Ứng dụng quy trình công nghệ sản xuất chế phẩm diterpen lacton chiết xuất từ cây xuyên tâm liên andrographis paniculata burm f nees trên quy mô sxcn và sử dụng chế phẩm diterpen lacton thay thế kháng sinh trong khẩu phần heo gà nuôi thịt

UBND TP HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ -ooo0ooo - BÁO CÁO NGHIỆM THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng nghiệm thu) Tên dự án Ứng dụng quy trình cơng nghệ sản xuất chế phẩm diterpen lacton chiết xuất từ Xuyên Tâm Liên (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees) quy mô sản xuất công nghiệp sử dụng chế phẩm diterpen lacton thay kháng sinh phần heo, gà nuôi thịt CHỦ NHIỆM DỰ ÁN CƠ QUAN QUẢN LÝ CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên, đóng dấu) (Ký tên, đóng dấu) TP HỒ CHÍ MINH, THÁNG 12/2015 BÁO CÁO NGHIỆM THU DỰ ÁN PHẦN MỞ ĐẦU Tên dƣ ̣ án: Ứng dụng quy trình cơng nghệ sản xuất chế phẩm diterpen lacton chiết xuất từ Xuyên Tâm Liên (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees) quy mô sản xuất công nghiệp sử dụng chế phẩm diterpen lacton thay kháng sinh phần heo, gà nuôi thịt Chủ nhiệm dƣ ̣ án: TS Vương Nam Trung PGS TS Trần Cơng Luận Cơ quan chủ trì: Phân Viện Chăn Nuôi Nam Bộ Thời gian thực đề tài: 30 tháng (từ tháng 5/2012 tới tháng 11/2014) Kinh phí đƣợc duyệt: 863.400.000 Kinh phí cấp: 450.000.000đ theo TB số: 44 /TB-SKHCN ngày 16/5/2012 330.000.000đ theo TB số: 13 /TB-SKHCN ngày 14/4/2015 Mục tiêu: 7.1 Mục tiêu chung Sản xuất thịt heo, gà an tồn khơng có tồn dư kháng sinh sản phẩm 7.2 Mục tiêu cụ thể  Hồn thiện quy trình sản xuất bột bán thành phẩm diterpen lacton 50% bột thành phẩm diterpen lacton 10  2% đảm bảo tính ổn định quy trình sản phẩm sản xuất từ quy trình  Hồn thiện tiêu chuẩn sở bột nguyên liệu, bột bán thành phẩm diterpen lacton 50%, bột thành phẩm diterpen lacton 10  2% xây dựng tiêu chuẩn sở chất mang  Sản xuất 1.000 kg chế phẩm bột thành phẩm diterpen lacton (bột DL) có tính ổn định cao để đưa vào sử dụng mơ hình chăn ni heo thịt, gà thịt  Xây dựng mơ hình sản xuất thịt heo, gà sử dụng bột thành phẩm diterpen lacton thay hoàn toàn kháng sinh phần Nội dung: 8.1 Hồn thiện cơng nghệ + Hồn thiện quy trình sản xuất bột bán thành phẩm diterpen lacton (50%) bột thành phẩm diterpen lacton (10  2%) quy mơ sản xuất cơng nghiệp + Hồn thiện tiêu chuẩn sở sản phẩm - Nguyên liệu Xuyên tâm liên - Bột bán thành phẩm diterpen lacton (50% diterpen lacton) - Bột thành phẩm diterpen lacton (10  2% diterpen lacton) + Hoàn thiện tiêu chuẩn sở chất mang (tinh bột mì/bột sắn) + Các nghiên cứu bổ sung: - Xác định độ ổn định sản phẩm: Đánh giá thay đổi cảm quan, độ ẩm hàm lượng diterpen lacton theo thời gian bảo quản năm điều kiện bình thường - Thí nghiệm in vitro: Đánh giá tác dụng kháng khuẩn chế phẩm diterpen lacton số chủng vi khuẩn có hại đường ruột đường hô hấp heo, gà nuôi công nghiệp (E.coli, coliform, Salmonella, Staphylococcus, Streptococcus) - Thí nghiệm in vivo: Đánh giá tác dụng tăng cường miễn dịch, sức đề kháng chế phẩm diterpen lacton heo, gà nuôi công nghiệp 8.2 Giải pháp công nghệ + Sản xuất bột thành phẩm diterpen lacton sử dụng chăn nuôi heo, gà cơng nghiệp  Sản xuất sản phẩm theo quy trình công nghiệp cải tiến  Bột diterpen lacton thành phẩm đạt tiêu chuẩn sở  Số lượng 1.000 kg sản phẩm (200 kg sử dụng cho thí nghiệm hồn thiện cơng nghệ 800 kg sử dụng cho mơ hình heo, gà) + Xây dựng mơ hình chăn ni heo thịt gà thịt thương phẩm quy mô công nghiệp sử dụng sản phẩm diterpen lacton thay kháng sinh phần  Quy mô 1.000 heo thịt  Quy mô 2.000 gà thịt lông màu Sản phẩm đề tài, dự án (theo hợp đồng ký) TT Công việc theo kế hoạch Cơng việc thực Mức độ hồn thành so với HĐ Hồn thiện quy trình sản xuất bột bán thành phẩm diterpen lacton (50%) bột thành phẩm diterpen lacton (10  1%) quy mô sản xuất cơng nghiệp Hồn thành 100 % Hồn thiện tiêu chuẩn sở sản phẩm Hoàn thành 100 % Nghiên cứu bổ sung: độ ổn định SP, thử nghiệm tác dụng in vitro in vivo Hoàn thành 100 % Hoàn thành (đã chiết xuất cao đậm đặc 50% Sản xuất 1.000 kg bột thành phẩm đủ SX 1000 kg thành diterpen lacton sử dụng mơ hình phẩm khơng SX chăn ni heo, gà công nghiệp thành phẩm thời điểm mà SX theo nhu cầu sử dụng cho mơ hình heo, gà) Hoàn thành báo cáo giám định Báo cáo tiến độ giai đoạn - Đã tiến hành 500 heo trại heo Chí Trung, HTX Tiên Phong, Củ Chi từ 11 Xây dựng mơ hình chăn nuôi heo thịt /12 /2013 tới 25 /3 thương phẩm quy mô công nghiệp sử /2014 dụng sản phẩm diterpen lacton thay - Đã tiến hành 500 kháng sinh phần heo trại heo Gia Phát, HTX Tiên Phong, Củ Chi từ 1/2/2015 tới 10/5/2015 Xây dựng mơ hình chăn ni gà thịt lơng màu quy mô công nghiệp sử dụng sản phẩm diterpen lacton thay kháng sinh phần Đã tiến hành 3.200 gà Phân Viện Chăn Nuôi Nam Bộ từ 15/2/2014 tới 15/5/2014 100 % Theo format sở KHCN TP HCM 100 % 100 % 10 02 báo đăng tạp chí 02 báo khoa học đăng Kỷ yếu Khoa học Trường Đại học Tây Đơ 2015 tạp chí khoa học công nghệ chăn nuôi số tháng 10/2015 100% Thịt heo an tồn: 50 Tở ng số 1.000 heo mơ hình tương đương 92 thịt heo an tồn sản xuất mô hin ̀ h Bán sản phẩm cho Cty Vissan 184% Thịt gà lơng màu an tồn: Tở ng số 3.200 gà mơ hình tương đương 6,1 thịt gà an tồn sản xuất mơ hin ̀ h Bán sản phẩm cho Cty tư nhân 305% công ty, tổng cộng 664 kg sản phẩm Khơng có nội dung thuyết minh Hồn thành báo cáo tổng kết Theo format sở KHCN TP HCM Chào bán sản phẩm thị trường (Công ty mua sản phẩm đưa trực tiếp tới trại chăn nuôi heo, gà chăn nuôi thủy sản) 11 - Cty Bắc Âu Mỹ, Biên Hòa, Đồng Nai - Cty TNHH DV-SX-TM T.C.T, Q9 TP HCM 12 Báo cáo tổng kết TÓM TẮT Tiến hành thu thập mẫu nguyên liệu xuyên tâm liên (XTL) Tp HCM, Long An, Đồng Tháp đánh giá chất lượng nguyên liệu dựa vào tiêu chuẩn sở xây dựng trước làm định vùng cung cấp nguyên liệu phục vụ cho sản xuất chế phẩm diterpen lacton dự án Nghiên cứu hồn thiện quy trình sản xuất chế phẩm diterpen lacton từ XTL quy mô sản xuất công nghiệp (150 - 200 kg/mẻ) xuất phát từ quy trình sử dụng nghiên cứu (20 kg/mẻ) với mục đích giảm chi phí sản xuất rút ngắn thời gian sản xuất sản phẩm Từ quy trình hồn thiện, tiến hành sản xuất 1000 kg chế phẩm sử dụng mơ hình chăn ni lợn, gà quy mô công nghiệp phần chào bán thị trường Bên cạnh đó, tiến hành nghiên cứu invitro; invivo khả kháng khuẩn chế phẩm diterpen lacton nhóm vi khuẩn phân lập từ trang trại chăn nuôi tác dụng tăng sức đề kháng lợn gà sử dụng chế phẩm Đồng thời hoàn thiện tiêu chuẩn sở cho nguyên liệu XTL, sản phẩm diterpen lacton chất mang sử dụng sản xuất chế phẩm Thí nghiệm invivo thực 200 gà thịt Lương Phượng ngày tuổi bố trí ngẫu nhiên vào nghiệm thức, 10 ô/NT; gà/ô (NT 1: đối chứng, sử dụng kháng sinh oxytetracyclin liều 100 ppm tylosin liều 50 ppm; NT 2; 3; bổ sung chế phẩm diterpen lacton mức 0,30%; 0,45%; 0,60%) Đồng thời, 160 heo thịt 60 ngày tuổi (Duroc x Yorkshire x Landrace) bố trí ngẫu nhiên vào nghiệm thức, ô /NT; 10 heo /ô (NT 1: đối chứng, sử dụng kháng sinh oxytetracyclin liều 100 ppm tylosin liều 50 ppm; NT 2; 3; bổ sung chế phẩm diterpen lacton mức 0,15 %; 0,30 %; 0,45%) Các tiêu theo dõi cho TN gà, heo gồm thức ăn tiêu thụ hàng ngày, tăng trọng bình quân giai đoạn sinh trưởng, hệ số tiêu tốn thức ăn, tỷ lệ chết loại thải, tiêu sinh hóa máu (glucose, protein tổng số, almumin, globulin), tiêu vi sinh vật có phân sau sử dụng chế phẩm (Coli form, E coli, salmonella), tồn dư kháng sinh thịt, gan số tiêu chất lượng thịt Cuối xây dựng mơ hình heo thịt, gà thịt chăn nuôi công nghiệp sử dụng chế phẩm với tỷ lệ tối ưu từ kết nghiên cứu hồn thiện cơng nghệ với quy mơ 5000 gà 1000 heo để sản xuất thịt heo, gà an tồn khơng tồn dư kháng sinh hóa chất độc hại sản phẩm Kết hồn thiện cơng nghệ cho thấy quy trình chiết xuất cải tiến, khơng sử dụng than hoạt tính để loại tạp chất dịch chiết phù hợp cho quy mơ cơng nghiệp, góp phần hạ giá thành sản phẩm rút ngắn thời gian điều chế cao bán thành phẩm Chế phẩm diterpen lacton có tác dụng ức chế Staphylococcus aureus; E coli MRSA (Methicillin Resistant Staphylococcus aureus) khơng có tác dụng Salmonella typhimurium mức độ kháng khuẩn chế phẩm diterpen lacton thấp so với chlortetracyclin Hoạt chất diterpen lacton sản phẩm ổn định thời gian bảo quản, bảo quản chế phẩm tới tháng điều kiện nhiệt độ phịng mà khơng ảnh hưởng đáng kể tới chất lượng Sử dụng chế phẩm diterpen lacton phần heo thịt, gà thịt cải thiện sức sản xuất, nâng cao hiệu sử dụng thức ăn giảm tỷ lệ chết gà, đồng thời thay sử dụng kháng sinh phần Bên cạnh đó, sức đề kháng heo gà cải thiện, biểu số lượng tế bào bạch cầu có xu hướng giảm hàm lượng kháng thể glubolin có xu hướng tăng tăng hàm lượng chế phẩm diterpen lacton phần Ngoài ra, hàm lượng E coli Coliform phân giảm đáng kể sử dụng chế phẩm diterpen lacton phần Sử dụng chế phẩm diterpen lacton mơ hình sản xuất thay sử dụng kháng sinh thức ăn chăn ni, loại trừ hồn tồn tồn dư kháng sinh sản phẩm mà khơng ảnh hưởng đáng kể tới tăng trọng, hiệu sử dụng thức ăn, tỷ lệ chết chi phí tiền thức ăn, thuốc thú y cho đơn vị sản phẩm SUMMARY Conducted to collect Andrographis paniculata (AP) samples in HCM City, Long An, Đong Thap Provinces to assess the quality of materials that based on the standard base to be built in previous project to decide which region would be provide all raw materials for diterpene lactonee production for the new project Research on improving the diterpene lactone production process extracting from Andrographis paniculata for industrial scale (150-200 kg /batch) based on the production process that used in the previous project for study-scale (20 kg /batch) to reduce production costs and made shorten the production process Based on the perfect production process, conducted to produce 1000 kg diterpene lactone product that would be used mainly in industrial-scale pig as well as poultry models and sold a part on the market In addition, conducted to study in vitro and in vivo on antibacterial ability of diterpene lactone product for bacteria that isolated from the animal farm as well as on role of improving antibody of pig and poultry whom using the product in diet Besides, studied to improve standards base for Andrographis paniculata raw material, diterpene lactone product and carrier In vivo experiments were conducted on both pig and poultry A total of 200 one day chicks (Luong Phuong breed) weas collected and randomized in to treatments, 10 pens /treatment, birds /pen as T1: control with antibiotic of 100 ppm oxytetracycline + 50 ppm tylosine; T2, T3, T4 without antibiotic and plus 0,30%; 0,45%; 0,60% diterpene lactone product, respectively In the other hand, a total of 160 sixty day old crossed pigs (Duroc x Yorkshire x Landrace) was collected and randomized in to treatments, pens /treatment, 10 pigs /pen as T1: control with antibiotic of 100 ppm oxytetracycline + 50 ppm tylosine; T2, T3, T4 without antibiotic and plus 0,15%; 0,30%; 0,45% diterpene lactone product, respectively The basal diet in the treatment was the same and met all the pig and poultry requirements The parameter recorded both experiments were feed intake, weight gain, feed efficiency, mortality, diarrhea, blood biochemical parameters, harm-full organism in feces, antibiotic residue in meat and liver Finally, a model of 1000 pigs and 5000 chicken husbandry were carried out using the best diterpene lactone product rate in diet to produce safe pig and chicken meet for consumers The results showed that in the diterpene lactone production process has been improved in which does not use activated carbon to removed impurities from extracts that made lower costs and shorten product process Diterpene lactone glue inhibited E Coli; S aureus and MRSA but not affected on Salmonella typhimurium and antibacterial levels of diterpene lactone lower than chlortetracyclin Diterpene lactonee was stable during storage time that could store up to months in room temperature condition without significantly affecting quality Using diterpene lactone product in pig and chicken diet improved growth, feed efficiency, reduced mortality and could replaced completely antibiotic as growth promoter in diet Besides, the resistance ability of pigs and chickens also improved expression in leukemia cell count decreased and antibody of glubolin level increased when diterpene lactonee level increased in diet In addition, E coli and Coliform levels in feces decreased significantly when using diterpene lactonee product in diet Using diterpene lactone product in a production model could replace the use of antibiotics in animal feed, completely eliminating antibiotic residues in products and not significantly affect on weight gain, feed efficiency, mortality and feed expense as well as veterinary expense for unit of products MỤC LỤC TRANG Tóm tắt dự án (tiếng việt, tiếng anh) ………….5 Mục lục ………….7 Danh sách chữ viết tắt ………….9 Danh sách bảng ……… 10 Danh sách hình, đồ thị, sơ đồ ……… 12 I TỔNG QUAN TÀI LIỆU ……… 13 1.1 Đặc điểm chung Xuyên tâm liên……………………………………13 1.2 Tình hình nghiên cứu nước………………………………………… 15 1.3 Tình hình nghiên cứu ngồi nước………………………………………… 18 1.4 Tính cấp thiết dự án…………………………………………………… 21 II NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ……… 23 2.1 Hồn thiện cơng nghệ ……… 23 2.2 Giải pháp công nghệ ……… 31 III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ……… 34 3.1 Hồn thiện cơng nghệ ……… 34 3.1.1 Hoàn thiện nguyên liệu sản xuất bột thành phẩm ……… 34 3.1.2 Khảo sát QT loại than dịch chiết không dịch chiết………………….34 3.1.3 Sản xuất TN nguyên liệu quy mô 100 – 150 kg/mẻ ……… 35 3.2 Hoàn thiện tiêu chuẩn sở sản phẩm………………………………………40 3.2.1 Nguyên liệu Xuyên tâm liên……………………………………………… 40 3.2.2 Cao đặc Xuyên tâm liên…………………………………………………….42 3.2.3 Bột bán thành phẩm DL 50% .44 3.2.4 Bột bán thành phẩm DL 10% .44 3.2.5 Hoàn thiện tiêu chuẩn sở chất mang………………………………… 46 3.3 Các nghiên cứu bổ sung………………………………………………………47 3.3.1 Tính ổn định chế phẩm……………………………………………… 47 3.3.2 Thí nghiệm in vitro……………………………………………………… 49 3.3.3 Thí nghiệm in vivo…………………………………………………………50 3.4 Kết thực mơ hình heo, gà………………………………………….65 3.4.1 Các quy trình chăn ni an tồn dịch bệnh……………………………….65 3.4.2 Kết thực mơ hình ni gà………………………………… 65 3.4.3 Kết thực mơ hình ni heo…………………………………68 3.4.4 Khả tiếp cận sản phẩm thảo dược với thị trường………………… 72 IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ ……… 74 4.1 Kết luận ……… 74 4.2 Đề nghị ……… 74 TÀI LIỆU THAM KHẢO ……… 75 QUYẾT TỐN KINH PHÍ ……… 79 PHỤ LỤC DANH SÁCH CÁC TỪ VÀ THUẬT NGỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa đầy đủ AIAO All in, All out (Cùng vào ra) DĐTQ Dược điển Trung Quốc DL Diterpen Lacton ĐVT Đơn vị tính ERS Economic Research Service (Ban nghiên cứu kinh tế, Nông nghiệp Mỹ) EtOH Ethanol GOT Glutamat oxaloacetat transaminase GPT Glutamat pyruvat transaminase HPLC High performance thin layer chromatography (Sắc kí lỏng cao áp) HTX Hợp tác xã IOM Institute of Medicine (Viện nghiên cứu ý học Mỹ) KP Khẩu phần KPCS Khẩu phần sở ME Năng lượng trao đổi MeOH Methanol MHA Môi trường thạch Mueller - Hinton Agar MIC Nồng độ ức chế kháng sinh tối thiểu MRSA Methicillin Resistant Staphylococcus aureus OD Optical Density(Mật độ quang) QĐ-BNN Quyết định – Bộ Nông nghiệp P Probability (Xác suất) PDA Photodiote array PG Prostaglandin SKLM Sắc ký lớp mỏng SEM Standard error of the mean (Sai số số trung bình) SKC Sắc kí cột TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam UV Ultra Violet (Cực tím) VCK Vật chất khơ VKHK Vi khuẩn hiếu khí XTL Xun tâm liên D xY xL Duroc x (Yorkshire x Landarce) 3.4 Kết thực mơ hình heo, gà 3.4.1 Các quy trình chăn ni an tồn dịch bệnh đƣợc áp dụng 3.4.1.1 Mơ hình chăn ni heo Áp dụng theo tiêu chuẩn VietGahp 3.4.1.2 Mơ hình chăn ni gà Áp dụng tiêu chuẩn an toàn sinh học nội 3.4.2 Kết thực mơ hình chăn ni gà sử dụng chế phẩm Trước tiến hành mơ hình, yếu tố giống, chuồng trại chăn nuôi, khối lượng gà đầu kỳ thí nghiệm, tỷ lệ trống mái điều kiện chăm sóc ni dưỡng nhóm gà nhóm mơ hình gà nhóm đối chứng bảo đảm tính đồng Tổng số gà theo dõi mơ hình 3.200 con, vượt 60% so với yêu cầu dự án, có 2.700 gà bổ sung chế phẩm DL với mức 0,45% thức ăn 500 gà sử dụng kháng sinh chlortetracycline tylosine phần với liều tương ứng 150 ppm 50 ppm để làm Đối chứng Thời gian ngưng sử dụng kháng sinh ngày trước xuất bán Kết thực mơ hình gà trình bày bảng 3.44 Số liệu bảng 3.44 cho thấy, tiêu sản xuất gà ăn phần bổ sung 0,45% DL thấp so với gà nhóm đối chứng khác biệt nhóm khơng đáng kể Khối lượng gà giai đoạn xuất bán (12 tuần tuổi) nhóm mơ hình đạt trung bình 1925 g/con, thấp 3,11% so với gà nhóm gà đối chứng (1985 g/con) Các tiêu tăng trọng; lượng thức ăn ăn vào hiệu sử dụng thức ăn nhóm gà mơ hình thấp từ 1,31-3,11% so với nhóm đối chứng, nhiên khác biệt nhóm khơng đáng kể (22,5 g/con/ngày; 5,23 kg/con 2,77 kgtă /kgtt – gà mơ hình- so với 23,2 g/con/ngày; 5,30 kg/con 2,72 kgtă/kgtt – gà đối chứng) Chi phí tiền thức ăn thuốc thú y cho kg tăng trọng nhóm gà mơ hình cao 2,47% so với nhóm gà đối chứng (27.895 27.222 đ/kgtt) Nguyên nhân giá thức ăn nhóm gà mơ hình cao so với nhóm gà đối chứng (9.689 đ/kg tă 9.650 đ/kg tă) Sức sản xuất gà mơ hình sử dụng bột DL thấp chi phí tiền thức ăn + thuốc thú y/kg tăng trọng có xu hướng cao so với nhóm gà Đối chứng (có sử dụng kháng sinh) sai khác khơng đáng kể Từ kết mơ hình khẳng định sử dụng thảo dược thay kháng sinh phịng bệnh kích thích sinh trưởng cho kết tương đương Đây hướng phù hợp với điều kiện chăn ni Việt Nam Tính ưu việt hướng cung cấp thực phẩm an toàn cho cộng đồng tránh bất lợi sử dụng kháng sinh lâu dài chăn nuôi (lờn thuốc, vi khuẩn đột biến tồn dư kháng sinh hóa dược sản phẩm chăn ni) 65 Bảng 3.44 Một số tiêu kỹ thuật mơ hình gà STT Mơ hình Đối chứng SEM P 2.700 500 - - 35 35 - - 0,45 - - - + Chlortetracycline (ppm) - 150 - - + Tylosine (ppm) - 50 - - Chỉ tiêu theo dõi A Thơng số ban đầu (trước thí nghiệm) Số gà theo dõi (con) Khối lượng gà ngày tuổi (g/con) Yếu tố thử nghiệm + Bột DL (%) B Thông số sản xuất (thời gian thí nghiệm) Thời gian ni (tuần) 12 12 - - Số xuất bán (con) 2.552 478 - - Tỷ lệ nuôi sống (%) 94,51 95,60 0,981 0,32 Tổng khối lượng xuất bán (kg) 4,915 949 - - Khối lƣợng gà TB 12 tuần tuổi (g/con) 1,925 1,985 25,30 0,23 Tăng trọng gđ 0-12 tuần (g/con/ngày) 22,5 23,2 0,25 0,12 Tổng thức ăn tiêu thụ (kg) 13.359 2545 - - Thức ăn tiêu thụ bình quân (kg/con) 5,235 5,304 0,12 0,17 Tiêu tốn thức ăn (kg thức ăn/kg tt) 2,77 2,72 0,35 0,10 C Hiệu kinh tế 10 Đơn giá thức ăn (đ/kg) 9.689 9.650 - - 11 Đơn giá bột DL (đ/kg) 147.500 - - - 12 Chlortetracycline 10% (đ/kg) (Bayer) - 300.000 - - 13 Tylosin 10% (đ/kg) (Bayer) - 350.000 - - 14 Chi phí thú y (đ/con) 2.000 1.900 - - 15 Chi phí thức ăn, thuốc thú y (đ/kg tt) 27.895 27.222 175 0,11 (*) Ngưng sử dụng kháng sinh ngày trước bán 66 Bảng 3.45 Kết phân tích kháng sinh thịt gan gà mơ hình (ppm) Kháng sinh Mơ hình Đối chứng Oxytexytetracyclin thịt gà Số mẫu khảo sát Số mẫu tồn dư 0 Mức tồn dư (ppm) 0 Oxytetracyclin gan gà Số mẫu khảo sát Số mẫu tồn dư 0 Mức tồn dư (ppm) 0 Chlortetracycline thịt gà Số mẫu khảo sát Số mẫu tồn dư Mức tồn dư (ppm) 0,12 Chlortetracycline gan gà Số mẫu khảo sát Số mẫu tồn dư Mức tồn dư (ppm) 0,16 Tylosin thịt gà Số mẫu khảo sát Số mẫu tồn dư 0 Mức tồn dư (ppm) 0 Tylosin gan gà Số mẫu khảo sát Số mẫu tồn dư 0 Mức tồn dư (ppm) 0 Không phát kháng sinh oxytetracylin tồn dư mẫu thịt gan gà thuộc nhóm mơ hình nhóm Đối chứng, 03 ngày đầu thí nghiệm có sử dụng kháng sinh để phịng bệnh theo quy trình chăn ni trang trại Nguyên nhân thời gian ngưng sử dụng dài nên thể tự điều tiết thải Với kháng sinh chlortetracycline nhóm Đối chứng, việc sử dụng kháng sinh liên tục nguyên nhân gây tồn dư kháng sinh sản phẩm chăn nuôi, dù ngưng ngày trước xuất bán Trong mẫu thịt gà phân tích, có mẫu tồn dư chlortetracycline với hàm lượng 0,12 ppm, mức cao so với TCVN 7046:2002 tiêu chuẩn Codex (Codex Standard Volume Two B, Part 2; Volume Three) (mức cho phép ≦ 0,1 ppm) Hàm lượng tồn dư kháng sinh gan gà cao thịt (0,16 ppm) nhóm Đối chứng 67 Ở nhóm mơ hình, khơng phát tồn dư kháng sinh oxytetracycline mẫu thịt gà gan gà, có sử dụng kháng sinh thời điểm 36 - 38 ngày tuổi phòng bệnh Kháng sinh tylosin dạng bột, liều 1g /lít nước (Bayer 1000) sử dụng điều trị bệnh thời gian ngày, giai đoạn tuần tuổi, không phát tồn dư kháng sinh thịt gan gà Nhận xét: Sử dụng bột DL chiết xuất từ XTL với tỷ lệ 0,45% phần gà nuôi thịt Lương Phượng mơ hình sản xuất thay việc sử dụng kháng sinh với mục đích kích thích sinh trưởng thức ăn chăn ni, loại trừ hoàn toàn tồn dư kháng sinh sản phẩm mà không ảnh hưởng đáng kể tới tăng trọng, hiệu sử dụng thức ăn, tỷ lệ chết chí phí tiền thức ăn, thuốc thú y cho đơn vị sản phẩm 3.4.3 Kết thực mơ hình chăn nuôi heo sử dụng chế phẩm Kết thực mơ hình heo trình bày bảng 3.46 3.47 Tổng số heo theo dõi mô hình 1.018 con, vượt 1,8% so với yêu cầu dự án, có 815 heo bổ sung chế phẩm DL với mức 0,30% thức ăn 203 heo nhóm Đối chứng Trong nhóm đối chứng, kháng sinh chlortetracycline sử dụng phần với liều 150 ppm để phịng bệnh kích thích sinh trưởng Thời gian ngưng sử dụng kháng sinh ngày trước xuất bán Kết thực nghiệm mô hình đợt cho thấy, tiêu sản xuất heo mơ hình ăn phần bổ sung 0,3% bột DL so với heo nhóm Đối chứng (ăn phần có bổ sung kháng sinh liều phịng bệnh kích thích sinh trưởng) có xu hướng cao sai khác khơng đáng kể Ở mơ hình đợt 1, tăng trọng heo đạt trung bình 708 g/con/ngày, có xu hướng cao so với nhóm heo Đối chứng (705 g/con/ngày) Hiệu sử dụng thức ăn nhóm heo mơ hình có xu hướng thấp so với nhóm ĐC (tương ứng 2,72 kgtă /kgtt so với 2,75 kg tă /kgtt) Chi phí tiền thức ăn thuốc thú y (khơng bao gồm chi phí vaccine) cho kg tăng trọng nhóm heo mơ hình có xu hướng thấp so với nhóm heo ĐC (24.531 so với 24.600 đ/kgtt) đơn giá thức ăn nhóm heo mơ hình cao so với nhóm heo đối chứng (8943 so với 8875 đ/kgtă) Điều khẳng định tăng trọng hiệu sử dụng thức ăn heo mơ hình cải thiện so với heo ĐC Từ kết mơ hình khẳng định sử dụng thảo dược thay kháng sinh phịng bệnh kích thích sinh trưởng cho kết tương đương sức sản xuất heo nuôi thịt Đây hướng phù hợp với điều kiện chăn nuôi Việt Nam 68 Bảng 3.46 Một số tiêu kỹ thuật mơ hình heo đợt (trại heo Chí Trung) STT Chỉ tiêu theo dõi Mơ hình Đối chứng SEM P Thơng số ban đầu (trước thử nghiệm) A Số heo theo dõi (con) 415 98 - - Tỷ lệ đực /cái (%) 41 44 - - Khối lượng heo bắt đầu TN (kg/con) 21,12 21,86 0,24 0,21 Yếu tố thử nghiệm (0,30%) - - - - 150 - - + Bột DL (%) + chlortetracycline (ppm) Thông số sản xuất B Thời gian nuôi (ngày) 105 105 - - Số xuất bán (con) 397 94 - - Tỷ lệ nuôi sống (%) 95,66 95,91 0,01 0,94 Khối lượng heo kết thúc TN (kg/con) 95,48 95,88 1,52 0,28 Tăng trọng heo kỳ TN (g/con/ngày) 708 705 14 0,29 Thức ăn tiêu thụ (kg/con) 202,5 203,8 1,25 0,34 Tiêu tốn thức ăn (kg thức ăn/kgtt) 2,72 2,75 0,01 0,41 Hiệu kinh tế C Đơn giá thức ăn (đ/kg) 8.943 8.875 - - Đơn giá bột DL (đ/kg) 147.500 - - - 10 Chlortetracycline 10% (đ/kg) (Bayer) - 250.000 - - 11 Chi phí thú y khơng bao gồm vaccine (đ/con) 13.252 12.207 - - 12 Chi phí thức ăn, thuốc thú y (đ/kgtt) 24.531 24.600 102 0,18 (*) Ngưng sử dụng kháng sinh ngày trước bán Tương tự, kết thực nghiệm mơ hình đợt cho thấy, tiêu sản xuất heo mô hình ăn phần bổ sung 0,3% bột DL so với heo nhóm Đối chứng (ăn phần có bổ sung kháng sinh liều phịng bệnh kích thích sinh trưởng) có xu hướng cao sai khác khơng đáng kể Ở mơ hình đợt 2, tăng trọng heo đạt trung bình 761 g/con/ngày, cao so với nhóm heo đối chứng (754 g/con/ngày) Hiệu sử dụng thức ăn nhóm heo mơ hình thấp so với nhóm heo đối chứng (tương ứng 2,65 kgtă /kgtt so với 2,68 kgtă/kgtt) Chi phí tiền thức ăn thuốc thú y cho kg tăng trọng nhóm heo mơ hình thấp so với nhóm heo đối chứng 69 (23.840 so với 23.950 đ/kgtt) đơn giá thức ăn nhóm heo mơ hình cao so với nhóm heo đối chứng (8943 so với 8875 đ/kg tă) Điều khẳng định mức tăng trọng hiệu sử dụng thức ăn heo mơ hình cải thiện so với heo đối chứng Bảng 3.47 Một số tiêu kỹ thuật mơ hình heo đợt (trại heo Gia Phát) STT Chỉ tiêu theo dõi Mơ hình Đối chứng SEM / χ2 P Thơng số ban đầu (trước thí nghiệm) A Số heo theo dõi (con) 400 105 - - Tỷ lệ đực/cái 0,31 0,38 - - Khối lượng bắt đầu TN (kg/con) 20,46 20,77 0,28 0,41 Yếu tố thử nghiệm - - + Bột DL (%) + chlortetracycline (ppm) (0,30%) - - 150 Thông số sản xuất B Thời gian nuôi (ngày) 100 100 - - Số xuất bán (con) 388 101 - - Tỷ lệ nuôi sống (%) 97,00 96,19 0,17 0,67 Khối lượng heo kết thúc TN (kg/con) 96,57 96,16 0,25 0,15 Tăng trọng heo kỳ TN (g/con/ngày) 761 754 0,23 Thức ăn tiêu thụ (kg /con) 201,7 202,3 0,22 0,41 Tiêu tốn thức ăn (kg tă/kgtt) 2,65 2,68 0,01 0,14 Hiệu kinh tế C Đơn giá thức ăn (đ/kg) 8.943 8.875 - - Đơn giá bột DL (đ/kg) 147.500 - - - 10 Chlortetracycline 10% (đ/kg) (Bayer) - 250.000 - - 11 Chi phí thú y khơng bao gồm vaccine (đ/con) 11.250 10.200 - - 12 Chi phí tiền thức ăn, thú y (đ/kgtt) 23.840 23.950 112 0,26 (*) Ngưng sử dụng kháng sinh ngày trước bán Từ kết đợt tiến hành mơ hình heo, khảng định sử dụng thảo dược (chế phẩm bột Diterpen Lacton) thay kháng sinh phịng bệnh kích thích sinh trưởng, đạt hiệu tương tự sức sản xuất chi phí thức ăn chăn nuôi heo công nghiệp Đây hướng phù hợp với điều kiện chăn nuôi Việt Nam Tính ưu việt hướng cung cấp thực phẩm an toàn cho cộng đồng 70 tránh bất lợi sử dụng kháng sinh lâu dài chăn nuôi (lờn thuốc, vi khuẩn đột biến tồn dư kháng sinh hóa dược sản phẩm chăn nuôi) Nhận xét: Sử dụng chế phẩm bột Diterpen Lacton 10% chiết xuất từ XTL phần heo ni thịt mơ hình sản xuất (0,30% phần) thay hồn tồn kháng sinh mà cải thiện tăng trọng chi phí tiền thức ăn, thuốc thú y cho đơn vị sản phẩm Bảng 3.48 Kết phân tích kháng sinh tồn dư thịt gan heo mơ hình Kháng sinh Đối chứng Mơ hình Oxytetracyclin thịt heo Số mẫu khảo sát 2 Số mẫu tồn dư 0 Mức tồn dư (ppm) 0 Oxytetracyclin gan heo Số mẫu khảo sát 2 Số mẫu tồn dư 0 Mức tồn dư (ppm) 0 Chlortetracycline thịt heo Số mẫu khảo sát 2 Số mẫu tồn dư Mức tồn dư (ppm) 0,21 Chlortetracycline gan heo Số mẫu khảo sát 2 Số mẫu tồn dư Mức tồn dư (ppm) 0,32 Tylosin thịt heo (**) Số mẫu khảo sát 2 Số mẫu tồn dư 0 Mức tồn dư (ppm) 0 Tylosin gan heo Số mẫu khảo sát 2 Số mẫu tồn dư 0 71 Mức tồn dư (ppm) (**) 0 Tylosin sử dụng điều trị bệnh Kháng sinh oxytetracylin: Không phát tồn dư kháng sinh mẫu thịt gan heo thuộc nhóm mơ hình nhóm Đối chứng Mặc dù 05 ngày đầu thí nghiệm, có sử dụng kháng sinh (oxytetracycline liều 150 ppm floramphenicol liều 80 ppm) để phòng bệnh theo quy trình chăn ni trang trại Ngun nhân thời gian ngưng sử dụng dài, nên thể tự điều tiết thải Kháng sinh chlortetracycline: Ở nhóm Đối chứng, việc sử dụng liên tục kháng sinh nguyên nhân gây tồn dư kháng sinh sản phẩm chăn nuôi, cho dù ngưng sử dụng ngày trước xuất bán Trong mẫu thịt heo phân tích, phát mẫu có tồn dư chlortetracycline với hàm lượng 0,21 ppm, mức cao so với TCVN 7046:2002 tiêu chuẩn Codex (mức cho phép ≦ 0,1 ppm) Hàm lượng tồn dư kháng sinh gan heo nhóm Đối chứng cao thịt (0,32 ppm) Ở nhóm mơ hình, khơng phát tồn dư kháng sinh chlortetracycline mẫu thịt heo gan heo, có sử dụng kháng sinh thời điểm 56 - 59 ngày tuổi để trị bệnh tiêu hóa hơ hấp Kháng sinh tylosine: Trong q trình thực mơ hình heo, có sử dụng kháng sinh dạng thuốc tiêm với liều ml /15 kg thể trọng (Bio Genta Tylosin) để điều trị bệnh hô hấp thời gian tuần, giai đoạn tuần thí nghiệm, heo đạt 55 - 60 kg/con Nhưng không phát tồn dư kháng sinh thịt gan heo Bảng 3.49 Kết phân tích hormon ß-agonist thịt gan heo mơ hình (ppm) Mơ hình Đối chứng Số mẫu khảo sát (mẫu) Số mẫu tồn dư (mẫu) 0 Mức tồn dư (ppb) 0 Số mẫu khảo sát (mẫu) Số mẫu tồn dư (mẫu) 0 Mức tồn dư (ppb) 0 Hormon nhóm ß-agonist Thịt heo Gan heo Không phát diện hormon thuộc nhóm ß-agonist mẫu thịt gan heo hai nhóm mơ hình Đối chứng Nguyên nhân Dự án chủ động không sử dụng hóa dược phần thức ăn, đồng thời kết phân tích khẳng định hóa dược khơng diện loại thức ăn bổ sung mua từ thị trường để sử dụng mơ hình 72 3.4.4 Khả tiếp cận sản phẩm thảo dƣợc với thị trƣờng 3.4.4.1 Giá thành sản phẩm STT Nội dung Đơn giá Số lượng Thành tiền 01 Nguyên liệu XTL xay bột mm 38.000 150 kg 5.700.000 03 Ethanol 96% (hao hụt sau thu hồi khoảng 20 %) 25.000 280 lít 7.000.000 04 Tinh bột mỳ 15.000 90 kg 1.350.000 05 Bao bì + nhãn + đóng gói 3.000 100 kg 300.000 06 Chi phí gia cơng quay (500.000đ / 1kg cao) 500.000 10 kg 5.000.000 Tổng cộng 19.350.000  Trong trường hợp thuê máy cô quay + 100 kg bột diterpen lacton 10%: 19.350.000 đ + kg bột diterpen lacton 10%: 190.350 đ /kg → bán 165.000đ /kg  Trong trường hợp không thuê máy cô quay + Khấu hao máy cô quay + điện nước: 4000đ /kg (SX 100 kg chế phẩm /ngày; làm việc 22 ngày /tháng; 12 tháng /năm; giá trị máy 450 triệu, sử dụng 10 năm) + 100 kg bột diterpen lacton 10%: 14.750.000 đ + kg bột diterpen lacton 10%: 147.500 đ /kg → bán 165.000đ /kg (lãi 12%) 3.4.4.2 Chào bán thị trường Bước đầu chào bán sản phẩm cho số công ty trang trại chăn nuôi TP HCM, Đồng Nai Bà Rịa Vũng Tàu Sau tháng chào bán sản phẩm, có cơng ty đặt hàng tuần với sản lượng ban đầu 200 kg/tuần Tuy nhiên, khó khăn sản xuất với số lượng lớn khơng có hệ thống thống thiết bị có cơng xuất đủ lớn, đặc biệt hệ thống cô giảm áp với cơng xuất 400 lít /mẻ có khả cao lỏng với tỷ lệ 1/20 (21,5 kg cao lỏng) Để đặc dung dịch chế phẩm sau chiết, nhóm thực thường phải thuê thiết bị cô quay công ty dược phẩm (VD: công ty BV Pharma) Điều làm tăng đáng kể giá thành sản phẩm ưu tiếp cận thịt trường sản phẩm Trong dự án này, phần lớn sản phẩm sản xuất (800 - 1000 kg) phục vụ cho nhu cầu sử dụng thí nghiệm hồn thiện cơng nghệ xây dựng mơ hình chăn ni giành số lượng nhỏ sản phẩm chào bán thử thị trường (664 kg) 73 74 CHƢƠNG IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận Quy trình chiết xuất cải tiến (khơng loại than hoạt trình làm chế phẩm bột diterpen lacton bán thành phẩm (≈ 50%) áp dụng sản xuất chế phẩm diterpen lacton quy mô công nghiệp, tỏ ưu việt so với quy trình cũ sử dụng giai đoạn nghiên cứu Nguyên liệu sử dụng quy trình phải có hàm lượng diterpen lacton toàn phần 7,0%; tỷ lệ 35%; tro tồn phần 4%, tro khơng tan axít 1% hàm lượng tạp chất 1,5% Chế phẩm bột thành phẩm diterpen lacton bảo đảm có ẩm độ 4,60%; tro toàn phần 1%; hàm lượng diterpen lacton sản phẩm 10  1% có phản ứng định tính với sắc ký lớp mỏng đặc trưng Hoạt chất diterpen lacton sản phẩm ổn định thời gian bảo quản điều kiện nhiệt độ Phòng Có thể bảo quản chế phẩm tới tháng mà không ảnh hưởng đáng kể tới chất lượng sản phẩm Chế phẩm diterpen lacton có tác dụng ức chế chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus; E coli MRSA (Methicillin Resistant Staphylococcus aureus) khơng có tác dụng Salmonella typhimurium Mức độ kháng khuẩn chế phẩm diterpen lacton thấp so với chlortetracycline Bổ xung chế phẩm diterpen lacton chiết xuất từ Xuyên tâm liên phần gà (0,45%), heo (0,30%) cho chăn nuôi hướng thịt đã: - Cải thiện sức sản xuất, nâng cao hiệu sử dụng thức ăn giảm tỷ lệ chết gà, heo; đồng thời thay sử dụng kháng sinh phần - Số lượng tế bào bạch cầu có xu hướng giảm hàm lượng kháng thể glubolin có xu hướng tăng tăng tỷ lệ chế phẩm diterpen lacton phần - Số lượng vi khuẩn E coli Coliform phân giảm đáng kể sử dụng chế phẩm diterpen lacton Không phát diện Salmonella mẫu phân theo dõi Trên mơ hình sản xuất, sử dụng chế phẩm diterpen lacton phần heo, gà ni thịt thay việc sử dụng kháng sinh với mục đích kích thích sinh trưởng, loại trừ hoàn toàn tồn dư kháng sinh sản phẩm mà không ảnh hưởng đáng kể tới sức tăng trọng, hiệu sử dụng thức ăn, tỷ lệ chết chí phí tiền thức ăn, thuốc thú y cho đơn vị sản phẩm 4.2 Đề nghị Đề nghị công nhận tiến kỹ thuật chuyển giao cho sản xuất 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO Akbarsha, M.A Murugaian P 2000 Aspects of the male reproductive toxicity/male antifertility property of andrographolide in albino rats: Effect on the testis and the cauda epididymidal spermatozoa J Phytother Res 14(6): 432-435 Akbarsha, M.A., Manivannan B., Hamid K.S Vijayan B 1990 Antifertility effect of Andrographis paniculata Nees in male albino rat Indian J Exp Biol 28: 421-426 Chan W.R., Taylor D.R., Willis C R and Bodden R L 1971 The structure and stereochemistry of neoandrographolide, a diterpen glucoside from Andrographis paniculata Nees Tetrahedron, 27, 21, 5081-5091 Chiou W.F., Lin J.J and Chen C F 1998 Andrographolide suppresses the expression of inducible nitric oxide synthase in macrophage and restores the vasoconstriction in rat aorta treated with lipopolysaccharide British Journal of Pharmacology, 125, 327 – 334 Đinh Thiện Thuận, Võ Bá Lâm, Khương Thị Ninh, Nguyễn Ngọc Tuân, Võ Thị Trà An Lê Thanh Hiền 2002 Khảo sát tình hình sử dụng kháng sinh chăn nuôi dư lượng kháng sinh quầy thịt lợn, gà thương phẩm địa bàn tỉnh Bình Dương Tập san khoa học kỹ thuật Nông-Lâm nghiệp số 3/2002 Duke, J.A Ayensu E.S 1985 Medicinal plants of China Vol.1 Algonac, Mich, Publications, 705 Economic Research Service (ERS) 1996 Bacterial foodborne disease Agricultural economic report N0 741 Washington D.C, USA Iinstitute of Medicine (IOM) 1998 Antimicrobial resistance: Issues and options National Academy Press, Washington D.C Khajarern 2005 Effects of dietary substitution of andrographis powder for a mixed AGPs on growth performance of nursery piglets Proceedings AHAT/BSAS Conference in Khon Kaen Thailand Vol II T115 10 Kumar R.A., Sridevi K., Kumar N.V., Nanduri S and Rajagopal S 2004 Anticancer and immunostimulatory compounds from Andrographis paniculata Journal of Ethnopharmacology, 92, 2-3, 291-295 11 Lã Văn Kính, Đặng Thị Hạnh, Bùi Văn Miên Nguyễn Ngọc Điền 2001 Nghiên cứu giải pháp SX chế biến thịt lợn, gà an tồn Báo cáo khoa học Bộ Nơng nghiệp PTNT 2000-2001, Tiểu ban Chăn nuôi-Thú y, phần dinh dưỡng thức ăn chăn nuôi (các báo cáo bổ sung) 12 Lê Văn Hùng 2001 Khảo sát tình trạng vệ sinh thịt gia súc, gia cầm số lị mổ chợ khu vực TP Hồ Chí Minh vùng phụ cận Đề xuất giải pháp cải thiện Báo cáo tổng kết đề tài cấp Bộ, mã số B2000-21-67 13 Maiti P.C., Kanji S.K and Chatterjee R 1959 Studies in kalmegh extracts, Ind J Pharm., 21, pp.169 76 14 Mathivanan R., Edwin S.C., Amutha R and Viswanathan K 2006 Panchagavya and Andrographis paniculata as Alternatives to Antibiotic Growth Promoter on Broiler Production and Carcass Characteristics International Journal of Poultry Science (12): 1144-1150, 2006 ISSN 1682-8356 15 Nguyễn Ngọc Chương, Nguyễn Ngọc Vinh Võ Thị Bạch Huệ 2010 Nghiên cứu đặc điểm vi học thành phần hóa học xuyên tâm liên (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees) Tạp chí Y học tập 14(2): 157-165 16 Nguyễn Như Pho Võ Thị Trà An 2003 Tình hình sử dụng kháng sinh chăn nuôi lợn tồn dư kháng sinh thịt thận lợn Kỷ yếu hội thảo khoa học "Sản xuất chế biến thực phẩm sạch” Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh, trang 147-152 17 Nguyễn Viế t Tựu , Nguyễn Kim Hương , Trịnh Nguyệt Hồng , Trầ n Thi ̣Trung Trinh 1985 Nghiên cứu hóa ho ̣c Xuyên tâm liên trồ ng ta ̣i TP.HCM Kỷ yếu công triǹ h nghiên cứu dươ ̣c liê ̣u 1979-1985 - Phân viê ̣n dươ ̣c liê ̣u TP HCM, trang 32-34 18 NRC-National Research Council (2012) Nutrient Requirements of Swine 11 th ed National Acadamy Press, Washington , DC 19 NRC-National Research Council (1994) Nutrient Requirements of Poultry 9th rev Ed National Academy Press, Washington, DC, USA 20 Phạm Hoàng Hộ 2000 Cây cỏ Việt Nam, NXB Trẻ, Quyển III, 2000, 60 21 Phạm Nguyễn Thùy An, Nguyễn Ngọc Ẩn, Trần Công Luận 2008, Xác định hàm lượng hợp chất diterpen lacton tác dụng kháng khuẩn Xuyên tâm liên (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees), Tạp chí Y học Tp HCM, Phụ tập 12, 4, 124-130 22 Pinye Z., Nuanbing P and Weijie J 1984 J Pharm Anal., 4, pp.34–36 23 Rajani M., Shrivastava N., Ravishankara M.N 2000 A rapid method for isolation of Andrographolide from Andrographis paniculata Nees Pharmaceutical Biology, 38, 3, 204-209 24 Sarah Mellor 2000 Alternatives to antibiotics Feed mix November, 2000 25 Sengupta S.P., Banerjee S.and Chakravarty D 1949 Ind J Pharm 11, pp.77– 78 26 Sithisomwongse, N., J Phengchata S Cheewapatana 1989 Acute and chronic toxicity of Andrographis paniculata Nees J Thai Pharm Sci 14(2): 109-117 27 Srivastava S.K., Bose P.C., Ray G.K and Mukherjee B 1959 Ind J Pharm 21, pp.229–230 28 Sujikara, l 2000 Andrographis paniculata A paper presented at an International Conference on Tropical Agriculture for better health and environment at Kasetsart University, Kampaengsaen, Nakornpathom, 29 Nov.-1 Dec 2000 Thailand pp 77 29 Tipakorn N 2002 Effects of Andrographis paniculata (Burm.F.) Nees on performance, mortality and coccidiosis in broiler chickens Doctoral Dissertation, Georg-August-University, Gottingen, Germany 30 Viê ̣n dươ ̣c liê ̣u 2004 Cây thuố c và đô ̣ng vâ ̣t làm thuố c ở Viê ̣t Nam NXB Khoa học Kỹ thuật, Tâ ̣p II, 1138-1143 31 Võ Văn Chi 1999 Tự điển thuốc Việt Nam NXB Y học, 1354-1355 32 Zaidan, M.R.S., Noor Rain., Badrul., Adlin., Norazah and Zakiah 2005 In vitro screening of five local medicinal plants for antibacterial activity using disc diffusion method Tropical Biomedicine, 22(2), 165 170 33 Alỗiỗek A., Bozkurt M and Çabuk M 2004 The effect of a mixture of herbal essential oils, an organic acid or a probiotic on broiler performance South African Journal of Animal Science, 34 (4): 217-222 34 Abdul-Rahman S Y 2012 Effect of fenugreek seeds on some physiological characters in broiler breeders males Mesoptamia J of Agri, vol ( 40 ) Suppl ( ) 2012 ISSN: 2224-9796 (Online) 35 Akinmutimi A.H and Onen G.E 2008 The Response of Broiler Finisher Birds Fed Graded Levels of Yam Peel Meal in Place of Maize-Based Diets International Journal of Poultry Science (5): 474-479 ISSN 1682-8356 36 Yakubu A., Gwaska J A and Salako, A E 2009 Strain and placement density effects on welfare, haematological and serum biochemical indices of broilers in north central Nigeria Acta argiculturae Slovenica , 94/2 , 153–158 37 Chen H L., Li D F., Chang B Y., Gong L M., Dai J G., and Yi G F 2003 Effects of Chinese Herbal Polysaccharides on the Immunity and Growth Performance of Young Broilers1 Poultry Science 82:364–370 38 Saeed J M.1998 Stress effect on semen production & some blood traits in local cocks Iraqi Journal of Veterinary Medicine.11 (2): 105 – 113 39 Siegal H.S.1980 Physiological stress in birds Bio Sci 30: 529 – 534 40 Kumaran K.S., Thirugnanasambantham P., Viswanathan S., Murphy M.S.R (2003), "An HPLC for estimation of andrographolide in rabbit serum", India Journal of Pharmacology, 35, pp.109-112 41 Pholphana N., Rangkadilok N., Thongnest S., Ruchirawat S., Ruchirawat M., Satayavivad J (2004), "Determination and Variation of three active diterpenoids in Andrographis paniculata", Phytochem.Anal., 15, pp.365-371 42 Jain D.C., Gupta M.M., Saxena S., Kumar S (2000) LC analysis of hepatoprotective diterpenoids from Andrographis paniculata Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 22, 705–709 43 Srivastava A., Misra H., Verma R.K., Gupta M.M.(2004), "Chemical Fingerprinting of Andrographis paniculata using HPLC, HPTLC and Densitometry", Phytochem Anal., 15, pp.280-285 44 Patarapanich C., Laungcholatan S., Mahaverawat N., Chaichantipayuth C and 78 Pummangura C.(2007), "HPLC determination of active diterpene lactones from Andrographis paniculata Nees planted in various season and regions in Thailand", Thia J Pharm Sci., 31, pp.91-99 45 Akowuah G.A., Zhari I., Norhayati I and Mariam A (2006) HPLC and HPTLC densitometric determination of andrographolides and antioxidant potential of Andrographis paniculata Journal of Food Composition and Analysis, 19, 2-3, 118-126 79