Nghiên cứu khả năng kháng viêm, giảm đau và tăng cường miễn dịch của cao chiết từ cây ngải mọi

LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan đề tài “Nghiên cứu khả kháng viêm, giảm đau tăng cường miễn dịch cùa cao chiết từ Ngải mọi” công trình nghiên cứu riêng tơi số kết cộng tác với cộng khác hướng dẫn thầy cô Viện Công nghệ sinh học Công nghệ Thực phẩm, Trường Đại học Mờ Hà Nội Các số liệu, kct nghiên cứu thực hồn tồn trung thực Tơi xin chịu hoàn toàn trách nhiệm nội dung luận có sai sót Ký ghi rõ họ tên Đỗ Thị Phương Thư viện Trường Đại học Mở Hà Nội LỜI CẢM ON Tôi xin biết ơn sâu sắc tới cán hướng dẫn khoa học TS Trịnh Thị Thu Hang, TS Bùi Thị Hài Hịa, Viện Cơng nghệ sinh học Công nghệ Thực phẩm, Trường Đại học Mở Hà Nội hướng dẫn, tận tình giúp đỡ chi bâo tơi suốt q trình thực đế hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng quý trọng biết ơn sâu sắc tới ThS Nguyễn Thị Thu Hiền đà hướng dẫn, tạo điều kiện tốt cho tơi đề thực hồn thành tốt luận văn Đồng thời, xin gửi lời cám ơn tới tồn thầy Viện Cơng nghệ sinh học Công nghệ Thực phẩm, Trường Đại học Mở Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi đế tơi học tập hồn thành luận văn Chân thành cảm ơn! Hà Nội, Ngày 20 tháng 02 năm 2023 Học viên Thư viện Trường Đại học Mở Hà Nội ĐỒ Thị Phương ii MỤC LỤC MỚ ĐÀU CHƯƠNG I: TÔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tồng quan họ Gừng Ngải 1.2 Tổng quan viêm đau 1.3 Một số thào dược có hoạt tính chống viêm 11 1.4 Tình hình nghiên cứu, phát triển dược liệu nước 15 1.5 Tổng quan miễn dịch 16 1.6 Một số hoạt chất có hoạt tính sinh học thực vật .19 CHƯƠNG II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CÚƯ 22 2.1 Đối tượng nghiên cứu 22 2.2 Nguyên vật liệu 22 2.3 Phưomg pháp nghiên cứu 23 CHƯƠNG Ill: KÉT QUÁ 32 i 3.1 Độc tính 3.2 Tác dụng chống viêm cấp cùa cao chiết từ Ngãi mơ hình gây phù - - 32 nnir Viện Trưởng Đặì nọc MỢ Hạ NỘI ■ ■ chân chuột cống Carrageenan 44 3.3 Tác dụng giám đau cao Ngải 45 3.4 Tác dụng tăng cường miễn dịch cao chiết từ Ngải 48 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 PHỤ LỤC .61 ỉii DANH MỤC CÁC CHỦ VIÉT TẤT IL Interleukin IL-1 Interleukin - IL-2 Interleukin - IL-6 Interleukin - Tumor necrosis factor alpha TNF -a (Yeu tố hoại tử khối u alpha) Elisa Enzyme - Linker Immunosorbent Assay EtOAc Ethyl acetate IFN Interferon Gas chromatography mass spectrometry GC-MS (Sac ký khí ghép khối phố) 'Till IC 50 IgG viện TitrmiR Đai IịqỌxMỞ Hà Nội Nông độ ức che đa nửa Immunoglobulin G Globba obscura K Larsen Go Globba orixensis Roxb Globba saỉarkhanii Globba schomburgkii Hook.f Globba sessiliflora Sims Gs Globba sherwoodiana w.J.Kress & V.Gowda Gỉobba spathulata Roxb Globba subscaposa Collett & Hemsl Globba substrigosa King ex Baker iv DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Thân (rễ) Ngài (Globha Pendulci Roxb.) Hình 2.1 Chuột nhắt trắng chủng Swiss .23 Hỉnh 2.2 Tiêm carrageenan vào chân chuột 27 Thư viện Trường Đại học Mở Hà Nội DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học hợp chất tách chiết từ số thực vật họ Gừng Băng 1.2 Danh sách số loài Globba loài tương tự Băng 1.3 Các lồi Globba với phận dùng, cơng dụng cách dùng Bàng 1.4 Một số mô hình chống viêm, giảm đau động vật thí nghiệm 10 Bảng 1.5 Một số loài thực vật phổ biến có tác dụng chống bệnh viêm khớp 12 Bảng 1.6 Thành phần hệ miễn dịch 18 Bàng 1.7 Các đặc điếm số cytokin 18 Bàng 2.2 Danh mục thiết bị 22 Bàng 2.3 Danh mục dụng cụ .23 Bàng 3.1 Tỷ lệ chuột chết vòng 72 sau uống cao Ngải 33 Băng 3.2 Ảnh hường cúa cao Ngải đến trọng chuột cống trắng 34 Bàng 3.3 Ảnh hường cao Ngải đến mật độ hồng cầu 35 Bảng 3.4 Ánh hường cao Ngãi đến hàm lượng huyết sac tố 35 Băng 3.5 Ánh hướng cao Ngải đen hematocrit 36 Bảng 3.6 Ảnh hưởng cùa cao Ngải đến tích trung bình hồng 36 Bâng 3.7 Ánh hường cao Ngãi đến số lượng bạch cầu 37 Băng 3.8 Ánh hướng cao Ngải đến công thức bạch cầu 37 Bàng 3.9 Ảnh hường cao Ngải đến sổ lượng tiểu cầu 38 Bảng 3.10 Anh hường cao Ngãi đến hoạt độ AST 39 Bàng 3.11 Ánh hướng cao Ngài đến hoạt độ ALT 39 Bảng 3.12 Ánh hướng cũa cao Ngải đến nồng độ bilirubin toàn phần 40 Bảng 3.13 Ánh hường cao Ngải đến nồng độ albumin 40 Bảng 3.14 Ảnh hướng cùa cao Ngài đen nồng độ cholesterol toàn phần 41 Bảng 3.15 Ánh hường cao Ngải đến nồng độ creatinin 43 Bảng 3.16 Tác dụng chống viêm cấp cao Ngài độ phù chân chuột 44 Bàng 3.17 Ảnh hướng cao Ngãi phản ứng với nhiệt độ 46 Bảng 3.18 Ánh hường cao Ngài lên so quặn đau acid acetic vi gây 47 Băng 3.19 Ket quà tác động cao Ngải lên trọng lượng tương đối cùa lách chuột thí nghiệm 49 Bàng 3.20 Ảnh hướng cao Ngài lên trọng lượng tương đối tuyến ức 49 Bàng 3.21.Ánh hường cao Ngải lên số lượng bạch cầu 51 Bàng 3.22.Anh hướng cao Ngãi lên loại bạch cầu 52 Bảng 3.23.Ảnh hướng thuốc thử đến nồng độ IL-2 53 Bàng 3.24 Ành hường thuốc thử đến nồng độ TNF-a .54 Bàng 3.25 Ánh hường cao Ngãi lên hàm lượng IgG 55 Thư viện Trường Đại học Mở Hà Nội vii MỞ ĐẦU Tính cấp thiết Khi tác nhân gây bệnh vi khuân, vi rút, yếu tố sinh học, học, hóa học vật lý tác động vào sinh đáp ứng sinh học gọi viêm Viêm xảy tế bào bạch cầu thề tăng cường hoạt động đế bảo vệ thê khỏi bị đà kích tác nhân gây bệnh mô bị tồn thương bời phàn ứng học, nhiệt, điện, chiếu xạ, hóa chất nhiễm trùng Neu viêm không điều trị dần loại bệnh khác nghiêm trọng viêm khớp, bệnh tim mạch, ung thư, tiểu đường, rối loạn hoạt động thần kinh [1] Viêm khớp ánh hưởng khơng nhó đen sống cùa người, có 100 loại viêm khớp viêm xương khớp, viêm cột sống dính khớp, viêm khớp dạng thấp thường xảy khớp bàn chân, đầu gối, cột sống, hông hậu nặng viêm khớp thường cứng khớp vận động Viêm khớp tiến triền nặng gây ảnh hường với khớp lưng, cột sống, đau gối Thống kê năm gần cùa Trung tâm Kiểm soát bệnh tật cùa Mỹ cho thấy, bệnh viêm khớp nguyên nhân hàng đầu gây tàn phế cho người, vấn đề lưng cột sống Việt Nam nhiều nước giới, viêm khớp bệnh lý thường gặp Bệnh xảy tất câ lứa tuổi, đó, thường bị bệnh nhiều 30-50 tuổi (chiếm 73 - 85%) Từ xưa, người đà phát sừ dụng nhiều thuốc dân tộc đế điều trị bệnh viêm nhiễm, tăng cường khả kháng viêm tăng cường miền dịch cho thể Ngày nay, nước phát triến, việc điều trị dần hướng theo thiên nhiên, sử dụng loại thuốc có nguồn gốc tự nhiên Nhiều thuốc từ thảo dược chữa bệnh ghi sách quý truyền miệng, chưa cơng bố Việt Nam có hệ thực vật phong phú với nhiều thuốc Có nhiều dạng hợp chất thiên nhiên có tác dụng kháng viêm phenolic, flavonoid Việc nghiên cứu kháng viêm hợp chất mới, ứng dụng thuốc thúc đẩy mạnh nhằm tìm biện pháp đổ phòng điều trị bệnh việc vô cần thiết Phương pháp chừa bệnh dược liệu phương pháp sử dụng tốt việc điều trị bệnh xương khớp Việt Nam có khí hậu nhiệt đối gió mùa, điều kiện khí hậu thuận lợi cho loài thực vật phát triền Tìr xa xưa dân gian người biết sử dụng loại cị có tự nhiên đẻ làm thuốc chữa bệnh, tăng cường sức đề kháng Trong số thuốc cùa Việt Nam, Ngài mọc hoang vùng đồi núi đồng bào dân tộc trồng số tinh An Giang, Trà Vinh, Sóc Trăng Dân gian từ xưa sứ dụng Ngải thuốc đề chữa bệnh lao, ho máu, đau thắt ngực, bệnh động mạch vành, tiều đường, hạ huyết áp, rối loạn hệ thần kinh tự chù, đau lưng, khớp đau viêm khớp bao gồm viêm xương khớp Xuất phát từ nhu cầu thực tế, tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu khả kháng viêm, giảm đau tăng cường miễn dịch cao chiết từ Ngải mọi” Mục tiêu nội dung nghiên cứu 2.1 Mục tiêu nghiên cứu rUwyier)110.C Mở Hà Nôi _ , _ Xác địi ih, đánh giá khả kháng viêm, giám đau tăng cường miên dịch cùa cao chiết từ ngải mô hỉnh động vật thí nghiệm 2.2 Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp cùa cao chiết từ Ngãi - Nghiên cứu tác dụng giảm đau cao chiết từ Ngái - Nghiên cứu tăng cường miễn dịch cùa cao chiết từ Ngải CHUÔNG I TỎNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan họ Gùng Ngải 1.1.1 Khái quát họ Gùng chi Globba Gừng họ thân thảo có tinh dầu phân bố khắp nước giới Trong số đó, gừng phân bố chù yếu châu Á với khoảng 1000 loài Một số loài nghiên cứu thành phần hóa học, tách chiết hoạt tính sinh học sử dụng rộng rãi Tại Việt Nam họ Gừng có 19 chi với khoảng gần 200 lồi Các họ Gừng sống nơi ấm ướt, không can nhiều ánh sáng, phụ sinh Bộ rỗ to, nằm ngang, thân rễ chứa nhiều chất dự trữ, có ngắn chi mang hoa, thân tạo thành bẹ ôm chặt lấy tạo thành thân giả, ngấn khơng có hay cao 1-3 m, cao tới 4-5 m (Alpinia, Amomum ), khơng phân nhánh Cây thường có mùi thơm hay có mùi hắc số lồi chi Zingiber [ 17] Gừng sử dụng với nhiều ứng dụng mục đích khác thực phẩm, thuốc cổ truyền, gia vị, thuốc nhuộm hương vị Các nghiên cứu thực vật học thuốc tiết lộ gừng họ lớn sử dụng làm thuốc truyền thống, số thuốc chống độc nọc bọ cạp, chống viêm, thấp khớp , bệnh ngồi da, sốt, yếu tim thuốc giảm đau Gìmg ứng dụng điều trị bệnh thuốc chống viêm, thuốc chừa bệnh kích thích tim, viêm khớp dạng thấp, viêm, viêm họng, ho, hen suyễn, chứng khó tiêu, đau dày, béo phì, tiếu đường ngồi nhiều lồi có chứa hợp chất chuyển hóa thứ cấp ứng dụng lĩnh vực dược phẩm, chất chống viêm, chống oxy hóa, chống đột biến, chống đái tháo đường, kháng khuấn, chống viêm gan, chống co giật, giảm đau, thuốc tiêu chày, rối loạn da liều, thấp khớp.[18] Băng 1.1 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học họp chất tách chiết tù' số thực vật họ Gừng STT Loài Hedychium Họp chất Hoạt tính sinh học Chống oxy hóa, kháng tế bào Flaonoids ung thư thyrsiforme Thuốc đối chứng Levamisol có tác dụng làm sàn sinh phục hối loại bạch cầu lympho, bạch cầu trung tính gây Cyclophosphamid Cao Ngải với cá hai liều thí nghiệm có tác dụng tương tự Levamisol, điều cho thấy, cao Ngài tác dụng lên khà sàn sinh bạch cầu tùy xương, lách tuyến ức 3.4.3 Ành hưởng cao Ngải đến khả sinh tồng hợp số cytokin Các cytokin protein kháng sản xuất tế bào miền dịch có tác dụng điều hịa hoạt động hệ thống miễn dịch Interleukin (IL-2) interleukin hệ thống miền dịch, điều chinh hoạt động tế bào bạch cầu, chịu trách nhiệm khả miễn dịch, phán ứng lại lây nhiễm vi khuấn, nguồn cùa IL-2 tế bào TCD4+ hoạt hóa TCD8+ hoạt hóa Yen tố hoại tử khối u (Tumor Necrosis Factoralpha-TNF-ct) cytokin thúc kháng insulin có liên quan đen bệnh tiếu đường, hệ thống miễn dịch sử dụng đế truyền tín hiệu tể bào Neu , ' , Tnữ Viện.TrựợngĐại nQQlvfaHaNoi , ~ , tê bào bạch câu phát nhiêm trùng chùng giãi phóng TNF đê cành báo tê bào khác hệ thống miễn dịch phần phán ứng viêm [25] Bảng 3.23 Ảnh hưởng thuốc thử đến nồng độ 1L-2 Lơ thí nghiệm Số mẫu Lô đối chứng âm 7,24 Lô đối chứng Cyclophosphamid 2,56 Lô thừ nghiệm với Levamisol 7,55 5,58 7,49 Lô thử nghiệm với cao Ngái (0,5 g/chuột) Nồng độ IL-2 (pg/ml) Lô thử nghiệm với cao Ngải (1 g/chuột) Kêt nghiên cứu bảng 3.23 cho thây: Nồng độ IL-2 lô đối chứng dùng Cyclophosphamid giảm rõ rệt 53 Lô thí nghiệm dùngLevamisol có tăng nồng độ IL - tăng lên so với lô sử dụng Cyclophosphamid Cao Ngải liều 0,5 g/chuột có tác dụng làm tăng nồng độ IL -2 so với lô sử dụng Cyclophosphamid, thấp so với lô chuột khoẻ mạnh Cao Ngái lieu g/chuột có tác dụng làm tăng rô rệt nồng độ IL -2 so với lô sử dụng Cyclophosphamid nồng độ IL -2 lô cao Ngài g/chuột tương đương với Levamisol Intcrlcukin-2 yếu tố quan trọng hệ miền dịch, protein có vai trị hoạt hố dịng tế bào lympho T đề nhận diện kháng nguyên; giúp kích thích phát triển cùa tế bào diệt tự nhiên (NK); kích thích phát triển tăng tổng hợp kháng cùa tế bào B Sự tăng cường tổng hợp lóp intclcukin cùa cao Ngải có ý nghĩa quan trọng việc tăng cường miền dịch động vật Bảng 3.24 Ánh hưởng thuốc thử đến nồng độ TNF-a Lơ thí nghiệm Lơ đối chứng âf^Ịur viện Ỵrư Số mẫu Nồng độ TNF-a (pg/ml) ìmg Đậi học Mở Hà NỘI9 Lô đối chứng Cyclophosphamid 16,27 Lô thử nghiệm với Levamisol 8,14 9,25 9,98 Lô thử nghiệm với cao Ngải (0,5 g/chuột) Lôthử nghiệm với cao Ngải (1 g/chuột) Kết nghiên cứu ỏ' bảng 3.24 cho thấy: Lơ thí nghiệm với Cyclophosphamide có hàm lượng TNF - a tăng máu cúa chuột nhắt - Levamisol có tác dụng làm giám đáng kế hàm lượng TNF - a so với lô sử dụng Cyclophosphamide 54 Cao Ngài với cá liều 0,5g/chuột Ig/chuột làm giàm hàm lượng - TNF- a so với lô sử dụng Cyclophosphamide đạt ý nghĩa thống kê (p