nghiên cứu thành phần hóa học, tác dụng dược lý và độc tính cùa quả nhàu việt nam

Bộ Y Tế Báo cáo kết nghiên cứu đề tài cấp Nghiên cứu thành phần hoá học, tác dụng dợc lý độc tính nhàu Việt nam Chủ nhiệm đề tài: TS Nguyễn Trọng Thông Cơ quan chủ trì đề tài: Trờng Đại học Y Hà Néi 6368 12/5/2007 Hµ néi - 2005 Bé Y TÕ Báo cáo kết nghiên cứu đề tài cấp Nghiên cứu thành phần hoá học, tác dụng dợc lý độc tính nhàu Việt nam Chủ nhiệm đề tài: TS Nguyễn Trọng Thông Cơ quan chủ trì đề tài: Trờng Đại học Y Hà Nội Cấp quản lý đề tài: Bộ Y Tế Th ký đề tài: TS Vũ Thị Ngọc Thanh Danh sách ngời thực đề tài 1.TS Nguyễn Trọng Thông 2.PGS TSKH Nguyễn Thới Nhâm 3.TS Vũ Thị Ngọc Thanh 4.ThS Phạm Thị Vân Anh 5.ThS Nguyễn Hoài Trung DS Đặng Hồng Lâm Hà Nội - 2005 Các chữ viết tắt BCMTT : Bạch cầu múi trung tính CQN : Cao nhàu CY : Cyclophosphamid DĐVN : Dợc điển Việt Nam HA : Huyết ¸p HCC : Hång cÇu cõu HPLC : High performence liquid chromatography IFN : Interferon IL : Interleukin IR : Infrared KTMD : KÝch thÝch miƠn dÞch MS : Mass spectrometry NK : Natural killer cell NMR : Nuclear magnetic resonance OA : Ovalbumin SKC : S¾c ký cét SKLM : Sắc ký lớp mỏng TBTHHMC : Tế bào tạo hoa hồng mẫn cảm TBTQDH : Tế bào tạo quầng dung hut TCVN : Tiªu chn ViƯt Nam UV : Untraviolet spectroscopy A Tóm tắt kết bật đề tài Kết bật đề tài 1.1 Đóng góp đề tài Từ kết nghiên cứu thành phần hoá học nghiên cứu độc tính, tác dụng dợc lý cho thấy nhàu có tác dụng kích thích miễn dịch, chống viêm, giảm đau, hạ huyết áp, độc tính cấp bán trờng diễn Kết khẳng định tác dụng nhàu đà đợc nhân dân ta sử dụng để điều trị đau xơng khớp, cao huyết áp, bồi dỡng sức khoẻ đà khẳng định không rễ nhàu có tác dụng kích thích miễn dịch, chống viêm, giảm đau, hạ huyết áp mà nhàu có tác dụng kích thích miễn dịch, chống viêm, giảm đau hạ huyết áp Với kết hy vọng nhàu đợc bào chế thành dạng thuốc phù hợp để đa vào sử dụng lâm sàng phục vụ cho công tác chăm sóc bảo vệ sức khoẻ nhân dân 1.2 Kết cụ thể (các sản phẩm cụ thể đề tài) Chiết xuất dung môi khác thông qua sắc ký lớp mỏng phơng pháp phổ IR, UV, MS, DEPT, COSY, HMQ cho thấy: Trong nhàu có anthraglycosid, flavonoid, coumarin, triterpennoid, saponin, polyphenol, dầu béo, alkaloid, tinh dầu, acid hữu cơ, đờng khử, acid uronic Anthraquinon non 0,56%, già 0,55% chín 0,39 % Đà xác định đợc cấu trúc hợp chất: soranjidiol, 1- methoxy 2-methyl 3hydroxyanthraquinon, scopoletin coumarin không màu hình kim, 11 acid bÐo ®ã acid bÐo ch−a no chiÕm 68,85 %(acid linoleic 50,27%, acid oleic 17,79 % lại acid linolenic palmitoleic).Trong nhàu có alcol acid no 11 carbon víi mét chøc r−ỵu bËc nhng cha xác định xác đợc cấu trúc Trong gam cao nhàu chứa 0,0025 mmol natri; 0,00125 mmol kali; 0,00313 mmol calci; 0,00004 mmol clo; 0,081- 0,098 ppm selen; 1.07- 1,45 ppm Co; 3,02- 4,94 ppm Cu; 35,8-154 ppm Mn; 206-283 ppm Fe Xây dựng tiêu chuẩn nguyên liệu nhàu: miếng mỏng khô, cứng, màu nâu sẫm, mùi đặc biệt, vị đắng, độ ẩm không 10%, tro toàn phần không %, tro không tan acid HCL không 0,5%, định tính cho phản ứng dơng anthranoid, sắc ký lớp mỏng có vết màu đỏ sáng vết màu đỏ đậm anthraquinon, hàm lợng anthraquinon toàn phần không thấp 0,5% Xây dựng tiêu chuẩn sở cao nhàu: thể chất mềm, đồng nhất, màu nâu sẫm, mùi đặc biệt nhàu, vị đắng, độ ẩm không 20%, cắn không tan không 15 %, pH 3,5 5,5, tro toàn phần không 20%, tro không tan acid HCL không 2%, định tính cho phản ứng dơng anthranoid, sắc ký lớp mỏng có vết màu đỏ sáng vết màu đỏ đậm anthraquinon, hàm lợng anthraquinon toàn phần không thấp 1% Nghiên cứu độc tính cấp bán trờng diễn cao nhàu: kết cho thấy cao nhàu uống víi liỊu 300 g/kg thĨ träng cao gÊp 375 lÇn liều dùng cho ngời không gây chết chuột vòng 72 biểu độc tính thuốc vòng ngày theo dõi Trên thỏ uống cao nhàu liên tục 30 ngày với liều 6g/kg vµ 12g/kg thĨ träng cao gÊp 10 vµ 20 lần liều dùng cho ngời không thấy có thay đổi tình trạng chung, thể trọng, số lợng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, kích thớc hồng cầu, số lợng hemoglobin, công thức bạch cầu, hematocrit, hoạt độ ALT, AST, hàm lợng albumin, cholesterol, bilirubin, creatinin máu nh hình thái đại thể, vi thể gan, thận Trên mô hình gây suy giảm miễn dịch cyclophosphamid tia xạ cao nhàu liều 6g/kg thể trọng uống liên tục ngày liền ngày liền đà làm cải thiện rõ rệt số đánh giá chức miễn dịch dịch thể miễn dịch tế bào nh số đánh giá tình trạng chung miễn dịch nh: trọng lợng lách tuyến ức tơng đối số lợng bạch cầu Cao nhàu có tác dụng giảm đau liều 24g/Kg mô hình gây quặn đau acid acetic, tác dụng tơng đơng với aspirin 100 mg/Kg thể trọng Cao nhàu có tác dụng chống viêm cấp, mạn tính chống oxyhóa: sau uống cao nhàu làm giảm thể tích viêm chân chuột carragenin gây nên, giảm thể tích dịch số lợng bạch cầu dịch rỉ viêm giảm trọng lợng u hạt Tác dụng tơng đơng với aspirin liều150 mg/kg Trên mô hình gây tổn thơng tế bào làm tăng gốc tự tia xạ cao nhàu uống liều 5g 25g/kg thể trọng liên tục ngày làm giảm rõ rệt hàm lợng MDA, tăng hoạt độ enzym chống oxyhoá SOD, GPx, GR khả chống oxyhoá toàn phần thể (TAS) Cao nhàu có tác dụng hạ huyết áp Với liều 1,5 g/kg thể trọng, cao nhàu làm hạ huyết áp chó 20- 26 % so với huyết áp ban đầu Tác dụng phụ thuộc liều lợng, liều cao tác dụng hạ huyết áp mạnh Tác dụng hạ huyết áp xuất sau uống 30 phút kéo dài Đánh giá thực đề tài đối chiếu với đề cơng đà đợc duyệt 2.1 Tiến độ Theo đề cơng đợc duyệt đề tài đợc thực vòng 24 tháng kể từ ngày24 tháng năm 2002 đến ngày 24 tháng năm 2004 Nhng vào thời kỳ dịch viêm đờng hô hấp cấp vius bùng nổ việc chăn nuôi súc vật gặp khó khăn nên Bộ Y tế đà cho phép gia hạn thực đề tài đến hết 2005 2.2 Thực mục tiêu nghiên cứu Chúng đà hoàn thành đầy đủ nội dung nghiên cứu theo mục tiêu đề cơng đà đợc hội đồng duyệt: Đà nghiên cứu phơng pháp chiết xuất, thành phần hoá học cao nhàu Đà xây dựng tiêu chuẩn sở nguyên liệu cao nhàu Đà nghiên cứu tác dụng giảm đau, chống viêm cấp, mạn tính Đà nghiên cứu tác dụng chống oxyhoá mô hình gây tổn thơng tia xạ thỏ Đà nghiên cứu tác dụng kích thích miễn dịch hai mô hình gây suy giảm miễn dịch tia xạ cyclophosphamid chuột nhắt trắng Đà nghiên cứu tác dụng tim huyết áp chó, trơn thành mạch tai thỏ cô lập tim ếch cô lập Đà nghiên cứu độc tính cấp chuột nhắt bán trờng diễn thỏ 2.3 Kết đào tạo Kết hợp thực nội dung nghiên cứu với đào tạo đề tài đà góp phần cho đào tạo thành công 02 cao học (một ngành Y, 01 ngành Dợc), 01 bác sỹ, 02 dợc sỹ đại học sinh viên Y6 chuẩn bị bảo vệ, sinh viên đạt giải nhì Vifotec Kết đề tài đà đợc đăng tải báo tạp chí Dợc học, tạp chí nghiên cứu Y học Đại học Y Hà Nội tạp chí Dợc liệu 2.4 Đánh giá sử dụng kinh phí - Tổng kinh phí đợc duyệt: 150 triệu - Kinh phí đợc cấp: 130 triệu - Kinh phí đợc toán: 130 triệu Nhìn chung kinh phí so với nội dung đà thực hiên, tác giả phải sử dụng thêm nguồn kinh phí từ đề tài khác B Nội dung báo cáo kết đề tài Đặt vấn đề Cây nhàu (Morinda citrifolia L Rubiaceae), dợc liệu đợc nhân dân sử dụng lâu đời với mục đích nâng cao sức đề kháng thể, rễ nhàu chữa bệnh tăng huyết áp, chống viêm [4, 37] Năm 1981, dịch chiết toàn phần rễ nhàu dạng cha đà đợc Đào Văn Phan Nguyễn Trọng Thông nghiên cứu thấy có tác dụng giảm đau, chống viêm hạ huyết áp súc vật thực nghiệm [49] Năm 1996, Phan Thị Phi Phi cộng nghiên cứu invitro, invivo chứng minh có tác dụng kích thích miễn dịch thông qua tác dụng kích thích hồi phục số miễn dịch súc vật thực nghiệm, tế bào ngời nuôi cấy in vitro bị suy giảm miễn dịch chiếu tia gamma tiêm cyclophosphamid Trần Ngọc Dung cộng (2000) dùng viên M, chế phẩm từ dịch chiết rễ nhàu có tác dụng tốt cho bệnh nhân ung th vòm họng sau xạ trị Cây nhàu lu niên, thời gian trồng thu hoạch rễ sau 6-8 năm Nh muốn phát triển nhân rộng nguồn dợc liệu từ rễ nhàu làm thuốc gặp nhiều khó khăn nguyên liệu trồng nhàu để khai thác rễ đòi hỏi phải cần nhiều năm.Trong kinh nghiệm dân gian không dùng rễ nhàu làm thuốc mà dùng nhàu làm thuốc bổ nâng cao sức đề kháng thể Đặc biệt gần nhiều nhà khoa học giới đà nghiên cứu nhàu trồng Hawaii đa nhiều nhận xét khả quan tác dụng chống khối u tác dụng kích thích miễn dịch [61, 62, 70, 71, 72, 81, 82, 83, 84, 97, 105, 107] Tuy vËy, ë ViƯt Nam nghiªn cøu khoa häc chđ yếu tập trung vào rễ nhàu nh tác dụng dợc lý, thành phần hoá học, độc tính rễ nhµu [18, 25, 27, 35, 43, 45, 46, 49, 56, 57, 58] Trong nhân dân dùng nhiều sản phẩm từ nhàu chí có xí nghiệp đà sản xuất thuốc từ nhàu nhng cha có tác giả nghiên cứu cách tơng đối toàn diện nhàu Xuất phát từ thực tế đó, tiến hành nghiên cứu đề tài với mong muốn xác định tính khoa học tác dụng độc tính nhàu Việt Nam đà đợc dân gian sử dụng với mục tiêu nghiên cứu sau: Nghiên cứu thành phần hoá học nhàu Nghiên cứu độc tính cấp bán cấp cao nhàu Nghiên cứu số tác dụng dợc lý cao nhàu thực nghiệm Chơng Tổng quan tài liệu 1.1 Tổng quan Nhàu 1.1.1 Đặc điểm nhận dạng Cây nhàu gọi ngao núi, nhầu núi, giầu, tên khoa học Morinda citrifolia L., họ cà phê Rubiaceae [4, 37, 51] Đây lu niên, mọc tự nhiên nơi ẩm thấp dọc bờ sông bờ suối Việt Nam mọc chủ yếu miền Nam từ Quảng Bình trở vào, không thấy mọc tự nhiên miền Bắc Trên giới nhàu thấy có nhiều nớc nh Thái Lan, ấn Độ, Malaixia đặc biệt đợc trồng nhiều quần đảo Tahiti thuộc nớc vùng Trung Mỹ [61, 62, 105] Cây nhàu thân mộc, cao từ 6-8 m, có nhiều cành to, mọc đối xứng hình bầu dục, đỉnh nhọn, mép có ca, phiến mỏng dai, có 6-7 gân lá, cuống dài 10-12mm Hoa nhàu hình ống loa kèn, màu trắng mọc thành chùm nách lá, nở vào tháng 12 Quả hình trứng, dài 4-5cm, mọc thành chùm, lúc non có mầu xanh, sau chín có mầu trắng hồng vàng, chín vào tháng 7-8 ảnh 1.1 Cành, lá, hoa nhàu ảnh 2: Quả nhàu 1.1.2 Tình hình nghiên cứu giới * Nghiên cứu rễ: nhàu đợc quan tâm nghiên cứu từ sớm Youngken (1957) đà xác định thành phần hoá học rễ nhàu anthraglycosid, có alcaloid, flavonoid số thành phần khác [120] Younos cộng (1990) nghiên cứu chứng minh dịch chiết rễ nhàu có tác dụng giảm đau, thông qua hệ thống thần kinh trung ơng [121] * Nghiên cứu trái: năm 1990, Mỹ nhiều công trình nghiên cứu nhàu đà đợc công bố, đặc biệt công trình tập trung nhiều thành phần hoá học tác dụng trái nhàu trồng Hawaii Theo Hirazumi vµ céng sù (1994 - 1999) cho thấy dịch chiết nhàu có tác dụng chống ung th− trªn thùc nghiƯm [80, 81, 82, 83, 84] Míi đây, dịch chiết nhàu đà đợc nghiên cứu Mỹ Trờng Đại học Stanford, California, Los Angeles Trờng Đại học Hawaii; Anh Trờng Y Lon don; Pháp Trờng Đại học Meets Nói chung, kết thu đợc phù hợp với kết luận dịch chiết nhàu có tác dụng làm hạ huyết áp Các nhà nghiên cứu Hawaii lần đà chiết dịch Hình Sắc ký đồ HPLC mẫu C3 H×nh Phỉ UV cđa C3 H×nh Phỉ IR C3 Hình Cấu trúc hóa học hợp chất Soranjidiol Hình Sắc ký đồ HPLC mẫu C4 H×nh 10 Phỉ UV cđa C4 H×nh 11 Phỉ IR C4 Hình 12 Cấu trúc hóa học hợp chất 1-methoxy 2-methyl 3-hydroxy anthraquinon Hình 13 Sắc ký đồ HPLC hợp chất C5 Hình 14 Phổ UV hợp chất C5 Hình 15 Phổ IR hợp chất C5 Hình 16 Phổ 1H-NMR hợp chất C5 (500 MHz, CDCl3 + MeOD) Hình 17 Phổ MS hợp chất C5 (scopoletin) 2.Tiêu chuẩn dợc liệu nhàu: Yêu cầu kỹ thuật 1.1 Tiêu chuẩn cảm quan A C E G Trạng thái Màu sắc Mùi Vị B D F H Quả nhàu cắt thành lớp mỏng, phơi khô, cứng Màu nâu sẫm Mùi đặc biệt Vị đắng 1.2 Chỉ tiêu lý hoá Tên tiêu Độ ẩm Tro toàn phần Tro không tan acid HCl Định tính Phản ứng hoá học Sắc ký lớp mỏng Đơn vị tính % khối lợng % khối lợng % khối lợng Định lợng % khối lợng Phát UV365 Mức tiêu Không 10% Không 6% Không 0,5% Phơng pháp DĐVN III DĐVN III DĐVN III Cho phản ứng dơng tính anthranoid Có: vết màu đỏ sáng vết đỏ đậm anthraquinon Hàm lợng anthraquinon toàn phần phải không đợc thấp 0,5% TCCS TCCS theo phơng pháp cân có cải tiến Bảo quản Đóng gói: thùng kín, để nơi tránh ánh sáng trực tiếp NhÃn in rõ ràng, theo quy chế 3.Tiêu chuẩn cao nhàu Yêu cầu kỹ thuật 1.1 Tiêu chuẩn cảm quan Trạng thái Cao chất mềm đồng Màu sắc Màu nâu sẫm Mùi Mùi đặc biệt nhàu Vị Vị đắng 1.2 Chỉ tiêu lý hoá Tên tiêu Đơn vị tính Mức tiêu Phơng pháp Độ ẩm % khối lợng Không 20% TCVN 5613-1991 Cắn không tan % khối lợng Không 15% TCVN 5613-1991 3,5 - 5,5 TCVN 5613-1991 PH Tro toàn phần % khối lợng Không 20% TCVN Tro không tan % khối lợng Không 2% TCVN acid HCl Định tính Phản ứng hoá học TCCS kèm theo Cho phản ứng dơng tính nhóm anthranoid Sắc ký lớp mỏng Có vết tơng ứng với dợc liệu nhàu Định lợng Hàm lợng Bằng phơng anthraquinon toàn pháp cân phần phải không đợc Daels Kroeber thấp 0,5% Danh mục sản phẩm kèm theo đề tài Các luận văn Phạm Thị Vân Anh (2003), Nghiên cứu độc tính ảnh hởng cao nhàu lên số tiêu miễn dịch súc vật thực nghiệm, Luận văn thạc sỹ Y học, Trờng Đại học Y Hà Nội Nguyễn Thành Quân (2004), Nghiên cứu tác dụng hạ huyết áp cao trái nhàu thực nghiệm, Luận văn tốt nghiệp bác sỹ y khoa, Trờng Đại học Y Hà Nội Hồ Thảo Nhỏ (2005), Nghiên cứu thành phần hoá học cao nhàu, Luận văn tốt nghiệp Dợc sỹ đại học, Trờng Đại học Y Dợc thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Việt Xuân Phơng ( 2004), Nghiên cứu thành phần hoá học cao nhàu, Luận văn tốt nghiệp Dợc sỹ Đại học, Trờng Đại học Y Dợc thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Hoài Trung (2005), Xây dung phơng pháp chiết xuất tối u tiêu chuẩn hoá thành phần cao nhàu, Luận văn thạc sỹ Dợc học, Trờng Đại học Y Dợc thành phố Hồ Chí Minh Các báo khoa học Nguyễn Trọng Thông, Phạm Thị Vân Anh, Nguyễn Vinh Hà (2004), Nghiên cứu ảnh hởng cao trái nhàu súc vật bị gây suy giảm miễn dịch tia xạ, Tạp chí nghiên cứu Y học, Số 6, tr 82-86 Nguyễn Trọng Thông, Phạm Thị Vân Anh, Vũ Thị Ngọc Thanh (2004), Nghiên cứu ảnh hởng cao trái nhàu súc vật bị gây suy giảm miễn dịch cyclophosphamid, Tạp chí nghiên cứu Y häc, Sè 1, tr 28-33 Ngun Träng Th«ng, Phạm Thị Vân Anh, Vũ Thị Ngọc Thanh (2003), Nghiên cứu ảnh hởng cao nhàu thể trạng hệ thống tạo máu động vật thực nghiệm, Tạp chí Dợc liệu, Số 6, tr 176-179 Nguyễn Trọng Thông, Phạm Thị Vân Anh, Vũ Thị Ngọc Thanh (2004), Nghiên cứu ảnh hởng cao trái nhàu lên chức gan ,thận động vật thực nghiệm, Tạp chí Dợc liệu, Số 4, tr 111-115 Nguyễn Trọng Thông, Phạm Thị Vân Anh, Vũ Thị Ngọc Thanh (2004), Sơ nghiên cứu tác dụng hạ huyết áp cao trái nhàu (Morinda citrifolia L.) thực nghiệm, Tạp chí nghiên cứu Y học, tr 76-81 Nguyễn Trọng Thông, Phạm Thị Vân Anh, Vũ Thị Ngọc Thanh (2005), Sơ nghiên cứu tác dụng lên mạch máu cô lập thải trừ muối nớc cao trái nhàu (Morinda citrifolia L.) thực nghiệm, Tạp chí Dợc học, Số 11, tr 20-23 Nguyễn Trọng Thông, Phạm Thị Vân Anh, Vũ Thị Ngọc Thanh, Nguyễn Thế Siển (2004), Nghiên cứu tác dụng chống viêm cao trái nhàu thực nghiệm, Tạp chí Dợc liệu, Số 1, tr 28-31 Nguyễn Trọng Thông, Phạm Thị Vân Anh, Vũ Thị Ngọc Thanh (2005), Tiếp tục nghiên cứu ảnh hởng cao nhàu động vật bị suy giảm miễn dịch chiếu tia xạ, Tạp chí Dợc học, Số 3, tr 16-19 Nguyễn Trọng Thông, Phạm Thị Vân Anh, Vũ Thị Ngọc Thanh, Nguyễn Thế Xiển (2006), Nghiên cứu ảnh hởng cao nhàu lên hoạt động số enzym chống oxyhóa trạng thái chống oxyhóa toàn phần máu thỏ bị chiếu xạ thực nghiệm, Tạp chí Dợc học, Số 2, tr 23-26 Các giải thởng đạt đợc Giải nhì Vifotec đề tài nghiên cứu khoa học sinh viên Nguyễn Thành Quân Tên đề tài: "Nghiên cứu tác dụng hạ huyết áp cao trái nhàu thực nghiệm" Phiếu đăng ký giao nộp kết nghiên cứu KH CN Tên đề tài: Nghiên cứu thành phần hoá học, tác dụng dợc lý độc tính nhàu Việt nam Mà số: Thuộc chơng trình: Cấp đề tài: cấp Bộ Bộ chủ quản: Bộ Y tế Địa chỉ: 138 Giảng Võ Hà Nội ĐT: Cơ quan chủ trì đề tài: Trờng Đại học Y Hà Nội Địa chỉ: Số Tôn Thất Tùng - Đống Đa – Hµ Néi Tel: 04.8527622 Tỉng chi phÝ thùc chi: Trong đó: - Từ ngân sách Bộ: 150.000 triệu đồng Thời gian nghiên cứu: Thời gian bắt đầu: 4/2002 Thời gian kết thúc: 12/2005 Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Trọng Thông Học vị: Tiến sỹ Địa liên hệ: Bộ môn Dyựơc lý Trờng Đại học Y Hà Nội ĐT: 04.8521170/211 Fax: 04.5744726 Email: Tên cán phối hợp nghiên cứu: PGS.TSKH Nguyễn Thới Nhâm TS Vũ Thị Ngọc Thanh Ths Phạm Thị Vân Anh ThS Nguyễn Hoài Trung DS Đặng Hồng Lâm Bảo mật thông tin A Phổ biến rộng rÃi B Phổ biến hạn chế C Bảo mật Tóm tắt kết nghiên cứu: Từ kết nghiên cứu thành phần hoá học, tác dụng dợc lý nghiên cứu độc tính nhàu rút số kết luận sau: Về thành phần hoá học, tiêu chuẩn nguyên liệu tiêu chuẩn cao nhàu: Trong nhàu non, già chín có anthraglycosid, flavonoid, coumarin, triterpennoid, saponin, polyphenol, dầu béo, alkaloid, tinh dầu, acid hữu cơ, đờng khử, acid uronic, iridoid với tỷ lệ gần tơng đơng - Anthraquinon có non 0,56%, già 0,55% chín 0,39 % Trong nhàu có hợp chất đà xác định đợc cấu trúc : soanjidiol, 1- methoxy2methyl-3-hydroxyanthraquinon, scopoletin coumarin không màu hình kim - Trong nhàu có hàm lợng tinh dầu 0,23 % có chất đà định danh đợc: acid hexanoic; acid octanoid methyl ester; acid octanoid;1-penten5 – (pentyloxy)-; acid hexanoic -2-pentyl ester, (z), acid decanoi metyl ester vµ acid decanoi acid vµ chÊt cha định danh đợc có hàm lợng 0,34 3,36 % - Trong nhàu có 11 acid béo ®ã acid bÐo ch−a no chiÕm 68,85%(acid linoleic 50,27%, acid oleic 17,79 % lại acid linoleic palmitoleic) vµ alcol acid no 11 carbon víi mét chøc rợu bậc nhngchúng cha xác định xác đợc cấu trúc - Trong gam cao nhàu chøa 0,0025 mmol natri; 0,00125 mmol kali; 0,00313 mmol calci; 0,00004 mmol clo; 0,081- 0,098 ppm selen; 1.07- 1,45 ppm Co; 3,02- 4,94 ppm Cu; 35,8-154 ppm Mn; 206-283 ppm Fe - Quả nhàu để làm nguyên liệu phải đạt : miếng mỏng khô, cứng, màu nâu sẫm, mùi đặc biệt, vị đắng, độ ẩm không 10%, tro toàn phần không %, tro không tan acid HCL không 0,5%, định tính cho phản ứng dơng anthranoid, sắc ký lớp mỏng có vết màu đỏ sáng vết màu đỏ đậm anthraquinon, hàm lợng anthraquinon toàn phần không thấp 0,5% - Cao nhàu chất mềm, đồng nhất, màu nâu sẫm, mùi đặc biệt nhàu, vị đắng, độ ẩm không 20%, cắn không tan không 15 %, pH 3,5 5,5, tro toàn phần không 20%, tro không tan acid HCL không 2%, định tính cho phản ứng dơng anthranoid, sắc ký lớp mỏng có vết màu đỏ sáng vết màu đỏ đậm anthraquinon, hàm lợng anthraquinon toàn phần không thấp 1% Về tác dụng dợc lý: 2.1 Tác dụng kích thích miễn dịch: Trên mô hình gây suy giảm miễn dịch cyclophosphamid tia xạ cao nhàu liều 6g/kg thể trọng uống liên tục ngày liền ngày liền đà làm cải thiện rõ rệt số đánh giá chức miễn dịch dịch thể miễn dịch tế bào nh số đánh giá tình trạng chung miễn dịch nh: trọng lợng lách tuyến ức tơng đối số lợng bạch cầu 2.2 Tác dụng giảm đau, chống viêm chống oxyhoá: - Cao nhàu có tác dụng giảm đau mô hình mâm nóng mô hình gây quặn đau acid acetic, tác dụng phụ thuộc vào liều lợng, liỊu d−íi 12 g/Kg thĨ träng ch−a cã t¸c dơng, liều 24 g/Kg thể trọng có tác dụng Tác dụng tơng đơng với aspirin 100 mg/Kg Trên mô hình mâm nóng thuốc cha thấy có tác dụng liều lợng nghiên cứu - Cao nhàu làm giảm thể tích viêm chân chuột carragenin gây nên, giảm thể tích dịch số lợng bạch cầu dịch rỉ viêm giảm trọng lợng u hạt Tác dụng phụ thuộc vào liều dùng, liều 12 g/Kg cha có tác dụng liều 24 g/Kg có tác dụng chống viêm Tác dụng tơng đơng với aspirin 150 mg/kg thể trọng - Cao nhàu có tác dụng chống oxy hoá: sau uống cao nhàu g 25 g/Kg thể trọng liên tục ngày hàm lợng SOD, GR, TAS tăng lên so với nhóm chứng âm chứng dơng 2.3 Tác dụng huyết áp: Cao nhàu có tác dụng hạ huyết áp: với liều 1,5 g/kg thể trọng, cao nhàu làm hạ huyết ¸p chã 20- 26 % so víi huyÕt ¸p ban đầu Tác dụng phụ thuộc liều lợng, liều cao tác dụng hạ huyết áp mạnh Tác dụng hạ huyết áp xuất sau uống 30 phút kéo dài giờ, làm giảm phần tác dụng adrenalin huyết áp tai thỏ cô lập - Cao nhàu làm giÃn mạch tai thỏ cô lập Về độc tính cấp bán trờng diễn: 3.1 Độc tính cấp: Cao nhàu uống víi liỊu 300 g/kg thĨ träng cao gÊp 375 lÇn liều dùng cho ngời không gây chết chuột vòng 72 biểu độc tính thuốc vòng ngày theo dõi Cha xác định đợc LD50 cao nhàu theo đờng uống 3.2 Độc tính bán trờng diễn: Trên thỏ uống cao nhàu liên tục 30 ngày với liều 6g/kg 12g/kg thể trọng cao gấp 10 20 lần liều dùng cho ngời không thấy có thay đổi tình trạng chung, thể trọng, số lợng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, kích thớc hồng cầu, số lợng hemoglobin, công thức bạch cầu, hematocrit, hoạt độ ALT, AST, hàm lợng albumin, cholesterol, bilirubin, creatinin máu nh hình thái đại thể, vi thể gan, thận Kiến nghị áp dụng kết nghiên cứu: Từ kết nghiên cứu thành phần hoá học, tác dụng độc tính cho thấy nhàu có tác dụng kích thích miễn dịch, chống viêm, giảm đau, hạ huyết áp, độc tính cấp bán trờng diễn Kết khẳng định tác dụng nhàu đà đợc nhân dân ta sử dụng để điều trị đau xơng khớp, cao huyết áp, bồi dỡng sức khoẻ đà khẳng định không rễ nhàu có tác dụng kích thích miễn dịch, chống viêm, giảm đau mà nhàu có tác dụng kích thích miễn dịch, chống viêm, giảm đau Để chủ động nguồn nguyên liệu nhàu chuẩn bị cho sản xuất quy mô lớn nhàu trở thành thuốc có hiệu thực có số kiến nghị sau : - Nhà nớc cần có dự án trồng nhàu - Bộ Y Tế phê duyệt đề tài cấp thử nghiệm lâm sàng tác dụng kích thích miễn dịch nhàu bệnh nhân bị suy giảm miễn dịch bệnh nhân ung th - Cần nghiên cứu bào chế dạng thuốc phù hợp có hiệu cao, ngời bệnh dƠ sư dơng Hµ néi, ngµy / HiƯu tr−ëng Chđ nhiệm đề tài TS Nguyễn Trọng Thông Trờng Đại học Y Hà Nội GS TS Nguyễn Lân Việt / 2006 mục lục A Tóm tắt kết bật đề tài 1 Kết bật đề tài Đánh giá thực đề tài đối chiếu với đề cơng đà đợc duyệt B Nội dung báo cáo kết đề tài Ch−¬ng 1: Tỉng quan tµi liƯu 1.1 Tổng quan Nhàu 1.1.1 Đặc điểm nhận dạng 1.1.2 T×nh h×nh nghiªn cøu trªn thÕ giíi 1.1.3 Tình hình nghiên cứu nớc Ch−¬ng 2: Đối tợng phơng pháp nghiên cứu 12 2.1 Đối tợng 12 2.2 Dụng cụ, hoá chất nghiên cứu 12 2.2.1 Nghiªn cøu ho¸ häc 12 2.2.2 Nghiên cứu độc tính tác dơng d−ỵc lý 13 2.3 Phơng pháp nghiên cứu 15 2.3.1 Nghiên cứu thành phần ho¸ häc 15 2.3.2 Nghiên cứu độc tính cao nhàu 21 2.3.3 Nghiªn cøu vỊ tác dụng dợc lý cao nhàu 23 2.4 Xư lý sè liƯu 32 Chơng 3: Kết nghiên cứu 33 3.1 Nghiªn cøu vỊ ho¸ häc 33 3.1.1 Kết định tính nhóm chất hữu 33 3.1.2 Kết nghiên cứu nhóm anthraglycosid 34 3.1.3 Kết nghiên cứu tinh dÇu 37 3.1.4 Kết xác định acid béo nhàu 38 3.1.5 Kết xác định nguyên tố vô nhàu 39 127 3.2 Nghiên cứu độc tính 39 3.2.1 Nghiên cứu độc tính cấp 39 3.2.2 Nghiên cứu độc tính bán trờng diễn cao nhàu thỏ 40 3.3 Nghiên cứu tác dụng dợc lý cao nhàu 55 3.3.1 Nghiên cứu tác dụng chống viêm, giảm đau 55 3.3.2 Tác dụng giảm đau 58 3.3.3 Nghiên cứu tác dụng kích thích miễn dịch 67 3.3.3 Kết nghiên cứu huyết áp 79 Chơng 4: Bàn luận 85 4.1 Nghiªn cøu ho¸ häc 85 4.2 Nghiên cứu độc tính 88 4.2.1 §éc tÝnh cÊp 88 4.2.2 §éc tÝnh b¸n tr−êng diƠn 89 4.3 Nghiên cứu tác dụng dợc lý 93 4.3.1 Tác dụng chống viêm, giảm đau 93 4.3.2 T¸c dơng chèng oxy ho¸ 95 4.3.3 Tác dụng kích thích miễn dịch 99 4.3.4 Tác dụng huyết áp, tim mạch 117 KÕt luËn 123 KiÕn nghÞ 126 Tài liệu tham khảo Phụ lục 128