Bài thu hoạch ứng dụng các kỹ thuật sắc ký để phân tích độc chất có trong thuốc lắc

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LIÊN BỘ MÔN HĨA PHÂN TÍCH - KIỂM NGHIỆM - ĐỘC CHẤT BÀI THU HOẠCH ỨNG DỤNG CÁC KỸ THUẬT SẮC KÝ ĐỂ PHÂN TÍCH ĐỘC CHẤT CĨ TRONG “THUỐC LẮC” GVHD: PGS.TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ Lớp: Dược 35 – Nhóm 11 Năm 2022 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Chữ viết tắc ATS Chữ nguyên Amphetamine Type Stimulants Nghĩa tiếng Việt Tên gọi chung chất kích thích có cấu trúc hóa học dạng Amphetamine MDMA 3,4-methylenedioxy-N- Thuốc lắc hay Ecstacy methamphetamine MDMA-d5 3,4-methylenedioxy-Nmethamphetamine-d5 High Performance Liquid Phương pháp sắc ký lỏng hiệu Chromatography cao GC Gas Chromatography Hệ thống sắc ký khí MS Mass Spectrometry Phương pháp khối phổ MRM Multiple Reaction Monitoring Phương pháp giám sát nhiều HPLC phản ứng TOF Time of Fligh Kỹ thuật phân tích thời gian bay Gas Chromatography/Mass Phương pháp sắc ký khí ghép Spectroscopy khối phổ HPLC- High Performance Liquid Phương pháp sắc ký lỏng hiệu MS/MS Chromatography tandem Mass cao ghép lần khối phổ GC/MS Spectrometry MỤC LỤC Lời nói đầu Stt Nội dung Nguồn gốc, tính chất lý hóa 1.1 Nguồn gốc 1.2 Tính chất lý hóa 1.3 Thành phần hố học 1.4 Điều chế/ tổng hợp Độc tính, chế gây độc xử trí ngộ độc 2.1 Độc tính 2.2 Cơ chế gây độc 2.3 Xử trí ngộ độc Phân tích, so sánh phương pháp định tính, định lượng chất MDMA có Thuốc Lắc, mẫu dịch sinh học kỹ thuật miễn dịch sắc ký đại (sắc ký lỏng, sắc ký khí) 3.1 Phương pháp miễn dịch 3.2 Phương pháp sắc ký lỏng - Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) - Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao ghép lần khối phổ (HPLCMS/MS) 3.3 Phương pháp sắc ký khí - Phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ (GC/MS) 3.4 Phân tích, so sánh, bàn luận BÀI THU HOẠCH THỰC TẬP ĐỘC CHẤT CHỦ ĐỀ 9: ỨNG DỤNG CÁC KỸ THUẬT SẮC KÝ ĐỂ PHÂN TÍCH ĐỘC CHẤT CĨ TRONG “THUỐC LẮC” GVHD: PGS.TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ Danh sách thành viên Dược K35 – Nhóm 11 STT Họ Tên MSSV 01 Trần Thống 2133030004 02 Huỳnh Phương Thuỳ 2133030005 03 Đổ Cao 2133030006 04 Võ Thị Thuý Oanh 2133030017 05 Võ Văn Qui 2133030018 06 Nguyễn Khắc Quy 2133030019 07 Lê Thị Cẩm Tiên 2133030020 08 Huỳnh Như Ý 2133030028 09 Cao Văn Yên 2133030029 LỜI NÓI ĐẦU Trong thập kỷ gần đây, việc sử dụng trái phép 3,4-methylenedioxy-Nmethamphetamine loại thuốc kích thích tâm thần khác tăng lên đáng kể nhiều quốc gia 3,4-methylenedioxy-N-methamphetamine chất kích thích dạng amphetamine Đây loại thuốc có đặc tính kích thích gây ảo giác bị lạm dụng Trong số chất kích thích loại Amphetamine, MDMA biết đến chất kích thích mạnh mẽ hệ thống thần kinh trung ương MDMA chứng minh làm giảm biểu kiểu hình 5-HT tồn não người trưởng thành Một số chứng kiểu hình nhiễm độc thần kinh serotonin MDMA gây người lớn Để chẩn đoán điều trị cho người nghiện ma túy, đánh giá nồng độ MDMA máu bước thiếu Phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ (GC/MS) sử dụng để phân tích loại thuốc nhiều năm, đơi gặp khó khăn áp dụng tính khơng bền nhiệt phải tạo dẫn xuất dễ bay Gần đây, phương pháp sắc ký lỏng song song hiệu cao ưu tiên lựa chọn để xác định MDMA chất kích thích khác, phương pháp sử dụng để phân tích sản phẩm thuốc, mẫu nước tiểu Phương pháp HPLC ghép nối khối phổ sử dụng kỹ thuật phân tích thời gian bay (TOF) ion xác nhận để phân tích MDMA mẫu máu Nhưng thơng số phương pháp đánh giá cách sử dụng mẫu máu trắng đồng thời chưa áp dụng phân tích mẫu thực Mục đích nghiên cứu nhằm thẩm định phương pháp có độ nhạy cao để xác định MDMA mẫu máu HPLC-MS/MS từ áp dụng phân tích MDMA mẫu thực Bằng cách sử dụng đồng phân chứa năm đồng vị deuterium so với chất chuẩn (MDMA-d5) việc sử dụng lần khối phổ với chế độ MRM Phương pháp hứa hẹn tính đặc hiệu độ nhạy cao phân tích Ngồi ra, cách sử dụng mẫu máu thực xác định giá trị thông số đặc trưng, hứa hẹn phương pháp phân tích đạt với độ tin cậy cao áp dụng cho chẩn đốn, điều trị nghiên cứu độc tính thuốc NỘI DUNG Nguồn gốc, tính chất hóa lý 1.1 Nguồn gốc: Thuốc lắc hay ecstasy, tên khoa học MethyleneDioxylMethamphetAmine (viết tắt: MDMA), dạng ma túy chế tạo tổng hợp lần từ năm 1910, năm sau thuộc quyền sở hữu công ty dược Merck (Đức) dạng chất ức chế cảm giác thèm ăn Năm 1914 hãng thuốc Merck xin cầu chứng thuốc MDMA Lúc đó, MDMA dùng để bôi vào vết thương giúp cầm máu Nửa kỷ sau có người thử uống thuốc lắc MDMA, lúc đầu để gây cảm giác chán ăn Trong thập niên 1950 quân đội Hoa K ỳ thí nghiệm liều độ gây tử loạt thuốc tương tự MDMA (ký hiệu EA-1475) Cho đến năm 1969 có tiết lộ thí nghiệm Cùng năm, bác sĩ Alexander Shulgin đề nghị dùng thuốc MDMA cho vài bệnh tâm thần Nhờ khả gây sảng khối, thuốc MDMA trở nên thơng dụng Hoa Kỳ thập niên 1985 bị cấm Từ đó, dân chơi thuốc mua lậu câu lạc Dallas, hộp đêm đồng tính luyến nay, thuốc MDMA phổ biến sàn nhảy loại nhạc rave Trong thập niên 1990, phong trào chơi thuốc lắc MDMA xâm nhập vào trường đại học trung học Thuốc lắc loại thuốc cấm ma túy phổ biến nhất, hạng với cocaine, heroin cần sa Ecstasy loại ma túy ăn chơi phổ biến Mỹ, sau Châu Âu ngày lan rộng nơi khác giới MDMA chế tạo địa điểm bí mật dạng bột hay viên nén có nhiều màu sắc hình ảnh khác Những tên hiệu khác MDMA viên lắc, thuốc điên, viên chúa, viên hồng hậu, max, ecstasy, mecsydes, kẹo v.v 1.2 Tính chất lý hóa: Về mặt hóa học, chúng thuộc nhóm Phenylalkylamine coi dẫn xuất Amphetamine Dạng bazo, số chất lỏng sánh, khơng màu, số chất khác dạng bột kết tinh màu trắng, khơng hịa tan nước, hịa tan dung môi hữu ethanol, diethyl ether chloroform - Khối lượng phân tử: 193,25 g/mol - Điểm sơi: 105oC - Màu sắc: có nhiều màu sắc khác Trong thực tế chúng dùng dạng muối, chủ yếu muối clohydrat Ở dạng muối, tất chất ATS chất kết tinh khơng màu bột kết tinh màu trắng, hịa tan nước rượu ethanol, hịa tan chloroform khơng hịa tan diethyl ether Các viên có màu sắc khác gặp thị trường sở sản xuất pha thêm phẩm màu để tạo đặc điểm thương hiệu nhằm đánh lạc hướng quan thi hành pháp luật 1.3 Thành phần hóa học: Cơng thức hóa học: C11H15NO2 (3,4-methylenedioxy-N-methamphetamine ) Công thức cấu tạo: Thuốc lắc (Ecstasy) - MDMA 1.4 Điều chế/ tổng hợp: Methamphetamine tổng hợp cách khử nhóm hydroxyl ephedrin (phenylmethylaminopropanol) pseudoephedrin Nếu nguyên liệu ephedrin có từ Ma hồng sản phẩm d-methamphetamine có hoạt tính mạnh Nếu ngun liệu từ ephedrin tổng hợp sản phẩm chúng d,l- methamphetamine có hoạt tính Ở châu Âu, người ta tổng hợp MA từ phenylaxeton (benylmethylketon) 3,4-Methylendioxy-N-ethylamphetamine (MDEA) chất tổng hợp dòng Amphetamine Tổng hợp MDMA từ piperonal Độc tính, chế gây độc xử trí ngộ độc 2.1 Độc tính Độc cấp tính: Tim mạch : Tăng HA, nhịp nhanh, loạn nhịp, thiếu máu tim, nhồi máu tim, phình tách ĐM chủ, co thắt mạch Thần kinh trung ương : + Lo lắng, tính khí dễ thay đổi, hãn, ảo thị, ảo giác xúc giác, loạn thần kiểu tâm thần phân liệt dạng paranoid + Co giật, xuất huyết nội sọ, nhồi máu não, đau đầu, hưng cảm, chán ăn, vận động kiểu múa vờn Thần kinh giao cảm: Vã mồ hôi, thở nhanh, đồng tử giãn, run, buồn nôn Các quan khác : Tiêu vân, cứng cơ, tổn thương phổi cấp, viêm ruột kết thiếu máu, suy thận, RL đông máu Tử vong :Thường tăng thân nhiệt, loạn nhịp, xuất huyết nội sọ Mức độ độc: Mc đ trung bnh Mc đ nng Sng khoi Kch thch Tăng thân nhit Tăng thc tnh Hoang tưng Toang chuyn ha Nghin o gic Tiêu vân Thay đi tnh tnh V m hôi Suy thn cp Nhp nhanh Đau bng Tăng kali mu Tăng huyt p Hi hp đnh trng ngc Gim huyt p Đau ngc DIC, t vong Mc đ nh Độc tính mãn - Viêm mạch hoại tử (động mạch nhỏ-trung bình hẹp nhiều đoạn kiểu chuỗi hạt) - Ảnh hưởng nhiều quan: xuất huyết, nhồi máu não, thiếu máu tim, viêm tụy cấp, suy thận - Bệnh lý tim: ngộ độc cấp mạn - Tăng áp lực động mạch phổi:Khi dùng từ tuần trở lên - Van tim: Hở van ĐM chủ, van hai - Não: Các gốc tự gây tổn thương vĩnh viễn với neuron hệ serotonin dopamin Thay đổi chức transporter dopamin serotonin, cạn kiệt chất synape 2.2 Cơ chế gây độc Các loại amphetamine (MDMA, MDEA MNDA, DOM) gây phóng thích catecholamine (dopamine norepinephrine) serotonin Serotonin chất vận chuyển thần kinh chứng tỏ yếu tố chủ yếu liên quan đến tác động gây ảo giác Khi vào tế bào thần kinh, MDMA gây phóng thích nhanh serotonin ức chế sản xuất enzyme phân hủy serotonin Cầm phần cuối kit thử chỗ in tên sản phẩm Tránh làm bẩn , không chạm vào màng kit thử Cầm kit thử theo chiều dọc, nhúng kit thử vào mẫu phẩm nước tiểu khoảng 10-15 giây Không ngâm vạch tối đa ( MAX ) kit thử Sau hoàn thành xét nghiệm , lấy kit thử khỏi mẫu phẩm đặt lên mặt phẳng khơng thấm nước Bắt đầu tính thời gian chờ vạch màu xuất Đọc kết vịng phút Khơng sử dụng kết 10 phút • Diễn giải: Kết Test thử thuốc lắc MDMA / ECTASY - DƯƠNG TÍNH : Chỉ có vạch màu xuất vùng chứng (C) Khơng có vạch xuất vùng kết (T) Kết dương tính nồng độ chất gây nghiện vượt mức phát - ÂM TÍNH : Có vạch màu xuất Một vạch vùng chứng (C) vạch vùng kết (T) Kết âm tính nồng độ thuốc mức phát - KẾT QUẢ KHƠNG CĨ GIÁ TRỊ : Khơng xuất vạch chứng (C) Nên loại bỏ kết không xuất vạch d) Phương pháp ELISA Nguyên tắc: Phương pháp ELISA có nhiều dạng mà đặc điểm chung dựa kết hợp đặc hiệu kháng nguyên kháng thể, kháng thể gắn với enzyme Khi cho thêm chất thích hợp (thường nitrophenol phosphate) vào phản ứng, enzyme thủy phân chất thành chất có màu Sự xuất màu chứng tỏ xảy phản ứng đặc hiệu kháng thể với kháng nguyên thông qua cường độ màu mà biết nồng độ kháng nguyên hay kháng thể cần phát Marleen Laloup cộng [24] sử dụng phương pháp để xác định amphetamin, MDMA, MDA mẫu máu nước bọt Phương pháp phân tích dự đốn diện hai amphetamin MDMA/MDA (MDMA sản phẩm chuyển hóa MDA) với độ nhạy đạt 98,3% độ đặc hiệu 100% Đây kỹ thuật sàng lọc nhanh xác để xác định amphetamin, MDMA/MDA mẫu nước bọt huyết tương dương tính Nguyên lý ELISA e) Những điều cần lưu ý thực kỹ thuật ELISA Do kỹ thuật ELISA kỹ thuật miễn dịch bán tự động nên kết xét nghiệm bị ảnh hưởng nhiều yếu tố như: người, dụng cụ thao tác, hóa chất, thiết bị phân tích Để quản lý chất lượng tốt kỹ thuật xét nghiệm ELISA yêu cầu phải thực theo quy trình loại xét nghiệm * Dụng cụ hóa chất - Ống nghiệm - Giá đựng ống nghiệm - Micropipette tích khác từ 1^l đến 1000^l - Đầu type nhựa gắn vào Micropipette - Giấy thấm - Máy rửa giếng ELISA - Máy đọc ELISA - Bộ hóa chất gồm có: + Các nhựa gắn kháng nguyên/kháng thể + Dung dịch rửa + Calibration + Chứng âm + Chứng dương + Cộng hợp + Cơ chất + Dung dịch pha loãng huyết + Chất ngưng phản ứng • Mẫu bệnh phẩm + Sử dụng mẫu máu tĩnh mạch cho vào vào ống nghiệm không chứa chất chống đông có chứa chất chống đơng (Heparin/EDTA) tùy theo u cầu loại xét nghiệm + Mỗi mẫu máu để vào ống nghiệm riêng biệt có dán mã Barcode tên tuổi đầy đủ, có nắp vặn kín + Các mẫu máu cho vào hộp kín vận chuyển phòng xét nghiệm thời gian sớm + Thông thường mẫu máu để làm xét nghiệm ELISA ổn định 12h nhiệt độ phòng từ 20 - 25 ºC, nhiệt độ - ºC ổn định 24 - 48h + Tại phòng xét nghiệm mẫu máu phân phối khu vực thực xét nghiệm riêng mã hóa số mẫu theo dịch vụ xét nghiệm để hạn chế việc lây nhiễm chéo nhầm lẫn mẫu bệnh phẩm Quản lý chất lượng Kỹ thuật ELISA kỹ thuật miễn dịch bán tự động việc quản lý chất lượng trình làm xét nghiệm đóng vai trị vơ quan trọng Cần thiết phải đưa quy trình kiểm sốt chất lượng chặt chẽ bước thực hiện: + Trước xét nghiệm: Mẫu bệnh phẩm phải đạt yêu cầu không vỡ hồng cầu, không nhiễm khuẩn, nồng độ mỡ máu cao ảnh hưởng đến kết xét nghiệm + Trong xét nghiệm: Thực Calibration Control lần thực mẫu theo yêu cầu kít xét nghiệm + Sau xét nghiệm: Kết mẫu bệnh nhân chấp nhận đường Calibration Control lần thực đạt kết tốt Kết sau thực phân tích xong nên sử dụng phần mềm ghi nhận kết trực tiếp, tránh ghi tay gây sai số kết nhầm lẫn vào sổ • Quy trình kỹ thuật Quy trình gồm bước sau đây: Bước 1: Cho mẫu bệnh nhân, chứng âm, chứng dương vào giếng nhựa gắn sẵn kháng nguyên/kháng thể Ủ nhiệt độ phòng 37 ºC, thời gian ủ theo hướng dẫn nhà sản xuất Bước 2: Rửa giếng dung dịch đệm PBS - Tween 20, thấm giấy cho nước Bước 3: Cho cộng hợp vào giếng, ủ nhiệt độ phòng 37 ºC, thời gian ủ theo hướng dẫn nhà sản xuất Bước 4: Rửa giếng dung dịch đệm PBS - Tween 20, thấm giấy cho nước Bước 5: Cho chất vào giếng, chờ cho màu xuất (15 - 30 phút) Bước 6: Cho dung dịch ngưng phản ứng Bước 7: Đọc kết máy đọc ELISA tự động Phản ứng ELISA sandwich Tóm lại bước quy trình kỹ thuật ELISA có khả ảnh hưởng đến kết xét nghiệm người kỹ thuật viên thực khơng làm theo quy trình xây dựng Các yếu tố nguy hay gặp dẫn đến sai số kết là: + Hóa chất khơng để ổn định nhiệt độ phịng trước làm xét nghiệm + Hút sai thể tích mẫu pha lỗng, sai thể tích thuốc thử + Thời gian ủ nhiệt độ khơng đúng: gây âm tính dương tính giả + Rửa khơng sạch: nên sử dụng máy rửa tự động để đảm bảo đủ thể tích nước rửa số lần rửa, không thấm khô khay mẫu sau rửa xong + Không đọc kết sau dừng phản ứng * Biện luận kết - Ngưỡng dương tính khác loại xét nghiệm Biện luận kết dựa ngưỡng dương tính nhà sản xuất đưa - Các kỹ thuật miễn dịch phát kháng thể cho kết gián tiếp, khơng có giá trị tuyệt đối - Kết âm tính khơng loại trừ hồn tồn khơng nhiễm bệnh, bị nhiễm, bị nhiễm lâu, lượng kháng nguyên/kháng thể q để phát phương pháp ELISA Trong trường hợp nghi ngờ mắc bệnh lâm sàng nên làm lại xét nghiệm sau -2 tuần Xét nghiệm vài lần để theo dõi biến động kháng thể/ kháng nguyên có giá trị xét nghiệm lần Nếu cần, phải kiểm tra lại kỹ thuật khác - Kết dương tính khơng khẳng định hồn tồn dương tính giả phản ứng chéo loại ký sinh trùng nguyên gây bệnh Vì vậy, phản ứng miễn dịch tìm kháng ngun/kháng thể khơng thể thay hoàn toàn xét nghiệm trực tiếp chẩn đoán nguyên nhân bệnh Kết xét nghiệm, dù âm hay dương, cần xem xét cách cẩn thận, kết hợp với yếu tố dịch tễ xét nghiệm bổ sung khác (sinh học phân tử, nuôi cấy tế bào…) hỗ trợ phi lâm sàng khác (XQ, siêu âm…) • Thực theo hướng dẫn bác sĩ trước tiến hành lấy mẫu xét nghiệm • Báo với bác sĩ loại thực phẩm chức năng, thuốc có khơng kê đơn, nhịn ăn sáng uống nước với liều lượng yêu cầu, mà sử dụng Bên cạnh đó, bạn nên cung cấp thời gian sử dụng loại thuốc, thuốc chống đông máu chống động kinh Nếu yêu cầu kiêng sử dụng loại thuốc thời gian, cần chấp hành để tránh làm ảnh hưởng đến kết xét nghiệm • Khai báo thành thật câu hỏi bác sĩ tiền sử bệnh, thói quen hút thuốc hay sử dụng rượu bia,… Bởi vì, điều gây ảnh hưởng đến kết xét nghiệm Cung cấp thành thật thơng tin tình trạng thân cho bác sĩ ❖ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG Sơ đồ nguyên lý hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao HPLC - Sắc ký lỏng HPLC kỹ thuật để tách hỗn hợp chất thành thành phần riêng biệt dựa tương tác chất phân tích với pha động (thường chất lỏng) pha tĩnh (thông thường chất rắn) Pha động mang theo chất phân phân tích di chuyển qua pha tĩnh đứng yên - Các thành phần mẫu tương tác mạnh với pha tĩnh di chuyển chậm so với thành phần có tương tác yếu MDMA biết đến chất kích thích mạnh mẽ hệ thống thần kinh trung ương MDMA chứng minh làm giảm biểu kiểu hình 5-HT toàn não người trưởng thành Một số chứng kiểu hình nhiễm độc thần kinh serotonin MDMA gây người lớn Để chẩn đoán điều trị cho người nghiện ma túy, đánh giá nồng độ MDMA máu bước thiếu Phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ (GC/MS) sử dụng để phân tích loại thuốc nhiều năm, đơi gặp khó khăn áp dụng tính khơng bền nhiệt phải tạo dẫn xuất dễ bay Gần đây, phương pháp sắc ký lỏng song song hiệu cao ưu tiên lựa chọn để xác định MDMA chất kích thích khác, phương pháp sử dụng để phân tích sản phẩm thuốc, mẫu nước tiểu ❖ Phương pháp xử lý mẫu phân tích mẫu máu HPLC-MS/MS - Phương pháp xác định MDMA mẫu máu HPLC-MS/MS từ áp dụng phân tích MDMA mẫu thực Bằng cách sử dụng đồng phân chứa năm đồng vị deuterium so với chất chuẩn (MDMA-d5) việc sử dụng lần khối phổ với chế độ MRM Phương pháp hứa hẹn tính đặc hiệu độ nhạy cao phân tích ➢ Tiến hành: ml mẫu máu thêm vào 250 µL MDMA-d5 mg/L vào ống li tâm dung tích 15 ml, lắc trộn hỗn hợp máy lắc vịng 15 phút, sau để n 10 phút Ly tâm hỗn hợp thu tốc độ 8.000 vòng/phút phút, thu hồi phần dung dịch phía tiến hành tách làm giàu chất phân tích cột chiết C18 theo bước: (1) Kích hoạt cột mL metanol, mL nước cất mL dung dịch đệm phosphate (pH = 6); (2) Chuyển mL dung lịch mẫu (sau li tâm) chạy qua cột vòng phút; (3) Loại trừ tạp chất cột ml dung dịch hỗn hợp nước cất/acetone (20:80, v/v), chờ dung dịch rửa hồn tồn chảy khỏi cột vịng phút; (4) Rửa giải chất phân tích cột mL metanol Dung dịch thu được làm bay pha loãng lại 500 mL MeOH sau lọc qua giấy lọc 0,45 mm Dung dịch sau lọc phân tích hệ thống HPLCMS/MS điều kiện phương pháp Thông số HPLC- Agilent 1290 Infinity Cột tách Agilent Eclipse Plus C18 RRHD analytical column, 2,1 ì 100 mm, 1,8 àm (959757-902) Nhit độ tách 30oC Tốc độ dòng 0,3 mL / Pha động Nước cất chứa 0,1% formic acid (A), acetonitrile (B) Chương trình dung mơi (%B, initial, 80%; phút, 80%; 2,2 phút, min) 100%; 2,8 phút, 80% Thể tích mẫu tiêm µL 110-200 V (Positive) Capillary (Vcap) 4000 V (Positive) Nhiệt độ khí mang 350oC Tốc độ khí mang He, 11 L/min Nebulizer 35 psi Thế Nozzle 1500 V (Positive) Thế RF 110-200 V (Positive) ➢ Kết bàn luận - Để thẩm định độ xác phương pháp phân tích MDMA mẫu máu, thơng số độ đặc hiệu, độ tuyến tính, giới hạn phát hiện, độ độ lặp đánh giá theo hướng dẫn quy định tài liệu EC/657/2002, ISO 17025: 2017 AOAC 2016 - Độ đặc hiệu phương pháp xác minh cách phân tích mẫu trắng mẫu thêm chuẩn Phổ sắc ký khảo sát chế độ MRM với tín hiệu mảnh với mảnh phổ sơ cấp MDMA MDMA-d5 193,9 199 Mảnh ion thứ cấp MDMA có độ nhạy cao dùng để định lượng 163,1 Mảnh thứ cấp MDMA-d5 có độ nhạy cao để định lượng 164,9 - Ví dụ kết đưa hình bên ta có nhận xét: (Hình 1) (Hình 2) ✓ Như kết trình bày Hình 2, khơng có tín hiệu thu phổ sắc ký mẫu trắng, chứng tỏ khơng có hoạt chất ma túy MDMA mẫu máu blank chọn (Hình 2A) Ngược lại, thêm 1µg/mL MDMA vào mẫu trắng trên, peak đơn xuất thời gian lưu 0,407 phút, (Hình 1B) Sự khác biệt tín hiệu peak nồng độ MDMA thay đổi từ 1µg/mL đến 10 µg/mL với diện tích peak thay đổi từ 5833 (Hình 2B) tới 22948 (Hình 2C), điều xác nhận tính đặc hiệu cao phương pháp ➢ Kết luận ✓ Phương pháp phân tích định lượng có độ xác cao thẩm định để phân tích MDMA mẫu máu HPLC-MS/MS chất nội chuẩn đồng phân deuterium chất chuẩn Đường hiệu chuẩn thu khoảng nồng độ rộng từ 0,5-500 µg/L hệ số tương quan cao (R2 = 0,999) với giới hạn phát phương pháp thấp 0,3 µg/L Những thông số cho phép phương pháp ứng dụng phạm vi nồng độ rộng nhạy cao Độ độ tái lặp phương pháp tốt nhiều so với yêu cầu cần thiết phương pháp định lượng nồng độ ppb ✓ Phương pháp ứng dụng để phân tích MDMA mẫu thực áp dụng nghiên cứu, chẩn đoán điều trị nghiện ma túy ❖ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ Trong phương pháp này: pha động chất khí, pha tĩnh rắn lỏng Phương pháp có hiệu tách cao, thời gian phân tích nhanh, với detector phù hợp giới hạn phát phương pháp đạt 0,1 ppb ➢ Những loại đầu dò (Detector) sử dụng sắc ký khí Khối phổ (GC / MS) Sắc ký khí tách hợp chất Trong khối phổ kế giúp xác định chúng Dựa mơ hình phân mảnh phương pháp sắc ký khí khối phổ đánh giá có độ nhạy, độ phân giải độ xác cao Đây phương pháp phân tích ma túy tổng hợp áp dụng rộng rãi giới Đầu dị ion hóa Ngọn lửa (FID) Loại đầu dò (Detector) nhạy cảm phân tử hữu Nguyên tắc cụ thể đầu dò FID là: hợp chất Hydrocarbon sau khỏi cột bị cháy lửa Hydo ion hóa Trong từ trường áp điện khoảng 200V, ion bay vào điện cực góp (có cấu trúc hình ống) Khi ion va vào điện cực góp, dịng điện nhỏ sinh Dịng điện sau khuyếch đại lên khoảng mA (tùy thuộc vào độ nhạy Đây tín hiệu mà máy phân tích ghi lại cường độ Detector dẫn nhiệt (TCD) Detector cộng kết điện tử (ECD) Phương pháp định tính định lượng thuốc lắc phương pháp sắc ký khí Bằng phương pháp sắc ký khí sử dụng detector ion hóa lửa (GC/FID) kết hợp kỹ thuật vi chiết pha rắn: Nikolaos Raikos cộng đưa quy trình phân tích amphetamin, MA, MDA, MDMA, MDEA mẫu nước tiểu Q trình phân tích thực với chế độ bơm mẫu chia dòng, khí mang sử dụng heli với tốc độ dịng khí ml/phút, nhiệt độ phận bơm mẫu detector 220 2800C Nhiệt độ cột tách giữ 400C vòng phút sau tăng lên 2800C với tốc độ 200C/phút, giữ phút Giới hạn phát cho MA, MDA, MDMA, MDEA 30; 40; 35; 35 ng/ml Hiêu suất thu hồi đạt sau: MA (20–38,1%), MDA (5,1–6,6%), MDMA (7–9,6%) MDEA (5,4–9,6%) Phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC/MS) để xác định MDA, MDMA mẫu tóc mẫu nước tiểu: Tác giả Eunyoung Han cộng sử dụng cột tách cột mao quản silica Khí mang sử dụng Heli với tốc độ dòng 1,0 ml/phút, nhiệt độ phận bơm mẫu 2800C, trì nhiệt độ cột tách ban đầu 1000C phút sau tăng lên 2700C với tốc độ 200C/phút trì nhiệt độ 10 phút, thể tích bơm mẫu 1µL Chất phân tích định danh dựa vào thời gian lưu, thời gian lưu cho chất tương ứng: MDMA, m/z 154; 162; 7,56 phút; MDA, m/z 162; 135; 6,85 phút; MDMA-d5 (chất nội chuẩn), m/z 158, 167; 7,54 phút; MDA-d5 (chất nội chuẩn) m/z167, 136, 6.84 phút.Giới hạn phát đạt cho hai chất phân tích 0,125 ng/mg sử dụng 10mg tóc Hiệu suất thu hồi đạt 97,19 % 99,17 % với MDMA MDA Kết phân tích cho thấy hàm lượng MDMA, MDA tương ứng mẫu tóc 0,84 ng/mg ÷ 34,06 ng/mg, mẫu nước tiểu 0,15 ng/mg ÷ 1,03 ng/mg Nhóm tác giả Đặng Đức Khanh, Trần Việt Hùng, Trần Thị Thúy xác định MA, MDA, MDMA mẫu nước tiểu phương pháp sắc ký khí - khối phổ kết hợp vi chiết pha rắn Quy trình sử dụng chất nội chuẩn đồng vị MDA-d5, mẫu nước tiểu tách chiết làm cột chiết pha rắn C8 loại 500 mg, chất ma túy tạo dẫn xuất với trifluoroacetic anhydride trước phân tích sắc ký khí khối phổ Quy trình xây dựng có độ thu hồi khoảng từ 89,0-97,2%; độ lặp lại có RSD < 8%; giới hạn phát giới hạn định lượng chất MA, MDA, MDMA 1,4 ng/ml, 1,5 ng/ml, 1,1 ng/ml 4,6 ng/ml, 4,9 ng/ml, 3,6 ng/ml Ứng dụng quy trình xây dựng phân tích 56 mẫu nước tiểu gửi giám định ma túy, kết phát chất ma túy MA, MDA, MDMA mẫu với nồng độ từ 30480 ng/ml Tài liệu tham khảo https://tapchicongthuong.vn/bai-viet/tham-dinh-phuong-phap-phan-tich-34- methylenedioxymethamphetamine-trong-mau-mau-bang-phuong-phap-hplc-msms74811.htm Nghiên Cứu Quy Trình Xử Lý Mẫu Nước Tiểu Để Phân Tích Một Số Chất Ma Túy Tổng Hợp Nhóm Ats Bằng Phương Pháp Ce-C4d – Luận văn Thạc Sĩ Khoa Học (Tác giả: Phạm Thùy Linh)