Đang tải... (xem toàn văn)
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http //www lrc tnu edu vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC NGÔ THỊ HUỆ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT PHÂN LẬP TỪ LOÀI TRUNG QUÂN Ancis[.]
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC NGÔ THỊ HUỆ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT PHÂN LẬP TỪ LOÀI TRUNG QUÂN Ancistrocladus cochinchinensis Ở VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG THÁI NGUYÊN - 2016 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC NGÔ THỊ HUỆ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT PHÂN LẬP TỪ LOÀI TRUNG QUÂN Ancistrocladus cochinchinensis Ở VIỆT NAM Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Người hướng dẫn khoa học: TS Lê Quỳnh Liên THÁI NGUYÊN - 2016 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Luận văn tốt nghiệp với đề tài “Đánh giá hoạt tính sinh học số hợp chất phân lập từ loài Trung qn Ancistrocladus cochinchinensis Việt Nam” cơng trình nghiên cứu cá nhân hướng dẫn TS Lê Quỳnh Liên hỗ trợ đề tài nghiên cứu “Nghiên cứu đa dạng loài thuộc chi Trung quân (Ancistrocladus) Việt Nam dựa vào phân tích hóa sinh di truyền”, mã số: 104.01-2013.53, tiến sĩ Lê Quỳnh Liên chủ nhiệm đề tài, không chép Tơi xin chịu trách nhiệm cơng trình nghiên cứu Thái Nguyên, ngày tháng năm 2016 Người cam đoan Ngơ Thị Huệ Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ii LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc mình, tơi xin cảm ơn TS Lê Quỳnh Liên Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam anh/chị làm việc Phòng Tài Nguyên sinh vật tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn đề tài Nghiên cứu bản: “Nghiên cứu đa dạng loài thuộc chi Trung quân (Ancistrocladus) Việt Nam dựa vào phân tích hóa sinh di truyền”, mã số: 104.01-2013.53, TS Lê Quỳnh Liên chủ nhiệm đề tài hỗ trợ trình thực luận văn Tơi xin cảm ơn thầy cô khoa Khoa học sống, thầy cô giảng dạy trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên thầy cô công tác Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam truyền đạt kiến thức cho năm học tập trường Trong suốt trình học tập thực luận văn nhận động viên bạn bè, đồng nghiệp người thân gia đình Thái Nguyên, ngày tháng năm 2016 Người cam đoan Ngơ Thị Huệ Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH, BIỂU ĐỒ vii MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu đề tài Nội dung nghiên cứu Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Hợp chất thứ cấp có hoạt tính sinh học từ thực vật 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Những nghiên cứu hợp chất thiên nhiên từ thực vật giới 1.1.4 Tình hình nghiên cứu hợp chất thiên nhiên từ thực vật Việt Nam 1.2 Một số hoạt tính sinh học thực vật 1.2.1 Hoạt tính kháng vi sinh vật 1.2.2 Hoạt tính chống oxy hóa 10 1.2.3 Hoạt tính gây độc tế bào 11 1.3 Tổng quan tình hình nghiên cứu Chi Trung quân (Ancistrocladus) 13 1.3.1 Đặc điểm, phân bố 13 1.3.2 Tình hình nghiên cứu giới 14 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 16 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Vật liệu nghiên cứu 19 2.2 Phạm vi nghiên cứu 21 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn iv 2.2.1 Phạm vi 21 2.2.2 Địa điểm nghiên cứu 21 2.2.3 Thời gian: Nghiên cứu tiến hành từ tháng 09/2015-09/2016 22 2.3 Đối tượng, thiết bị nghiên cứu 22 2.3.1 Các hóa chất, thiết bị chuyên dùng 22 2.4 Phương pháp nghiên cứu 24 2.4.1 Phương pháp thử hoạt tính kháng sinh: 24 2.4.2 Phương pháp thử hoạt tính chống oxy hóa thu dọn gốc tự DPPH 25 2.4.3 Phương pháp thử độc tính tế bào 26 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 28 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Kết đánh giá hoạt tính sinh học Trung quân (Ancistrocladus cochinchinensis) 29 3.1.1 Đánh giá hoạt tính kháng sinh hợp chất phân lập từ loài Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis 29 3.1.2 Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa hợp chất phân lập từ loài Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis 37 3.1.3 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập từ loài Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis 38 KẾT LUẬN, KIẾN NGHỊ 45 Kết luận 45 Kiến nghị 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Ký hiệu Thuật ngữ ADN Axit Deoxyribo Nucleotit DMSO Dimethylsulfoxide DPPH 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl LU Human lung carcinoma Ung thư phổi IC50 Inhibitory concentration 50% Nồng độ ức chế 50% cá thể SRB Sulforhodamine B OD Optical Density SA Scavenging Activities SC Scavenging Concentration at 50% HL-60 Human promyelocytic leukima SK-MEL-2 Human skin caner TCA Mật độ quang học Khả trung hịa gốc oxy hóa tự Nồng độ trung hòa 50% gốc tự Tế bào ung thư bạch cầu Tế bào ung thư da Trichloroacetic acid Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn vi DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Một số loài thực vật có hoạt tính kháng vi sinh vật Bảng 1.2 Một số hợp chất chống oxy hóa từ thực vật 11 Bảng 1.3 Một số hợp chất có khả gây độc tế bào từ thực vật 13 Bảng 2.1 Tên gọi, ký hiệu hợp chất nghiên cứu 20 Bảng 2.2 Danh sách đặc điểm lồi vi sinh vật thử nghiệm 23 Bảng 3.1 Khả ức chế vi khuẩn E.coli hợp chất phân lập 30 Bảng 3.2 Khả ức chế vi khuẩn Staphylococcus aureus 31 Bảng 3.3 Khả ức chế vi khuẩn Salmonella tiphymurium 32 Bảng 3.4 Khả ức chế nấm Candida albicans 35 Bảng 3.5 Khả ức chế nấm A fumigatus 36 Bảng 3.6 Khả chống oxy hóa hợp chất thử nghiệm 37 Bảng 3.7 Hoạt tính ức chế dòng tế bào ung thư LU-1 39 Bảng 3.8 Hoạt tính ức chế dòng tế bào ung thư HL-60 40 Bảng 3.9 Hoạt tính ức chế dịng tế bào ung thư SK-MEL-2 41 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn vii DANH MỤC HÌNH, BIỂU ĐỒ HÌNH Hình 1.1 Cây trung quân (Ancistrocladus cochinchinensis) 14 Hình 1.2 Cấu trúc hóa học số naphthylisoquinonline alkaloids tách từ Ancistrocladus 15 Hình 1.3 Các Napthylisoquinoline alkaloid tách chiết từ Cây Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis 18 Hình 2.1 Mẫu dùng để phân lập hợp chất nghiên cứu 19 Hình 2.2 Mơ hình cấu trúc hóa học hợp chất nghiên cứu 21 Hình 3.1 Hoạt tính ức chế hợp chất AC1 (M1), AC4 (M4) loài vi khuẩn 33 BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Giá trị SC50 hợp chất thử nghiệm đối chứng 38 Biểu đồ 3.2: Phần trăm tế bào khối u bị ức chế nồng độ: 20µg/ml chất thử 10µg/ml đối chứng dương Ellipticine 41 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Từ xa xưa người biết sử dụng số loại thực vật để làm thực phẩm làm thuốc chữa trị bệnh tật, vết thương Ngày nay, với phát triển kỹ thuật tách chiết hợp chất thiên nhiên, người có xu hướng sử dụng sản phẩm từ thiên nhiên lĩnh vực chăm sóc sức khỏe Việt Nam nước có hệ thực vật phong phú đa dạng Tổng số loài thực vật ghi nhận Việt Nam khoảng 10.500 lồi tổng số 12.000 lồi theo ước tính Trong số đó, nguồn tài nguyên làm thuốc chiếm khoảng 30% Kết điều tra nguồn tài nguyên thuốc Viện Dược liệu (2006) cho biết Việt Nam có 3.948 lồi thực vật bậc cao, bậc thấp nấm lớn dùng làm thuốc Trong thời gian qua, nước ta có 3.000 loại thuốc có nguồn gốc từ thảo dược cấp số đăng ký, chiếm gần 1/3 tổng số thuốc cấp số đăng ký lưu hành hàng năm Như vậy, nhu cầu sử dụng dược liệu chế xuất thuốc nước lớn Không vậy, việc sử dụng dược phẩm có nguồn gốc thiên nhiên nước giới quan tâm Trong có lồi thuộc chi Trung qn (Ancistrocladus) nhiều nhà nghiên cứu giới quan tâm thành phần hóa học đặc trưng tác dụng sinh học chúng Chi Trung quân phân bố phổ biến vùng nhiệt đới châu Á Tây Phi, người ta tìm thấy lồi thực vật số hợp chất có alkaloid giá trị naphthoquinon có độc tính tế bào, tác dụng số tế bào ung thư, kháng vi khuẩn kháng nấm Theo y học cổ truyền, Trung quân có vị đắng, chát, tính bình, khơng độc, có cơng hành huyết, hóa ứ, trừ phong thấp, mạnh gân xương, giải nhiệt, trục ứ huyết, trừ đờm, giải độc Thường dùng trị đau lưng, đau xương khớp, phong thấp, chân tay tê mỏi; trường hợp phụ nữ sau đẻ, người mệt mỏi, đau nhức toàn thân, yếu sức [1] Ngồi ra, Trung qn Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn dùng trị đau bụng lỵ sốt rét Loài thực vật thuộc họ Trung quân Ancistrocladaceae mọc khắp khu rừng vùng Đông Dương, gặp Trung Quốc (đảo Hải Nam) Ấn Độ, mọc hoang miền rừng núi khắp nước ta Đồng Nai, Bình Dương, Bình Phước, Bà Rịa Vũng Tàu [25] Tuy nhiên Việt Nam nghiên cứu sở khoa học để sử dụng chi Trung quân làm thuốc hạn chế, chưa có nhiều cơng trình khoa học đánh giá đầy đủ hoạt tính hợp chất tách chiết từ chi Trung quân Nhằm tạo tiền đề cho việc tìm kiếm hợp chất có giá trị y dược học chi Trung quân Việt Nam, tiến hành nghiên cứu đề tài “Đánh giá hoạt tính sinh học số hợp chất phân lập từ loài Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis Việt Nam” Mục tiêu đề tài Khảo sát hoạt tính sinh học (kháng vi sinh vật, chống oxy hóa, gây độc tế bào) số hợp chất phân lập từ loài A cochinchinensis Việt Nam Nội dung nghiên cứu - Đánh giá hoạt tính kháng vi sinh vật (vi khuẩn nấm) hợp phân lập từ loài A.cochinchinensis; - Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa hợp chất phân lập từ lồi A.cochinchinensis; - Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập từ loài A.cochinchinensis Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Hợp chất thứ cấp có hoạt tính sinh học từ thực vật 1.1.1 Khái niệm Hợp chất thiên nhiên (natural product) chất hóa học sản sinh thể sống có hoạt tính sinh học, dược học định Các chất thứ cấp khơng có chức q trình sinh trưởng, phát triển thực vật mà sản xuất kết thích nghi sinh vật với môi trường xung quanh hoạt động chế bảo vệ chống lại kẻ thù để đảm bảo tồn thân sinh vật [9] Trong số loài sinh vật, thực vật đánh giá nguồn cung cấp hợp chất có hoạt tính sinh học đa dạng phong phú Theo ước tính sơ bộ, có khoảng 200 nghìn lồi thực vật tổng hợp hợp chất thứ cấp vòng đời chúng.Với độ đa dạng cao cấu trúc hóa học, hợp chất thứ cấp thực vật đóng vai trị vơ quan trọng việc tìm kiếm chất có tiềm y dược phục vụ bảo vệ sức khỏe cho người 1.1.2 Phân loại Các hợp chất có hoạt tính sinh học thường phân loại dựa vào cấu trúc hóa học, đường sinh tổng hợp nhóm hợp chất hoạt tính chúng Dựa vào tiêu chí đó, Bernhoft (2010) phân nhóm số hợp chất có dược tính từ thực vật sau: Nhóm Glycoside: nhóm hợp chất có cấu trúc gồm nhiều nhóm saccharide (nhóm đường) Các nhóm hợp chất gồm cardiac glycoside, cyanogenic glycoside, saponin anthraquinone glycoside [14] Một hợp chất tiếng thuộc nhóm ginseng saponin phân lập từ loài nhân sâm Panax Ginseng C A Meyer Panax quinquefolius Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Nhóm Flavonoid Proanthocyanidin: Flavonid nhóm hợp chất có cấu trúc vịng mạch vịng trung tâm, oligomer Flavonoid tạo thành Proanthocyanidin Flavonid thành phần sắc tố phổ biến hầu hết thực vật bậc cao Hoạt tính trội hợp chất Flavonoid ngăn chặn hình thành gốc oxy hóa tự do, từ làm giảm q trình oxy hóa [14] Có thể kể đến hợp chất rutin thuộc nhóm Flavonid tách chiết từ nhiều loại thực vật họ cam chanh Citrus có tác dụng bảo vệ thành mạch [24] Nhóm Tanin: hợp chất polyphenol có thực vật có khả tạo liên kết bền vững với proteinvà hợp chất hữu cao phân tử khác amino axit alkaloid Tanin kết hợp với protein tạo thành màng niêm mạc nên thường dùng làm thuốc săn da Tanin có tác dụng kháng khuẩn dùng làm thuốc súc miệng viêm niêm mạc miệng chỗ loét nằm lâu chữa viêm ruột, tiêu chảy Tanin kết tủa với kim loại nặng alkaloid thường dùng để chữa ngộ độc đường tiêu hố [14] Nhóm Terpenoid: Terpenoid, gọi isoprenoid, nhóm hợp chất tự nhiên lớn đa dạng, có nguồn gốc từ đơn vị isoprene (năm carbon) lắp ráp biến đổi theo hàng ngàn cách khác Hầu hết cấu trúc đa vòng khác khơng nhóm chức mà cịn khung carbon chúng [14] Terpenoid nhóm hợp chất có cấu trúc đa dạng có số lượng lớn sử dụng rộng rãi từ công nghiệp thực phẩm đồ uống đến cơng nghiệp dược.Có thể kể đến ví dụ trội ứng dụng hợp chất terpenoid menthol chiết xuất từ bạc hà, hay artemisinin thành phần thuốc chống sốt rét taxol có tác dụng diệt tế bào ung thư người [15] Nhóm Resin: có cấu trúc hóa học gồm lipid kết hợp với nhóm có khả tan nước Các hợp chất thường tồn dạng lỏng, có đặc tính dính nên thường có đặc tính ức chế vi sinh vật, làm lành vết thương [14] Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Nhóm Lignan: hợp chất có khung 18 carbon hình thành từ kết hợp nhóm phenylpropanoid nhóm chức khác Nhóm lignans thực vật thường có hoạt tính ức chế vi sinh vật, chống oxy hóa [14] Nhóm Alkaloid: nhóm hợp chất chứa Nitơ dị vịng, có hàm lượng thấp thực vật Các hợp chất alkaloid gồm nhiều phân nhóm như: trophane alkaloid, pyrrolizidine alkaloid, isoquinoline alkaloid, methylxanthine alkaloid, pseudoalkaloid Hầu hết hợp chất thuộc nhóm alkaloid có hoạt tính mạnh, thường lên hệ thần kinh gây độc tế bào nên sử dụng làm thuốc giảm đau tiêu diệt khối u [14] Nhóm Furocoumarine naphthodianthrone: hợp chất nhạy sáng thực vật, số hợp chất nhóm tách từ thực vật sử dụng để điều chế thuốc chống trầm cảm [14] 1.1.3 Những nghiên cứu hợp chất thiên nhiên từ thực vật giới Theo Tổ chức y tế giới (WHO), có đến 80% dân số giới sử dụng thảo dược làm thuốc để chữa bệnh chăm sóc sức khỏe Thống kê cho thấy, khoảng 100 hợp chất từ 90 lồi xem thuốc quan trọng sử dụng nhiều nước, với khoảng 70% số có nguồn gốc từ loài thực vật đươc dùng y học truyền thống [7] Từ lâu, vỏ canh kina dùng làm thuốc trị sốt rét Nam Mỹ Từ năm 1630, người ta biết dùng vỏ để trị sốt từ năm 1677 sử dụng Luân Đôn (Anh) với tên “Vỏ Peru” Từ mọc hoang, năm 1792, nhà khoa học tổ chức trồng trọt canh kina nhiều vùng khác giới, Angeri, Peru, Java sau Malaysia, Việt Nam Châu Phi (Camorun, Ghine) Đây thuốc với loại alkaloid quinin quinidin Hóa học hợp chất thiên nhiên thực bắt đầu cơng trình Serturner người phân lập morphine, hợp chất nhóm alkaloid từ Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn thuốc phiện (Papaver somniferum) vào năm 1803 Năm 1817, Emetine phân lập từ Ipecacuanha [41] Một số alkaloid khác strychnine (Strychnos nuxvomica) [50], quinine (Cinchona officinalis) [23], colchinne (Colchicum autumnale), atropin (Atropa belladonna) [9], papaverine (Papaver somniferum) [44],…cũng phân lập Vào năm 1876, Maclagan giới thiệu salicin từ dịch chiết dương liễu (Spiraea ulmaria) [42] Đến năm 1971, Wani cộng tìm diterpene amide có khả chống ung thư gọi “taxol” chiết từ thông đỏ Pacific (Taxus brevifolia) [53] Đến năm 1983, taxol Cục quản lý Dược phẩm Thực phẩm Hoa Kỳ (FDA) đồng ý đưa vào thử nghiệm giai đoạn I điều trị cho ung thư buồng trứng Sau đó, FDA cho phép sử dụng taxol điều trị trường hợp ung thư buồng trứng ung thư vú Ngoài ra, taxol có tác dụng bệnh nhân có khối u ác tính, ung thư phổi dạng u bướu khác xem chất nhóm hóa trị liệu ung thư [26] Tuy nhiên, sử dụng taxol điều trị bị hạn chế tách chiết lượng từ vỏ thơng đỏ tự nhiên Lớp vỏ mỏng chứa khoảng 0,001% taxol tính theo khối lượng khô Ở 100 năm tuổi trung bình thu 3kg vỏ (khoảng 300mg taxol), lượng ứng với liều toàn đợt điều trị ung thư Sở dĩ nguồn taxol khan tự nhiên sinh trưởng chậm [26] Do đó, cần có nguồn khác để thay đáp ứng nhu cầu ngày tăng y học Do vậy, việc nuôi cấy tế bào loài Taxus xem phương pháp tối ưu để cung cấp nguồn taxol ổn định, ứng dụng rộng rãi tạo giá trị lớn Hiện nay, nhiều nghiên cứu hợp chất thiên nhiên dùng y học tiếp tục thực Tuy nhiên để tạo lượng lớn chất phương pháp chủ yếu nuôi cấy tế bào để thu sinh khối tiến hành tách chiết Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 1.1.4 Tình hình nghiên cứu hợp chất thiên nhiên từ thực vật Việt Nam Ở Việt Nam, công nghệ tách chiết hợp chất thứ cấp chủ yếu gắn liền với công nghệ nuôi cấy tế bào phát triển từ năm 1970 Đến đạt nhiều thành tựu đáng kể quy trình sản xuất sâm Ngọc Linh Học viện Quân Y khai thác Sâm Ngọc Linh loại sâm thứ 20 tìm thấy giới, có tác dụng phịng chống ung thư, bảo vệ tế bào gan, kích thích hệ miễn dịch, chống stress trầm cảm, chống oxy hóa, lão hóa Cơng trình Học viện Qn Y hồn thành quy trình ni cấy tế bào rễ củ sâm, quy trình định tính định lượng thành phần ginsenoid sinh khối sâm Ngọc Linh sắc ký lỏng cao áp (HPLC) Phương pháp sản xuất sinh khối tế bào rễ sâm Ngọc Linh cấp sáng chế số 7523 ngày 11/2/2009 Việt Nam [58] Từ kinh nghiệm y học cổ truyền sử dụng phận cà độc dược để điều trị bệnh đường hô hấp, tiêu hóa giảm đau, nhóm tác giả Đặng Thị Hồng Vân, Phan Quốc Kinh, Nguyễn Văn Long chiết scopolamin thuộc nhóm alkaloid chủ yếu lồi thực vật Tiếp đó, Viện dược liệu chiết hyoscyamin atropine Atropine dùng điều trị đau thắt đường tiêu hóa tiết niệu [6] Berberin alkaloid Hồng liên gai (Berberis wallichiana D.C), Hoàng liên chân gà (Coptis teeta Wall), Hoàng bá (Phellodendron amurense) mọc hoang trồng quanh dãy Hồng Liên Sơn) Berberin loại thuốc có hoạt tính kháng sinh, chống viêm Gần đây, nhà y học phương tây lại ý đến hoạt tính sinh học Berberin Những nghiên cứu xác định berberin có tác dụng chống lại nhiều loại vi khuẩn Gram (+), Gram (-) vi khuẩn kháng acid Bên cạnh cịn có tác dụng chống lại số loại nấm men số động vật nguyên sinh Ở nước ta, từ năm 1972 Phan Quốc Kinh Đặng Thị Hồng Vân (Trường Đại học Dược Hà Nội) nghiên cứu điều chế Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn berberin từ hoàng liên gai, hoàng bá để góp phần chủ yếu dập tắt dịch lỵ thời gian Sau năm 1975 nhiều nơi sản xuất berberin từ vàng đắng để dùng nước xuất [6] Việt Nam triển khai dự án nuôi cấy chiết xuất taxol từ thơng đỏ Lâm Đồng Ngồi cịn có “Nghiên cứu sản xuất arteminisin dùng kỹ thuật nuôi cấy tế bào từ hao hoa vàng” Viện Sinh học Nhiệt đới nghị định thư hợp tác với Malaysia (2007-2010) hay đại học Huế “Nghiên cứu khả tích lũy glycoalkaloid mơ sẹo cà gai leo Solanum hainanense” Tuy nhiên, dự án nói cịn quy mơ phịng thí nghiệm [6] Ngoài ra, hai hợp chất flavonoid isoquercitrin vitexin phân lập từ phân đoạn etyl acetat chum ngây thể khả ức chế chủng vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus với nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) 50 µg/ml [2] Hiện có nhiều cơng trình nghiên cứu tác dụng sinh học hợp chất tách chiết từ thực vật có sản phẩm thuốc thực phẩm chức sản xuất tiêu thụ có nguồn gốc từ thực vật Đây lĩnh vực có nhiều triển vọng dựa nguồn tài nguyên thực vật phong phú Việt Nam 1.2 Một số hoạt tính sinh học thực vật 1.2.1 Hoạt tính kháng vi sinh vật 1.2.1.1 Hợp chất kháng vi sinh vật Là hợp chất hữu có tác dụng tiêu diệt hay kìm hãm phát triển vi sinh vật Các chất kháng khuẩn thường có tác dụng đặc hiệu lên loài vi sinh vật khác nhau, với nồng độ hoạt tính khác thường nhỏ Những tính chất thuộc nhiều cấu trúc hóa học khác alkaloid, tanin, flavonoid, tinh dầu…[43] Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Các chất kháng khuẩn ức chế, tiêu diệt vi sinh vật theo số chế chủ yếu như: ức chế trình tổng hợp vách vi khuẩn, tác động lên trình tổng hợp vách nên làm cho vi khuẩn dễ bị đại thực bào phá vỡ thay đổi áp suất thẩm thấu; ức chế chức màng tế bào làm chức màng làm cho phân tử có khối lượng lớn ion bị ngồi; ức chế trình sinh tổng hợp protein ức chế trình tổng hợp acid nucleic [55] 1.2.1.2 Một số chất có hoạt tính kháng vi sinh vật từ nguồn gốc thực vật Thực vật khơng có hệ miễn dịch chuyên biệt nên trình sinh trưởng phát triển sản sinh nhiều hợp chất có khả tiêu diệt hay ức chế vi sinh vật nấm bệnh xâm hại Có thể kể nhiều hợp chất có hoạt tính kháng khuẩn tốt nhóm hợp chất terpenoid từ thực vật thuộc chi nghệ, xa nhân; hợp chất flavonid từ trà xanh hay alkaloid tỏi, mao lương, vỏ bưởi,…[43] (Bảng 1.1) Bảng 1.1 Một số loài thực vật có hoạt tính kháng vi sinh vật Tên thơng thường Cỏ linh lăng STT Tỏi đen Mao lương Trà xanh Bưởi Củ hành 10 Tên khoa học Hợp chất Nhóm Hoạt tính kháng Alfalfa - - Piper nigrum Poiperine Alkaloid Vi khuẩn gram dương Nấm, Lactobacillus, Micrococcus, E.coli Vi khuẩn, Gardia duodenale , trypanosomes Nấm, vi khuẩn, virus, Shigella Nấm Vi khuẩn, nấm Hydrastis Berberine, canadensis hydrastine Camellia sinensis catechin Citrus Paradisa Allium cepa Allicin alkaloids flavonoid terpenoid sulfoxide Hỗn hợp terpenoid, Đu đủ Carica papaya Mủ Vi khuẩn, nấm, virus axit hữu cơ, alkaloid Nghệ Curcuma longa Curcumin terpenoid Vi khuẩn, động vật nguyên sinh Anthemic Phenolic M.tuberculosis, S typhimurium, Hoa cúc la mã Matricaria acid acid S.aureus, giun Sán Xạ hương Thymus vulgaris Caffeic acid Terpenoid Virus, nấm, vi khuẩn Nguồn: Marjorie Murphy Cowan (1999) [43] Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 10 1.2.2 Hoạt tính chống oxy hóa 1.2.2.1 Hợp chất chống oxy hóa Là hợp chất có khả chống lại hay làm chậm phá hủy tế bào gốc tự có hại có thể [56] Oxy xem nguyên tố quan trọng giúp người trì sống, chúng tham gia vào q trình hơ hấp tế bào, sản sinh lượng cung cấp cho hoạt động sống người Oxy vào thể tham gia nhiều trình sinh hóa q trình oxy tạo hợp chất trung gian gọi gốc tự Các gốc tự có nguồn gốc oxy có hoạt tính cao, bền vững gọi chung gốc dạng oxy hoạt động (ROS: Reactive oxygen species) [56], [57] Các dạng oxy hoạt động dễ dàng phản ứng với đại phân tử protein, lipid, DNA, … gây rối loạn trình sinh hóa thể Đồng thời, phân tử sống bị gốc tự công, điện tử trở thành gốc tự mới, tiếp tục phản ứng với phân tử khác tạo thành chuỗi phản ứng thường gọi phản ứng dây chuyền, gây biến đổi có tác hại thể [56] Theo nhà khoa học gốc tự thủ phạm gây tới 60 bệnh, đáng kể gồm có: bệnh xơ vữa động mạch, ung thư, Alzheimer, Parkinson, đục thủy tinh thể, bệnh tiểu đường, cao huyết áp không nguyên nhân, xơ gan [57] Các nghiên cứu phát gốc dạng oxy hóa hoạt động (ROS) loại bỏ chất chống oxy hóa tự nhiên có sẵn thể enzyme superoxid dismutase (SOD), enzyme glutathion peroxidase (GSP-Px), enzyme catalase (CAT)… để tạo cân dạng oxy hoạt động dạng chống oxy hóa thể người hay gọi cân nội mô (homeostasis) Do ảnh hưởng nhiều yếu tố tác động từ bên hay bên thể, làm cân di chuyển theo hướng gia tăng dạng oxy hoạt động Trạng thái sinh lý gọi stress oxy hóa (oxidative stress) Hay nói cách khác, stress oxy hóa rối loạn cân chất chống oxy hóa chất oxy hóa theo hướng tạo nhiều chất oxy hóa [39], [57] Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 11 1.2.2.2 Một số hợp chất chống oxy hóa có nguồn gốc thực vật Thực vật nguồn cung cấp lượng lớn chất chống oxy hóa Vitamin A, C hay E chất chống oxy hóa điển hình tìm thấy nhiều chi thực vật khác giới Các hợp carotene, carotenoid, flavonoid có hoạt tính chống oxy hóa mạnh tìm thấy nhiều thực vật có màu đỏ cà chua, cà rốt…[30] Gupta cộng tổng kết số loài thực vật hợp chất chống oxy hóa điển sau (bảng 1.2) Bảng 1.2 Một số hợp chất chống oxy hóa từ thực vật STT Tên thông thường Nghệ Tơ hồng Cà rốt C am thảo Xoài Mướp đắng húng quế Tầm bóp đen Tên khoa học Hợp chất Hoạt tính Curcumin, eugenol, β- Làm máu, điều trị sốt rét, rối pinene, camphene, β- loạn tiêu hóa liên quan đến dày, sitpsterol kháng nấm, diệt côn trùng Flavonoids, dulcitol, Long đờm, diệt giun sán, làm Cuscuta bergenin, coumarins, thuốc xổ, lợi tiểu, chữa vàng da, reflexa glycosides, lactone bệnh lý mật Chữa viêm phổi, phế quản, đau Carotens, carotenoids, ngực, nhiễm trùng đường niệu, Daucus carota glycosides, flavonoids, bệnh trĩ, bệnh phong, vàng da, đường khối u Glycyrhizin, flavonoids, Lợi tiểu, điều kinh, chữa hen, Glycyrrhiza liquiritin, isoliquiritin, viêm phổi phế quản, viêm màng glabra rhamnoliquiritin, 2- kết cấp tính, loét đường tiêu methylisoflavones hóa, lành vết thương Cyanogenetic glycosides, Chữa lỵ, viêm phổi, nhiễm trùng Mangifera polyphenols, vitamin A, đường niệu, xuất huyết tử cung, indica C, β-sitosterol, quercetin, phổi, ruột ellagic acid, gallic acid Rễ giúp nhuận tràng, hạ sốt, Mormodica Stearic acid, triterpene, chữa viêm phổi, bệnh tả, vết loét chanratia glycosides Quả có tác dụng giảm đầy hơi, tiêu hóa tốt, trị tiểu đường Long đờm, chữa viêm phổi, Ocimum Dầu bay hơi, terpenoids, số bệnh da, tiêu hóa tốt, rối sanctum eugenol, thymol, estragole loạn tiêu hóa trẻ em, đau tai Solanum Polyphenolic, Lợi tiểu, nhuận tràng, bệnh ngủ, nigrum flavonoids, steroids chữa kiết lỵ, bảo vệ gan Curcuma domestica Nguồn: Gupta V.K.et al (2006) Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ... 3.1.1 Đánh giá hoạt tính kháng sinh hợp chất phân lập từ loài Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis 29 3.1.2 Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa hợp chất phân lập từ loài Trung quân Ancistrocladus. .. kiếm hợp chất có giá trị y dược học chi Trung quân Việt Nam, tiến hành nghiên cứu đề tài ? ?Đánh giá hoạt tính sinh học số hợp chất phân lập từ loài Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis Việt Nam? ??... nấm) hợp phân lập từ loài A .cochinchinensis; - Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa hợp chất phân lập từ loài A .cochinchinensis; - Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập từ lồi A.cochinchinensis