFkappa B localization are involved in inhibition of lung carcinoma 95-D cell invasion by (-)-epigallocatechin-3-gallate," Biomed Pharmacother, vol 59, no 3, pp 98-103, 2005 [43] Zhou D H., Wang X., Yang M., Shi X., Huang W., Feng Q., "Combination of Low Concentration of (-)-Epigallocatechin Gallate (EGCG) and Curcumin Strongly Suppresses the Growth of Non-Small Cell Lung Cancer in Vitro and in Vivo through Causing Cell Cycle Arrest," Int J Mol Sci, vol 14, no 6, pp 12023-12036, 2013 [44] Ly B T., Chi H T., Yamagishi M., Kano Y., Hara Y., Nakano K., Sato Y., Watanabe T., "Inhibition of FLT3 expression by green tea catechins in FLT3 mutated-AML cells," PLoS One, vol 8, no 6, p 66378, 2013 [45] Lu M J., Chen C., "Enzymatic modification by tannase increases the antioxidant activity of green tea," Food Research International, vol 41, no 2, pp 130-137, 2008 [46] Guo S., Lu J., Subramanian A., Sonenshein G E., "Microarray-assisted pathway analysis identifies mitogen-activated protein kinase signaling as a mediator of resistance to the green tea polyphenol epigallocatechin 3gallate in her-2/neu-overexpressing breast cancer cells," Cancer Res, vol 66, no 10, pp 5322-5329, 2006 [47] Pollard J W , "Tumour-educated macrophages promote tumour progression and metastasis," Nat Rev Cancer, vol 4, no 1, pp 71-78, 2004 [48] Lekha P K., Lonsane B K., "Production and application of tannin acyl hydrolase: state of the art," Adv Appl Microbiol, vol 44, pp 215-260, 1997 60 [49] Saffari Y., Sadrzadeh S M., "Green tea metabolite EGCG protects membranes against oxidative damage in vitro," Life Sci, vol 74, no 2, pp 1513-1518, 2004 [50] Shimizu M., Shirakami Y., Sakai H., Tatebe H., Nakagawa T., Hara Y., Weinstein I B., Moriwaki H., "EGCG inhibits activation of the insulinlike growth factor (IGF)/IGF-1 receptor axis in human hepatocellular carcinoma cells," Cancer Lett, vol 262, no 1, pp 10-18, 2008 [51] Cho Y S., Schiller N L., Kahng H Y., Oh K H., "Cellular responses and proteomic analysis of Escherichia coli exposed to green tea polyphenols," Curr Microbiol, vol 55, no 6, pp 501-506, 2007 [52] Nguyễn Liêm, Triệu Huy Điệt, Đỗ Văn Bình, Nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa (antioxidant in vitro) số thuốc Việt Nam., 1998 [53] Nguyễn Thanh Dương, Lê Thị Hà, Phan Văn chí, Nguyễn Bích Nhi, Đồn Hùng Tiến, “Tác dụng chống phòng xạ , giảm cholesterol chế phẩm từ chè xanh, phylamin ngưu tất.,” Hội Y dược học Việt Nam, pp 1317, 1997 [54] Ngô Văn Thành, Triệu Huy Điệt, Nghiên cứu tách chiết catechin thử tác dụng BVPX chuột nhắt trắng SWISS., Việt Nam, 1996 [55] Phạm Thiện Ngọc, Chiết xuất polyphenol từ chè xanh Việt Nam, đánh giá tác dụng bột polyphenol rối loạn chuyển hoá lipid thỏ uống cholesterol trạng thái chống oxy hoá thỏ bị chiếu xạ, Việt Nam: Trường Đại học Y Hà Nội, 2003 [56] Đặng Ngọc Dung, Phạm Thiện Ngọc, "Chiết xuất đánh giá sơ thành phần polyphenol chè xanh Việt Nam," Tạp chí nghiên cứu y học, vol 18, no 2, pp 35-39, 2002 61 [57] Nguyễn Thị Hà, Phạm Thiện Ngọc, "Tác dụng dịch chiết chè xanh Việt Nam rối loạn chuyển hóa Lipid thỏ uống Cholesterol," Tạp chí nghiên cứu y học, vol 21, no 4, pp 14-21, 2003 [58] Phạm Thiện Ngọc, Nguyễn Thị Hà, Đặng Ngọc Dung, "Tác dụng dịch chiết polyphenol chè xanh peroxy hoá lipid xơ vữa động mạch thỏ uống cholesterol," Tạp chí Y học Việt Nam, vol 6, pp 49-57, 2003 [59] Đặng Minh Nhật, "Nghiên cứu thu nhận chế phẩm chống oxy hóa tự nhiên từ chè già," Tạp chí khoa học cơng nghệ, vol 48, no 6, pp 89-98, 2010 [60] Vũ Hồng Sơn, "Nghiên cứu công nghệ khai thác tổ hợp polyphenol từ chè xanh Việt Nam ứng dụng sản xuất thực phẩm chức năng," Bộ môn quản lý chất lượng, Trường Đại học bách khoa Hà Nội,, p 147, 2011 [61] Vũ Hồng Sơn, Ha Duyên Tư, "Nghiên cứu trích ly polyphenol từ trà xanh vụn Phần 1: Các yếu tố ảnh hưởng đến q trình trích li polyphenol," Tạp chí khoa học cơng nghệ, vol 47, no 1, pp 81-86, 2009 [62] Vũ Hồng Sơn, Hà Duyên Tư, "Nghiên cứu trích li polyphenol từ chè xanh vụn Phần Tối ưu hố q trình trích li polyphenol phương pháp hàm mong đợi," Tạp chí khoa học công nghệ, vol 47, no 2, pp 39-46, 2009 [63] Chen Z Y., Chan P T., "Antioxidative activity of green tea catechins in canola oil," Chemistry and Physics of Lipids, vol 82, no 2, pp 163-172, 1996 [64] Matsuzaki T., Hara Y., "Antioxidative Activity of Tea Leaf Catechins," 1985 62 [65] Ikigai H., Nakae T., Hara Y., Shimamura T., "Bactericidal catechins damage the lipid bilayer," Biochim Biophys Acta, vol 1147, no 1, pp 132-136, 1993 [66] Wang H., Provan G J., Helliwell K., "HPLC determination of catechins in tea leaves and tea extracts using relative response factors," Food Chemistry, vol 81, pp 307-312, 2003 [67] Prakash A., Rigelhof F., Eugene MIller Antioxidant Activity., IN Laboratories, M (Ed.)., 1997 [68] Ohmori R., Iwamoto T., Tago M., Takeo T., Unno T., Itakura H., Kondo K., "Antioxidant activity of various teas against free radicals and LDL oxidation," Lipids, vol 40, no 8, pp 849-853, 2005 [69] Lawrence T., Fong C., "The resolution of inflammation: antiinflammatory roles for NF-kappaB," Int J Biochem Cell Biol, vol 42, no 4, pp 519-523, 2010 [70] Zhuang J C., Wogan G N., "Growth and viability of macrophages continuously stimulated to produce nitric oxide," Proc Natl Acad Sci U.S.A, vol 94, no 22, pp 11875-11880, 1997 [71] Zaveri N T., "Green tea and its polyphenolic catechins: medicinal uses in cancer and noncancer applications," Life Science, vol 78, no 18, pp 2073-2080, 2006 [72] Ngan L T M., Moon J K., Shibamoto T., Ahn Y J., "Growth-inhibiting, bactericidal, and urease inhibitory effects of Paeonia lactiflora root constituents and related compounds on antibiotic-susceptible and resistant strains of Helicobacter pylori.," J Agric Food Chem, vol 60, pp 9062 - 9073, 2012 63 [73] Mak Y.W., Chuah L.O., Ahmad R., Bhat R., " Antioxidant and antibacterial activities of Hibiscus (Hibiscus rosasinensis L.) and Cassia (Senna bicapsularis L.) flower extracts.," J King Saud Univ Sci, vol 25, no 4, pp 275-282, 2013 [74] Koh T J., DiPietro L A., "Inflammation and wound healing: the role of the macrophage," Expert Rev Mol Med, vol 13, pp 23-24, 2011 [75] Kim M., Murakami A., Ohigashi H., "Modifying effects of dietary factors on (-)-epigallocatechin-3-gallate-induced pro-matrix metalloproteinase-7 production in HT-29 human colorectal cancer cells," Biosci Biotechnol Biochem, vol 71, no 10, pp 2442-2450, 2007 [76] Dong J J., Ye J H., Lu J L., Zheng X Q., Liang Y R., "Isolation of antioxidant catechins from green tea and its decaffeination.," Food and bioproducts processing, vol 89, p 62–66, 2011 [77] Lucas L., Russell A., Keast R., "Molecular Mechanisms of Inflammation Anti-inflammatory Benefits of Virgin Olive Oil and the Phenolic Compound Oleocanthal," Current Pharmaceutical Design, vol 17, no 8, pp 754-768, 2011 [78] Liu S., Ou S and Huang H., "Green tea polyphenols induce cell death in breast cancer MCF-7 cells through induction of cell cycle arrest and mitochondrial-mediated apoptosis," Journal of Zhejiang UniversitySCIENCE B (Biomedicine & Biotechnology), vol 18, no 2, pp 89-98, 2017 64