Đánh giá hoạt tính sinh học của các cao có độ phân cực khác nhau chiết từ cây sùng thảo stachys affinis

SỞ NƠNG NGHIỆP VÀ PTNT CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Độc lập – Tự – Hạnh phúc TRUNG TÂM CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ Đánh giá hoạt tính sinh học cao có độ phân cực khác chiết từ Sùng thảo (Stachys affinis) Mã số: TP02/18-19 Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Công nghệ Sinh học TP HCM Chủ nhiệm nhiệm vụ: ThS Đồn Thị Tám Thành phố Hồ Chí Minh - 2020 SỞ NƠNG NGHIỆP VÀ PTNT CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Độc lập – Tự – Hạnh phúc TRUNG TÂM CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ Đánh giá hoạt tính sinh học cao có độ phân cực khác chiết từ Sùng thảo (Stachys affinis) Mã số: TP02/18-19 (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày 30/06/2020) Chủ nhiệm nhiệm vụ ThS Đồn Thị Tám Cơ quan chủ trì nhiệm vụ PGS.TS Dương Hoa Xơ Thành phố Hồ Chí Minh - 2020 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH TÍNH CẤP THIẾT CỦA VIỆC THỰC HIỆN NHIỆM VỤ MỤC TIÊU NHIỆM VỤ TÓM TẮT I MỞ ĐẦU II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan chi Stachys 2.1.1 Hoạt tính sinh học 2.1.1.1 Hoạt tính chống oxy hóa 2.1.1.2 Hoạt tính kháng vi sinh vật 2.1.1.3 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư 2.1.1.4 Các hoạt tính khác 2.2 Tổng quan Stachys affinis 2.2.1 Phân loại thực vật học 2.2.2 Thành phần hóa học 2.3 Một số hoạt chất sinh học 13 2.3.1 Polyphenol 13 2.3.2 Alkaloid 13 2.3.3 Saponin 14 2.3.4 Polysaccharide 15 2.3.5 Stachyose 17 2.4 Tổng quan bệnh đái tháo đường 19 2.4.1 Khái niệm 19 2.4.2 Hiện trạng bệnh đái tháo đường 20 2.4.2.1 Trên giới 20 2.4.2.2 Tại Việt Nam 21 2.4.3 Liệu pháp điều trị 21 III VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 3.1 Vật liệu 24 3.2 Phương pháp 25 3.2.1 Phương pháp chiết cao tổng cao phân đoạn 25 3.2.2 Phân tích sơ thành phần hóa thực vật 28 3.2.3 Phương pháp định lượng polyphenol 31 3.2.4 Phương pháp định lượng alkaloid 31 3.2.5 Phương pháp TLC (Thin Layer Chromatography) 31 3.2.6 Phương pháp định lượng saponin 33 3.2.7 Phương pháp định lượng polysaccharide 33 3.2.8 Phương pháp định lượng đường stachyose 34 3.2.9 Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng oxi hóa 34 3.2.10 Phương pháp đánh giá hoạt tính ức chế enzyme 38 3.2.11 Phương pháp đánh giá hạ đường huyết chuột 39 3.2.12 Phương pháp xử lý số liệu 43 IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 43 4.1 Thu nhận cao chiết tổng cao phân đoạn từ cao tổng mẫu Sùng thảo 44 4.2 Định tính thành phần hóa thực vật mẫu Sùng thảo 46 4.3 Định lượng thành phần hóa thực vật mẫu Sùng thảo 49 4.3.1 Định lượng polyphenol tổng 49 4.3.2 Định lượng alkaloid 51 4.3.3 Định lượng saponin 53 4.3.4 Định lượng polysaccharide 56 4.3.5 Định lượng stachyose 58 4.4 Đánh giá hoạt tính kháng oxi hóa mẫu Sùng thảo 60 4.5 Đánh giá hoạt tính ức chế enzyme 63 4.5.1 Đánh giá hoạt tính ức chế enzyme α-amylase 63 4.5.2 Đánh giá hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase 64 4.6 Đánh giá hoạt tính hạ đường huyết mơ hình chuột mẫu Sùng thảo 65 4.6.1 Độc tính cấp đường uống 65 4.6.2 Tác động hạ đường huyết chuột nhắt gây đái tháo đường streptozotocin 67 4.6.2.1 Tác động trọng lượng thể chuột thử nghiệm 67 4.6.2.2 Tác động đường huyết đói chuột thử nghiệm 68 4.6.2.3 Tác động thử nghiệm dung nạp insulin (ITT) 71 4.6.2.4 Tác động thử nghiệm dung nạp glucose (OGTT) 73 4.6.3 Tác động hạ đường huyết chuột bình thường 75 4.6.3.1 Tác động đường huyết đói 75 4.6.3.2 Thử nghiệm dung nạp insulin (ITT) 76 4.6.3.3 Thử nghiệm dung nạp glucose (OGTT) 78 V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 79 Kết luận 79 Kiến nghị 81 TÀI LIỆU THAM KHẢO 82 PHỤ LỤC DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT ABTS: AG: CPĐ: cs: đđ: DMSO : DPPH: EA: EtOH: Et2O: GAE: 2,2'-azino-bis (3ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid acid gallic cao phân đoạn cộng đậm đặc dimethyl sulfoxyde - 2,2 -diphenyl - - picrylhydrazyl ethyl acetate ethanol diethyl ether gallic acid equivalent high performance liquid HPLC: chromatography ultra performance liquid UPLC chromatography - mass MS spectrometer high-performance liquid HPLCchromatography- evaporative light ELSD scattering detector ITT insulin tolerance test OA: oleanolic acid OD: optical density OGTT: oral glucose tolerance test Oxh: PL: MeOH: ROS: RT: SEM: test: TLC: TPHH: UBNN: v: w: methanol reactive oxygen species room temperature standard error of mean thin layer chromatography gốc tự đương lượng gallic acid sắc ký lỏng hiệu cao sắc ký lỏng siêu hiệu ghép đầu dò khối phổ sắc ký lỏng hiệu cao ghép đầu dò tán xạ ánh sáng bay kiểm tra dung nạp insulin mật độ quang kiểm tra dung nạp glucose qua đường uống oxy hóa phụ lục gốc tự nhiệt độ phịng sai số chuẩn số trung bình kiểm tra sắc lý lớp mỏng thành phần hóa học ủy ban nhân dân thể tích khối lượng DANH SÁCH BẢNG Bảng 2.1 Hàm lượng dinh dưỡng củ Sùng thảo (S affinis) 10 Bảng 2.2 Hàm lượng nhóm polyphenol S sieboldii 11 Bảng 3.1 Thành phần phản ứng định lượng đường huyết 42 Bảng 4.1 Hiệu suất cao tổng methanol 44 Bảng 4.2 Hiệu suất chiết cao phân đoạn 44 Bảng 4.3 Hiệu suất chiết cao tổng nước 45 Bảng 4.4 Kết định tính sơ TPHH dịch chiết Sùng thảo diethylether 46 Bảng 4.5 Kết định tính sơ TPHH dịch chiết Sùng thảo ethanol 47 Bảng 4.6 Kết định tính sơ TPHH dịch chiết Sùng thảo nước 48 Bảng 4.7 Hàm lượng polyphenol có cao tổng MeOH mẫu Sùng thảo 50 Bảng 4.8 Hàm lượng polyphenol có cao tổng nước củ Sùng thảo 51 Bảng 4.9 Hàm lượng alkaloid có cao tổng MeOH mẫu Sùng thảo 51 Bảng 4.10 Hàm lượng alkaloid có cao tổng nước củ Sùng thảo 52 Bảng 4.11 Hàm lượng saponin cao tổng MeOH mẫu Sùng thảo 55 Bảng 4.12 Hàm lượng saponin cao tổng nước củ Sùng thảo 56 Bảng 4.13 Hàm lượng polysaccharide cao chiết củ Sùng thảo 57 Bảng 4.14 Hàm lượng stachyose cao chiết củ Sùng thảo 59 Bảng 4.15 Giá trị IC50 mẫu cao chiết củ Sùng thảo so với vitamin C 62 Bảng 4.16 Giá trị IC50 ức chế α-amylase cao chiết củ Sùng thảo so với acarbose 64 Bảng 4.17 Giá trị IC50 ức chế α-glucosidase cao chiết củ Sùng thảo so với acarbose 65 Bảng 4.18 Kết khảo sát độc tính cấp đường uống chuột nhắt cao củ Sùng thảo liều 60 g/kg 66 Bảng 4.19 Trọng lượng trung bình lô chuột thử nghiệm 67 Bảng 4.20 Đường huyết đói trung bình chuột lơ thử nghiệm 69 Bảng 4.21 Đường huyết trung bình chuột thử nghiệm dung nạp insulin chuột đái tháo đường 71 Bảng 4.22 Đường huyết trung bình chuột thử nghiệm dung nạp glucose chuột đái tháo đường 74 Bảng 4.23 Đường huyết đói trung bình chuột lô thử nghiệm 76 Bảng 4.24 Đường huyết trung bình chuột thử nghiệm dung nạp insulin chuột bình thường 76 Bảng 4.25 Đường huyết trung bình chuột thử nghiệm dung nạp glucose chuột bình thường 78 DANH SÁCH HÌNH Hình 2.1 Một số lồi thực vật thuộc chi Stahys Hình 2.2 Hình thái S affinis Bunge Hình 2.3 Cấu trúc polysaccharides 16 Hình 2.4 Cấu trúc Stachyose 17 Hình 3.1 Cây củ Sùng thảo tháng tuổi trồng Trung tâm CNSH TP.HCM 24 Hình 3.2 Lơ chuột sinh lý 24 Hình 3.3 Lơ chuột đái tháo đường 24 Hình 3.4 Sơ đồ nội dung nghiên cứu 25 Hình 3.5 Sơ đồ định tính diện nhóm hợp chất hữu cao tổng cồn 30 Hình 3.6 Cơ chế phản ứng DPPH 35 Hình 3.7 Sự chuyển màu gốc tự ABTS•+ 36 Hình 4.1 Sơ đồ tách chiết hợp chất theo phương pháp Ciulei 46 Hình 4.2 Đồ thị đường chuẩn gallic acid 50 Hình 4.3 Đồ thị đường chuẩn atropine 52 Hình 4.4 Sản phẩm TLC mẫu Sùng thảo với chất chuẩn OA 54 Hình 4.5 Đồ thị đường chuẩn oleanolic acid 55 Hình 4.6 Đồ thị đường chuẩn glucose .57 Hình 4.7 Biểu đồ hàm lượng polysacchride (% chất khô) mẫu cao chiết 58 Hình 4.8 Hiệu trung hòa gốc tự ABTS.+ vitamin C 60 Hình 4.9 Hiệu trung hịa gốc tự ABTS.+ cao chiết củ Sùng thảo 60 Hình 4.10 Hiệu trung hòa gốc tự DPPH vitamin C 60 Hình 4.11 Hiệu trung hịa gốc tự DPPH cao chiết củ Sùng thảo 61 Hình 4.12 Đồ thị đường chuẩn acarbose ức chế α-amylase 63 Hình 4.13 Đồ thị đường chuẩn acarbose ức chế α- glucosidase 64 Hình 4.14 Đường huyết đói trung bình chuột lơ thử nghiệm 69 Hình 4.15 Đường huyết lô chuột thử nghiệm dung nạp insulin chuột đái tháo đường 72 Hình 4.16 Đường huyết lô thử nghiệm dung nạp glucose chuột đái tháo đường 74 Hình 4.17 Đường huyết lô chuột thử nghiệm dung nạp insulin chuột bình thường 77 Hình 4.18 Đường huyết lơ chuột thử nghiệm dung nạp glucose chuột bình thường 78 Ahsan H., Reagan-Shaw S., Eggert D M., Tan T C., Afaq F., Mukhtar H., Ahmad N (2007), “Protective effect of sanguinarine on ultraviolet B-mediated damages in SKH-1 hairless mouse skin: implications for prevention of skin cancer”, Photochemistry and photobiology, 83(4), pp 986 - 93 Ainsworth E.A., Gillespie K.M (2007), “Estimation of total phenolic content and other oxidation substrates in plant tissues using FolinCiocalteu reagent”, Nature Protocols, 2(4), pp 875 - 877 10.Akoro S.M., Ogundare C.O., Oladipupo O.R (2017), “Phytochemical Study and Alpha-amylase Inhibitory Properties of Leaf Extracts of Croton zambesicus”, Biotechnology Journal International, 18(1), pp - 11.Andrikopoulos S., Blair A.R., Deluca N., Fam B.C., Proietto J (2008), “Evaluating the glucose tolerance test in mice”, Am J Physiol Endocrinol Metab, 295, pp E1323 - E1332 12.Anh L.V., Parks S.E., Minh N.H., Roach P.D (2018), “Improving the Vanillin - Sulphuric Acid Method for Quantifying Total Saponins”, Technologies, 6(84), pp - 12 13.Ashour M.A.G (2012), “Isolation, HPLC/UV characterization and antioxidant activity of phenylethanoids from Blepharis edulis Pers growing in Egypt”, Bulletin of Faculty of Pharmacy, Cairo University, 50(1), pp 67 - 72 14.Avigad G., Dey P.M (1997), “Carbohydrate Metabolism: Storage Carbohydrates”, Plant Biochemistry Dey, P M and Harborne, JB eds Academics Press, San Diego, CA, pp 143 - 204 15.Becker M.M., Gilvanda S., Nunes G.S., Ribeiro D.B Silva F.E.P.S., Catanantea G., Martya J.L ( 2019), “Determination of the Antioxidant 83 Capacity of Red Fruits by Miniaturized Spectrophotometry Assays”, Journal of the Brazilian Chemical Society, 30(5), pp 1108 - 1114 16.Bhavsar S.K., Föller M., Gu S., Vir S., Shah M.B., Bhutani K.K., Santani D D., Lang F (2009), “ Involvement of the PI3K/AKT pathway in the hypoglycemic effects of saponins from Helicteres isora”, Journal of ethnopharmacology, 126(3), pp 386 - 396 17.Cho H.K., Kim C.S., Suh W.S., Kim K.H., Lee K.R (2014), “Two new riterpene saponins from the tubers of Stachys sieboldii”, Heterocycles, 89(11), pp 2619 - 2626 18.Choe D.J., Ahn H.Y., Kim Y.W., Kim T.H., Kim M.D., Cho Y.S (2016), “Improvement Effect of Stachys sieboldii MIQ According to Mixing Ratio of Calcium on Memory Impairment in Scopolamineinduced Dementia Rats”, Journal of Life Science, 26(7), pp 812 - 818 19.Cushnie T.P., Lamb A.J (2005), "Antimicrobial activity of flavonoids", Int J Antimicrob Agents, 26(5), pp 343 - 356 20.Denga Y., He K., Ye X., Chen X., Huang J., Li X., Lujiang Y., Yalan J., Qing J., Li P (2012), “Saponin rich fractions from Polygonatu modoratum (Mill.) druce with more potential hypoglycemic effects”, Journal of ethnopharmacology, 141(1), pp 228 - 233 21.Desai A., Small D., McGILL A.E., Shah N.P (2002), “Metabolism of Raffinose and Stachyose in Reconstituted Skim Milk and of n-Hexanal and Pentanal in Soymilk by Bifidobacteria”, Bioscience and Microflora, 21(4), pp 245 - 250 22.Dierking E.C., Bilyeu K.D (2009), “Raffinose and Stachyose metabolism are not required for efficient soybean seed germination”, Journal of Plant Physiology, 166(12), pp 1329 - 1335 23.Dirar A.I., Wada M., Watanabe T., Devkota H.P (2019), “Phenolic Compounds from the Aerial Parts of Blepharis linariifolia Pers and 84 Their Free Radical Scavenging and Enzyme Inhibitory Activities”, Medicines, 6(4), pp 113 24.Dong H.Q., Li M., Zhu F., Liu F.L., Huang J.B (2012), “Inhibitory potential of trilobatin from Lithocarpus polystachyus Rehd against aglucosidase and a-amylase linked to type diabetes”, Food Chemistry, 130, pp 261 - 266 25.Elekofehinti O.O (2015), “Saponins: Anti-diabetic principles from medicinal plants-A review”, Pathophysiology, 22(2), pp 95 - 103 26.Elekofehinti O.O., Kamdem J.P., Kade I.J., Adanlawo I.G., Rocha J.B.T (2012), “ Saponins from Solanum anguivi Lam fruit exhibit in vitro and in vivo antioxidant activities in alloxan-induced oxidative stress”, Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, 6(2), pp 249 - 254 27.Elekofehinti O.O., Kamdem J.P., Kade I.J., Rocha J.B.T., Adanlawo I.G (2013), “Hypoglycemic, antiperoxidative and antihyperlipidemic effects of saponins from Solanum anguivi Lam fruits in alloxaninduced diabetic rats”, South African J Bot., 88, pp 56 - 61 28.Fan Y.L., Wang W.H., Song W., Chen H.S., Teng A.G., Liu A.J (2012), “Partial characterization and anti-tumor activity of an acidic polysaccharide from Gracilaria lemaneiformis”, Carbohydrate Polymers, 88(4), pp 1313 - 1318 29.Feng K., Chen W., Sun L., Liu J., Zhao Y., Li L., Wang Y., Zhang W (2015), “Optimization extraction, preliminary characterization and antioxidant activity in vitro of polysaccharide from Stachys sieboldii Miq Tubers”, Carbohydrate polymers, 125, pp 45 - 52 30.Francis G., Kerem Z., Makkar H.P.S., Becker K (2002), “The biological action of saponins in animal systems: a review”, British journal of Nutrition, 88(6), pp 587 - 605 85 31.Ganesan K., Xu B (2019), “Review Anti-Diabetic Effects and Mechanisms of Dietary Polysaccharide”, Molecules, 24(14), pp 2556 32.Goren A C (2014), "Use of Stachys Species (Mountain Tea) as Herbal Tea and Food", Records of Natural Products, 8(2), pp 71 - 82 33.Guo H., Saravanakumar K., Wang M.H (2018), “Total phenolic, flavonoid contents and free radical scavenging capacity of extracts from tubers of Stachys affinis”, Biocatalysis and Agricultural Biotechnology, 15, pp 235 - 239 34.Guzman-Gutierrez S.L., Gomez-Cansino R., Garcia-Zebadua J.C., Jimenez-Perez N.C., Reyes-Chilpa R (2012), "Antidepressant activity of Litsea glaucescens essential oil: identification of β-pinene and linalool as active principles", Journ of ethnopharmacology, 143(2), pp 673 - 679 35.Habicht S.D., Kind V., RudLoff S., Borsch C., Mueller A.S., Pallauf J., Yang R., Krawinke M.B (2011), “Quantification of antidiabetic extracts and compounds in bitter gourd varieties”, Food Chemistry, 126(1), pp 172 - 176 36.Harada S., Tsujita T., Ono A., Miyagi K., Mori T., Tokuyama S (2015), "Stachys sieboldii (Labiatae, Chorogi) Protects against Learning and Memory Dysfunction Associated with Ischemic Brain Injury", Journal of nutritional science and vitaminology, 61(2), pp 167 - 174 37.Hayashi K., Nagamatsu T., Ito M., Hattori T., Suzuki Y (1994), “Acteoside, a Component of Stachys Sieboldii MIQ, May Be a Promising Antinephritic Agent (2): Effect of Acteoside on Leukocyte Accumulation in the Glomeruli of Nephritic Rats”, The Japanese Journal of Pharmacology, 66(1), pp 47 - 52 86 38.Hayashi K., Nagamatsu T., Ito M., Yagita H., Suzuki Y (1996), "Acteoside, a component of Stachys sieboldii MIQ, may be a promising antinephritic agent (3): effect of aceteoside on expression of intercellular adhesion molecule-1 in experimental nephritic glomeruli in rats and cultured endothelial cells", The Japanese journal of pharmacology, 70(2), pp 157 - 168 39.Háznagy-Radnai E., Balogh Á., Czigle S., Máthé I., Hohmann J., Blazsó G (2012), "Antiinflammatory Activities of Hungarian Stachys species and Their Iridoids", Phytotherapy Research, 26(4), pp 505 509 40.Husak L., Dakhym I., Marchyshyn S., Demydyak O., Kyryliv M (2017), “ Determination of phenolic compounds from Stachys sieboldii MIQ herb and tubers”, The Pharma Innovation Journal, 6(9), pp 450 453 41.Huynh T., Nguyen T.T.H., Nguyen T.N.A., Mai X.D., Tran M.T., Le N.Q., Nguyen A.D., Nguyen D.N., Dinh M.H (2016),“Antioxidant, αglucosidase inhibitory and antifungal activities of extracts from lichens collected in Vietnam”, Journal of Science and Technology, 54(4A), pp 156 - 163 42.International Diabetes Federation (2019) IDF Diabetes Atlas 2019 43.Jeon K.S., Park S.I (2015), “Antioxidative Properties of Chinese Artichoke (Stachys sieboldii Miq) added White Bread”, The Korean Journal of Culinary Research, 21(6), pp 120 - 132 44.John B., Sulaiman C.T., George S., Reddy V.R.K (2014), “Spectrophotometric estimation of total alkaloids in selected justicia species”, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 6(5), pp 647 - 648 87 45.Keller F., Matile P.(1985), “The Role of the Vacuole in Storage and Mobilization of Stachyose in Tubers of Stachys sieboldii”, J Plant Physiol., 119 pp 369-380 46.Kim Y.K., Son H.K Lee J.J (2017), “Nutritional Components and Antioxidant Activities of Various Stachys Sieboldii Miq Parts”, Korean J Community Living Sci, 28(2), pp 203 - 215 47.Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S (1984) “Studies on the constituents of Cistanchis Herba III Isolation and structures of new phenylpropanoid glycosides, Cistanosides A and B”, Chemical and pharmaceutical bulletin, 32(8), pp 3009 - 3014 48.Kokhdan E P., Sadeghi H., Ghafoori H., Danaei N., Javadian H., Aghamaali M R (2018), “Cytotoxic effect of methanolic extract, alkaloid and terpenoid fractions of Stachys pilifera against HT-29 cell line”, Research in pharmaceutical sciences, 13(5), pp 404 - 412 49.Kwon D.Y., Kim Y.S., Ryu Y.S., Choi Y.H., Cha M.R.,Yang H.J., Park S (2012), “Platyconic acid, a saponin from Platycodi radix, improves glucose homeostasis by enhancing insulin sensitivity in vitro and in vivo”, European journal of nutrition, 51(5), pp 529 - 540 50.Lazarević J.S., Ðorđević A.S., Kitić D.V., Zlatković B.K., Stojanović G.S (2013), "Chemical Composition and Antimicrobial Activity of the Essential Oil of Stachys officinalis (L.) Trevis (Lamiaceae)", Chemistry & Biodiversity, 10(7), pp 1335 – 1349 51.Lee J.W., Wu W., Lim S.Y (2018),“ Effect of extracts from Stachys sieboldii Miq on cellular reactive oxygen species and glutathione production and genomic DNA oxidation”, Basic Research, (10), pp 485 - 489 88 52.Lee K.T., Jung T.W., Lee H.J., Kim S.G., Shin Y.S., Whang W.K (2011), “The antidiabetic effect of genosenoside Rb2 via activation of AMPK”, Archives of pharmacal research, 34(7), pp 1201 - 1208 53.Li W., Huang D., Gao A., Yang X (2015), “Stachyose increases absorption and hepatoprotective effect of tea polyphenols in high fructose-fed mice”, Molecular Nutrition & Food Research, 60(3), pp 502 - 510 54.Liang L., Liu G., Yu G., Zhang F., Linhardt R.J., Li Q (2020), “Urinary metabolomics analysis reveals the anti-diabetic effect of stachyose in high-fat diet/streptozotocin-induced type diabetic rats”, Carbohydrate Polymers, 229 (115534 55.Linck V.M., Silva A.L., Figueiro M., Caramao E.B., Moreno P.R., Elisabetsky E (2010), "Effects of inhaled Linalool in anxiety, social interaction and aggressive behavior in mice", Phytomedicine, 17(8-9), pp 679 - 683 56.Lukasz J.L., Svanberg I., Koăhler P (2011), "Marsh woundwort, Stachys palustris L (Lamiaceae) : an overlooked food plant", Genetic Resources and Crop Evolution, 58(5), pp 783 - 793 57.Ma L., Qin C., Wang M., Gan D., Cao L., Ye H., Zeng X (2013), "Preparation, preliminary characterization and inhibitory effect on human colon cancer HT-29 cells of an acidic polysaccharide fraction from Stachys floridana Schuttl ex Benth", Food Chem Toxicol, 60, pp 269 - 276 58.Machowinski A., Krämer H J., Hort W., Mayser P (2006), “Pityriacitrin – a potent UV filter produced by Malassezia furfur and its effect on human skin microflora”, Mycoses, 49(5), pp 388 - 92 59.Marja P K., Anu I.H., Heikki J.V., JussiPekka P.R., Kalevi P., Tytti S.K., Marina H (1999), “Antioxidant activity of plant extracts 89 containing phenolic compounds”, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 47(10), pp 3954 - 3962 60.Marzag H., Warnault P., Bougrin K., Martinet N., Benhida R (2014), “Chapter - Natural Polyphenols as Potent Inhibitors of DNA Methyltransferases”, Studies in Natural Products Chemistry, 41, pp 195 - 223 61.Matsuura H.N., Fett-Neto A.G (2015), “Plant Alkaloids: Main Features, Toxicity, and Mechanisms of Action”, Plant Toxins, pp 15 62.McAnuff M.A., Harding W.W., Omoruyi F.O., Jacobs H., Morrison E.Y., Asemota H.N (2005), “Hypoglycemic effects of steroidal sapogenins isolated from Jamaican bitter yam, Dioscorea polygonoides” Food and chemical toxicology, 43(11), pp 1667 - 1672 63.Metwally N.S., Mohamed A.M., ELSharabasy F.S (2012), “Chemical constituents of the Egyptian Plant Anabasis articulata (Forssk) Moq and its antidiabetic effects on rats with streptozotocin-induced diabetic hepatopathy”, Journal of Applied Pharmaceutical Science, 2(4), pp 54 - 65 64.Nagy C., Einwallner E (2018), “Study of In Vivo Glucose Metabolism in High-fat Diet-fed Mice Using Oral Glucose Tolerance Test (OGTT) and Insulin Tolerance Test (ITT)”, JoVE (Journal of Visualized Experiments), 131, pp e56672 65.Ngoc N.B., Zhou L.L., Waqas A (2020), “REVIEW Diabetes: What Challenges Lie Ahead for Vietnam?”, Annals of Global Health, 86(1), pp - 66.Nielsen S.S (2010), “Phenol-Sulfuric Acid Method for Total Carbohydrates”, Food Analysis Laboratory Manual, Springer, pp 47 52 90 67.Nishimura H., Sasaki H., Inagaki N., Masao C., Chen Z., Mitsuhashi H (1991), “Nine phenethyl alcohol glycosides from Stachys sieboldii”, Phytochemistry, 30, pp 965 - 969 68.Oleszek W., Kapusta I., Stochmal A (2007), “TLC of Triterpenes (Including Saponins)”, Thin Layer Chromatography in Phytochemistry, pp 519 - 541 69.Papatheodorou K., Banach M., Bekiari E., Rizzo M., Edmonds M (2018), “Complications of Diabetes”, Journal of Diabetes Research, Article ID 3086167, pp 70.Papoutsi Z., Kassi E., Mitakou S., Aligiannis N., Tsiapara A., Chrousos G.P., Moutsatsou P (2006), “Acteoside and martynoside exhibit estrogenic/antiestrogenic properties”, The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology, 98(1), pp 63 - 71 71.Park S.D., Lai Y.S., Kim, C.H (2004), “Immunopontentiating and antitumor activities of the purified polysaccharide from Phellodendron chinense SCHNEID”, Life Science, 75, pp 2621 - 2632 72.Pathak V., Pathak N.M , O’Neill C.L., Guduric-Fuchs J., Reinhold J (2019), “Medina1 Therapies for Type Diabetes: Current Scenario and Future Perspectives”, Clin Med Insights Endocrinol Diabetes, 12: 1179551419844521 73.Peterbauer T., Mucha J., Mayer U., Popp M., Glossl J., Richter A (1999), “Stachyose synthesis in seeds of adzuki bean (Vigna angularis): molecular cloning and functional expression of stachyose synthase”, Plant J Cell Mol Biol., 20, pp 509 - 518 74.Petti S., Scully C (2009), "Polyphenols, oral health and disease: a review", Journal of Dentistry, 37, pp 413 - 423 75.Piccolella S., Pacifico S (2015) “Chapter - Plant-Derived Polyphenols: A Chemopreventive and Chemoprotectant Worth91 Exploring Resource in Toxicology”, Advances in Molecular Toxicology, 9, pp 161 - 214 76.Podolak I , Galanty A., Sobolewska D (2010), “Saponins as cytotoxic agents: a review”, Phytochemistry Reviews, 9(3), pp 425 - 474 77.Rahimi R., Ghiasi S., Azimi H., Fakhari S., Abdollahi M (2009), “A review of the herbal phosphodiesterase inhibitors; future perspective of new drugs”, Cytokine, 49(2), pp 123 - 129 78.Ravichandran V.A., Kim M., Han S.K., Cha Y.S (2018), “Stachys sieboldii Extract Supplementation Attenuates Memory Deficits by Modulating BDNF-CREB and Its Downstream Molecules, in Animal Models of Memory Impairment”, Nutrients, 10(7), pp 917 79.Regier N Streb S., Zeeman S.C., Frey B (2010), “Seasonal changes in starch and sugar content of poplar (Populus deltoides x nigra cv Dorskamp) and the impact of stem girdLing on carbohydrate allocation to roots”, Tree Physiology, 30(8), pp 979 - 987 80.Saeedi M., Morteza K.S., Mahdavi M.R., Jamnani F.R (2008), "Antimicrobial Studies on Extracts of Four Species of Stachys", Indian Journal of Pharmaceutical Sciences, 70(3), pp 403 - 406 81.Salmaki Y., Zarre S., Govaerts R., Bräuchler C (2012), "A taxonomic revision of the genus Stachys (Lamiaceae: Lamioideae) in Iran", Botanical Journal of the Linnean Society, 170(4), pp 573 - 617 82.Serbetci T., Demirci B., Guzel C.B., Kultur S., Erguven M., Baser K.H (2010), "Essential oil composition, antimicrobial and cytotoxic activities of two endemic Stachys cretica subspecies (Lamiaceae) from Turkey", Nat Prod Commun, 5(9), pp 1369 - 1374 83.Setzer W.N., Schmidt J.M., Noletto J.A., Vogler B (2006), "Leaf oil compositions and bioactivities of Pharmacologyonline, 3, pp 794 - 802 92 abaco bush medicines", 84.Sgarbossa A., Dal B.M., Pressi, G., Cuzzocrea S., Dal T.R., Menegazzi M (2012), “Phenylpropanoid glycosides from plant cell cultures induce heme oxygenase gene expression in a human keratinocyte cell line by affecting the balance of NRF2 and BACH1 transcription factors”, Chemico-biological interactions, 199(2), pp 87 - 95 85.Singh R (2018), “Chapter - Chemotaxonomy of Medicinal Plants: Possibilities and Limitations”, Natural Products and Drug Discovery, pp 119 - 136 86.Singh V., Kumar P., Sanghi R (2012), “Use of microwave irradiation in the grafting modification of the polysaccharide–A review”, Progress in polymer science, 37(2), pp 340 - 364 87.Sprenger N., Keller F (2000), “ Allocation of raffi nose family oligosaccharides to transport and storage pools in Ajuga reptans: The roles of two distinct galactinol synthases” , The Plant Journal, 21(3), pp 249 - 258 88.Takeda Y., Fujita T., Satoh T., Kakegawa H (1985), "On the glycosidic constituents of Stachys sieboldi MIQ and their effects on hyaluronidase activity", Yakugaku Zasshi: Journal of the Pharmaceutical Society of Japan, 105(10), pp 955 - 959 89.Tang D., Liu L., Ajiakber D., Ye J., Xu J., Xin X., Aisa H.A., (2018), “Anti-diabetic Effect of Punica granatum Flower Polyphenols Extract in Type Diabetic Rats: Activation of Akt/GSK-3β and Inhibition of IRE1α-XBP1 Pathways”, Front Endocrinol, 9, pp 586 90.Tang S.M., Yang Z.M., Chen W.Q., Yuan Q.F., Chen S.Y., Li H.Z (2017), “Astragalus polysaccharide improves type diabetes mellitus in rats by protecting islet β cells”, Academic Journal of Second Military Medical University, 38(4), pp 482 - 487 93 91.Taylor S.L., Hefle S.L (2017), “Chapter 16 - Naturally Occurring Toxicants in Foods”, Foodborne Diseases, pp 327 - 344 92.Teixeira J., Gaspar A., Garrido E.M., Garrido J., Borges F (2013), “Review Article Hydroxycinnamic Acid Antioxidants: An Electrochemical Overview”, BioMed Research International, Article ID 251754, pp 11 93.Tepe B., Degerli S., Arslan S., Malatyali E., Sarikurkcu C (2011), "Determination of chemical profile, antioxidant, DNA damage protection and antiamoebic activities of Teucrium polium and Stachys iberica", Fitoterapia, 82(2), pp 237 - 246 94.Thulé P.M (2012), “Mechanisms of current therapies for diabetes mellitus type 2”, Adv Physiol Educ., 36(4), pp 275 - 283 95.Tundis R., Peruzzi L., Menichini F (2014), "Phytochemical and biological studies of Stachys species in relation to chemotaxonomy: a review", Phytochemistry, 102, pp - 39 96.Venditti A., Bianco A., Nicoletti M., Quassinti L., Bramucci M., Lupidi G., Lucarini D (2013), “Phytochemical analysis, biological evaluation and micromorphological study of Stachys alopecuros (L.) Benth subsp divulsa (Ten.) Grande endemic to central Apennines, Italy”, Fitoterapia, 90, pp 94 - 103 97.Venditti A., Frezza C., Celona D., Bianco A., Serafini M., Cianfaglione K., Fiorini D., Ferraro S., Maggi F., Lizzi A.R., Celenza G (2017), "Polar constituents, protection against reactive oxygen species, and nutritional value of Chinese artichoke (Stachys affinis Bunge)", Food Chem, 221, pp 473 – 481 98.Vijaya Abinaya R., Kim M., Lee S.J., Jeong E., Cha Y.S (2017), “Protective effects of Stachys sieboldii MIQ extract in SK-N-SH cells 94 and its memory ameliorative effect in mice”, Journal of Food Biochemistry, 41(6), pp e12411 99.Vundac V.B., Brantner A.H., Plazibat M (2007), "Content of polyphenolic constituents and antioxidant activity of some Stachys taxa", Food Chemistry, 104(3) , pp 1277 - 1281 100 Wang Z., Wang C., Su T., Zhang J (2014), “ Antioxidant and immunological activities of polysaccharide from Gentiana scabra Bunge roots”, Carbohydrate Polymers, 112, pp 114 - 118 101 Wang P., Kang J., Zheng R., Yang Z., Lu J., Gao J., Jia Z (1996), “Scavenging effects of phenylpropanoid glycosides from Pedicularis on superoxide anion and hydroxyl radical by the spin trapping method”, Biochemical Pharmacology, 51, pp 687 - 691 102 Wang Z., Wang C., Quan Y (2014), “Extraction of polysaccharide from Phellinus nigricans mycelia and their antioxidant activities in vitro”, Carbohydrate Polymers, 99, pp 110 - 115 103 World Health Organization (2016), “Global report on diabetes” , ISBN 978 92 156525 104 Wu J., Shi S., Wang H., Wang S (2016), “Mechanisms underlying the effect of polysaccharide in the treatment of type diabetes: A review”, Carbohydrate Polymers, 25(144), pp 474 - 494 105 Yamahara J., Kitani T., Kobayashi H., Kawahara Y (1990), "Studies on Stachys sieboldii MIQ II Anti-anoxia action and the active constituents", Yakugaku Zasshi: Journal of the Pharmaceutical Society of Japan, 110(12), pp 932 - 935 106 Yang L., Chao W., Jinshan L (2019), “Phellinus linteus polysaccharide extract improves insulin resistance by regulating gut microbiota composition”, The faseb journal, 34(1), pp 1065 - 1078 95 107 Yang L., Stöckigt J (2010), “Trends for diverse production strategies of plant medicinal alkaloids”, Natural product reports, 27(10), pp 1469 - 79 108 Yildiz F (2010), “Chapter 2: Glycobiology of Foods: Food Carbohydrates-Occurrence, Production, Food Uses, and Healthful Properties”, Advances in Food Biochemistry, CRC Press, Taylor & Francis: London, pp 29 - 32 109 Yin J., Yang G., Wang S., Chen Y (2006), “Purification and determination of stachyose in Chinese artichoke (Stachys Sieboldii Miq.) by high-performance liquid chromatography with evaporative light scattering detection”, Talanta, 70(1), pp 208 - 212 110 Yoshiki Y., Kudou S., Okubo K (1998), “Relationship between chemical structures and biological activities of triterpenoid saponins from soybean (Review)”, Bioscience, biotechnology, and biochemistry, 62(12), pp 2291 - 2299 111 Yu Y., Shena M., Song Q., Xie J (2018), “Biological activities and pharmaceutical applications of polysaccharide from natural resources: A review”, Carbohydrate Polymers, 183, pp 91 - 101 112 Zhang R.X., Jia Z.P., Kong L.Y., Ma H.P., Ren J., Li M.X., Ge X (2004), “Stachyose Extract From Rehmannia Glutinosa Libosch To Lower Plasma Glucose in Normal and Diabetic Rats by Oral Administration”, Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 59(7), pp 552 - 556 113 Zheng Y., Ley S.H , Hu F.B (2018), “Global aetiology and epidemiology of type diabetes mellitus and its complications”, Nat Rev Endocrinol., 14(2), pp 88 - 98 96 114 Ziaullah H P., Rupasinghe V (2014),“Chapter 3- Application of NMR Spectroscopy in Plant Polyphenols Associated with Human Health”, Application of NMR Spectroscopy in Food Science, 1, pp -10 97