(Tiểu luận) báo cáo thực tập ứng dụng các kỹ thuật sắc ký để phân tích chất độc gây ảo giác và kích động mạnh ‘ketamine

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ KHOA DƯỢC LIÊN BỘ MƠN HĨA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM- ĐỘC CHẤT BÁO CÁO THỰC TẬP ỨNG DỤNG CÁC KỸ THUẬT SẮC KÝ ĐỂ PHÂN TÍCH CHẤT ĐỘC GÂY ẢO GIÁC VÀ KÍCH ĐỘNG MẠNH ‘‘KETAMINE” Giáo viên hướng dẫn: PGS TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ Lớp: Dược 45 - Nhóm: Cần Thơ, ngày 18 tháng năm 2021 DANH SÁCH THÀNH VIÊN NHĨM STT Họ tên MSSV Đóng góp (%) Hồ Thanh Phát 1953030049 100 Đào Hoàng Ngọc 1953030039 100 Nguyễn Diệp Huy Phong 1953030051 100 Lại Hà Phương 1953030052 100 Thạch Thị Diễm Phương 1953030053 100 Đỗ Hoàng Quyên 1953030054 100 Trương Thị Quyên 1953030055 100 Thạch Ngô Xà Rậy 1953030056 100 MỤC LỤC MỞ ĐẦU .1 NỘI DUNG .2 NGUỒN GỐC,TÍNH CHẤT LÝ HĨA 1.1 Nguồn gốc 1.2 Tính chất lý hố 1.3 Điều chế tổng hợp Ketamin ĐỘC TÍNH, CƠ CHẾ GÂY ĐỘC, XỬ TRÍ NGỘ ĐỘC 2.1 Độc tính 2.2 Cơ chế gây độc 2.3 Xử trí ngộ độc PHÂN TÍCH, SO SÁNH CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG KETAMINE VÀ DẪN XUẤT CÓ TRONG MÂU DỊCH SINH HỌC (MÁU, HUYẾT TƯƠNG, NƯỚC TIỂU) BẰNG CÁC KỸ THUẬT MIỄN DỊCH VÀ SẮC KÝ HIỆN ĐẠI (SẮC KÝ LỎNG, SẮC KÝ KHÍ) 3.1 Phương pháp ELISA .6 3.2 Phương pháp GC-MS 3.3 Phương pháp Sắc kí lỏng 18 3.4 So sánh phương pháp định tính, định lượng Ketamine chất chuyển hóa chúng có dịch sinh học 23 TÀI LIỆU THAM KHẢO ii Tiếng Việt ii Tiếng Anh ii Website .iii DANH MỤC BẢNG Bảng Các ion phân tử ban đầu phân mảnh đặc trưng chất phân tích chất chuẩn nội chế độ SIM .11 Bảng Thời gian lưu ion chọn để xác nhận định lượng GC – MS 12 Bảng Các thơng số tối ưu hóa cho Ketamine Norketamine 19 Bảng Đặc điểm phân tích phương pháp LC-ESI-MS-MS Ketamine Norketamine nước tiểu 20 Bảng So sánh phương pháp định tính, định lượng Ketamine chất chuyển hóa chúng có dịch sinh học 23 DANH MỤC HÌNH Hình Cấu trúc hoá học Ketamine Hình Phương pháp ELISA Được mơ tả ELISA bánh mì, hiển thị bước xét nghiệm, đánh số theo thứ tự 1-4 Hình Một đường cong tiêu chuẩn điển hình Được hiển thị đường cong chuẩn cho IFN-γ ELISA Để tính nồng độ kháng nguyên mẫu, cần chuẩn bị đường chuẩn sử dụng dung dịch có nồng độ biết Hình Sắc kí đồ MS K, K-d4, NK, NK-d4 DHNK 13 Hình Sắc kí đồ chất chuẩn K NK 14 Hình Sắc kí đồ mẫu nước tiểu 15 Hình Nồng độ K, NK DHNK mẫu nước tiểu dương tính 16 Hình Đường cong hiệu chuẩn cho NK ( ) Và K ( ) thu kỹ thuật ghi SIM phân tích GCMS 18 Hình Đường cong hiệu chuẩn cho ketamine norketamine 21 Hình 10 Sắc ký đồ nước tiểu trắng (A), ng / mL Ketamine Norketamine chuẩn (B), mẫu trường hợp Ketamine Norketamine dương tính (C) 22 DANH MỤC VIẾT TẮT STT KÍ HIỆU NGUYÊN VĂN ABTS 2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) ) DHNK Dehydronorketamine EA Etyl acetate ESI Electrospray Ionization ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay FDA United States Food and Drug Administration HIV Human Immunodeficiency Virus IUPAC International Union of Pure and Applied Chemistry K Ketamine 10 GC-MS Gas Chromatography/Mass Spectroscopy 11 LC-MS-MS 12 LOQ Limit of Quantitation 13 LLOQ Lower Limit Of Quantification 14 MDMA 3,4-methylenedioxymethamphetamine 15 NDMA N-methyl-D-aspartate 16 NK Norketamine 17 OD Optical Density 18 PCP phencyclidine 19 SIM Selected Ion Monitoring 20 SPE Solid-Phase Extraction 21 SRM Selected Reaction Monitoring 22 TMP Trimethylphosphate Liquid Chromatography - Mass Spectrometry/Mass Spectrometry KETAMINE MỞ ĐẦU Ketamine hay gọi tắt “ke” Việt Nam, có tên thương mại thường gặp Ketalar số tên gọi khác Special K, Kit Kat, Cat Valium, Dorothy, Vitamin K Ketamine sử dụng y khoa loại thuốc gây mê Ngoài ra, cịn có tác dụng giảm đau cấp mạn tính, kiểm sốt chứng trầm cảm kháng trị [4][11] Ban đầu, ketamine tổng hợp với mong muốn thay cho phencyclidine Đến năm 1970, thức đưa vào sử dụng gây mê cho người phê duyệt FDA [11] Tuy nhiên nay, việc lạm dụng ketamine cho mục đích “phi y tế” khiến trở thành dao hai lưỡi, loại thuốc giải trí phổ biến tác dụng gây rối loạn tâm thần Khi dùng liều thấp, ketamine cho tác dụng hưng phấn phân ly gọi “k-land”; liều cao cho cảm giác “k-hole” Sử dụng ketamine liều gây ức chế hô hấp, ngưng thở; hạ huyết áp, nhịp tim chậm, nhồi máu tim; co giật, hôn mê [16] Ketamine gây hội chứng lệ thuộc thuốc tương tự morphin, heroin Một thuốc sử dụng không mục đích trở thành ma tuý ketamine trường hợp Năm 2020 giới ghi nhận số người sử dụng ma tuý lên đến khoảng 284 triệu chủ yếu rơi vào độ tuổi 15-64, tăng 26% so với thập kỷ trước; 11,2 triệu người giới tiêm chích ma túy, nửa số sống chung với bệnh viêm gan C, khoảng 1,4 triệu người sống chung với HIV 1,2 triệu người sống chung với hai [19] Một thống kê Việt Nam vào thời điểm 16/06/2022 cho biết, nước có 217.059 người nghiện ma túy có hồ sơ quản lý (tăng 11.241 so với cuối năm 2021); 59.537 người sử dụng trái phép chất ma túy [2] Việc lạm dụng ketamine thường xảy kết hợp với chất khác bao gồm rượu, amphetamine, MDMA, cocaine caffein gặp nhiều nước Đông Nam Á Đài Loan, Malaysia Trung Quốc so với khu vực khác giới [16] Những hậu mà việc sử dụng ma tuý nói chung, ketamine nói riêng đem lại tạo thành gánh nặng lên xã hội tinh thần lẫn vật chất Vì vậy, cần có chiến KETAMINE lược cụ thể như: triển khai mở rộng tuyên truyền thích hợp để nâng cao hiểu biết cho người dân hậu việc sử dụng chất ma tuý; thắt chặt quản lý, tăng cường giám sát kiểm soát dạng thuốc gây nghiện, hướng thần, tiền chất Còn người sau cai nghiện, tạo điều kiện cho họ tái hoà nhập với cộng đồng mục tiêu cần lưu ý Ketamine mang lại nhiều lợi ích tác hại sử dụng chúng cách Việc tiếp tục thực nghiên cứu sâu ketamine cần thiết để tìm phương pháp giúp phát cách nhanh chóng xác ketamine mẫu dịch sinh học, thực phẩm, … góp phần việc phát sớm trường hợp nghiện ma tuý NỘI DUNG NGUỒN GỐC,TÍNH CHẤT LÝ HĨA 1.1 Nguồn gốc - Năm 1962, Calvin Stevens dược phẩm Parke-Davis Co (nay Pfizer) tổng hợp từ phencyclidine - Sau lần sử dụng ketamine người vào năm 1964 nhà tù Jackson (Michigan, Hoa Kỳ) Corssen Domino thực hiện, tác dụng phân ly liên quan đến việc gây mê thời gian ngắn báo cáo, sáng chế cho việc sử dụng người nộp vào năm 1966 - Năm 1970, đưa vào thực hành lâm sàng - Trong năm gần đây, người sử dụng ketamine (đặc biệt chất đối quang nó) để điều trị trầm cảm - Năm 1992, Pháp Trường hợp lạm dụng ketamine ghi nhận vào, dẫn đến giám sát đặc biệt quan y tế - Năm 1997, đưa vào danh sách chất gây nghiện [8] Cơng thức hố học: C13H16ClNO KETAMINE Tên IUPAC: 2-(2-chlorophenyl)-2-(methylamino) cyclohexan-1-one Hình Cấu trúc hố học Ketamine 1.2 Tính chất lý hố o - Ketamine tồn dạng tinh thể màu trắng, có điểm nóng chảy 92,5 C - Tan nước Dạng muối cloride tan nước với độ hòa tan 20g/ 100mL, tan tự metanol, tan rượu, hịa tan cloroform - Ketamine có pKa = 7,5, pH dung dịch=3.5 - Màu sắc dung dịch thay đổi từ khơng màu đến vàng sẫm lại tiếp xúc lâu với ánh sáng Sự sẫm màu không ảnh hưởng đến hiệu lực Không sử dụng xuất kết tủa Khi bị đun nóng, ketamine phân huỷ tạo thành khói độc clorua oxid nitơ [12] 1.3 Điều chế tổng hợp Ketamin Được điều chế cách brom hóa o-clorophenyl xiclopentyl xeton, sau phản ứng với metylamin để tạo rượu metylimino Nhiệt phân imino hydrochloride tạo ketamine cách mở rộng vòng.[20] - ĐỘC TÍNH, CƠ CHẾ GÂY ĐỘC, XỬ TRÍ NGỘ ĐỘC 2.1 Độc tính Triệu chứng ngộ độc đặc trưng Ketamin cảm giác sảng khoái dùng với liều thấp; hưng phấn thường kèm với lo lắng tâm trạng lười biếng - Quá liều gây trạng thái cai nghiện với nhân cách phối hợp; liều cao hơn, phối hợp trở nên trầm trọng phản ứng với kích thích KETAMINE bên ngồi bị suy giảm, với khả chiến đấu, điều hòa, loạn nhịp, phì đại cơ, rung giật nhãn cầu, tăng phản ứng giật Với liều lượng cao, nhiễm toan, tăng thân nhiệt, nhịp tim nhanh, cao huyết áp nặng, co giật, mê xảy ra; chí tử vong - Tác dụng cấp tính thường nhanh chóng mờ nhiều bệnh nhân lấy lại ý thức bình thường 45 phút đến vài 2.2 Cơ chế gây độc Ketamin thuốc gây mê an thần ngăn chặn thụ thể NMDA / tăng cường hoạt động GABA làm tăng trình chết rụng tế bào thần kinh não phát triển dẫn đến suy giảm nhận thức lâu dài sử dụng lâu 2.3 Xử trí ngộ độc Bệnh nhân nên giữ yên môi trường yên tĩnh theo dõi chặt chẽ Benzodiazepine sử dụng để kiểm sốt kích động co giật Các biện pháp hỗ trợ khẩn cấp: Duy trì đường thở thơng thống hỗ trợ thơng khí cần thiết Điều trị hôn mê, co giật, tăng huyết áp, tăng thân nhiệt tiêu vân chúng xảy Hành vi kích động đáp ứng với việc hạn chế kích thích cảm giác cần an thần với liều cao benzodiazepin (midazolam, lorazepam, diazepam) haloperidol thuốc chống loạn thần khác Trong xử trí ban đầu bệnh nhân kích động, tiêm bắp midazolam haloperidol khơng có đường truyền tĩnh mạch Theo dõi nhiệt độ dấu hiệu sinh tồn khác tối thiểu thu nhận tất bệnh nhân bị tăng thân nhiệt chứng nhiễm độc đáng kể khác.[14] KETAMINE Hình Sắc kí đồ MS K, K-d4, NK, NK-d4 DHNK 13 KETAMINE 3.2.5 Kết Sắc ký đồ ion K, chất chuẩn NK, mẫu pháp y dương tính thể Hình Ketamine, NK DHNK phân tách tốt sắc ký đồ mẫu nước tiểu dương tính (Hình 5) Hình Sắc kí đồ chất chuẩn K NK 14