Nghiên cứu chiết xuất cao linh chi (ganoderma lucidum) bằng phương pháp chiết xuất lỏng siêu tới hạn để bào chế cao giàu triterpen

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - BỘ Y TẾ NGUYỄN THỊ KHÁNH LINH NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT CAO LINH CHI (Ganoderma lucidum) BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT LỎNG SIÊU TỚI HẠN ĐỂ BÀO CHẾ CAO GIÀU TRITERPEN Luận văn Thạc sĩ Dược học Thành phố Hồ Chí Minh - Năm 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - BỘ Y TẾ NGUYỄN THỊ KHÁNH LINH NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT CAO LINH CHI (Ganoderma lucidum) BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT LỎNG SIÊU TỚI HẠN ĐỂ BÀO CHẾ CAO GIÀU TRITERPEN Ngành : Công nghệ Dược phẩm Bào chế Thuốc Mã số : 8720202 Luận văn Thạc sĩ Dược học NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS TRẦN VIỆT HÙNG TS LÊ MINH QUÂN Thành phố Hồ Chí Minh - Năm 2020 ii LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình Nguyễn Thị Khánh Linh iii BẢNG TÓM TẮT LUẬN VĂN BẰNG TIẾNG VIỆT Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Dược học - Năm học 2018 - 2020 “NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT CAO LINH CHI (Ganoderma lucidum) BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT LỎNG SIÊU TỚI HẠN ĐỂ BÀO CHẾ CAO GIÀU TRITERPEN” NGUYỄN THỊ KHÁNH LINH Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Trần Việt Hùng TS Lê Minh Quân Đặt vấn đề Linh chi (Ganoderma lucidum) dược liệu thuộc họ Nấm lim (Ganodermataceae), nhóm triterpen Linh chi chứng minh có tác dụng chống ung thư Do đó, việc nghiên cứu bào chế chế phẩm từ Linh chi hỗ trợ chống ung thư nhu cầu cần thiết có tiềm Để nâng cao ổn định chất lượng thuốc có nguồn gốc từ dược liệu, việc chuẩn hóa chất lượng cao dược liệu cần thiết Trong nghiên cứu này, chúng tơi trình bày kết bào chế cao chuẩn hóa Linh chi giàu triterpen tiêu chuẩn hóa chất lượng cho cao Đối tượng phương pháp nghiên cứu Đối tượng: Linh chi Công ty cổ phần phát triển Dược liệu Tây Nguyên cung cấp, acid ganoderic A Viện Kiểm nghiệm Thuốc TP.HCM cung cấp chuẩn cao Linh chi USP Phương pháp nghiên cứu: (1) Kiểm tra chất lượng dược liệu Linh chi (2) Nghiên cứu quy trình chiết xuất cao Linh chi giàu triterpen phương pháp chiết lỏng siêu tới hạn (3) Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho cao khô Linh chi (4) Đánh giá độ ổn định cao khô Linh chi Kết nghiên cứu (1) Dược liệu Linh chi đạt yêu cầu chất lượng theo DĐVN V USP 41 (2) Đã chiết xuất cao Linh chi giàu triterpen phương pháp chiết xuất lỏng siêu tới hạn định lượng triterpen toàn phần (3) Tiêu chuẩn chất lượng cao gồm tiêu: cảm quan, khối lượng làm khơ, tro tồn phần, cắn khơng tan nước, định tính, định lượng triterpen tồn phần, kim loại nặng giới hạn nhiễm khuẩn (5) Cao thu ổn định vòng tháng điều kiện nhiệt độ 40 oC, độ ẩm 75% Kết luận Đã nghiên cứu quy trình bào chế cao khơ Linh chi chuẩn hóa phương pháp chiết xuất lỏng siêu tới hạn Cao quy định hàm lượng triterpen từ 9,06% iv BẢNG TÓM TẮT LUẬN VĂN BẰNG TIẾNG ANH Final essay for the degree as a Master of Pharmacy - Year 2018-2020 “A STUDY OF SUPERCRITICAL FLUID EXTRACTION FOR GANODERMA LUCIDUM TO PREPARE A HIGH IN TRITERPENOID EXTRACT” NGUYEN THI KHANH LINH Supervisor: Assoc Prof PharmD Tran Viet Hung PharmD Le Minh Quan Introduction Ganoderma lucidum is a medicine plant belonging to Ganodermataceae family and is proved to support anti-cancer effects So it is necessary and potential that the above products would be studied and prepared The standardization of the extracts is necessary to improve and stabilize the product quality According to this issue, a study of procedure for preparation a standardised extract from Ganoderma lucidum is conducted Materials and methods Materials: Ganoderma lucidum herbal were provided by Tay Nguyen Pharmaceutical Development Joint Stock Company, acid ganoderic A standard from Institute of Drug Quality Control HCM city and Ganoderma lucidum extract from USP Methods: (1) Test the quality of the Ganoderma lucidum herbal (2) Study of procedure to extract Ganoderma lucidum using supercritical fluid extraction method (3) Establish the specification of the standardised dried extract containing Ganoderma lucidum (4) Evaluate the stability of the extract Results (1) Ganoderma lucidum herbal complied with the requirements of the specifications as per VNP (2) The procedure to extract Ganoderma lucidum using supercritical fluid extraction method were established and quantitative total triterpenoids (3) The specifications include appearance, loss on drying, total ash, non-solubility in water, indentification, total triterpenoids assay, heavy metals and microbial contamination (4) The extract is stabled for months at a temperature of 40 oC and relative humidity of 75 % Conclusions The preparation of standardised dried extract containing Ganoderma lucidum was established using supercritical fluid extraction method The triterpenoids content were 9,06% v MỤC LỤC MỤC LỤC v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT viii DANH MỤC HÌNH ix DANH MỤC BẢNG xi MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 LINH CHI 1.1.1 Danh pháp vị trí phân loại 1.1.2 Mô tả 1.1.3 Sinh thái 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Tác dụng dược lý - Công dụng 10 1.1.6 Các chế phẩm thị trường chứa Linh chi 12 1.2 Phương pháp chiết xuất lỏng siêu tới hạn 13 1.2.1 Nguyên lý phương pháp 13 1.2.2 Quy trình chiết xuất lỏng siêu tới hạn 14 1.2.3 Ưu điểm phương pháp so với phương pháp truyền thống 16 1.2.4 Ưu điểm dung môi CO2 siêu tới hạn [41] 16 1.2.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến quy trình chiết xuất lỏng siêu tới hạn 17 1.2.6 Ứng dụng phương pháp chiết lỏng siêu tới hạn 18 1.2.7 Các nghiên cứu chiết xuất triterpen từ nấm Linh chi phương pháp chiết lỏng siêu tới hạn 19 1.3 Cao dược liệu 20 1.3.1 Cao thuốc 20 1.3.2 Nội dung tiêu chuẩn chất lượng cao thuốc 22 vi 1.4 Công nghệ sấy phun 22 1.4.1 Tổng quan 22 1.4.2 Quá trình sấy phun 22 Nguyên lý hoạt động: 23 1.4.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình sấy phun 23 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Đối tượng nghiên cứu, chất đối chiếu, dung mơi hóa chất thiết bị 25 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 25 2.1.2 Chất đối chiếu, dung môi, thuốc thử, trang thiết bị, dụng cụ 26 2.2 Phương pháp nghiên cứu 28 2.2.1 Đánh giá chất lượng dược liệu Linh chi 28 2.2.2 Nghiên cứu quy trình chiết xuất, bào chế cao Linh chi giàu triterpen phương pháp chiết lỏng siêu tới hạn (SFE) 33 2.2.3 Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho cao khô Linh chi 44 2.2.4 Đánh giá độ ổn định lão hóa cấp tốc cao khô Linh chi 47 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 49 3.1 Đánh giá chất lượng dược liệu Linh chi đầu vào 49 3.1.1 Mô tả 49 3.1.2 Bột 50 3.1.3 Định tính 51 3.1.4 Tổng kết tiêu đánh giá chất lượng Linh chi đầu vào 52 3.2 Nghiên cứu quy trình chiết xuất bào chế cao Linh chi giàu triterpen phương pháp chiết lỏng siêu tới hạn (SFE) 54 3.2.1 Khảo sát quy trình định lượng triterpen tồn phần cao Linh chi 54 3.2.2 Khảo sát điều kiện chiết xuất phương pháp SFE 56 3.2.3 Nâng cấp cỡ lô chiết xuất 63 vii 3.2.4 Khảo sát quy trình bào chế cao khơ Linh chi phương pháp sấy phun 63 3.3 Xây dựng TCCS cho cao khô Linh chi 68 3.3.1 Kiểm tra chất lượng lô cao dược liệu 68 3.3.2 Tiêu chuẩn sở cao dược liệu Linh chi 71 3.4 Xác định độ ổn định cao khô Linh chi 72 CHƯƠNG BÀN LUẬN 75 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 81 TÀI LIỆU THAM KHẢO 83 PHỤ LỤC viii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT STT 10 11 12 13 Từ viết tắt Từ nguyên DĐVN V EFSA European Food Safety Authority GRAS Generally Regarded as Safe HL HPLC High performance liquid chromatography RSD Relative standard deviation Rs Resolution S/N Signal/Noise SKLM SCO2 Supercritical CO2 Spic tR Retention time TP Ý nghĩa Dược điển Việt Nam V Cơ quan An toàn Thực phẩm châu Âu Chứng nhận an toàn Hàm lượng Sắc ký lỏng hiệu cao Độ lệch chuẩn tương đối Độ phân giải Tỉ lệ tín hiệu/nhiễu Sắc ký lớp mỏng CO2 siêu tới hạn Diện tích pic Thời gian lưu Tồn phần ix DANH MỤC HÌNH Vị trí Linh chi (Ganoderma lucidum) bảng phân loại thực vật Lục bảo Linh chi Cấu trúc polysaccharid Linh chi Các triterpen từ Linh chi (Ganoderma lucidum) Cơ chế ức chế ung thư polysaccharid triterpen từ Linh chi (Ganoderma lucidum) [23] .11 Một số chế phẩm chứa Linh chi thị trường .13 Trạng thái tồn CO2 siêu tới hạn 13 Sơ đồ quy trình cơng nghệ chiết SCO2 14 Sự biến đổi trạng thái CO2 trình chiết .15 Dược liệu Linh chi 25 Lưu đồ điều chế cao Linh chi 36 Máy sấy phun - tạo hạt tầng sôi 43 Cảm quan Linh chi 49 Sợi nấm Linh chi 50 Bào tử Linh chi 50 Dung dịch cao Linh chi mg/ml điều kiện 54 Dung dịch Acid ganoderic A 0,1 mg/ml điều kiện .54 Dung dịch cao Linh chi mg/ml điều kiện 55 Dung dịch đối chiếu cao Linh chi mg/ml điều kiện 55 Dung dịch acid ganoderic A 0,1 mg/ml điều kiện 55 Biểu đồ ảnh hưỡng tốc độ dòng ethanol 96% đến hiệu suất chiết cao HL triterpen toàn phần 58 Biểu đồ ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến hiệu suất chiết cao HL triterpen toàn phần 59 Biểu đồ ảnh hưởng áp suất chiết đến hiệu suất chiết cao HL triterpen toàn phần 61 Hình vết acid ganoderic A theo thời gian chiết 62 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.4 Xác định độ ổn định cao khô Linh chi Cao khô bảo quản tủ vi khí hậu vịng tháng, điều kiện nhiệt độ 40 C ± oC, độ ẩm 75% ± 5% o Kết nghiên cứu độ ổn định lão hóa cấp tốc cao khơ Linh chi trình bày bảng 3.21 Độ ổn định lão hóa cấp tốc cao khơ Linh chi Chỉ tiêu thử Cảm quan Tiêu chuẩn chấp nhận Bột màu nâu đồng nhất, Kết thử nghiệm thời điểm T=0 T=1 T=3 T=6 Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt (6,5%) (6,6%) (6,6%) (6,6%) Đúng Đúng Đúng dễ hút ẩm, có mùi thơm đặc trưng Linh chi Vị đắng nhẹ Mất khối lượng Không q 8,0% làm khơ Định tính SKLM Acid ganoderic A Đúng HPLC Trong phần định lượng, Đúng sắc ký đồ mẫu thử phải có đỉnh có thời gian lưu trùng với thời gian lưu đỉnh triterpen sắc ký đồ dung dịch đối chiếu 72 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Kết thử nghiệm thời điểm Chỉ tiêu thử Tiêu chuẩn chấp nhận T=0 Tro toàn phần T=1 T=3 T=6 Đạt Không 20,0% (18,5%) Chất không tan Đạt Không 30,0% nước (20,3%) Định lượng Hàm lượng Khơng 5,0% tính Đạt Đạt Đạt Đạt triterpen tồn chế phẩm khan (9,2%) (9,0%) (9,0%) (8,9%) Không µg/g Đạt phần Giới hạn kim loại nặng Arsen (As) (1,7 µg/g) Cadimi (Cd) Đạt Khơng q µg/g (0,1 µg/g) Chì (Pb) Đạt Khơng q µg/g (3,7 µg/g) 73 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Kết thử nghiệm thời điểm Chỉ tiêu thử Tiêu chuẩn chấp nhận T=0 Thủy ngân (Hg) T=1 T=3 T=6 Đạt Khơng q µg/g (0,7 µg/g) Giới hạn nhiễm Đạt yêu cầu chất lượng khuẩn chế phẩm Thuốc Đạt Đạt uống có nguồn gốc tự nhiên (động thực vật, khoáng chất); cao thuốc, cồn thuốc dùng để sản xuất thuốc uống từ dược liệu - Phụ lục 13.6 Kết luận: cao khơ Linh chi ổn định vịng tháng điều kiện lão hóa cấp tốc nhiệt độ 40 oC ± oC , độ ẩm 75% ± 5% 74 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM CHƯƠNG BÀN LUẬN CHƯƠNG BÀN LUẬN Về việc kiểm tra, đánh giá chất lượng dược liệu Linh chi đầu vào Mục tiêu nghiên cứu thu cao giàu triterpen từ Linh chi kỹ thuật cơng nghệ mới, việc kiểm sốt chất lượng nguồn nguyên liệu đầu vào cần thiết để sản phẩm tạo ổn định, qn Vì lẽ đó, theo DĐVN V, Linh chi kiểm tra tiêu bao gồm: mô tả, soi bột, định tính, độ ẩm, tro tồn phần, tro khơng tan acid chất chiết dược liệu Ngồi tiêu trên, đề tài cịn thực thêm tiêu định tính, kim loại nặng, định lượng triterpen toàn phần theo USP 41 nhằm nâng cao chất lượng dược liệu Linh chi đạt yêu cầu lựa chọn nguồn nguyên liệu đầu vào để tiến hành khảo sát chiết xuất cao giàu triterpen phương pháp chiết lỏng siêu tới hạn Kết cho thấy Linh chi hàm lượng tro toàn phần tro không tan acid tương đối thấp (lần lượt 1,4% 0,3%), chứng tỏ phần tạp vô dược liệu thấp, Linh chi nguyên liệu chứa nhóm hữu hịa tan nhiều so với lồi Linh chi khác Theo kinh nghiệm, dược liệu độ ẩm thích hợp để bảo quản 8,0% để hạn chế xâm nhập nấm mốc mối mọt, mà theo kết đánh giá cho thấy hàm ẩm dược liệu Linh chi 12,4% Vì vậy, Linh chi sau kiểm tra sấy gió vòng bảo quản túi nhựa hút chân khơng hàn kín miệng Về việc nghiên cứu quy trình chiết xuất cao Linh chi giàu triterpen phương pháp chiết lỏng siêu tới hạn (SFE) Việc lựa chọn phương pháp chiết phụ thuộc vào sở hạ tầng nhu cầu nhà sản xuất So với phương pháp truyền thống, phương pháp chiết lỏng siêu tới hạn cho thấy ưu điểm vượt trội việc rút ngắn thời gian chiết xuất; từ đó, dung mơi lượng hao phí tiết kiệm hơn, đặc biệt giảm thiểu tối đa vấn đề an tồn nhiễm mơi trường Mặt khác, Việt Nam chưa có nhiều nghiên cứu chiết cao Linh chi phương pháp chiết lỏng siêu tới hạn, coi nghiên cứu bước đầu ứng dụng công nghệ đại vào chiết xuất dược liệu 75 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM CHƯƠNG BÀN LUẬN Phương pháp chiết lỏng siêu tới hạn coi phương pháp kỹ thuật xanh quan tâm Các thông số quy trình ảnh hưởng đến hiệu chiết cao giàu triterpen từ Linh chi phương pháp chiết lỏng siêu tới hạn khảo sát là: dung môi chiết, tốc độ dung môi, nhiệt độ chiết, áp suất chiết thời gian chiết Ở điều kiện nhiệt độ 40 oC, áp suất 200 bar, dung môi phối hợp ethanol 96% tốc độ 0,3 ml/phút đạt hiệu suất chiết cao hàm lượng triterpen toàn phần tốt Lựa chọn dung mơi phối hợp Mục đích đề tài bào chế cao chuẩn hóa Linh chi có hàm lượng phần trăm hoạt chất cao giúp giảm khối lượng thành phẩm chứa cao, việc đánh giá lựa chọn thơng số quy trình dựa hàm lượng phần trăm cao dược liệu mang tính khoa học thể xác chất lượng cao cần nghiên cứu Với việc sử dụng cao dược liệu có hàm lượng hoạt chất cao, thành phẩm chứa cao có khối lượng nhỏ giúp giảm chi phí sản xuất, việc sử dụng thuốc dễ dàng, góp phần nâng cao tuân trị, từ nâng cao hiệu sử dụng thuốc Ethanol kết hợp với CO2 siêu tới hạn giúp tăng độ phân cực dung môi chiết xuất lên, mở rộng phạm vi chiết xuất sang nhóm hoạt chất phân cực khơng đơn sử dụng chiết lỏng siêu tới hạn chiết chất không phân cực Đây điểm đề tài nghiên cứu kỹ thuật chiết lỏng siêu tới hạn Cao dược liệu sử dụng để bào chế thành phẩm thuốc dùng cho người, dung mơi sử dụng phải gây độc cho người Đồng thời, quy mô công nghiệp, dung môi chiết xuất sử dụng thường dung mơi thân thiện với mơi trường để giảm chi phí xử lý chất thải bảo vệ môi trường Với luận điểm nước hỗn hợp ethanol - nước dung môi thường lựa chọn Yếu tố nồng độ ethanol ảnh hưởng nhiều đến hàm lượng hoạt chất thu cao dược liệu Ethanol cao độ thích hợp ethanol thấp độ hàm lượng nước hơn, tránh tượng đóng băng, đặc làm khô dịch chiết dễ dàng Việc sử dụng ethanol 96% không kinh tế nồng độ ethanol thấp hơn, nhiên ethanol 96% dễ thu hồi, đồng thời kết thực nghiệm cho thấy hàm lượng triterpen toàn phần cao so với chiết ethanol 70% 76 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM CHƯƠNG BÀN LUẬN Quy trình giải nhược điểm phương pháp chiết truyền thống Đề tài thực thí nghiệm so sánh với phương pháp ngâm cho kết sau: So sánh với phương pháp ngâm chiết chiết lỏng siêu tới hạn Thời gian Phương HL Chiết lỏng HL Hiệu suất pháp ngâm triterpen siêu tới triterpen chiết cao TP (%) hạn TP (%) (%) 4,98 9,06 3,3 96 chiết Dung môi 450 ml 54 ml 2,7 chiết Kết cho thấy phương pháp chiết lỏng siêu tới hạn có ưu điểm mặt thời gian (giảm 32 lần) dung môi hao tốn (giảm 8,3 lần) so với phương pháp truyền thống Ngoài ra, hàm lượng triterpen thu gần gấp đôi phương pháp cũ hiệu suất chiết triterpen toàn phần tương đối cao (98,5%) Kết nghiên cứu phù hợp với tài liệu tham khảo [18], [30], [35], [36] Tốc độ dung mối phối hợp Hàm lượng triterpen cao Linh chi thu phụ thuộc vào độ phân cực dung mơi chiết xuất Lựa chọn tốc độ dịng ethanol 96% phù hợp để thu lượng triterpen cao Kết cho thấy tốc độ dòng cao độ phân cực dung môi lớn thu nhiều hoạt chất Cụ thể, lượng hoạt chất thu tốc độ dòng 0,3 ml/phút, 0,2 ml/phút 0,1 ml/phút tương ứng giảm dần 9,97; 10,09 7,77) Nhưng tăng tốc độ dòng 0,4 ml/phút 0,5 ml/phút, hàm lượng hoạt chất không thay đổi Điều phù hợp với kết nghiên cứu cơng bố trước Kết lựa chọn tốc độ dòng 0,3 ml/phút phù hợp với tài liệu [35], [36] Nhiệt độ chiết CO2 siêu tới hạn Nhiệt độ ảnh hưởng đồng thời đến tỷ trọng độ phân cực CO2 siêu tới hạn Khi vượt qua điểm nhiệt độ tới hạn (31,04 oC), CO2 chuyển sang trạng thái siêu tới hạn, nhiệt độ 40 oC lựa chọn thu hiệu suất chiết cao hàm lượng triterpen lớn Kết nghiên cứu phù hợp với tài liệu tham khảo [18], [30], [35], [36] 77 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM CHƯƠNG BÀN LUẬN Áp suất chiết CO2 siêu tới hạn Tương tự nhiệt độ, áp suất ảnh hưởng nhiều đến tỷ trọng độ phân cực CO2 siêu tới hạn Áp suất tăng, lượng hoạt chất thu nhiều quy mơ phịng thí nghiệm, khó kiểm sốt dịng CO2 ổn định mức áp suất cao Vì vậy, 200 bar mức áp suất lựa chọn Kết nghiên cứu thấp thông số so với tài liệu tham khảo [18], [30], [35], [36] phù hợp để tiến hành nâng cấp cỡ lô quy mô nghiên cứu Về nghiên cứu bào chế cao khô Linh chi phương pháp sấy phun Cao khô Linh chi thu phương pháp sấy phun đạt tiêu chuẩn mặt cảm quan cao khô theo DĐVN V Việc bào chế cao khơ góp phần làm tăng độ ổn định chế phẩm, đồng thời đóng vai trị nguồn ngun liệu để bào chế sản phẩm hoàn chỉnh sau Các thơng số kỹ thuật ảnh hưởng đến quy trình bào chế bao gồm: nhiệt độ khí vào, tốc độ bơm nhu động, tốc độ quạt, thời gian chờ phun thời gian phun Về việc lựa chọn tá dược sấy phun: đặc tính cao dược liệu chứa hàm ẩm lớn nên cần chọn tá dược Syloid có khả hút nước che đậy mùi vị tốt mà không làm ảnh hưởng đến hàm lượng hoạt chất cao Cao khơ thu có hàm lượng tro tồn phần cắn khơng tan nước lớn ảnh hưởng tá dược Lactose có vai trị tá dược độn tạo hạt có độ trơn chảy tốt Về xây dựng tiêu chuẩn sở cho cao khô Linh chi Cao khô Linh chi chưa quy định chất lượng DĐVN V, việc xây dựng tiêu chuẩn sở cho cao có ý nghĩa thực tiễn Việc chất lượng cao dược liệu chuẩn hóa góp phần ổn định quy trình sản xuất ổn định chất lượng thành phẩm thuốc chứa cao Linh chi Đây nguồn tham khảo để đưa cao Linh chi vào chuyên luận DĐVN, góp phần thúc đẩy việc nghiên cứu sản xuất thành phẩm thuốc chứa Linh chi Theo DĐVN V, Linh chi chưa quy định hàm lượng hoạt chất dược liệu Do đó, việc cao Linh chi quy định hàm lượng triterpen toàn phần góp phần ổn định hàm lượng hoạt chất nguồn liệu đưa vào sản xuất thành phẩm, 78 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM CHƯƠNG BÀN LUẬN tránh trường hợp thành phẩm thuốc không đạt hàm lượng hoạt chất mong muốn Việc mức chất lượng cao dược liệu đưa dựa kết kiểm nghiệm lô nguồn dược liệu cho thấy mức chất lượng chưa thể tính đại diện cho nhiều nguồn dược liệu Mức chất lượng cao thấp so với chất lượng trung bình dược liệu thị trường hàm lượng hoạt chất dược liệu khác tùy thuộc vào vùng thổ nhưỡng, thời gian thu hái, cách chế biến dược liệu… Tuy nhiên, mức chất lượng cao dược liệu đưa đề tài nguồn tham khảo để nhà sản xuất đưa mức chất lượng riêng tùy thuộc vào nguồn dược liệu cung cấp Theo DĐVN V, cao thuốc phải đạt yêu cầu chất lượng tiêu Dư lượng hóa chất bảo vệ thực vật Tuy nhiên, khuôn khổ thời gian thực đề tài, tiêu chưa thực hiện, tiêu chuẩn chất lượng cao thuốc chưa bao gồm tiêu Về đánh giá độ ổn định cao khô Linh chi Độ ổn định nhân tố quan trọng có ảnh hưởng đến chất lượng, an toàn hiệu thành phẩm thuốc Thuốc ổn định dẫn tới thay đổi đặc tính vật lý (như độ cứng, tốc độ hoà tan, tách pha ) hố học (sự tạo thành chất phân huỷ có hoạt tính mạnh) Sự ổn định mặt vi sinh thành phẩm thuốc vơ khuẩn dẫn tới rủi ro Về nguyên tắc, thử nghiệm độ ổn định nên thực điều kiện khắc nghiệt điều kiện khắc nghiệt để đảm bảo sai số thừa ưu tiên cho hiệu điều trị thuốc bệnh nhân để tăng xác suất phát chất hay công thức bào chế có vấn đề độ ổn định Mục tiêu nghiên cứu độ ổn định xác định tuổi thọ, khoảng thời gian bảo quản điều kiện xác định mà khoảng thời gian thành phẩm thuốc đạt tiêu chuẩn chất lượng thiết lập Nghiên cứu độ ổn định bao gồm chuỗi thử nghiệm để đảm bảo độ ổn định thành phẩm thuốc, khả trì tiêu chuẩn chất lượng thành 79 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM CHƯƠNG BÀN LUẬN phẩm thuốc đóng gói bao bì phù hợp cho thành phẩm bảo quản điều kiện thiết lập khoảng thời gian xác định Đề tài thực nghiên cứu lão hóa cấp tốc cho chế phẩm cao khơ Linh chi điều kiện nhiệt độ 40 oC ± oC, độ ẩm 75% ± 5% Kết cho thấy cao khơ Linh chi ổn định vịng tháng Đây sở để khảo sát tiếp độ ổn định dài hạn 80 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Qua thời gian thực hiện, đề tài hoàn thành mục tiêu đề với kết cụ thể sau: - Đã đánh giá chất lượng Linh chi đầu vào đạt yêu cầu chất lượng theo tiêu chuẩn DĐVN V tiêu theo tiêu chuẩn USP 41 - Đã nghiên cứu quy trình chiết xuất cao Linh chi giàu triterpen phương pháp chiết lỏng siêu tới hạn (SFE) với thông số kỹ thuật: nhiệt độ chiết 40 oC, áp suất chiết 200 bar, tốc độ ethanol 96% phối trộn 0,3 ml/phút, thời gian chiết 2,5 thu cao Linh chi có hàm lượng triterpen đạt 9,06% hiệu suất chiết triterpen đạt 98,5% - Đã tìm điều kiện phù hợp để bào chế cao khô Linh chi phương pháp sấy phun: điều kiện lựa chọn nhiệt độ phun sấy 50 - 60 oC, tốc độ bơm 35 - 45 vòng/ phút, tốc độ quạt 500 - 1,200, thời gian chờ phun - phút, thời gian phun 0,1 - 0,2 phút Cao khô Linh chi đạt yêu cầu cảm quan hiệu suất thu hồi 93,6% - Đã đánh giá chất lượng lô cao tiêu: cảm quan, khối lượng làm khơ, định tính, tro tồn phần, cắn khơng tan nước, kim loại nặng, định lượng triterpen toàn phần giới hạn nhiễm khuẩn; số tiêu đạt theo yêu cầu chất lượng chung Cao thuốc DĐVN V - Từ kết đánh giá lô cao, xây dựng tiêu chuẩn sở cho cao dược liệu Linh chi với tiêu: cảm quan, khối lượng làm khơ, định tính, tro tồn phần, cắn khơng tan nước, kim loại nặng, định lượng triterpen toàn phần giới hạn nhiễm khuẩn Tiêu chuẩn sở đáp ứng yêu cầu tối thiểu tiêu chuẩn chất lượng Cao thuốc theo DĐVN V Viện Kiểm nghiệm Thuốc TP Hồ Chí Minh thẩm định - Đã đánh giá độ ổn định cao khô Linh chi điều kiện lão hóa cấp tốc Kết cho thấy cao khơ Linh chi ổn định vòng tháng điều kiện lão hóa cấp tốc nhiệt độ 40 oC ± oC , độ ẩm 75% ± 5% 81 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kiến nghị Với kết thu từ đề tài, số hướng phát triển đề nghị: - Nâng cao tiêu chuẩn chất lượng cho dược liệu Linh chi, có quy định giới hạn hàm lượng hoạt chất, nấm mốc, dư lượng thuốc trừ sâu, góp phần chuẩn hóa dược liệu đầu vào - Tối ưu hóa quy trình chiết cao Linh chi phương pháp chiết lỏng siêu tới hạn - Tiếp tục thực độ ổn định dài hạn cao khô Linh chi - Tiến hành thử tác dụng sinh học độc tính cao khơ Linh chi 82 Tn thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt [1] Nguyễn Phương Đại Nguyên (2013), Nấm Linh chi Tây Nguyên, Nhà xuất Giáo dục Việt Nam [2] Đỗ Tất Lợi (2006), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học [3] Dược điển Việt Nam V (2018), Linh chi, Bộ Y tế, pp 1229 -1230 [4] tế Bộ Y (2009), "Dược điển Việt Nam V, Hà Nội, PL 9-10, PL 197, PL 203, PL 278, PL 300-311" Tài liệu Tiếng Anh [5] Kirti M Kulkarni Leena S Patil, Mrs Vineeta V Khanvilkar, Dr Vilasrao J Kadam Kirti (2014), "Fingerprinting techniques in herbal standardization" Indo American Journal of Pharmaceutical Research, Vol (2) [6] A.Femenia M Garcia-Marin, S Simal, C Rossello and M Blasco (2001), "Effects of Supercritical Carbon Dioxide (SC-CO2) Oil Extraction on the Cell Wall Composition of Almond Fruits J Agric Food Chem" 49 (12), pp 5828-5834 [7] A.P.Sánchez-Camargo J.A.Mendiola, E.Ibáñez, M.Herrero (2014), "Supercritical Fluid Extraction Chemistry, Molecular Sciences and Chemical Engineering", pp 1-17 [8] Bao X Liu C., Fang J., Li X (2001), ""Structural and immunological studies of a major polysaccharide from spores of Ganoderma lucidum (Fr.) Karst " Carbohydr Res." 332, pp 67-74 [9] Bao X Wang X., Dong Q., Fang J., Li X (2002), ""Structural features of immunologically active polysaccharides from Ganoderma lucidum." Phytochemistry." 59, pp 175-181 [10] Berger A Rein D, Kratky E, Monnard I, Hajjaj H, Meirim I (2004), "Cholesterollowering properties of Ganoderma lucidumin vitro, ex vivo, and in hamsters and minipigs Lipids Health Dis" 3:2 [11] Boh B Berovic M., Zhang J., Zhi-Bin L (2007), ""Ganoderma lucidum and its pharmaceutically active compounds." Biotechnol Annu Rev.", pp 265-301 [12] Borchers A T Stern J S, Hackman R M, Keen C L, Gershwin M E (1999), "Mushrooms, tumors, and immunity" Proc Soc Exp Biol Med., Vol 221, pp 281293 [13] Bravi E., G Pperretti, L Motanari, F Favati and P Fantozzi (2007), "Supercritical fluid extraction for quality control in beer industry J Supercrit Fluids" 42, pp 342346 [14] Cal Krzysztof (2009), ""Reviews: Spray drying technique", Hardware and process parameters, Journal of Pharmaceutical Sciences", pp 99 [15] Chang S T Buswell J A (1996), "Mushroom nutriceuticals." World J Microbiol Biotechnol, pp 473-476 [16] Chang YH Yang JS., Yang JL., Wu CL., Chang SJ., Lu KW., Kuo CL., Hsia TC., Chung JG (2009), ""Ganoderma lucidum extract promotes immune responses in normal BALB/c mice in vivo" In Vivo: International Journal of Experimantal and Clinical Pathophysiology and Drug Research" 23 (5), pp 755-759 [17] Chen D H Shiou W Y., Wang K C., editors et al (1999), ""Chemotaxonomy of triterpenoid pattern of HPLC of Ganoderma lucidum and Ganoderma tsugae." J Chin Chem Soc." 46, pp 47–51 83 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM TÀI LIỆU THAM KHẢO [18] Chen Y Bicker W, Wu J., Xie M Y., Lindner W (2010), ""Ganoderma species discrimination by dual-mode chromatographic fingerprinting: A study on stationary phase effects in hydrophilic interaction chromatography and reduction of sample misclassification rate by additional use of reversed-phase chromatography." J Chromatogr." 1217 (8), pp 1255-1265 [19] Cheng Seng Tan Nurulhikma Md Isa , Ismanizan Ismail and Zamri Zainal (2019), "Agarwood Induction: Current Developments and Future Perspectives Frontiers in Plant Science" 10, pp [20] CN102293789B (2014), Method for extracting triterpenoids from ganoderma lucidum sporocarp [21] Fiori L (2007), "Grape Seed Oil Supercritical Extraction Kinetic and Solubility Data: Critical Approach and Modeling J Supercrit Fluids" 43, pp 43-54 [22] Gallo L Llabot J.M, Allemandi D, Bucalá V, Pina J (2011), "Influence of spray-drying operating conditions on Rhamnus purshiana (Cáscara sagrada) extract powder physical properties Powder Technology" 208, pp 205-214 [23] Hikino H Konno C., Mirin Y., Hayashi T (1985), ""Isolation and hypoglycemic activity of ganoderans A and B, glycans of Ganoderma lucidum fruit bodies." Planata Med." 4, pp 339-340 [24] J Falandysz (2008), ""Selenium in edible mushrooms." J Environ Sci Health C Environ Carcinog Ecotoxicol Rev." 26 (3), pp 256-299 [25] J.P Cannel.R (1998), Natural producter isolation Humana Press Inc [26] Kao C HJ Jesuthasan A C., Bishop K S., Glucina M P., Ferguson L R (2013), ""Anti-cancer activities of Ganoderma lucidum: active ingredients and pathways" Functional Foods in Health and Disease" (2), pp 48-65 [27] Katarzyna Ty´skiewicz Marcin Konkol and Edward Rój (2019), "Supercritical Carbon Dioxide (scCO2) Extraction of Phenolic Compounds from Lavender (Lavandula angustifolia) Flowers: A Box-Behnken Experimental Optimization Molecules" 24, pp 3354-3369 [28] Kim HW Kim BK (1999), "Biomedicinal triterpenoids of Ganoderma lucidum(Curt: Fr.) P Karst (Aphyllophoromycetidae) Int J Med Mushrooms" 1, pp 121-138 [29] Kubota T Asaka Y., Miura I., Mori H (1982), ""Structures of ganoderic acids A and B, two new lanostane type bitter triterpenes from Ganoderma lucidum (Fr.) Karst." Helvetica Chimica Acta" 65, pp 611-619 [30] L Leo L Rescio, L Ciurlia and G Zacheo (2005), "Supercritical Carbon Dioxide Extraction of Oil and α-Tocopherol from Almond Seeds J Sci Food Agric" 85, pp 2167-2174 [31] Ma C Guan S H., Yang M., Liu X., Guo D A (2008), ""Differential protein expression in mouse splenic mononuclear cells treated with polysaccharides from spores of Ganoderma lucidum" Phytomedicine" 15 (4), pp 268-276 [32] Mau J L Lin H C, Chen C C (2001), "Non-volatile components of several medicinal mushrooms" Food Res Int., pp 521-526 [33] MEI-SU LIN ZER-RAN YU, BE-JEN WANG, CHENG-CHI WANG, YIH-MING WENG & MALCOLM KOO* (2015), "Bioactive Constituent Characterization and Antioxidant Activity of Ganoderma lucidum Extract Fractionated by Supercritical Carbon Dioxide" 44(12), pp 1685–1691 84 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM TÀI LIỆU THAM KHẢO [34] Moncalvo J.M Wang HH., Hseu RS (1995), "Phylogenetic Relationships in Ganoderma Inferred from the Internal Transcribed Spacers and 25S Ribosomal DNA Sequences" Mycologia, Vol 87 (2) [35] Nautiyal Omprakash H (2016), "Food Processing by Supercritical Carbon DioxideReview EC Chemistry" (1), pp 111-135 [36] Paroma Chakravarty Amin Famili, Karthik Nagapudi and Mohammad A Al-Sayah (2019), "Review: Using Supercritical Fluid Technology as a Green Alternative During the Preparation of Drug Delivery Systems, Pharmaceutics" 11, pp 629 [37] RUEY-SHYANG HSEU HSI-HUA WANG, HUEI-FANG WANG, JEAN-MARC MONCALVO (1996), "Differentiation and Grouping of Isolates of the Ganoderma lucidum Complex by Random Amplified Polymorphic DNA-PCR Compared with Grouping on the Basis of Internal Transcribed Spacer Sequences" APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, Vol 62 (4) [38] Ruey Chi Hsu * Bin Hwae Lin, and Chi Wei Chen (2001), "The Study of Supercritical Carbon Dioxide Extraction for Ganoderma Lucidum" 40, pp 4478-4481 [39] Ruhan Askin Mitsuru Sasaki, Motonobu Goto* (2007), "Sub- and Supercritical Fluid Extraction of Bioactive Compounds from Ganoderma lucidum", pp 573-578 [40] S G Özkal M E Yener, U Salgın and Ü Mehmetoġlu (2005), "Response Surfaces of Hazelnut Oil Yield in Supercritical Carbon Dioxide Europen Food Res Technol." 220, pp 74-78 [41] S.S.H Rizvi (1994), Supercritical fluid Processing of food and biomaterials., Vol 1, Springer US [42] Sanodiya B S Thakur G S, Baghel R K, Prasad G B, Bisen P S (2009), ""Ganoderma lucidum: A potent pharmacological macrofungus." Curr Pharm Biotechnol", (10 (8)), pp 717-742 [43] Shi Y L James A E, Benzie I F, Buswell J A (2002), ""Mushroom-derived preparations in the prevention of H2O2-induced oxidative damage to cellular DNA." Teratog Carcinog Mutagen." 22, pp 103–111 [44] Sihvonen M Jăarvenpăaăa E., Hietaniemi V & Huopalahti R (1999), "Advances in supercritical carbon dioxide technologies, Trends Food Sci Technol." 10, pp 217222 [45] SONIAMOL JOSEPH BABY SABULAL, VARUGHESE GEORGE, KUTTIKKADAN RONY ANTONY, KAINOOR KRISHNANKUTTY JANARDHANAN (2011), ""Antitumor and anti-inflammatory activities of polysaccharides isolated from Ganoderma lucidum" Acta Pharm." 61 (335-342) [46] T Lu T., F Gaspar, R Marriott, S Mellor, C Watkinson, C., B Al-Duri, J Seville and R Santos (2007), "Extraction of Borage Seed Oil by Compressed CO2: Effect of Extraction Parameters and Modelling J Supercrit Fluids" 41 (1), pp 68-73 [47] Tariq Ahmad F A Masoodi, Sajad A Rather, S M Wani & Amir Gull (2019), "Supercritical Fluid Extraction: A Review, J Biol Chem Chron" 5, pp 114-122 [48] USP41-NF36 (2017), "GANODERMA LUCIDUM FRUITING BODY" [49] Wachtel-Galor S Choi S W, Benzie I F F (2005), ""Effect of Ganoderma lucidum on human DNA is dose dependent and mediated by hydrogen peroxide" Redox Rep." 10 (3), pp 145–149 [50] Wang S Y Hsu M L., Hsu H C., et al (1997), ""The anti-tumor effect of Ganoderma lucidum is mediated by cytokines released from activated macrophages and T lymphocytes" International journal of cancer" 70 (6), pp 699-705 85 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM TÀI LIỆU THAM KHẢO [51] Wang YY Khoo KH, Chen ST, Lin CC, Wong CH, Lin CH (2002), ""Studies on the immuno-modulating and antitumor activities of Ganoderma lucidum (Reishi) polysaccharides: functional and proteomic analyses of a fucose-containing glycoprotein fraction responsible for the activities" Bioorganic & medicinal chemistry" 10 (4), pp 1057-1062 [52] Xia Q Zhang H., Sun X., Zhao H., Wu L., Zhu D., Yang G., Shao Y., Zhang X., Mao X., Zhang L., She G (2014), ""A Comprehensive Review of the Structure Elucidation and Biological Activity of Triterpenoids from Ganoderma spp." Molecules" 19 (11), pp 17478-17535 [53] Yuen J W Gohel M D (2005), ""Anticancer effects of Ganoderma lucidum: A review of scientific evidence." Nutr Cancer." 53, pp 11-17 [54] Zahoor Ahmad Bhat Abdul Hamid Wani, Mohd Yaqub Bhat, Abdul Rashid Malik (2019), "MAJOR BIOACTIVE TRITERPENOIDS FROM GANODERMA SPECIES AND THEIR THERAPEUTIC ACTIVITY: A REVIEW" 12 (4), pp 2230 [55] Zaidman B Z Yassin M, Mahajna J, Wasser S P (2005), ""Medicinal mushroom modulators of molecular targets as cancer therapeutics." Appl Microbiol Biotechnol." 67, pp 453-468 [56] Zhang R Xu S, Cai Y, Zhou M, Zuo X, and Chan P (2011), ""Ganoderma lucidum Protects Dopaminergic Neuron Degeneration through Inhibition of Microglial Activation" Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine", pp 2011 [57] Zhou X Lin J, Yin Y, Zhao J, Sun X, Tang K (2007), "Ganodermataceae: natural products and their related pharmacological functions The American Journal of Chinese Medicine" 35 (04), pp 559-574 [58] Zhu X Lin Z (2006), ""Modulation of cytokines production, granzyme B and perforin in murine CIK cells by Ganoderma lucidum polysaccharides." Carbohydrate Polymers" 63 (2), pp 188-197 [59] Moncalvo J M (2000), Systematics of Ganoderma Ganoderma Diseases of Perennial Crops, CAB International, Wallingford, UK, pp 23-45 [60] S Deora N et al (2013), Ultrasound for Improved Crystallisation in Food Processing, Vol Tài liệu web [56] https://www.most.gov.vn/vn/tin-tuc/7317/hop-tac-nghien-cuu-ung-dung-cong-nghechiet-sieu-toi-han-de-chiet-xuat-mot-so-hoat-chat-sinh-hoc-tu-mot-so-duoc-lieu-viet-namtao-.aspx [57] http://cesti.gov.vn/chi-tiet/1409/khong-gian-cong-nghe/cong-nghe-trich-ly-su-dung- co2-sieu-toi-han-nang-gia-tri-qua-gac [58] https://text.123doc.net/document/1897083-cong-nghe-chiet-xuat-sieu-toi-han-thanhtuu-trien-vong-su-dung-sfe-tren-the-gioi-va-o-viet-nam.htm 86 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... NGUYỄN THỊ KHÁNH LINH NGHIÊN CỨU CHI? ??T XUẤT CAO LINH CHI (Ganoderma lucidum) BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHI? ??T XUẤT LỎNG SIÊU TỚI HẠN ĐỂ BÀO CHẾ CAO GIÀU TRITERPEN Ngành : Công nghệ Dược phẩm Bào chế Thuốc Mã... hướng nghiên cứu đại Xuất phát từ nhu cầu trên, đề tài ? ?Nghiên cứu chi? ??t xuất cao Linh chi (Ganoderma lucidum) phương pháp chi? ??t lỏng siêu tới hạn để bào chế cao giàu triterpen? ?? với mục tiêu bào chế. .. 1.2.7 Các nghiên cứu chi? ??t xuất triterpen từ nấm Linh chi phương pháp chi? ??t lỏng siêu tới hạn Trên giới có nhiều nghiên cứu chi? ??t xuất triterpen từ Linh chi (Ganoderma lucidum) CO2 siêu tới hạn như: