Chủ đề 2 ứng dụng các kỹ thuật sắc ký để phân tích chất độc xrl 11 và các dẫn xuất trong cỏ mỹ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LIÊN BỘ MÔN HPT-KN-ĐC BÀI THU HOẠCH CHỦ ĐỀ 2: ỨNG DỤNG CÁC KỸ THUẬT SẮC KÝ ĐỂ PHÂN TÍCH CHẤT ĐỘC XRL-11 VÀ CÁC DẪN XUẤT TRONG “CỎ MỸ” LỚP DƯỢC 35 – NHÓM 10 GVHD: PGS.TS.Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ NĂM HỌC: 2021 – 2022 NHẬN XÉT CỦA GVHD PHỤ LỤC DANH MỤC VIẾT TẮT K2 synthetic cannabinoids THC (delta-9tetrahydrocannabinol ) DANH MỤC HÌNH Hình Nghị định số 60/2020/NĐ-CP ngày 29 tháng 05 năm 2020 Hình Cơng thức cấu tạo XRL-11 Hình Ảnh minh họa cỏ mỹ Hình XLR-11 12 Hình M1 12 Hình 6: GC / MS Phân tích Quan sát 13 Hình LC – MS-MS phân tích trích xuất 100 µ L trống miệng dịch vật mẫu làm giàu với ng / mL THC-d (đứng đầu dấu vết), THC cannabidiol (ở dấu vết) cannabinol (đáy dấu vết) 15 Hình M3-1 21 Hình M3-2 21 Hình 10 M4 21 Hình 11 M5-1 22 BÀI THU HOẠCH THỰC TẬP ĐỘC CHẤT CHỦ ĐỀ 2: ỨNG DỤNG CÁC KỸ THUẬT SẮC KÝ ĐỂ PHÂN TÍCH CHẤT ĐỘC XRL-11 VÀ CÁC DẪN XUẤT TRONG “CỎ MỸ” GVHD: PGS.TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ Danh sách thành viên Dược K35 – Nhóm 10 STT Họ Tên MSSV 01 Đào Thị Mỹ Dung 2133030009 02 Lê Thu Hiền 2133030012 03 Hà Thanh Mỹ Phương 2133030002 04 Huỳnh Thị Thu Thảo 2133030023 05 Nguyễn Thị Diễm Thi 2133030003 06 Trần Minh Trang 2133030024 07 Lê Thị Cẩm Tú 2133030021 08 Lê Thị Ngọc Trâm 2133030025 09 Nguyễn Ngọc Trân 2133030027 MỞ ĐẦU ➢ Thực trạng sử dụng: Cỏ Mỹ với tên gọi khác Cần sa tổng hợp (synthetic cannabis), gia vị (spice) hay chất giống cần sa (cannabionid) ngày phổ biến thị trường với nhiều hình thức tiếp thị mua bán thơng qua trang mạng xã hội trực tiếp cửa hàng với nhiều thương hiệu mẫu mã khác như: trà giảm cân, thảo dược buôn bán dễ dàng thị trường Giá thành hợp lý phù hợp với nhiều tầng lớp xã hội, dễ dàng mua dễ dàng sử dụng Sự lan truyền, “rỉ tai” dân chơi độ phê pha ảo giác đến tức sau sử dụng lượng nhỏ Cỏ Mỹ với ma lực tiến vào giới trẻ với tộc độ nhanh khủng khiếp Theo khảo sát tiêu thụ cần sa tổng hợp New York cho thấy người hỏi (N = 42: tỷ lệ tham gia 88%) chủ yếu niên, nam giới, đa dạng chủng tộc tốt nghiệp trung học Gần tất hút thuốc cần sa, với 86% hút cần sa từ ngày trở lên tuần Gần tất (91%) quen thuộc với sản phẩm cần sa tổng hợp, nửa (50%) cho biết hút sản phẩm cần sa tổng hợp trước đây, thiểu số đáng kể (24%) cho biết sử dụng (tức tháng trước) [1] Trước lo ngại độc tính liên quan đến việc sử dụng hợp chất này, Cơ quan Thực thi Thuốc (DEA) cấm loại cần sa tổng hợp phổ biến vào ngày tháng năm 2011 Bất chấp lệnh cấm liên bang, liệu từ Khảo sát Tương lai Quốc gia cho thấy mức tiêu thụ sản phẩm tiếp diễn Trong năm 2012, 11% học sinh trung học phổ thông cho biết sử dụng sản phẩm cần sa tổng hợp năm qua; tỷ lệ sử dụng không thay đổi so với báo cáo năm trước Cùng với nhau, liệu cho thấy lệnh cấm liên bang năm 2011 khơng có tác dụng việc sử dụng sản phẩm cần sa tổng hợp người trẻ tuổi.[2] ➢ Vì cần nghiên cứu vấn đề này? Cỏ Mỹ gây tác hại tương tự ma túy đá, chí mức độ ảnh hưởng cịn nhanh mạnh Một phận giới trẻ mơ hồ lạm dụng chúng Cỏ Mỹ khiến người sử dụng rối loạn cảm xúc, tức người bệnh có lo lắng, căng thẳng, đặc biệt có ảo giác (nghe thấy tiếng nói xúi giục đầu, nghĩ bị theo dõi, truy sát ) gây nguy hại cho thân người xung quanh Nguy hiểm hơn, cỏ Mỹ gây hại thể gây teo não, suy giảm khả miễn dịch, mắc nhiều bệnh, bị ung thư Chính nghiên cứu vấn đề trang bị kỹ sống lành mạnh cho niên trước ngưỡng cửa sống tự lập Đưa giải pháp kịp thời để ngăn chặn, kiểm sốt tình trạng sử dụng…xử trí ngộ độc phục vụ cho y tế ➢ Giải pháp kiểm sốt Chính phủ có hành động ngăn ngừa việc phát hành văn sau : • Nghị định số 126/2015/NĐ-CP (có hiệu lực từ ngày 01/02/2016) đưa XLR-11, hoạt chất có cỏ mỹ, vào danh mục chất ma túy tiền chất • Nghị định số 73/2018/NĐ-CP (có hiệu lực từ ngày 15/5/2018) đưa chất XLR-11 chất ma túy sử dụng lĩnh vực y tế điều tra tội phạm hành vi sản xuất, mua bán, vận chuyển, tàng trữ, sử dụng cỏ Mỹ bị truy cứu trách nhiệm hình • Nghị định số 60/2020/NĐ-CP ngày 29 tháng 05 năm 2020 sửa đổi, bổ sung danh mục chất ma túy tiền chất [4] Chính thức đưa chất 5FLUORO-MDMB-PICA (hoạt chất cỏ Mỹ) vào danh mục quản lý Pháp luật Việt Nam Hình Nghị định số 60/2020/NĐ-CP ngày 29 tháng 05 năm 2020 Về cá nhân, cộng đồng: Cập nhật kiến thức định cho thân, theo dõi thông tin, trang mạng xã hội thống, chọn lọc thơng tin Tỉnh táo trước lời kêu gọi tham gia sử dụng, mua bán Nói khơng với cỏ Mỹ dù lần NỘI DUNG Nguồn gốc, tính chất lý hóa 1.1 Nguồn gốc: “Cỏ Mỹ” khơng phải sản phẩm nước mà có xuất xứ từ Mỹ vào đầu năm 2000, gọi Spice hay K2 Tuy nhiên, “cỏ Mỹ” xuất Việt Nam thường điều chế sản xuất chủ yếu Trung Quốc vùng Tam giác vàng Ban đầu thứ thuốc theo chân du học sinh Việt Nam, “cậu ấm chiêu” đón nhận Sau đó, lan rộng đám ăn chơi bắt đầu len lỏi vào học sinh, sinh viên 1.2 Tính chất lý hóa: Cơng thức phân tử: C 21 H 28 F N O Khối lượng phân tử: 329,459 g · mol −1 Cơng thức cấu tạo Hình Cơng thức cấu tạo XRL-11 XLR-11 có cấu trúc vịng xyclopropyl dễ dàng bị phân cắt thành hợp chất bị nhiệt phân, gọi chất phân hủy XLR-11, đun nóng [3] XLR-11 báo cáo thay đổi cấu trúc hóa học cách hút thuốc [3] 1.3 Thành phần hóa học: Hoạt chất có “cỏ Mỹ” XLR-11, tên khoa học [1-(5fluoropentyl)-1H-indol-3-yl] (2,2,3,3- tetramethylcyclopropyl) methanone Tên khác 5-Fluoro-UR-144 1.4 Điều chế/tổng hợp: Cỏ Mỹ điều chế từ yếu tố chính: Hóa chất tổng hợp: hoạt chất “cỏ Mỹ” XRL-11 chất gây kích thích thần kinh, khiến cho người sử dụng bị rối loạn tâm thần, cảm xúc chí gây ảo giác Bên cạnh cịn chứa nhiều loại hóa chất độc hại khác Vật mang hóa chất mẫu: mẫu thực vật cắt nhỏ làm khơ trước phun hóa chất vào Mẫu thực vật mang hóa chất đa dạng, làm từ phận rễ, thân, hoa loại cỏ, thảo mộc Ngoài ra, số loại cỏ Mỹ tẩm thêm gia vị, hương liệu mùi thơm để thêm phần hấp dẫn cho người dùng Hình Ảnh minh họa cỏ mỹ Độc tính, chế gây độc xử trí ngộ độc 2.1 Độc tính Hoạt chất có "cỏ Mỹ" XLR-11 – chất gây nghiện, gây ảo giác giống cần sa tác dụng mạnh cần sa nhiều lần Các cannabinoid tổng hợp hoạt động thụ thể tế bào não giống THC (delta-9-tetrahydrocannabinol ), thành phần làm thay đổi tâm trí cần sa Tác hại cỏ Mỹ khủng khiếp, chí dẫn đến tử vong: nhịp tim nhanh, nôn mửa, hành vi bạo lực, ý nghĩ tự tử, tâm trạng cao, thay đổi nhận thức — nhận thức đối tượng điều kiện xung quanh, triệu chứng rối loạn tâm thần — suy nghĩ thiếu sáng suốt rối loạn tách rời khỏi thực tế Các hiệu ứng loạn thần bao gồm: Lo lắng độ, hoang mang, hoang tưởng, không tin tưởng vào người khác cách vơ lý, ảo giác —cảm giác hình ảnh thật khơng phải… Bệnh tim: làm tăng nguy đau tim tử vong người bị bệnh tim Bệnh thận: gây hạ i cho thận người bị bệnh thận Rối loạn co giật ( động kinh ): gây nhiều co giật người bị rối loạn co giật [5] 2.2 Cơ chế gây độc Cannabinoid nhóm hợp chất hóa học đa dạng hoạt động thụ thể cannabinoid tế bào làm thay đổi giải phóng chất dẫn truyền thần kinh não Các phối tử cho protein thụ thể bao gồm endocannabinoid (được sản xuất tự nhiên thể động vật), (nih) [6] phytocannabinoid (tìm thấy cần sa số thực vật khác) cannabinoid tổng hợp (được sản xuất nhân tạo) Cannabinoid đáng ý phytocannabinoid tetrahydrocannabinol (THC), hợp chất tâm sinh lý cần sa (pubs.acs.org) [7] Khi hút cỏ Mỹ, chất THC nhanh chóng qua phổi vào máu Sau theo máu lên não gây cảm giác “phê” Cảm giác diễn sau vài phút kéo dài đến đồng hồ Chất THC hấp thu nhanh vào mô mỡ thể, sau từ từ giải phóng vào máu" Có thể đến tháng để đào thải hết liều THC khỏi thể Điều nguy hiểm loại cỏ Mỹ tạo chứng hoang tưởng từ lời nói, dẫn vơ thức khiến người sử dụng làm theo Nếu sử dụng với liều lượng cao thời gian từ tháng khả hồi phục não người nghiện vô khó khơng muốn nói khơng thể XLR-11 có “cỏ Mỹ” xác định chất kích thích (chủ vận) thụ thể cannabinoid có não động vật kể người Vì có cấu trúc với cần sa nên Cannabinoids tổng hợp ó Cỏ Mỹ tác động thụ thể não THC (delta-9-tetrahydrocannabinol) Cho đến nay, có Các cột lị vi sóng trì 40 ° C máy lấy mẫu tự động đến ° C Các phân tích thực máy ghi điện ioniza- (ESI) tích cực ion cách thức Các ion nguồn điều kiện làtối ưu hóa sau: ion Xịt nước Vơn, 5500 V; khí ga, 30 psi; khí va chạm, trung bình; nhiệt độ nguồn, 600 ° C; khí phun sương (GS1), 345 kPa; khí đốt nóng (GS2), 379 kPa Việc phát ion thực nhiều phản ứng đơn chế độ itoring (MRM) với hai trình chuyển đổi cho chất phân tích chuyển tiếp Kết Hình XLR-11 Hình M1 12 3.1 GC / MS Phân tích Quan sát: GC / MS TIC XLR-11 cho thấy hai cực đại có phổ khối lượng tương tự Thị trưởng đỉnh, có thời gian lưu 16,452 phút, XLR-11 đỉnh khác, với thời gian lưu 16,641 phút, sản phẩm xếp lại nhiệt cảm ứng XLR-11 Sản phẩm xếp lại mộttạo tác gây nhiệt độ cao Cổng tiêm GC Một số mảnh ion quan sát thấy có mức độ phong phú khác bao gồm 210, 212, 294, 309 329;tuy nhiên, có biến thể khác chưa quan sát thấy 3.2 Hình 6: GC / MS Phân tích Quan sát Phân tích định lượng ∆ -tetrahydrocannabinol dịch miệng qua sắc ký lỏng– khối phổ 13 Sắc ký LC thực cách sử dụng Waters Alliance 2690 sepa- mô-đun (Waters, Milford, MA, USA) Phân tích × XTerra CƠ C 18 cột (150 mm 2.1 mm,3.5 µ m) ( nước), rửa giải với mM amoni formate – metanol (10:90, v / v) 0,2 mL / phút Tổng thời gian chạy phương pháp phút Tất các khía cạnh hoạt động hệ thống thu thập liệu troll sử dụng MassLynx NT 4.0 phần mềm Khối lượng phép đo phổ Một máy quang phổ khối song song Quattro Premier (Waters) sử dụng cho tất phân tích Q trình ion hóa đạt cách sử dụng elec- trospray chế độ ion hóa tích cực (ESI +) Tối ưu điều kiện là: mao mạch Vôn, 2.0 kV; nguồn nhiệt độ, 120 ◦ C; khí mang khí ga (nitơ) đun nóng đến 280 ◦ C lưu lượng tỷ lệ 700 L / h Để thiết lập phản ứng bội× thích hợp điều kiện giám sát (MRM) hợp chất → riêng lẻ, giải→pháp tiêu chuẩn [500 ng / mL, Trong mM amoni formate – metanol (10:90, v / v)] truyền vào vào khối phổ kế điện áp hình nón (CV) tối ưu hóa để tối đa hóa cường độ lồi phân tử proton hóa [M + H] + Do va chạm phân ly (CID) proton hóa phân tử thực Các va chạm khí ga (ar-gon) áp suất trì 0,35 Pa (3,5 10 - mBar) va chạm lượng (eV) điều chỉnh đến tối ưu hóa dấu hiệu phần lớn dồi sản phẩm ion, mà làsau sử dụng MRM phân tích Các chuyển tiếp m / z 315,2 193,1 m / z 315,2 259,3 THC Các chuyển tiếp THC-d m / z 318,2 196,1 14 Hình LC – MS-MS phân tích trích xuất 100 µ L trống miệng dịch vật mẫu làm giàu với ng / mL THC-d (đứng đầu dấu vết), THC cannabidiol (ở dấu vết)và cannabinol (đáy dấu vết) Kết luận Một phương pháp LC-MS xác thực đầy đủ để xác định- lượng THC dịch miệng bảo quản, thu thập In- thiết bị tercept, phát triển Phương pháp cung cấp kết kết hợp chiết xuất lỏng-lỏng đơn giản để tránh ion đàn áp, cao hồi phục độ xác xác, sử dụng hai 100 500 µ 3.3 Phát triển xác nhận phương pháp định tính GC/MS cho THCCOOH nước tiểu Hóa chất thuốc thử THCCOOH (100 μg / mL methanol) THCCOOH-glu (100 μg / mL methanol) mua từ Cerilliant (Austin, TX, USA) THCCOOH-d9 (100 μg / mL metanol) sử dụng làm chất chuẩn nội (IS), mua từ Cerilliant Thuốc thử ONLINE DAT Cannabinoids II sử dụng xét nghiệm miễn dịch mua từ Roche Diagnostics (Mannheim, Đức) N, O- Bis (trimethylsilyl) trifluoroacetamide chứa 1% trimethylchlorosilane (BSTFA + 1% TMCS) làm thuốc thử tạo dẫn xuất cung cấp Acros Organics (Morris Plains, NJ, USA) Các dung môi hữu cơ, etyl axetat (cấp HPLC) hexan (cấp HPLC), mua 15 từ J.T Baker / Avantor (Thung lũng Trung tâm, PA, Hoa Kỳ) Axit axetic sử dụng trình tiền xử lý mua từ Wako Pure Chemical Ind Ltd (Osaka, Nhật Bản) dung dịch KOH M (kali hydroxit) mua từ Cơng ty TNHH Hóa chất Kim loại Daejung (Gyeonggi-do, Hàn Quốc) Tất thuốc thử khác sử dụng loại ACS cao Các dung dịch chuẩn THCCOOH THCCOOH -glu chuẩn bị cách pha loãng nối yêu cầu, dung dịch IS chuẩn bị cách pha loãng metanol đến nồng độ cuối μg / mL Các dung dịch tiêu chuẩn bảo quản -20 ° C yêu cầu sử dụng Thiết bị Dụng cụ xét nghiệm miễn dịch sử dụng để sàng lọc ban đầu máy phân tích Cobas c311 (Roche Diagnostics, Đức) Thiết bị GC-MS sử dụng để xác nhận Máy sắc ký khí 7890 / Máy đo khối phổ 5975 (Agilent Technologies, Hoa Kỳ) thiết bị trang bị cột DB-5MS UI GC (30 m × 0,25 mm I.D., độ dày màng 0,25 μm, J&W Khoa học, Hoa Kỳ) Nhiệt độ lò GC tăng từ 200 đến 300 ° C với tốc độ 40 ° C / phút sau trì 300 ° C 7,5 phút Nhiệt độ cổng phun đặt thành 280 ° C tốc độ dịng khí mang (He) 1,1 mL / phút Phương pháp tiêm đặt chế độ khơng tách dịng với thời gian lọc 1,5 phút Phần nhỏ (2 μL) mẫu tiêm vào GC-MS cách sử dụng máy lấy mẫu chất lỏng tự động 7693 (Agilent Technologies, Hoa Kỳ) Nhiệt độ nguồn MS đặt thành 230 ° C phân tích MS thực chế độ SIM / quét điều kiện ion hóa điện tử (EI) Trong phổ khối lượng chất phân tích thu chế độ quét, ba ion đặc trưng chọn làm ion định lượng hai ion cịn lại chọn làm ion định tính Hai ion đặc trưng chọn để xác định IS Tỷ lệ ion định lượng ion định tính tính tốn từ sắc ký đồ SIM Đối với phân tích GC-MS định tính, độ lệch chấp nhận tỷ lệ ion định lượng ion định tính nằm khoảng ± 20% Mẫu nước tiểu Mẫu nước tiểu trắng chuẩn bị cách trộn nước tiểu từ người không tiêu thụ cần sa, sử dụng để kiểm tra phương pháp LOD độ chọn 16 lọc Để đo tỷ lệ pic ion định lượng với chiều cao pic ion định tính chất phân tích, THCCOOH thêm vào mẫu trắng pha loãng đến nồng độ 20, 50 100 ng / mL Chuẩn bị mẫu Mẫu nước tiểu (2 mL) trộn với IS (30 μL, μg / mL) dung dịch KOH M (200 μL) ống polypropylene (5 mL, Eppendorf) Hỗn hợp thu sau thủy phân 70 ° C 10 phút Sau thời gian này, axit axetic đậm đặc (200 μL) thêm vào để điều chỉnh độ pH đến 4,5 hỗn hợp etyl axetat: hexan (1,5 mL, 1: (v / v)) thêm vào trước tạo xoáy hỗn hợp 3200 vòng / phút phút Sau ly tâm tốc độ cao 20000 g phút, phần (1,2 mL) phần phía cho vào ống nghiệm để làm khơ Sau đó, phần lại hòa tan lại hỗn hợp gồm etyl axetat (20 μL) thuốc thử BSTFA + 1% TMCS (20 μL), phần (2 μL) mẫu bơm vào thiết bị GC-MS Kết luận Chúng báo cáo phát triển xác nhận phương pháp sắc ký khí định tính-khối phổ để phát 11-nor-9-carboxy-Δ9- tetrahydrocannabinol (THCCOOH), chất chuyển hóa Δ9-tetrahydrocannabinol, nước tiểu người Về bản, phương pháp phát triển để xác nhận sau sàng lọc xét nghiệm miễn dịch, sau xác nhận, áp dụng phân tích mẫu nước tiểu pháp y (n = 221) Việc sử dụng chiết xuất có hỗ trợ xốy ly tâm tốc độ cao cho phép giảm thời gian chiết mẫu xuống