Nghiên cứu phương thuốc bán hướng chi về thành phần hóa học, tác dụng hạ lipid và thăm dò dạng bào chế Nghiên cứu phương thuốc bán hướng chi về thành phần hóa học, tác dụng hạ lipid và thăm dò dạng bào chế Nghiên cứu phương thuốc bán hướng chi về thành phần hóa học, tác dụng hạ lipid và thăm dò dạng bào chế Nghiên cứu phương thuốc bán hướng chi về thành phần hóa học, tác dụng hạ lipid và thăm dò dạng bào chế Nghiên cứu phương thuốc bán hướng chi về thành phần hóa học, tác dụng hạ lipid và thăm dò dạng bào chế Nghiên cứu phương thuốc bán hướng chi về thành phần hóa học, tác dụng hạ lipid và thăm dò dạng bào chế
Trang 1BO GIAO DUC VA DAO TAO BO Y TE
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI
HOÀNG THỊ NGỌC ANH
NGHIÊN CỨU PHƯƠNG THUỐC BÁN HƯƠNG CHI
VE: THANH PHAN HOA HOC, TAC DUNG HA LIPID
MAU VA THAM DO DANG BAO CHE
LUẬN VĂN THẠC SỸ DƯỢC HỌC
Trang 2BO GIAO DUC VA DAO TAO BO Y TE
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI
HOÀNG THỊ NGỌC ANH
NGHIÊN CỨU PHƯƠNG THUOC BAN HUONG CHI
VE: THANH PHAN HOA HOC, TAC DUNG HA LIPID VA THAM DO DANG BAO CHE
LUAN VAN THAC SY DUOC HOC
CHUYÊN NGÀNH DƯỢC LIỆU - DUGC HOC CO TRUYEN MA SO: 607310
Trang 3LOI CAM ON
Sau gân một năm nghiên cứu để hoàn thành luận văn này, tôi xin tỏ
lòng kinh trọng và biết ơn sâu sắc tới người thầy PGS.TS Phùng Hoa Binh,
đã trực tiếp hướng dân và động viên tôi trong suốt quá trình làm luận văn lôi xin chân thành gửi lời cảm ơn tới cô PGS.TS Phạm Thị Minh Huệ đã tạo điễu kiện, tận tình giúp đố tôi thực hiện nghiên cứu về bào chế
Toi xin gui loi cam ơn tới thay cô, các anh chị ở Bộ môn Dược cổ truyền Trường đại học Dược Hà Nội đã giúp đỡ và chỉ bảo tận tình cho tôi
trong quá trình nghiÊn cứu
Tôi cũng xin cảm ơn Ths Đỗ Thị Phương, trưởng phòng Dược lý Sinh hóa — Viện Dược liệu, cùng các anh chị ở Viện Dược liệu đã nhiệt tỉnh giup đỡ tôi trong quá trình nghiên cứu về tác dụng dược lý phương thuốc Bán Huong Chi
Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè đã động viên, giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập và nghiên cứu
Hà Nội, tháng I1 năm 2012 Học viên
Trang 4MUC LUC Danh mục các ký hiệu, các chữ viết tat Danh mục các bảng Danh mục các hình vẽ, đồ thị Danh mục các phụ lục DAT VAN DE
CHU ONG 1 TÔNG QUAN 5t tt gu 3
1.1 Lipid trong cơ thể con nBưỜi - ¿se ket gen ch gcee 3 IS (06v 0o —-'-ẼẦ 3 1.1.2 Lipid ¡cái ng 4
1.1.3 CHO€S€TOÌ GGĂ S3 9 9g ng ng vú 4
1.2 Quan điểm y học hiện đại về hội chứng rỗi loạn lipid máu 5
1.3 Quan điểm y học cổ truyền về rồi loạn lipid máu - - - 2+ e¿ 8
1.3.1 Chứng đàm thấpp - - <1 cưng ghi 8
1.3.2 Sự tương đồng giữa chứng đàm thấp và rỗi loan lipid mau 10
1.4 Một số bài thuốc có tác đụng làm giảm lipid máu - 11 1.5 Phương thuốc “Bán Hương Chỉ” - Set EESEkckeE ket ereced 12
1.5.1 COng thi 12
1.5.2 Đặc điểm vị thuốc ¿cv 12
1.5.3 Cơ sở xây dựng phương thuỐc - - cv zxsveerrsrxd 19 1.6 Bao ché d6ng duoc ecccecccccssessesssesssscssssesessssssessssssvsesusessesesesesansesesaee 21
Trang 51.6.2 Một số dạng thuốc bào chế từ đông được -. 5- - 22 CHƯƠNG 2 NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP
NGHIÊN CỨU ¿5c th E3 H1 TH HH ngư 24 2.1 NGUYEN HEU 24 2.2 PhUONG tiGtecccccccccccssescssescssessesescsstssssessescssesssstsssssssssessessseeseeees 24 58/1207 24 2.2.2 Hóa chất ¿cà Làn 1 11 111111311 131111 101g HH gio 25 2.2.3 Súc vật ngh1Ên CỨU -c c1 011 11111 9 119551511134 25 2.3 Nội dung nghiÊn CỨU - - ( < Ă cc 13111111 1% 1011110 111111111 1 10 144 26 2.4 Phương pháp nghiÊn CỨU - G0 Y0 S19 9 9 13111 1k cha 26
2.4.1 Thâm định tính đúng của vị thuỐc ¿- + sxx+xk+xsxvxea 27 2.4.2 Nghiên cứu thành phần hóa học -¿- - c6 xe x++x+xeš 27
2.4.3 Tham do tac dung ha lipid mấu - << «<< <<+<++2 28
2.4.4 Thtr dOc tinh CAp.icicccccsscscscsssssscsscscssscssscsecscssscsesssscseesesessavens 29
2.4.4.1 Nguyên vật liệu thí nghiệm - ‹< <<: 29
2.4.4.2 Phương pháp thí nghiỆm c5 5s Ss*++<<+s 29
2.4.5 Nghiên cứu thăm dò đạng bào chế - - - c6 sxssssxcxei 30
2.4.5.1 Điều chế cao đặc E —- BHC -. . 5-cccce 30
2.4.5.2 Phương pháp bào chế - -s- k+xx+k+kex tk xee 31 2.4.5.3 Đánh giá tiêu chuẩn đạng bào chễ -5- e: 31
CHƯƠNG 3 KÉT QUÁ NGHIÊN CỨU 2-5: 5552552552 32
Trang 63.2 Nghiên cứu thành phần hóa học - - - sk +xe ket 38
3.2.1 Định tính bằng phản ứng hóa học 2-6 ket 38 3.2.1.1 Bào chế đạng cao lỏng tỉ lệ 2: . - - s sec 38
Sun an .4 38
3.2.2 Định tính bằng sắc ký lớp mỏng - + ce+k+xk xe 47
3.2.2.1 Định tính phân đoạn Ethylacetat «‹‹‹+++- 47 3.2.2.2 Định tính phân đoạn n - Butanol ‹ ‹<- 50
3.3 Thăm dò tác dụng hạ ÏIpId mắu - << << c <1 sssssssssssxs2 52
3.4 Thử độc tính cấp - - - c6 ket tk E19 131 HH ng ng 57 3.5 Nghiên cứu thăm dò dạng bào chẾ - se +ksE+Evss+keEersrkxee 59
3.5.1 Điều chế cao đặc - ca canh v 191 218115515515 E55EEEE se srrd 59
3.5.2 Thăm dò bào chế viên nang UNG ceccsccceseseccssesteesteteeeseens 59
3.5.2.1 Khảo sát quá trình tạo hạt «5< <<<+<+2 59 3.5.2.2 Xây dựng công thức bào chê - - sscsccscscxo 62
3.5.3 Thăm dò bảo chế viên nén - cv +cxtcerkreerkrerrke 64
Trang 7BHC Chol - T DD DDVN IV E - BHC E-QC HPTLC HDL IDL LDL N - BHC N - QC NXB PT PU QC SKLM TG TN tr., p TT UV VLDL YHCT YHHD
DANH MUC CAC KY HIEU, CAC CHU VIET TAT
Ban Huong Chi
Cholesterol toan phan Dung dich
Dược điển Việt Nam IV
Cao cồn phương thuốc Bán Hương Chi
Cao cồn quế chỉ
Sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao
(High performance thin layer chromatography)
High Density Lipoprotein (Lipoprotein ti trong cao)
Intermidiate Density Lipoprotein (Lipoprotein ti trong trung binh) Low Density Lipoprotein (Lipoprotein ti trong thap)
Cao nước phương thuốc Bán Hương Chỉ
Trang 8DANH MUC CAC BANG
Bang 1.1 Phan loại các typ réi loan lipid mau theo Fredrickson 6
Bang 1.2 Phan loai rỗi loạn lipid máu theo Hội tim mạch Việt Nam và theo ATTP III (2001) - - Ăn, 6 Báng 1.3 Tác dụng của phương thuốc Bán Hương Chi -. 20
Bảng 3.1 Kết quả định tính thành phân hóa học trong E - BHC, N- BHC 46
Bảng 3.2 Kết quả SKLM phân đoạn Ethylacetat từ dịch chiết E-BHC 49
Bang 3.3 Két qua SKLM phân đoạn n - Butanol từ địch chiết E-BHC 31
Bang 3.4 Ham luong Chol-T (mg/dl) va ty 16 (%) tang Chol-T huyết thanh trước và sau tiêm triton của các lô -. - 54
Bang 3.5 Ham luong TG (mg/dl) va tỷ lệ (%) TG huyết thanh trước va sau THEM tritON CUA CAC PT a - 55
Bảng 3.6 Kết quả thử độc tính cấp của cao cồn phương thuốc BHC 58
Bảng 3.7 Kết quả tạo hạt với hỗn hợp (Erapac, CaHPO/) - -: 60
Bảng 3.8 Kết quả tạo hạt với hỗn hợp (Aerosil, CaCO) 61
Trang 9DANH MUC CAC HINH VE, DO THI
Hình 2.1 Sơ đồ bào chế cao đặc E - BHC - -< 2 30
Hình 3.1 Ảnh cây và hoa Bán hạ nam ‹ cc-c << 2c c2 32
Hình 3.2 Ảnh chup vi thuốc Bán ha nam viccccccccscccccsssesesesesessscscsesssescecseecaeans 32 Hinh 3.3 Anh chup dac điểm vi hoc b6t Ban ha nam cccccccccscssscsesssesesssees 33
Hình 3.4 Ảnh cây và hoa Huong phul cc.ceeccecccucecesceusceuseecenes 34
Hình 3.5 Ảnh chụp vị thuốc Hương phụ .- - - + 6xx +x+kexe£keEexsrkd 34
Hình 3.6 Ảnh chụp đặc điểm vi học bột Hương phụ - - 5 «¿ 35 Hình 3.7 Ảnh chụp vị thuốc Quế chi -¿-¿- + SkckcketeEkekckererkr 36 Hình 3.8 Ảnh chụp đặc điểm vi học bột Quế chi . se cxcxcered 36
Hình 3.9 Ảnh chụp vị thuốc Thương truật cv ke 37
Hình 3.10 Ảnh chụp đặc điểm vi học bột Thương truật - 37 Hình 3.11 Sắc kí đồ phân đoạn Ethylacetat từ dịch chiết E - BHC 49
Hình 3.12 Sắc kí đồ phân đoạn n - Butanol từ dịch chiết E - BHC 51
Hinh 3.13 Biéu dé biéu thi ty 16 (%) tang Chol - T (mg/dl) huyét thanh 6
chuột sau khi tiêm triton 6 cac lô thí nghiệm 555cc ss‡sss+sss2 56
Hình 3.14 Biểu đồ biểu thị tý lệ (%) tăng TG (mg/dl) huyết thanh ở chuột
Trang 10DANH MUC PHU LUC
Phụ lục 1: Hàm lượng và tỷ lệ (%) tăng Chol - T và TG trước và sau khi tiêm Triton của cac 16 TN
Phụ lục 2: Một số công thức bài thuốc có tác dụng hạ lipid máu Phụ lục 3: Bảng ngoại suy liều tương đương giữa các loài
Phụ lục 4: Thẻ tích tối đa dung dịch thuốc có thể dùng cho động vật
Phụ lục 5: Kết quả kiêm định một số chỉ tiêu viên nén Bán Hương Chi
Trang 11DAT VAN DE
Bệnh rối loạn lipid máu là một bệnh phố biến ở Việt Nam và trên thế
giới, nhất là ở các đô thị, với tỉ lệ mắc bệnh cao Đặc biệt, khi đời sống được
cải thiện cùng với lối sông tĩnh tại dẫn đến tỉ lệ bệnh nhân có hội chứng rối
loạn lipid ngày càng tăng Rối loạn lipid máu là nguy cơ chính của nhiều bệnh nguy hiểm như: cao huyết áp, nhồi máu cơ tim, tai biến mạch máu não, xơ
vữa động mạch Điều trị rối loạn lipid mau da va dang la van dé quan tam
hang đầu của y học thế giới cũng như y học Việt Nam
Y học hiện đại đã đi sâu và nghiên cứu, tìm ra nhiều loại thuốc có tác
dung làm giảm lipid máu, hiệu quả điều trị cao, tiện sử dụng Nhưng hâầu hết các bệnh nhân với hội chứng tăng lipid máu cần được điều trị với hai hay
nhiều thuốc, việc sử dụng đồng thời nhiều loại thuốc sẽ làm tăng nguy cơ xuất
hiện các tác dụng không mong muốn; mặt khác giá thành thuốc khá cao
không phù hợp với điều kiện kinh tế của đại đa số bệnh nhân
Cây cỏ đã đóng góp đáng kể, làm giàu thêm danh mục thuốc trị rỗi loạn lipid máu; nhiều dược liệu được xác định bằng dược lý hiện đại có tác dụng tốt trên rỗi loạn chuyển hóa lipid đã được công bố và đưa vào áp dụng
Y học cỗ truyền Việt Nam nhận thấy chứng rối loạn lipid máu và
chứng đàm có nhiều điểm tương đồng, bài thuốc có tác dụng trừ đàm thấp
cũng có liên quan đến tác dụng hạ lipid máu,
Xuất phát từ nhu cầu thực tế, đồng thời góp phân làm phong phú thêm
kho tàng thuốc điều trị rối loạn lipid máu, chúng tôi thiết kế phương thuốc Bán Hương Chi và thực hiện đề tài "Nghiên cứu phương thuốc Bán Hương Chỉ về: thành phần hóa học, tác dụng hạ lipid và thăm dò dạng bào chế"
Trang 121 Nghiên cứu tác dụng giảm cholesterol và triglycerid trong máu, độc tính cấp của phương thuốc Bán Hương Chỉ
2 Thăm dò dang bao ché phù hợp đỗi với phương thuốc
Trang 13CHUONG 1 TONG QUAN
1.1 Lipid trong co thé con người
1.1.1 Vai trò của lipid
Trong cơ thể con người, lipid có vai trò chính: cung cấp, dự trữ năng
lượng và tham gia vào cấu tạo tế bào Lipid dự trữ chủ yếu là triglycerid ở tổ chức mỡ đưới da Lượng lipid dự trữ thay đổi theo chế độ ăn và trạng thái cơ thé [10]
Lipid tham gia vao cau tao mang tế bào, màng nhân, màng các tiêu thê
trong tế bào và có mặt trong thành phần của bào tương hầu hết là lipid phức
tạp chủ yếu là phospholipid [10]
Ngoài ra, lipid còn có vai trò bảo vệ, điều hòa thân nhiệt, hấp thu và vận chuyên các chất tan trong dau; đặc biệt là các vitamin A, D, E, K và các hormon steroid [10]
Trong cơ thể, lipid phan bé 6 ba khu vuc [11] [12]:
Khu vực các lipid cau trac gém các lipid có ở màng tế bào, bào tương nhu cholesterol, cac lipid khac nhu phospholipid, acid béo
Khu vực lipid dự trữ: tạo nên lớp mỡ mà thành phần chủ yếu là triglycerid, ở khu vực này luôn có quá trình sinh và thoái biến lipid
Khu vực lipid lưu hành: lipid được kết hợp với mot loai protein là apoprotein (Apo) dé chuyén thanh dang lipoprotein luu hanh trong mau
1.1.2 Lipid trong mau
Trong mau, lipid 6 dang lipoprotein hoa tan dé van chuyển đến các tổ
Trang 14- Lipoprotein ti trong rat thap (VLDL) 0,94< d < 1,006 - Lipoprotein ti trong thap (LDL) 1,019<d < 1,063
- Lipoprotein ti trong trung binh (IDL) 1,006 <d < 1,019
- Lipoprotein ti trong cao (HDL) 1,063 <d < 1,210
Do đó có thể phân biệt các lipoprotein bằng phương pháp siêu ly tâm hoặc
dién di
Sw van chuyén lipid:
- Chylomicron: do cac tế bào niêm mạc ruột non tạo nên, có vai trò van
chuyền TG ngoại sinh
- VLDL: chủ yếu do gan tổng hợp, vận chuyển lipid cha yéu là TG nội
sinh và một phần cholesterol
- LDL: là sản phẩm chuyền hoá của VLDL có tỉ trọng cao và kích thước
nhỏ hơn VLDL Vai trò chính là vận chuyển cholesterol nội sinh tới các tô
chức
- HDL: nguén gốc từ gan và ruột, vận chuyên cholesterol và phospholipid từ tê bào ngoại vi về gan đê thải ra ngoài băng đường mật
1.1.3 Cholesterol
Cholesterol trong cơ thể có hai nguon sốc:
Nguồn gốc ngoại sinh: do niêm mạc ruột hấp thu từ thức ăn, chủ yếu từ
mỡ động vật, có thể từ 0,5 - 1g/ngay [10]
Nguồn gốc nội sinh: đo cơ thể tổng hợp chủ yếu ở tế bào gan khoảng lg/ngày [10]
Cholesterol có vai trò tham gia câu tạo màng tế bào Con đường chuyển
Trang 15mật đồ vào ruột giúp cho quá trình tiêu hoá và hấp thu lipid Cholesterol con là nguyên liệu tổng hợp hormon steroid [10]
Trong máu cholesterol tồn tại đưới hai dạng: dạng tự do (chiếm 1/3) va
dạng este (chiếm 2/3), cả hai dạng này đều kết hợp với protein tạo thành lipoprotein Bình thường ở người nông độ cholesterol toàn phần trong máu khoảng 200 mg/dl, chủ yếu là dạng cholesterol - este Nồng độ cholesterol
trong hông cầu và trong huyết thanh bằng nhau, trường hợp bệnh lý chỉ thấy
tăng cholesterol ở huyết thanh [10]
1.2 Quan điểm y học hiện đại về hội chứng rối loạn lipid máu
Định nghĩa:
Rối loạn lipid máu là tình trạng tăng cholesterol, triglycerid huyết tương hoặc cả hai; hoặc giảm nồng độ lipoprotein phân tử lượng cao, tăng nồng độ
lipoprotein phân tử lượng thấp làm gia tăng nguy cơ xơ vữa động mạch [24] [54I
Phán loại:
Hội chứng rối loạn lipid máu nguyên phát Hội chứng rối loạn lipid máu thứ phát
Rối loạn lipid máu thể nguyên phát: phân loại kinh điển dựa trên đặc
Trang 16Bang 1.1 Phan logi các typ rối loạn lipid mdu theo Fredrickson [9] Typ Loai lipoprotein I Chylomicron Ila LDL IIb LDL va VLDL II Cấu trúc bất thường của LDL IV VLDL V Chylomicron va VLDL Bang 1.2 Phan logi rồi loạn lipid mau theo Hoi tim mach Viét Nam va ATP IH (2001) Ộ Hội tim Phan loai lipoprotein theo ATP III (2001) Thanh phan h
lipoprotein “A va, Thấp | Tối a 61 uu Binh | Grothan C ao
Việt Nam thường trên CT (mmol/1) < 5,2 < 5,2 5,2-6,2 | >6,2 TG (mmol/l) < 2,3 <1,7 | 1,7-2,3 > 2,3 HDL-c (mmol/1) > 0,9 <1 >1 > 1,6 LDL-c (mmol/l) < 3,2 <2,6 | 2,6-3,3 | 34-41 | >4,1
Réi loan lipid mau thể thứ phát: gặp nhiều trong các bệnh như đái tháo
đường, bệnh gout, suy tuyến giáp nguyên phát, hội chứng tắc mật, hội chứng
thận hư, suy thận mạn Khi dùng một số loại thuốc cũng có thể gây tăng
lipid máu như corticoid, thuốc lợi tiêu, thuốc hạ huyết áp hoặc ăn nhiều thức
Trang 17Biến chứng:
Xơ vữa động mạch: tăng lipid máu là một trong những yếu tố đe dọa chính của bệnh xơ vữa động mạch Cholesterol tỉ trọng thấp (LDL) lưu hành trong
mạch máu, nó sẽ từ tử lắng đọng vào thành mạch Cùng với một số chất khác, nó sẽ hình thành mảng xơ vữa động mạch, làm lòng mạch bị hẹp dần hoặc tắc
hoàn toàn [10] [23] [24] [49]
Tai bién mach vanh: theo Framingham, néu tai bién mach vanh là 1 khi cholesterol máu < 2g/1, và tỉ lệ bệnh này tăng lên 2,25 đến 3,35 nếu
cholesterol tang tt 2,4 - 2,5 g/l dén > 2,6 g/l [24] [49]
Các thuộc dung dé diéu tri roi loan lipid mau: cac resin chelat héa, cac dan xuat cua statin, cac dan xuat cua acid fibric va cac thudc khac nhuw acid nicotinic, acid oxiniacic [9] [24] [54]
Các thuốc điều trị trên vẫn được dung phố biến và có hiệu quả tốt Tuy nhiên, giá thành các thuốc này khá đắt, và đều có những tác dùng không
mong muốn trên hệ tiêu hóa như rối loạn tiêu hóa, tiêu cơ vân và rối loạn thần kinh trung ương Vì vậy, hầu hết những thuốc này đều chống chỉ định cho đối tượng phụ nữ mang tha, đang cho con bú cũng như những người bị suy gan thận nặng
1.3 Quan điểm y học cô truyền về rối loạn lipid máu 1.3.1 Chứng đàm thấp
Quan điểm y học cỗ truyền về chứng đàm thấp:
Theo lý luận của y học cô truyền, thủy - thấp - đàm - âm là những sản
phẩm bệnh lý hình thành trong quá trình trao đối thủy dịch trong cơ thể bị rồi
loạn Loại sản phẩm bệnh lý này vừa hình thành đã trở thành nhân tổ gây
bệnh mới tác động đến cơ thể làm rối loạn chức năng tạng phủ dẫn đến các
Trang 18lưu chuyên khác nhau, cũng có thê phân làm bốn nhưng cũng có thê hợp làm
một Chúng đều là sản phẩm bệnh lý hình thành từ tân dịch của cơ thể [1] [13] Nói chung thấp tụ thành thủy, thủy tích thành âm và âm ngưng thành
đàm Thủy - thấp - đàm - âm đều do tân dịch đình lưu trong cơ thể mà hình thành nên trong nhiều trường hợp thủy - thấp - đàm - âm được gọi chung là
“đàm thấp”, “đàm âm”, “thủy thấp”, “thủy âm” [18] [33] [35]
Nguyên nhân, cơ chế sinh đàm thấp:
Nguyên nhân phần nhiều liên quan đến phế, tỳ, thận [1] [13] [18] Khi công năng mất điều hòa và có ảnh hưởng qua lại lẫn nhau, nhất là tỳ đương
mất chức năng kiện vận, tam tiêu khí hóa chướng ngại làm cho thủy dịch tích chứa lại là nguyên nhân chủ yếu [1] [35]
T?: là nguồn sinh ra đàm, tỳ khí hư yếu công năng vận hóa thủy cốc kém, khiến chất thanh khó thăng lên, chất trọc khó giáng xuống Chất tinh vi của
thủy cốc không được vận hóa bình thường tụ lại thành đàm Tỳ hư sinh đàm
có thể do [1]:
- Ăn uống nhiều chất béo ngọt tốn hại tỳ vị, vận hóa thủy thấp rỗi loạn, đàm thấp nội sinh
- Do tình chí: lo, nghĩ, giận dữ, làm tổn thương tạng can tỳ
- Do ít vận động thê lực: nằm nhiều hại khí, ngồi nhiều hại cơ nhục Thương
khí dẫn đến khí hư, thương nhục dẫn đến tỳ hư, tỳ khí hư suy mà sinh đàm
trệ
Thán- là gốc của đàm, thận dương hư suy, hỏa không ôn 4m duoc thé,
thủy thấp tân dịch không khí hóa được tràn lên thành dam [1]
Phế: khí hư suy mất khả năng thông điều thủy đạo, thủy dịch ngưng lại
thành đàm hoặc phê âm bất túc, âm hư hỏa vượng, hư hoa hun nau tan dich
Trang 19khi sinh ra theo khí phân bố rất rộng, gây ra các chứng đầu thống, huyễn
vựng giỗng triệu chứng lâm sàng của rối loạn lipid máu [1] Phân loại đàm:
Dựa vào nguyên nhân sinh ra đàm, đàm được chia thành năm loại [1] Gồm: thấp đàm, nhiệt đàm, tảo đàm, phong đàm và hàn đàm
Một số triệu chứng điển hình trên lâm sàng:
* Dam troc u frở: người mập, nặng đầu, cảm giác đầy bung, mach hoat [21] * Ty than duong hư: chóng mặt, mệt mỏi, tay chân uê oải, cảm giác đầy bụng,
buôn nôn, rêu lưỡi trăng dày, mạch hoạt [21]
* Can thận âm hư: người gầy ốm, mệt mỏi, cảm giác nóng bứt rứt trong người, đau lưng, mỏi gối, tiêu đêm, ngũ tâm phiên nhiệt, lưỡi đỏ, mach tram sắc vô lực [21]
* Âm hự đương can: đau đầu, chóng mặt, U tai, ngũ tâm phiền nhiệt [21] * Khí trệ huyết : đau nhói vùng ngực, đoản hơi, lưỡi tím hoặc có điểm ứ huyết, mạch huyền [21]
1.3.2 Sự tương đồng giữa chứng đàm thấp và rối loạn lipid máu
Rối loạn lipid máu không có trong y văn của y học cô truyền; tuy nhiên
dựa trên nhiều nghiên cứu lâm sàng và cận lâm sàng, giữa chứng rối loạn
lipid máu và đàm thấp có nhiều điểm tương đồng
Trong tác phẩm Tố vấn - “Thông bình hư thực luận”, cho rằng béo phì đa phan do đàm nhiều, thấp nhiều và khí hư gây nên; nguyên nhân thường có
liên quan đến yếu tố hậu thiên, do ăn nhiều cao lương mỹ vị, đồ ăn béo ngọt,
nằm nhiều, ngồi nhiều, ít vận động [39] Cụ thể:
+ Yếu tô thể chất do tiên thiên quyết định: thường là tiên thiên bắt túc [1], yếu tố này có thể hiểu như yếu tô di truyền của y học hiện đại [24] [54]
Trang 20như việc ăn quá nhiều thức ăn giàu mỡ động vật chứa nhiều acid béo no theo
y học hiện đại quan niệm [24] [54]
+ Yếu tố ít vận động thê lực: sách 7ố Vấn - “Tuyên minh ngũ khí luận” viết
“Cửu ngọa thương khí, cửu tọa thương nhục” (nằm nhiều hại khí, ngồi nhiều
hại cơ nhục) Thương khí dẫn đến khí hư, thương nhục dẫn đến tỳ hư, tỳ khí
hư suy mà sinh ra bệnh [39] Y học hiện đại đã chứng minh vận động tập thể
luc lam giam LDL - c va tang HDL, - c, làm giảm nguy cơ xơ vữa động mạch [24] [54]
+ Yếu tô tinh thần: lo nghĩ hại tỳ, giận dữ hại can, tỳ can hư dẫn đến công
năng vận hóa suy giảm, đàm trọc ứ trệ mà sinh bệnh [1] Đây chính là yếu tô
căng thang tinh than (stress) của y học hiện dai [24] [54]
Ngoài ra, có nhiêu còn nhiều bằng chứng cho thay chứng đàm thấp liên
quan chặt chẽ đến rối loạn lipid máu như:
+ Huyễn vựng thê đàm thấp: đau đầu, chóng mặt ở người béo, đàm thấp [26] + Khí trệ, huyết ứ do đàm thấp: tuần hoàn giảm do thành mạch máu cản trở
[36]
1.4 Một số bài thuốc có tác dụng làm giảm lipid máu
Một số bài thuốc đã được nghiên cứu có tác dụng làm giảm lipid máu như:
+ Giáng chi âm [28]
+ Nhị trần thang gia giảm [1] [22]
* Bán hạ bạch truật thiên ma thang [29] [34] [36] [41]
+ Ôn đởm thang gia giảm [29] [34]
Trang 211.5 Phương thuốc “Bán Hương Chỉ” 1.5.1 Công thức Bán hạ 20g Quế chỉ 10g Hương phụ 20g | Thương truậi 10g 1.5.2 Đặc điểm vị thuốc
% Bán ha nam: Tén khoa hoc Rhizoma Typhonii trilobati [14]
Bộ phận dùng: Thân rễ già được chế biến thành phiến khô của cây chóc
chudt Typhonium trilobatum (L.) Schott, ho Ray (Araceae) [14]
Thanh phan héa hoc:
Alcaloid, coumarin, sterol, saponin, acid amin, acid httu co, chat nhay, va tinh bột [4] [5] Trong đó hàm lượng alcaloid toàn phần là 0,35%, hàm lượng coumarin toan phan là 0,20%, hàm lượng sterol toàn phần là 0,01%, hàm lượng saponosid toàn phân là 0,18% [4]
Sterol co Stigmasterol va — sitosterol [4], trong đó ÿ - sitosterol có tác dụng giảm lipid máu [48] [57]
Tác dụng: * Tác dụng dược lý
Tác dụng giảm ho, trừ đờm: Khi thử tác dụng được lý đối với cao lỏng
(1:1) của bán hạ sống và bán hạ chế, nhận thấy, cả 2 mẫu đều có tác dụng
Trang 22Tác dụng chống nôn: Cao lỏng (1:1) bán hạ chế có tác dụng giảm nôn khi
thử trên chó con với cả hai giống [4]
Tác dụng lợi tiểu: Cao lỏng (1:1) của bán hạ chế có tác dụng lợi tiểu trên chuột công trắng [4]
* Theo YHCT
Tĩnh vị: vị cay, tính âm, có độc [5] [14] [42]
Qui kinh: tỳ, vị [5] [141 [37] [421
Cong nang, Chu tri [5] [14] [42]:
Làm ráo thấp, trừ đàm, chỉ ho, dùng trong các chứng đàm thấp, biểu hiện
ho có nhiêu đàm
Giáng nghịch, cầm nôn, đùng khi khí nghịch lên mà gây nôn, đầy chướng bụng
Tiêu phù, giảm đau, giải độc, dùng ngoài trỊ rắn can sung dau
Đau mỏi cơ nhục do đàm thấp
* Chế biễn theo phương pháp cỗ truyền
Chế biến sơ bộ:
Trang 23Ban hạ nam ngâm trong nước vo gạo 2 ngày đêm, mỗi ngày thay nước một
lần Rửa nhẹ Ngâm trong dịch nước phèn chua 3 — 5% trong 2 ngày đêm
Phơi khô Tâm dịch nước gừng, ủ đến thắm đều toàn phiến Sao vàng [14]
s Hương phụ: Tên khoa học Rhizoma Cyperi [14]
Bộ phận dùng: Thân rễ đã loại bỏ rễ con và lông, sẵy khô của cây hương
phụ vườn Cyperus rotundus L., hoặc cây hương phụ biển Cyperus stoloniferus Retz., ho Coi (Cyperaceae) [14]
Thanh phân hóa học:
Hương phụ chứa tính dau 0,3 - 2, 8%, flavonoid 1,25%, tanin 1,66%, cac
acid phenol (acid p.coumaric, acid ferulic, acid vamilic, acid
p hydroxybenzoic), alcaloid 0,21 - 0, 24 %, glycosid tim 0,62 - 0,74% Ngoai ra, cu gau còn có chất đẳng (hệ số chất đẳng 1,333), pectin, tinh bột 9,2%, chất béo, acid hữu cơ, protein, vitamin C và nhiều nguyên tố vi lượng khác [42]
Tac dung: * Tác dụng dược ly
Tác dụng ức chế co bóp tử cung: Cao lỏng 5% ức chế sự co bóp tử cung của chuột lang, mèo, thỏ trên cả hai mô hình thử nghiệm tử cung bình thường va co thai [5] [37] [42]
Tac dụng giảm đau: Từ dịch chiết côn tiễn hành thí nghiệm trên chuột
nhất trắng gây đau bằng kích thích điện; cao lỏng 20% dùng đường tiêm đưới
Trang 24Tác dụng trên thần kinh trung ương: Tĩnh dầu với liều 0,03ml/chuột, thi nghiệm trên chuột nhắt trăng bằng đường tiêm phúc mạc, có tác dụng kéo dài thời gian gay ngu cua phenobarbital [42]
Tac dung khac: Dich chiết ether có tác dụng chống viêm, hoạt chất chống
viêm chủ yếu là œ — cyperen (trong tỉnh dầu) ức chế mạnh sự hình thành
prostaglandin E, [42] * Theo YHCT
Tinh vi: vi cay, hoi dang, tinh binh [5] [14] [42]
Qui kinh: can, tam tiéu [5] [14] [42], ty [14] Cong nang, Chu tri [5] [14] [42]:
Hành khí, giải uất, dùng đề điều trị bệnh đau bụng, đau hai bên sườn, sôi
bụng, tiết tả
Khai uất, điều kinh, dùng khi kinh nguyệt không đều do tỉnh thần căng
thăng, khí có đau bụng đưới, hai vú căng đau
Kiện vị, tiêu thực, dùng trong các trường hợp ăn uống không tiêu, tức bụng * Chế biễn theo phương pháp cỗ truyền Chế biển sơ bộ: Thu hoạch rễ củ gia, phơi khô, đốt chảy hết rễ con, rửa sạch, phơi đến khô kiệt [14]
Chế biển cô truyền:
Thái phiến mong 1 — 2mm, chia déu thanh 4 phan, mỗi phần tâm với một
Trang 25Ủ riêng từng phần đến khi dịch thấm đều vào vị thuốc Phần tâm rượu sao qua, ba phần còn lại sao vàng Trộn đều 4 phân [14]
s» Quế chỉ: Tên khoa học Ramunlus Cinnamomi [14]
Bo phan dung: Canh phoi khé cua cay Qué Cinnamomum cassia Rresl.,
hoặc một sơ lồi Q khác cua mét sé loai khac Cinnamomum zeylanicum Blume, Cinnamomum loureirii Nees., ho Long nao (Lauraceae) [14]
Thanh phan héa hoc:
Tinh dau: ham lượng tinh dâu thay đối ở các bộ phận từ 1 - 3%, lá 0,14 - 1,04%, cành con 0,3 - 0,33% [7] Thành phần chính trong tỉnh dầu quế là
aldehyd cinamic [7] [14] Ngoai ra con c6 cinnamyl acetat, coumarin,
cinnamy]l alcol, methyl cinnamat
Thanh phan khac: tinh bét, chat nhay, dau béo, tanin, chat mau, chat ngọt,
gôm, calcioxalat; các dẫn chất flavonoid gém ca procyanidin; các chất chứa nhân thơm [7]; B - sitosterol, cholin, acid protoatechic [43]
Tác dụng: * Tác dụng dược lý
Tác dụng trên chuyển hóa: Trên mô hình chuột gây đái tháo đường bằng
Alloxan, dịch chiết nước của qué chi va qué nhục đều có tác dụng hạ đường
huyết bằng đường uống với liều 2,4g được liệu/kg thê trọng (tương đương với liều 10g dược liệu/người/ngày) [31]
Quế nhục gây hạ đường huyết và giảm cholesterol, đặc biệt đối với bệnh
nhân đái tháo đường typ 2 [43] [45] [46] [47] [52] [53] [54] [56] [57]
Tác dụng trên hệ tim mạch: Giãn mạch [5], trợ hô hấp và tuần hoàn, cường
Trang 26Tác dụng trên hệ tiêu hóa: Kích thích tiêu hóa, tăng sự bài tiết, tăng nhu
động dạ dày ruột, kích thích niêm mạc dạ dày [5] [7] [37]
Tác dụng toàn thân: Quê chi có khả năng kích thích tuyến mô hôi, tăng bài
tiết mồ hôi, giãn mạch [5] [43]
Tác dụng giảm đau, giải co quắp [5]
Tác dụng kháng khuẩn: quê chi ức chễ hoạt động của một số vi khuẩn
đường ruột như ly trực khuẩn, vi khuẩn, ức chế hoạt động của vi khuan sinh
hơi [5] [7] [37] [43] * Theo YHCT
Tinh vi: vị cay ngọt, tính âm [5] [14] [43]
Quy kinh: quy vào 3 kinh phế, tâm, bàng quang [Š] [14] [43] Công năng, chủ trị:
Giải biểu, phong hàn, dùng để chữa bệnh cảm mạo phong hàn: sốt cao, rét
run, không có mồ hôi [5] [14] [43]
Thông dương khí, dùng khi dương khí ứ trệ, hoặc dùng trong chứng đàm
âm, khí huyết lưu thông kém [5] [14] [43]
Âm kinh thông mạch, dùng điều trị các bệnh phong hàn, thấp trệ dẫn đến
đau nhức xương khớp, thân kinh ngoại biên [5] [14]
Hành huyết giảm đau, dùng trong các trường hợp bế kinh, ứ huyết [5] [43]
Trang 27“+ Thuong truat: Tén khoa hoc Rhizoma Atractylodis [14]
Bộ phận dùng: Thân rễ đã phơi khô của cây Mao thương truật
Atractylodes lancea (Thumb.) DC, hoặc cây Bắc thương truat Atractylodes chinensis (DC) Koidz., ho Cuc (Asteraceae) [14]
Thanh phan héa hoc [37] [43]:
Thân rễ thương truật chứa glycosid kali atractylat, hydroxyatractylon,
acetoxyatractylon, hinesol; tỉnh đầu và các polysaccharid là thành phần có hoạt tính sinh học Tinh dầu thương truật có p.cymen, B - selinen, Ar - curcumen, elemol, B - eudesmol Tac dung: * Tác dụng dược ly
Tác dung trén duong mau: Glycosid kali atractylat trong thương truật có tác dụng trên đường máu, đầu tiên gây tăng, sau đó gây hạ đường máu có thê đến mức gây co giật, làm giảm glycogen trong gan, cơ và làm tăng nhẹ trong
tim [43]
Tác dụng trên tế bào: Cao chiết với nước nóng của thương truật có hoạt
tính tạo phân bào Phân đoạn polysaccharid thô kích thích sự tăng sinh của tế
bào tủy xương trung gian bởi các tế bào Peyer [43]
Cao nước thu được từ căn còn lại sau khi chiết thân rễ thương truật với
methanol cho uống có tác dụng kéo đài thời gian sống sót của chuột nhất
trắng gây nhiễm Candida albicans với liều 140 mg/kg/ngày, so với chuột đối
Trang 28* Theo YHCT
Tinh vị: VỊ đăng, cay, tính am [5] [14] [37] [43] Quy kinh: vao 2 kinh ty, vi [5] [14]
Cong nang, chu tri:
Hóa thấp, kiện tỳ, đùng trong trường hợp bị thấp khuẩn tỳ vị, bụng trướng
đây, buồn nôn, ăn uống không tiêu [5] [14] [43]
Trừ phong thấp, đùng trong các trường hợp phong thấp, tê đại xương cốt,
đau nhức [5] [14] [43]
Thanh can sáng mắt, dùng khi mắt bị mờ, nhức mỏi [5]
1.5.3 Cơ sở xây dựng phương thuốc
Phương thuốc Bán Hương Chỉ được thiết kế nhằm thăm đò tác dung ha cholesterol và triglycerid huyết thanh Cơ sở thiết kế phương thuốc:
* Theo ly luan YHCT:
Chứng bệnh liên quan đến cholesterol và triglycerid thuộc phạm trù đàm
thấp, đàm thấp hình thành do thấp tà ứ đọng lại “Đàm sinh tại tỳ, chứa tại
Trang 29Bảng 1.3 Tác dụng của phương thuốc Ban Huong Chi
Tác dụng Vị thuốc Ý nghĩa trong bài thuốc
Hóa đàm thấp Banha | Hóa đàm thấp, được dùng trị chứng “phì nhân đa đàm” (Quân) Thông hành kinh| Quéchi | Lưu thông phần huyết, giảm ứ đọng thấp tà lạc, hoạt huyết
Hành khí Hương phụ | Hỗ trợ tác dụng thông kinh lạc, hành huyết
cua qué chi
Kiện tỳ hòa thấp | Thương truật | Trị nguyên nhân sinh đàm, biến hóa thấp tà
Vì vậy, phương thuốc vừa trị triệu chứng vừa trị nguyên nhân gây bệnh * Tác dụng dược lý và thành phan hóa học
Bán hạ chứa nhiều thành phần của sterol như ÿ - sitosterol, stigmasterol Trong đó 6 - sitosterol co tac dung ha lipid mau va đã được sử dụng dưới dạng dược phẩm dung cho bệnh nhân tăng lipid mau [48] [57]
Quế chi: Giảm đường huyết Đối với quê nhục, đã có một số nghiên cứu
khoa học chứng minh có tác dụng hạ cholesterol và triglycerid [43] [45] [46] [47] [52] Gian mach máu, làm tăng lưu thông máu, giảm ứ đọng [Š] [43]
Thương truật: Có glycosid kali atractylat có tác đụng giảm đường huyết,
một trong những nguyên nhân gây rối loạn lipid máu [37] [43]
1.6 Bào chế đông dược
Trang 30Bào có nghĩa là dùng sức nóng để thay đổi lý tính và được tính của thuốc,
tiện cho việc chế biến và điều trị Chế có nghĩa là dùng công phu thay đổi hình đạng, tính chất của dược liệu [32] Mục đích của việc bào chế [5]:
Tạo ra tác dụng trị bệnh mới Tăng hiệu lực trị bệnh
Giảm độc tính của thuốc
Giảm tác dụng phụ không mong muốn
Thay đổi tính (khí) vị của thuốc, từ đó thay đối tác dụng của thuốc
On định tác dụng của thuốc
Giảm tính bền vững cơ học, tăng khả năng giải phóng hoạt chất, dẫn đến tăng hiệu lực của thuốc
Bảo quản
Phân chia thuốc thành kích thước phù hợp, thuận tiện cho việc sử dụng
Tỉnh chế thuốc
Thay đổi dạng dùng
Các phương pháp chế biển: Hỏa chễ, thủy chễ, thủy hỏa hợp chế; phương
pháp chế biến khác như rán dầu, chế thuốc đạng khúc 1.6.2 Một số dạng thuốc bào chế từ đông được
Một số dạng thuốc bào chế thông thường: Thuốc phiên, thuốc sắc, thuốc cao nước, thuốc hoàn, thuốc tán [221]
Trang 31Kỹ thuật sắc thuốc đối với công hiệu của thuốc rất quan trọng Lý Thời Trân viết: “Uống thuốc thang, dẫu phẩm chất thuốc tốt và bào chế đúng phép, nhưng sắc lỗ mãng, vội vàng, đun lửa không đúng mức, thì thuốc cũng không công hiệu” Sắc thuốc luôn tuân theo một quy tắc nhất định về mức độ lửa, nước và thời gian [32]
Bào chế viên hoàn mềm: thường dùng mật ong, mạch nha trộn với bột
được liệu; khối lượng bột dược liệu lớn, đễ bị mốc mọt, quá trình bào chế khó
đảm bảo vệ sinh Trong bào chế viên hoàn cứng, yêu cầu được liệu phải dễ nấu thành cao hoặc dễ tán mịn, để lâu không bị mốc, màu sắc đẹp [32]
Quá trình bảo quản gặp khó khăn do chế phẩm đông dược thường có xu
hướng: dễ hút âm, lắng đọng, mốc, thay đổi thê chất dẫn tới thay đổi tác dụng
của thuốc
Mặt khác, được liệu chủ yêu là cây mọc tự nhiên, mỗi phương thuốc bao gồm nhiều vị thuốc hợp lại Nguyên tắc sử dụng thuốc nguồn gốc dược liệu là sử dụng những được chất có sẵn trong tự nhiên đó là những chất có hoạt tinh sinh học trong thành phan hóa học của dược liệu, phương thuốc Thành phân
hóa học trong dược liệu phụ thuộc vào nhiều yếu tô như: vùng sinh thái, thời
tiết, khí hậu, thời điểm thu hái, chế biến sau thu hái dẫn tới tác dụng điều trị, chất lượng bào chế thường không 6n định
Xu hướng bảo chế thuốc dong dược hiện đại:
Xã hội hóa công tác nghiên cứu, kế thừa, bảo tồn và phát triển vốn Y được học cổ truyền và Ydược học hiện đại nhằm xây dựng nên Y được học Việt Nam hiện đại, khoa học, dân tộc và đại chúng Thực hiện quy trình hiện đại hóa công nghệ bào chế thuốc Y học cô truyền
Chiết xuất dược chất trong được liệu để giảm lượng dược liệu phải sử dụng mà vẫn đảm bảo hiệu lực tác dụng của thuốc
Trang 32Kiểm soát được thành phần hóa học, hàm lượng hoạt chất trong chế phẩm,
đảm bảo hiệu lực tác dụng của thuốc, điều trị hiệu quả và an toàn
Thuốc được phân liều sẵn, đảm bảo liều điều trị, thuận tiện cho bệnh nhân
sử dụng như các thuốc tân được
Sản phẩm bào chế được kiêm nghiệm bán thành phẩm, thành phẩm; đạt
Trang 33CHUONG 2 NGUYEN LIEU, PHUONG TIEN VA
PHUONG PHAP NGHIEN CUU
2.1 Nguyén liéu
Các vị thuốc có trong phương thuốc:
Qué chi: thu hái tại tỉnh Hà Giang, thời gian: 10/2010 Bán hạ nam: thu hái tại tỉnh Lạng Sơn, thời gian: 09/2010 Hương phụ: thu hái tại tỉnh Lạng Sơn, thời gian: 10/2010 Thương truật: mua tại công ty Mediplantex, thời gian: 10/ 2010
2.2 Phương tiện
2.2.1 Thiết bị
Tu say: Memmert, Shellab
Can phan tich: Sartorius BP 221 S (Germany)
Can ky thuat: Precisa (Switzeland)
Hệ thống chấm sắc kí lớp mỏng hiệu năng cao Linomat 5 (Camag-
Switzeland)
Máy cất thu hồi dung môi: Buchi R - 200 (Germany) May đo quang phổ tử ngoại UV-VIS: Hitachi U-1800 Máy định lượng sinh hóa bán tự động SCOUT của Ý
May li tam lanh HETICH
May lac VOLTEX
Trang 34Bộ bơm tiêm và canuyn để bơm thuốc vào dạ dày súc vật
Cối, chày, cốc có mỏ, ray xat hạt, tủ sây
Các dụng cụ thủy tinh: Cốc, ống nghiệm, bình khai triển dung môi sắc ký,
âm sắc, bếp đung cách thủy, ỗng nghiệm, piper, lồng chuột nhất
2.2.2 Hóa chất
Hóa chất kiểm nghiệm hóa học: tiêu chuẩn phân tích
Các hóa chất thử tác dụng hạ cholesterol máu và triglycerid:
Chất gây tang lipid: Triton WR 1339 của Sigma
Kít định lượng cholesterol toàn phần, triglyceride của JAS Diagnostics Inc
Dung dich NaCl dang truong, tiét tring 2.2.3 Súc vật nghiên cứu
Thử tác dụng hạ cholesterol và triglycerid: Chuột nhất trăng, chủng
SWISS trọng lượng 23 - 27g, cả hai giống, khỏe mạnh, đạt tiêu chuẩn thí
nghiệm do Viện vệ sinh dịch tễ cung cấp
Thử độc tính cấp: Chuột nhắt trăng, chủng SWISS trọng lượng 18 - 20g, cả hai giống, khỏe mạnh, đạt tiêu chuẩn thí nghiệm do Viện vệ sinh dịch tế
cung cấp
2.3 Nội dung nghiên cứu
* Thâm định tính đúng của vị thuốc
+ Nghiên cứu thành phân hóa học phương thuốc Bán Hương Chi:
Định tính bằng phản ứng hóa học
Định tính bằng sắc kí lớp mỏng
* Thăm dò tác dụng hạ lipid của vị thuốc Qué chi va phương thuốc Ban Huong Chi
+ Thử độc tính cấp của phương thuốc Ban Huong Chi
Trang 352.4 Phương pháp nghiên cứu
Ban Huong Chi la phương thuốc mới, định hướng nghiên cứu là tìm hiểu tác dụng đối với căn bệnh rối loạn chuyên hóa lipid trên súc vật thí
nghiệm; vì thế chúng tôi nghiên cứu tập trung chính vào việc xác định dung
môi chiết, phân đoạn chiết có tác dụng giảm cholesterol và triglyceride tốt hơn
Lựa chọn mẫu nghiên cứu có tác dụng tốt hơn đề nghiên cứu tiếp tục:
* Nghiên cứu thành phần hóa học: chọn kết quả có tính chất đặc trưng có thể
sử dụng làm tiêu chuẩn định tính cho phương thuốc
+ Thử độc tính cấp
* Nghiên cứu thăm dò dạng bào chế
2.4.1 Thâm định tính đúng của vị thuốc
Mô tả hình thái vị thuốc:
Phân tích đặc điểm bột các vị thuốc, so sánh với đặc điểm được mô tả trong DDVN IV [14]
Làm các phản ứng định tính theo DĐVN IV [14]
2.4.2 Nghiên cứu thành phan hóa học
Nguyên tac:
Căn cứ vào tac dung ha cholesterol và triglycerid tốt hơn trong các mẫu E-
BHC, N - BHC để tiến hành kiểm định phân đoạn có tác dụng tốt hơn nhằm
mục đích xây dựng một số tiêu chuẩn của cao thuốc
Mẫu nghiên cứu: cao lỏng (2:1) E - BHC, N - BHC và các phân đoạn chiết từ E - BHC
* Chiết xuất: Xay thô các được liệu trong phương thuốc
Mau 1 (E - BHC): Chiết lạnh nhiều lần với Ethanol 70”, cô đến cao lỏng (2:1)
Trang 36Mau 3: Chiét phan doan Ethylacetat va n - Butanol tir cao long (2:1) E - BHC * Dinh tinh: Định tính các nhóm chất bằng các thuốc thử và phản ứng chung với Mẫu 1 và 2 [6] [7] [8] Định tính bằng SKLM 2.4.3 Thăm do tac dung ha lipid mau Phwong phap:
Thử tác dụng đối với lipid máu của các mẫu nghiên cứu gồm E - BHC,
N - BHC, E - QC và N - QC Đánh giá tác dụng các mẫu trên
Lựa chọn mẫu có tác dụng tốt hơn để kiểm định thành phân hóa học và
thăm dò dạng bào chế
Nguyên fắc: Chuột thí nghiệm được nuôi ôn định 5 ngày trước khi làm thí
nghiệm Cho chuột uống thuốc (các lô thử) hoặc nước (lô chứng bệnh lý)
trong 7 ngày Gây tăng lipid huyết cấp tính bằng cách cho chuột uống Triton WR 1339 (Triton WR 1339 ttc ché su thanh thai cdc lipoprotein giàu triglyceride gdy ra su tang lipid huyết cấp tính) pha trong nước muỗi sinh lý
với tỉ lệ thích hợp (liều 250mg/kg thé trong) Sau 17 gid, lay máu định lượng Chol - T và TG huyết thanh [44] [50] [51]
Chỉ tiêu theo dõi: hàm lượng Chol - T và TG huyết thanh trước và sau khi
uống Triton ở tất cả các lô
Chỉ tiêu đánh giá: so sánh tỷ lệ (%) tăng hàm lượng Chol - T và TG huyết
thanh trước và sau khi uỗống Triton của tất cả các lô thử thuốc với lô chứng bệnh lý
Xử lý số liệu: các số liệu được biểu thị bằng số trung bình M + SE và kết
quả nghiên cứu được xử lí bằng thuật toán thống kê sinh học Test T - student,
Trang 37- Hàm lượng Chol - T và TG lô thử thuốc nhỏ hơn lô chứng bệnh lý với P<0,05 được đánh giá là có tac dung ha Chol - T va TG
- Hàm lượng Chol-T va TG 16 thir thuéc nho hon 16 chtmg bénh ly voi P>0,05
được đánh giá là tác dụng hạ Chol - T và TG không có ý nghĩa thống kê
2.4.4 Thử độc tính cấp
2.4.4.1 Nguyên vật liệu thí nghiệm
Mẫu thử: Cao lỏng E - BHC (2:1)
2.4.4.2 Phương pháp thí nghiệm
Nguyên tắc: Mô hình Behrens - Karber, được đề xuất từ năm 1929 với lập
luận “Những con vật đã sống ở một mức liều thử nào đó thì sẽ sống với tất cả
các mức liều thấp hơn và những con vật đã chết ở một mức liều sẽ chết ở tất
cả các mức liều lớn hơn” [25]
Chuột mua về được nuôi 5 ngày trước khi thí nghiệm để chuột thích nghỉ
điều kiện thí nghiệm Trước khi thí nghiệm, cho chuột nhị đói l6 giờ, dé uống nước tự nhiên theo nhu cầu
Mẫu thử: E - BHC (2:1) được cô đến độ đậm đặc thích hợp Chuột được cho uống với thê tích từ 0,2 - 0,4ml dịch cao/10g thể trọng chuột
Tìm liều tối đa mà không có chuột nào của lô thí nghiệm chết (LDạ), liều tối thiểu để 100% chuột của lô thí nghiệm chết (LD¡ạạ), thử thêm 3 - 4 liều trung gian giữa 2 liều nói trên để xác định LDạg
Thời gian theo đõi: Chuột được để ở phòng thí nghiệm có khí hậu đảm bảo
dé mọi hoạt động của chuột bình thường Theo dõi, quan sát các biêu hiện về hanh vi, hoạt động, ăn uống, bài tiết của chuột; số chuột sống chết trong 72h
2.4.5 Nghiên cứu thăm dò dạng bào chế
Thăm đò dạng bào chế phù hợp hơn đối với bài thuốc, đảm bảo tiêu chí:
Trang 38Độ ổn định tốt
Phù hợp với tâm lý người sử dụng: nếu là dạng viên thì số lượng tối đa không quá 4 viên/lần, 12 viên/ngày (Thuốc tân được thường dùng 2 - 3 viên/lần, 6 - 9 viên/ngày) Nếu không đảm bảo số lượng viên như vậy có thê
chuyển đạng bào chế đê người đùng chấp nhận được và phải đủ liều sử dụng
2.4.5.1 Điều chế cao đặc E - BHC
+ Các vị thuốc trong phương thuốc được loại tạp, rửa sạch, sây khô ở 60° C
+ Bào chế cao đặc từ phương thuốc (Hình 2.1) Bột dược liệu < Ethanol 70° Vv Chiét lanh nhiéu Ạ > lần Vv
Ba dược liệu k* Dịch chiết
Cất thu hồi đung
< moi Say & 60°C Ham am đưới 20 % Cao đặc E-BHC Hình 2.1 Sơ đô bào chế cao đặc E - BHC 2.4.5.2 Phương pháp bào chế + Mẫu nghiên cứu: Cao đặc E - BHC * Lựa chọn tá được: Tá dược độn: Erapac
Trang 39Cac ta duoc khac: Aerosil, Disolcel, CaHPO,
+ Bào chế theo phương pháp xát hạt ướt:
= Bào chế bột kép - tạo hạt: Nghiền mịn tá dược và rây qua cỡ rây thích
hợp Kiểm tra kích thước tiểu phân rắn, độ trơn chảy của bột để điều chỉnh tỉ lệ hoặc thay đổi tá được, tiễn hành trộn bột kép các tá dược
theo nguyên tắc đồng lượng, nhào ẩm hỗn hợp trên với cao đặc E-BHC
Xát hạt, sây hạt và sửa hạt
" Bảo chê viên nang cứng: chuân bị vỏ nang, đóng thc vào nang, hồn
chỉnh chế phẩm
"_ Bảo chê viên nén: kiêm tra độ trơn chảy, chuân bị chày côi, tiên hành dập viên, hoàn chỉnh chê phâm
2.4.5.3 Đánh giá tiêu chuẩn dạng bào chế
Trang 40CHUONG 3 KET QUA NGHIEN CUU