Nghiên cứu quy quy trình trích ly flavonoid tổng từ lá đỏ ngọn cratoxylum prunifolium và đánh giá hoạt tính sinh học của dịch chiết

N QU N L KHU N NG NGHI P Ứ NG NGH O TP HCM Ể BÁO CÁO NGHI M THU NGHIÊN CỨ Ừ Ỏ NGỌN (Cratoxylum prunifolium) VÀ Ọ HOẠT Ủ KS Nguyễn Hoàng Thảo Ly Thành ph H h Minh, th ng 01/2017 BAN QU N LÝ KHU NÔNG NGHI P CÔNG NGH CAO TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG NGHI P CÔNG NGH CAO BÁO CÁO NGHI M THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đ ng nghiệm thu) NGHIÊN CỨ Ừ Ỏ NGỌN (Cratoxylum prunifolium) Ọ HOẠ Ơ Ủ TRÌ (Ký tên, đóng dấu xác nhận) Thành ph H Ủ CHỦ NHI Ề TÀI (Ký tên) h Minh, th ng 01/2017 Ó ề t : N n u c u quy tr n tr (Cratoxylum prunifolium) v nt t n t Ắ n ến t n n s t p ly l vono oạt t n s n M tổn t ọ ị n n l ết” ởn t un yl x o q trình trích ly flavonoid tổng t l Tiến hành thí nghi m yếu t ản ỏ ến q trình trích ly n nồn ịn ỏ ộ dung môi ethanol (70, 80, 90%), tỷ l dung môi: nguyên li u (30/1, 50/1, 70/1 v/w), nhi t ộ (60, 70, 80oC) thời gian trích ly (30, 60, 90 phút) T ến t n s n p n p p ềm t (CCD) tìm giá trị t p n (RSM) – p u c a yếu t : nồn n t u n ữn n án cấu trúc có tâm ộ dung môi (79%), tỷ l nguyên li u: dung môi (1:64 w/v), nhi t ộ trích ly (78oC), thời gian trích ly (68 phút) cho ml ng flavonoid tổng c ại theo mơ hình 2,8063% Thử nghi m trích ly với ều ki n c a mơ hình kết t u Dịch chiết l ch ml ng flavonoid tổn ỏ có hoạt tính kháng oxy hóa: năn l c khử nồn µg/ml (0,1960), hoạt tính kháng g c t DPPH nồn hoạt tính kháng hydroxyl t nồn chiết l ạt 2,7920% ộ 120 ộ 140 µg/ml (75,679%) ộ 120 µg/ml (44,138%) Ngồi dịch ỏ cịn có khả năn k n nấm Aspergillus sp., Botrytis sp nồn 75 ppm v ppm ppm (55%) Nồn i với Penicillium sp (100%), Rhizopus sp nồn ộ c chế t i thiểu MI ộ 1000 i với ch ng nấm Aspergillus sp., Penicillium sp., Rhizopus sp Botrytis sp 1000 ppm BM20-QT.QLKH Trang ộ Ụ Ụ Trang TÓM TẮT MỤC LỤ ………… NH S H CHỮ VIẾT TẮT DANH SÁCH B NG DANH SÁCH HÌNH TH NG TIN Ề T I MỞ ẦU n : TỔNG QUAN T I LI U 1.1 Tổng quan ây ỏ Giới thi u ây ỏ 1.1.1 1.1.2 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học 1.2 Những nghiên c u tron v n o n ớc ỏ 10 1.3 Gớ t u p n p p tr ly p ất t n uy n l u t vật 13 1.3.1 Tr ly n p n p p n âm 14 1.3.2 Tr ly n p n p p Sox l t 14 1.3.3 Trích ly với s hỗ tr sóng c c ngắn (MAE) 15 1.3.4 Trích ly b ng sóng siêu âm (UAE) 16 1.3.5 Trích ly b ng chất lỏng siêu tới hạn (SFE) 16 Vi sinh vật ây 1.4 n ỏng rau 21 : N I UNG NGHI N ỨU 25 nv 2.1 Thờ ị ểm nghiên c u 25 2.2 Vật li u nghiên c u 25 t 2.2.2 ng nghiên c u 25 Hóa chất thí nghi m 26 2.2.3 Thiết bị thí nghi m 26 2.3 Nội dung nghiên c u 26 2.3.1 Nội dung 1: T BM20-QT.QLKH Trang u qu tr n tr ly l vono t l ỏ 27 2.3.2 Nội dung 2: T n T n m oạt t n s n m :T ửn ọ ị ết t l m oạt t n k n oxy ị ỏ n ọn 30 ết t l ỏ 30 T tron n m : T nghi m hoạt tính kháng vi sinh vật ây ều ki n in vitro c a dịch chiết t l P n 3.1 T ỏng rau ỏ 32 n p p t o õ s tiêu 33 : KẾT QU VÀ TH O LUẬN 35 u qu tr n tr ly l vono 3.2 Hoạt tính sinh học c a dịch chiết t l t l ỏ 40 3.2.1 Hoạt tính kháng oxy hóa c a dịch chiết t l 3.2.2 Hoạt tính kháng vi sinh vật ây dịch chiết l ỏ 35 ỏ 40 ỏng rau tron ều ki n in vitro c a ỏ 44 n 4: KẾT LUẬN V Ề NGHỊ 46 TÀI LI U THAM KH O 48 PHỤ LỤC 52 X L S LI U 53 BM20-QT.QLKH Trang Ữ Ắ Ắ Ữ ctv Cộng tác viên DPPH 1,1- diphenyl - – picrylhydrazyl IC50 Inhibitory concentration 50% - Nồn SFE Supercritical fluid extraction - Trích ly b ng chất lỏng siêu tới hạn MAE UAE CCD ộ c chế 50% Microwave assisted extraction - Trích ly với s hỗ tr c a sóng c c ngắn Ultrasound assised extraction - Trích ly với s hỗ tr c a sóng siêu âm Central composite design - Thiết kế cấu trúc có tâm BM20-QT.QLKH Trang BẢ Tựa ả g Bảng 1.1 Phân loại khoa học c Trang ây ỏ ểm c a Cratoxylum prunifolium 1.2 1.3 Vi sinh vật ây 2.1 Khoảng giá trị thích h p cho yếu t khảo sát 26 2.2 Ma trận nghi m th c thí nghi m 26 3.1 3.2 ỏng rau sau thu hoạch Mã hóa ma trận quy hoạch th c nghi m v t u H s ản ến hàm l ởng c a yếu t thí nghi m mơ hình hồi qui ng flavonoid tổn H ml 3.4 Năn l c khử c a dịch chiết l 3.6 3.7 3.8 ng flavonoid tổng c 3.3 3.5 ml 21 c trích ly t l ng flavonoid tổng trích ly t l ỏ ỏ ều ki n d o n ỏ vitamin C ỏ Giá trị IC50 kháng g c t DPPH c a dịch chiết l ỏ vitamin C vitamin C Hoạt tính kháng g c hydroxyl t c a dịch chiết l ỏ vitamin C Hoạt tính kháng nấm nồn ỏ BM20-QT.QLKH Trang 34 35 37 DPPH c a dịch chiết l Hoạt tính kháng g c t 32 ộ c chế t i thiểu MIC c a dịch chiết 39 39 40 41 DANH SÁCH HÌNH Tự h h Hình ây ỏ (Cratoxylum prunifolium) 1.1 2.1 L ỏ ã 2.2 S nghiên c u trích ly dịch chiết l BM20-QT.QLKH Trang Trang c sấy khô 23 ỏ d kiến 24 Ề T n ề t : N n c u quy tr n tr (Cratoxylum prunifolium) v n ly l vono oạt t n s n ọ ị tổn t l ỏ ết” Ch nhi m ề t : KS N uyễn Hồng Thảo Ly qu n trì: Trung tâm Nghiên c u Phát triển Nông nghi p n n cao Thời gian th c hi n: 1/2016 – 12/2016 Kn p c t: 190.436.000 ồng M c tiêu: Nghiên c u quy tr n (Cratoxylum prunifolium) v d n p ất s n ọ tron n tr oạt t n s n ịch chiết t l Sản phẩm c a ề t : Quy trình tr ly ị Báo cáo khoa học BM20-QT.QLKH Trang ly l vono ết t l ỏ n ọn ọ ỏ v o tổn ị t ết, l ỏ ớng tới ng sản p ẩm t p ẩm Ở Ầ ây ỏ có tên khoa học Cratoxylum prunifolium Kurtz, xuất hi n nhiều vùng nhi t v n thấp, trun ời dân gọi ngành ngạn , v n l , ú l tr u N ân nt khỏ k ờn ỏ thảo ùn u yếu ho s u k sn Tron ều ki n o tron u ẩy, bổ tr h thần k n , tăn k ả năn c bi t nhóm chất flavonoid có tác d ng tri t t ể, ch ng oxy hóa, bảo v tế ộng mạch, tai biến mạch máu não, tổn t ra, dịch chiết t l n , o n n ây ỏ có ch a nhóm chất k ả năn t ú hình thành phản xạ x vữ ồi núi ây ỏ làm thu c bổ, kích thích tiêu hóa, ph c hồi s c l vono , s pon n, t nn n…, tiêu g c t c quý mọc t nhiên vùn n ỏ có tác d n n ăn n o, n ăn n o n uy c xạ, thối hóa gan Ngồi a r i loạn n m u, úp l u t n tuần hoàn máu Hi n n y, ã p ần oạt t n s n n n ,k o l … n ú n un t M m ,k o t n ún ây r nt yt ế hi n v ớng tới ng d n sản p ẩm t p ẩm BM20-QT.QLKH Trang t ất tổn trị ều trị s n n n ữn ún ,k n p p ần l m o ún ảm n uy ất k n oxy p n m ạn ết t n n u quy tr n tr n p m t n p ẩm l m tăn n mon mu n t u n ận o sử (Cratoxylum prunifolium) v , t u n ận tăn k ả năn ulp , … n k ả năn n u p ân t ất k n oxy p ẩm ọ n yn y Vì thế, ề tài N n n t u n ận ảo quản t on n vật n m ổ sun v o t n ảo quản n ất l v , t m mạ , lão k n tr n n ọ t t t n tron n uồn p n ều ly l vono oạt t n s n ất s n ọ ọ tổn t ị dịch chiết t l l ỏ ết” c th c ỏ v o Level Mean 60 D 40 27.339667 E 20 22.380667 F 16.103667 Oneway Analysis of Hydroxyl tự - Vitamin C By Nồ g độ (ppm) Summary of Fit Rsquare 0.998127 Adj Rsquare 0.997262 Root Mean Square Error 0.227825 Mean of Response 65.0598 Observations (or Sum Wgts) 20 Analysis of Variance Source DF BM20-QT.QLKH Trang 76 Sum of Squares Mean Square F Ratio Prob > F Source DF Sum of Squares Mean Square F Ratio Prob > F 359.56899 59.9282 1154.590 F 17417.238 2902.87 4354.310 F 19895.238 3315.87 1071.282