Báo cáo thực tập ứng dụng các kỹ thuật sắc ký để phân tích chất độc gây ảo giác và kích động mạnh ‘ketamine

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ KHOA DƯỢC LIÊN BỘ MƠN HĨA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM- ĐỘC CHẤT  BÁO CÁO THỰC TẬP ỨNG DỤNG CÁC KỸ THUẬT SẮC KÝ ĐỂ PHÂN TÍCH CHẤT ĐỘC GÂY ẢO GIÁC VÀ KÍCH ĐỘNG MẠNH ‘‘KETAMINE” Giáo viên hướng dẫn: PGS TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ Lớp: Dược 45 - Nhóm: Cần Thơ, ngày 18 tháng năm 2021 DANH SÁCH THÀNH VIÊN NHÓM STT Họ tên MSSV Đóng góp (%) Hồ Thanh Phát 1953030049 100 Đào Hoàng Ngọc 1953030039 100 Nguyễn Diệp Huy Phong 1953030051 100 Lại Hà Phương 1953030052 100 Thạch Thị Diễm Phương 1953030053 100 Đỗ Hoàng Quyên 1953030054 100 Trương Thị Quyên 1953030055 100 Thạch Ngô Xà Rậy 1953030056 100 MỤC LỤC MỞ ĐẦU NỘI DUNG NGUỒN GỐC,TÍNH CHẤT LÝ HĨA 1.1 Nguồn gốc 1.2 Tính chất lý hố 1.3 Điều chế tổng hợp Ketamin ĐỘC TÍNH, CƠ CHẾ GÂY ĐỘC, XỬ TRÍ NGỘ ĐỘC 2.1 Độc tính 2.2 Cơ chế gây độc 2.3 Xử trí ngộ độc PHÂN TÍCH, SO SÁNH CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG KETAMINE VÀ DẪN XUẤT CÓ TRONG MÂU DỊCH SINH HỌC (MÁU, HUYẾT TƯƠNG, NƯỚC TIỂU) BẰNG CÁC KỸ THUẬT MIỄN DỊCH VÀ SẮC KÝ HIỆN ĐẠI (SẮC KÝ LỎNG, SẮC KÝ KHÍ) 3.1 Phương pháp ELISA 3.2 Phương pháp GC-MS 3.3 Phương pháp Sắc kí lỏng 18 3.4 So sánh phương pháp định tính, định lượng Ketamine chất chuyển hóa chúng có dịch sinh học 23 TÀI LIỆU THAM KHẢO ii Tiếng Việt ii Tiếng Anh ii Website iii DANH MỤC BẢNG Bảng Các ion phân t ban đầu phân m ảnh đặc trưng chất phân tích chất chuẩn n ội ch ế độ SIM 11 Bảng Thời gian lưu ion ch ọn để xác nh ận định lượng GC – MS 12 Bảng Các thông số tối ưu hóa cho Ketamine Norketamine 19 Bảng Đặc điểm phân tích phương pháp LC-ESI-MS-MS Ketamine Norketamine nước tiểu 20 Bảng So sánh phương pháp định tính, định lượng Ketamine chất chuyển hóa chúng có dịch sinh học 23 DANH MỤC HÌNH Hình Cấu trúc hoá học Ketamine Hình Phương pháp ELISA Được mơ tả ELISA bánh mì, hiển thị bước xét nghiệm, đánh số theo thứ tự 1-4 Hình Một đường cong tiêu chuẩn điển hình Được hiển thị đường cong chuẩncho IFN-γ ELISA Để tính nồng độ kháng nguyên mẫu, cần chuẩn bị đường chuẩn sử dụng dung dịch có nồng độ biết Hình Sắc kí đồ MS K, K-d4, NK, NK-d4 DHNK 13 Hình Sắc kí đồ chất chuẩn K NK 14 Hình Sắc kí đồ mẫu nước tiểu 15 Hình Nồng độ K, NK DHNK m ẫu nước ti ểu dương tính 16 Hình Đường cong hiệu chuẩn cho NK ( ฀) Và K (⚫) thu kỹ thuật ghi SIM phân tích GCMS 18 Hình Đường cong hiệu chuẩn cho ketamine norketamine 21 Hình 10 Sắc ký đồ nước tiểu trắng (A), ng / mL Ketamine Norketaminechuẩn (B), mẫu trường hợp Ketamine Norketamine dương tính (C) 22 DANH MỤC VIẾT TẮT STT 10 KÍ HIỆU ABTS DHNK EA ESI ELISA FDA HIV IUPAC K GC-MS 11 LC-MS-MS 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 LOQ LLOQ MDMA NDMA NK OD PCP SIM SPE SRM TMP NGUYÊN VĂN 2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) ) Dehydronorketamine Etyl acetate Electrospray Ionization Enzyme-linked immunosorbent assay United States Food and Drug Administration Human Immunodeficiency Virus International Union of Pure and Applied Chemistry Ketamine Gas Chromatography/Mass Spectroscopy Liquid Chromatography - Mass Spectrometry/Mass Spectrometry Limit of Quantitation Lower Limit Of Quantification 3,4-methylenedioxymethamphetamine N-methyl-D-aspartate Norketamine Optical Density phencyclidine Selected Ion Monitoring Solid-Phase Extraction Selected Reaction Monitoring Trimethylphosphate KETAMINE MỞ ĐẦU Ketamine hay gọi tắt “ke” Việt Nam, có tên thương mại thường gặp Ketalar số tên gọi khác Special K, Kit Kat, Cat Valium, Dorothy, Vitamin K Ketamine sử dụng y khoa loại thuốc gây mê Ngồi ra, cịn có tác dụng giảm đau cấp mạn tính, kiểm sốt chứng trầm cảm kháng trị [4][11] Ban đầu, ketamine tổng hợp với mong muốn thay cho phencyclidine Đến năm 1970, thức đưa vào sử dụng gây mê cho người phê duyệt FDA [11] Tuy nhiên nay, việc lạm dụng ketamine cho mục đích “phi y tế” khiến trở thành dao hai lưỡi, loại thuốc giải trí phổ biến tác dụng gây rối loạn tâm thần Khi dùng liều thấp, ketamine cho tác dụng hưng phấn phân ly gọi “kland”; liều cao cho cảm giác “k-hole” Sử dụng ketamine liều gây ức chế hô hấp, ngưng thở; hạ huyết áp, nhịp tim chậm, nhồi máu tim; co giật, hôn mê [16] Ketamine gây hội chứng lệ thuộc thuốc tương tự morphin, heroin Một thuốc sử dụng không mục đích trở thành ma tuý ketamine trường hợp Năm 2020 giới ghi nhận số người sử dụng ma tuý lên đến khoảng 284 triệu chủ yếu rơi vào độ tuổi 15-64, tăng 26% so với thập kỷ trước; 11,2 triệu người giới tiêm chích ma túy, nửa số sống chung với bệnh viêm gan C, khoảng 1,4 triệu người sống chung với HIV 1,2 triệu người sống chung với hai [19] Một thống kê Việt Nam vào thời điểm 16/06/2022 cho biết, nước có 217.059 người nghiện ma túy có hồ sơ quản lý (tăng 11.241 so với cuối năm 2021); 59.537 người sử dụng trái phép chất ma túy [2] Việc lạm dụng ketamine thường xảy kết hợp với chất khác bao gồm rượu, amphetamine, MDMA, cocaine caffein gặp nhiều nước Đông Nam Á Đài Loan, Malaysia Trung Quốc so với khu vực khác giới [16] Những hậu mà việc sử dụng ma tuý nói chung, ketamine nói riêng đem lại tạo thành gánh nặng lên xã hội tinh thần lẫn vật chất Vì vậy, cần có chiến KETAMINE lược cụ thể như: triển khai mở rộng tuyên truyền thích hợp để nâng cao hiểu biết cho người dân hậu việc sử dụng chất ma tuý; thắt chặt quản lý, tăng cường giám sát kiểm soát dạng thuốc gây nghiện, hướng thần, tiền chất Còn người sau cai nghiện, tạo điều kiện cho họ tái hoà nhập với cộng đồng mục tiêu cần lưu ý Ketamine mang lại nhiều lợi ích tác hại sử dụng chúng cách Việc tiếp tục thực nghiên cứu sâu ketamine cần thiết để tìm phương pháp giúp phát cách nhanh chóng xác ketamine mẫu dịch sinh học, thực phẩm, … góp phần việc phát sớm trường hợp nghiện ma tuý NỘI DUNG NGUỒN GỐC,TÍNH CHẤT LÝ HĨA 1.1 Nguồn gốc - Năm 1962, Calvin Stevens dược phẩm Parke-Davis Co (nay Pfizer) tổng hợp từ phencyclidine - Sau lần sử dụng ketamine người vào năm 1964 nhà tù Jackson (Michigan, Hoa Kỳ) Corssen Domino thực hiện, tác dụng phân ly liên quan đến việc gây mê thời gian ngắn báo cáo, sáng chế cho việc sử dụng người nộp vào năm 1966 - Năm 1970, đưa vào thực hành lâm sàng - Trong năm gần đây, người sử dụng ketamine (đặc biệt chất đối quang nó) để điều trị trầm cảm - Năm 1992, Pháp Trường hợp lạm dụng ketamine ghi nhận vào, dẫn đến giám sát đặc biệt quan y tế - Năm 1997, đưa vào danh sách chất gây nghiện [8] Cơng thức hố học: C13H16ClNO KETAMINE Tên IUPAC: 2-(2-chlorophenyl)-2-(methylamino) cyclohexan-1-one Hình Cấu trúc hố học Ketamine 1.2 Tính chất lý hố - Ketamine tồn dạng tinh thể màu trắng, có điểm nóng chảy 92,5oC - Tan nước Dạng muối cloride tan nước với độ hòa tan 20g/100mL, tan tự metanol, tan rượu, hịa tan cloroform - Ketamine có pKa = 7,5, pH dung dịch=3.5 - Màu sắc dung dịch thay đổi từ khơng màu đến vàng sẫm lại tiếp xúc lâu với ánh sáng Sự sẫm màu không ảnh hưởng đến hiệu lực Không sử dụng xuất kết tủa Khi bị đun nóng, ketamine phân huỷ tạo thành khói độc clorua oxid nitơ [12] 1.3 Điều chế tổng hợp Ketamin Được điều chế cách brom hóa o-clorophenyl xiclopentyl xeton, sau phản ứng với metylamin để tạo rượu metylimino Nhiệt phân imino hydrochloride tạo ketamine cách mở rộng vòng.[20] ĐỘC TÍNH, CƠ CHẾ GÂY ĐỘC, XỬ TRÍ NGỘ ĐỘC 2.1 Độc tính - Triệu chứng ngộ độc đặc trưng Ketamin cảm giác sảng khoái dùng với liều thấp; hưng phấn thường kèm với lo lắng tâm trạng lười biếng - Quá liều gây trạng thái cai nghiện với nhân cách phối hợp; liều cao hơn, phối hợp trở nên trầm trọng phản ứng với kích thích KETAMINE bên ngồi bị suy giảm, với khả chiến đấu, điều hòa, loạn nhịp, phì đại cơ, rung giật nhãn cầu, tăng phản ứng giật Với liều lượng cao, nhiễm toan, tăng thân nhiệt, nhịp tim nhanh, cao huyết áp nặng, co giật, mê xảy ra; chí tử vong - Tác dụng cấp tính thường nhanh chóng mờ nhiều bệnh nhân lấy lại ý thức bình thường 45 phút đến vài 2.2 Cơ chế gây độc Ketamin thuốc gây mê an thần ngăn chặn thụ thể NMDA / tăng cường hoạt động GABA làm tăng trình chết rụng tế bào thần kinh não phát triển dẫn đến suy giảm nhận thức lâu dài sử dụng lâu 2.3 Xử trí ngộ độc Bệnh nhân nên giữ yên môi trường yên tĩnh theo dõi chặt chẽ Benzodiazepine sử dụng để kiểm sốt kích động co giật Các biện pháp hỗ trợ khẩn cấp: Duy trì đường thở thơng thống hỗ trợ thơng khí cần thiết Điều trị hôn mê, co giật, tăng huyết áp, tăng thân nhiệt tiêu vân chúng xảy Hành vi kích động đáp ứng với việc hạn chế kích thích cảm giác cần an thần với liều cao benzodiazepin (midazolam, lorazepam, diazepam) haloperidol thuốc chống loạn thần khác Trong xử trí ban đầu bệnh nhân kích động, tiêm bắp midazolam haloperidol khơng có đường truyền tĩnh mạch Theo dõi nhiệt độ dấu hiệu sinh tồn khác tối thiểu thu nhận tất bệnh nhân bị tăng thân nhiệt chứng nhiễm độc đáng kể khác.[14] KETAMINE Bảng Thời gian lưu ion ch ọn để xác nhận định lượng GC – MS 12 KETAMINE Hình Sắc kí đồ MS K, K-d4, NK, NK-d4 DHNK 13 KETAMINE 3.2.5 Kết Sắc ký đồ ion K, chất chuẩn NK, mẫu pháp y dương tính thể Hình Ketamine, NK DHNK phân tách tốt sắc ký đồ mẫu nước tiểu dương tính (Hình 5) Hình Sắc kí đồ chất chuẩn K NK 14 KETAMINE Hình Sắc kí đồ mẫu nước tiểu Tuy nhiên số mẫu nước tiểu dương tính cho thấy nồng độ ba chất K, NK, DHKM khơng giống (Hình 7) Khoảng nồng độ K hẹp (20-7196 ng/mL) với mức trung bình thấp (332 ng / mL), khoảng nồng độ DHNK rộng (36-17629 ng / mL) với mức trung bình cao (891 ng / mL) Khoảng nồng độ NK từ 25 đến 7685 ng / mL Nồng độ DHNK nói chung cao nồng độ K NK, 82% 100 ng / mL; Nồng độ NK chủ yếu mức trung bình 77% 100 ng / mL; Nồng độ K thường thấp 86% 1000 ng / mL 15 KETAMINE Hình Nồng độ K, NK DHNK m ẫu nước ti ểu dương tính Nhà nghiên cứu Savchuk nhận thấy tỷ lệ Ketamine chất chuyển hóa có nước tiểu bệnh nhân khác đáng kể, DHNK xác định chất chuyển hóa sinh học Ketamine Các nghiên cứu dựa LC-MS, nghiên cứu liên hợp tạo dẫn xuất K cho thấy diện DHNK mẫu sinh phẩm Vì thế, ta nhận thấy nồng độ DHNK thường cao nồng độ K NK, khoảng nồng độ DHNK rộng mẫu nước tiểu dương tính Ngồi ra, chất nội chuẩn K-d4 NK-d4 phân tích riêng lẻ GC – MS cho thấy khơng có chất tương tự DHNK Vì vậy, DHNK khơng thể sản phẩm bị phân hủy nhiệt hay sản phẩm trình dehydro hóa, khơng phải mọt enzym mà chất chuyển hóa Ketamine.[9][10][17] 16 KETAMINE 3.2.6 Độ tuyến tính giới hạn phát LOD, giới hạn định lượng LOQ Các đường chuẩn khoảng 30–1000 ng / mL tuyến tính K, NK DHNK (R2 = 1.000, 1.000, 0,999, tương ứng) - LOD định nghĩa là: Nghiên cứu giá trị nhỏ khoảng phát phương pháp không cần định lượng nồng độ xác Hiểu cách đơn giản nồng độ thấp mà phương pháp xét nghiệm phát khơng cần định lượng xác nồng độ: LOD 10 ng/mL K, NK, DHNK - LOQ định nghĩa là: nồng độ tối thiểu chất có mẫu thử mà ta định lượng phương pháp khảo sát cho kết có độ chụm mong muốn Hiểu cách đơn giản nồng độ thấp mà máy (phương pháp) xét nghiệm phát định lượng xác nồng độ LOQ 15 ng/mL K, 10 ng/mL NK 20 ng/mL DHNK 3.2.7 Độ nhạy độ đặc hiệu Độ nhạy GC-MS 98,9% độ đặc hiệu 100% 17 KETAMINE Hình Đường cong hiệu chuẩn cho NK ( ฀) Và K ( ⚫) thu kỹ thuật ghi SIM phân tích GC-MS 3.3 Phương pháp Sắc kí lỏng[13] 3.3.1 Xử lý mẫu Thủy phân mẫu Các dung dịch chuẩn chuẩn bị cách cho mL nước tiểu trắng vào 50, 100, 200, 400, 800, 1200 ng ketamine chuẩn norketamine chuẩn Chuẩn bị: Một nước tiểu trắng khơng có tiêu chuẩn tiêu chuẩn nội nước tiểu trắng chứa 100 ng chất chuẩn nội Thêm vào ống ml dung dịch đệm natri axetat M (pH 5,0) với 40 µL dung dịch enzym β-glucuronidase (Helix pomatia) Các ống đậy nắp đặt tủ sấy 60 ° C Sau giờ, ống lấy khỏi tủ sấy để nhiệt độ phòng để làm mát Sau làm nguội, mL đệm photphat (0,1 M, pH 5,0) thêm vào ống, hỗn hợp trộn dạng xoáy Độ pH điều chỉnh đến pH 5,0 cách sử dụng kali hydroxit M Tất ống ly tâm tốc độ 2500 vòng / phút 10 phút trước tải lên cột ngoại pha rắn (SPE) SPE Đầu tiên, hộp mực SPE điều hòa với 3,0 mL metanol, 3,0 mL nước cất 1,0 mL đệm phosphat (0,1 M, pH 5,0) Sau đó, mẫu nước tiểu tải vào hộp SPE Các hộp mực rửa với mL đệm phosphat (0,1 M, pH 5,0) 1,0 mL axit axetic (1,0 M, pH 5,0) nhằm loại bỏ chất cản trở tiềm ẩn có chất nước tiểu Các cột làm khô hồn tồn chân khơng phút ml metanol / amoni hydroxit nước (98: 2) sử dụng để rửa giải chất phân tích chất chuẩn nội Chất rửa giải SPE làm bay đến khơ khí nitơ, sử dụng khối gia nhiệt đặt 40 ° C Cuối cùng, phần cịn lại hồn ngun với 150 μL pha động trộn xốy 18 KETAMINE 3.3.2 Định tính, Định lượng:LC-MS-MS - Phân tích LC thực cách sử dụng chương trình gradient - Cột phân tích: Cột Synergi Hydro RP (150 mmx2.0-mm, 4-µm) - Pha động: đệm amoni formate mM + axit formic 0,001% (pH 3) axetonitril (3:1) - Tốc độ dòng: 0,25 mL / phút - Thể tích tiêm: 20 µL - Đầu dị: ba tứ cực - Nguồn ion hóa: ESI - Kỹ thuật: SIM SRM - Dữ liệu phổ khối lượng thu cho chất phân tích chất chuẩn nội khử tín hiệu dựa chế độ ion dương điện cực (ESI) [M + H] +.Điện áp đầu dò sử dụng 4,5 kV Nhiệt độ mao quản, vỏ bọc tốc độ dịng khí phụ, lượng va chạm tối ưu hóa q trình điều chỉnh cho chất phân tích (Bảng 3) Bảng Các thông số tối ưu hóa cho Ketamine Norketamine Dữ liệu chuẩn nội thu thập cách theo dõi selected ion monitoring 19 KETAMINE (SIM) để xác định ion mẹ ketamine-d4 (m / z 242) norketamine-d4 (m / z 228) liệu chất phân tích thu thập cách theo dõi selected reaction monitoring (SRM) phạm vi khối lượng m / z 60–250 Các ion tiền chất ion sản phẩm ketamine norketamine thể bảng Ion định lượng ion sản phẩm tạo từ q trình phân mảnh tiền chất Để nhận dạng mẫu dương tính, tỷ lệ ion định lượng với chất chuẩn nội lớn khoảng ± 20% tỷ lệ chất chuẩn hiệu chuẩn thấp Tỷ lệ ion định tính ion định lượng tính tốn, tỷ lệ ion định tính chấp nhận chúng nằm khoảng ± 20% mẫu chuẩn mẫu chứng tương ứng Độ tuyến tính, LOD LLOQ Hệ số tương quan (R2) đường chuẩn lớn 0,99 ketamine norketamine Độ tuyến tính phương pháp LC – ESI-MS – MS đánh giá khoảng 0–1200 ng / mL, sử dụng tám điểm đường cong LOD ketamine norketamine xấp xỉ 0,6 ng / mL Giá trị LLOQ xác định 1,9 ng / mL ketamine 2,1 ng / mL norketamine Bảng Đặc điểm phân tích phương pháp LC-ESI-MS-MS Ketamine Norketamine nước tiểu 20 KETAMINE Hình Đường cong hiệu chuẩn cho ketamine norketamine Mẫu nước tiểu coi dương tính với LC– MS – MS ketamine norketamine phát nồng độ cao LLOQ phương pháp ng / mL Việc định lượng mẫu dựa vào diện tích đỉnh 21 KETAMINE Hình 10 Sắc ký đồ nước tiểu trắng (A), ng / mL Ketamine Norketamine chuẩn (B), mẫu trường hợp Ketamine Norketamine dương tính (C) 22 KETAMINE 3.4 So sánh phương pháp định tính, định lượng Ketamine chất chuyển hóa chúng có dịch sinh học Phương pháp Miễn dịch Sắc kí khí Sắc kí lỏng Khoảng tuyến tính K: - 20ng/ml NK: - 500ng/ml 30-1000 ng/mL 0–1200 ng / mL Độ nhạy Cao 98,9% Cao Độ đặc hiệu Cao 100% Cao LOD - 10 ng/mL K, NK, DHNK K NK xấp xỉ 0,6 ng / mL LOQ - K: 15 ng/mL đối NK: 10ng/mL DHNK: 20ng/mL - LLOQ - - K: 1,9 ng /mL NK: 2,1ng/mL Thời gian thực 3h/mẫu 12,5 phút/mẫu 30 phút/mẫu Đặc điểm Bảng So sánh phương pháp định tính, định lượng Ketamine chất chuyển hóa chúng có dịch sinh học Sự gia tăng nhanh chóng việc lạm dụng ketamine toàn giới tạo nhu cầu quy trình phát Ketamine với độ nhạy, độ đáng tin cậy cao Với quy trình ELISA, kết cho có dương tính giả âm tính giả, khắc phục GC-MS LC-MS-MS với độ tin cậy độ nhạy cao, có tính chọn lọc độ đặc hiệu cao, nhiên đòi hỏi phải xử lý mẫu nên LC -MS-MS có thời gian phân tích chậm phương pháp GC-MS 23 KETAMINE Với hai phương pháp GC-MS LC-MS-MS sử dụng đầu dò tứ cực tạo nhiều phân mảnh, LC-MS-MS sử dụng chế độ MS/MS tạo nhiều phân mảnh so với GC-MS, thích hợp cho phân tích vi lượng chất biết trước cấu trúc Nói nhược điểm GC-MS LC-MS-MS, hai phương pháp dùng kỹ thuật ghi SIM, đầu dị MS ghi nhận tín hiệu số mảnh ion đặc trưng cho chất cần xác định Khối phổ SIM cho tín hiệu ion lựa chọn trước Do đó, đầu dò khối phổ ba tứ cực, chế độ SIM thường lựa chọn để khảo sát lượng phân mảnh biết ion mẹ Ngoài ra, LC-MS-MS sử dụng thêm ký thuật ghi SRM: cô lập mảnh ion cần quan tâm đưa vào đầu dò để phát nên hạn chế số lượng ion quan tâm từ trở lên 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Dược thư Quốc gia Việt Nam (2018) Ủy ban Phòng, chống HIV/AIDS phòng, chống tệ nạn ma túy, mại dâm (2022), Tăng 11 nghìn người nghiện ma túy có hồ sơ quản lý Tiếng Anh Currance, P.L Clements, B., Bronstein, A.C (Eds).; Emergency Care For H azardous Materials Exposure 3rd revised edition, Elsevier Mosby, St Louis, MO 2007, p 160 Gao M, Rejaei D, Liu H Ketamine use in current clinical practice Acta Pharmacol Sin 2016 Jul;37(7):865-72 doi: 10.1038/aps.2016.5 Epub 2016 Mar 28 PMID: 27018176; PMCID: PMC4933765 Lin HR, Lua AC Detection of acid-labile conjugates of ketamine and its metabolites in urine samples collected from pub participants J Anal Toxicol 2004 Apr;28(3):181-6 Li, J., et al., Determination of Ketamine in Human Urine by Gas Chromatography Asian Journal of Chemistry, 2012 24: p 3764-3768 Le Daré B, Pelletier R, Morel I, Gicquel T Histoire de la kétamine : une molécule ancienne qui a toujours la cote [History of Ketamine: An ancient molecule that is still popular today] Ann Pharm Fr 2022 Jan;80(1):1-8 French doi: 10.1016/j.pharma.2021.04.005 Epub 2021 Apr 26 PMID: 33915159 Mion, Georges History of anaesthesia: The ketamine story – past, present and future European Journal of Anaesthesiology: September 2017 - Volume 34 - Issue - p 571-575 doi: 10.1097/EJA.0000000000000638 M.K Huang, C Liu, J.H Li, S.D Huang, J Chromatogr B 820 (2005) 162 10 Moore KA, Sklerov J, Levine B, Jacobs AJ Urine concentrations of ketamine and norketamine following illegal consumption J Anal Toxicol 2001 Oct;25(7):583-8 11 National Center for Biotechnology Information (2022) PubChem Compound Summary for CID 3821, Ketamine Retrieved August 9, 2022 ii 12 Norlida Harun, Robert A Anderson, Eleanor I Miller, Validation of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Screening Method and a Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry Confirmation Method for the Identification and Quantification of Ketamine and Norketamine in Urine Samples from Malaysia, Journal of Analytical Toxicology, Volume 33, Issue 6, July-August 2009, Pages 310–321 13 OLSON, K.R (Ed) Poisoning and Drug Overdose, Sixth Edition McGraw- Hill, New York, NY 2012, p 326 14 OLSON, K.R (Ed) Poisoning and Drug Overdose, Sixth Edition McGraw- Hill, New York, NY 2012, p 327 15 Orhurhu VJ, Vashisht R, Claus LE, et al Ketamine Toxicity [Updated 2022 Apr 4] In: StatPearls [Internet] Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2022 Jan- Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK541087/?report=classic 16 Pai-Sheng Cheng and erg (2007), GC–MS quantification of ketamine, norketamine, and dehydronorketamine in urine specimens and comparative study using ELISA as the preliminary test methodology, Journal of Chromatography B, 852 (2007) 443–449 17 S.A Savchuk, E.B Brodskii, B.A Rudenko, A.A Formanovskii, I.V Mikhura, N.A Davydova, J Anal Chem 52 (1997) 1299 18 UNODC (2022), UNODC World Drug Report 2022 highlights trends on cannabis post-legalization, environmental impacts of illicit drugs, and drug use among women and youth 19 Wollweber H; Anesthetics, General Ullmann's Encyclopedia of Industrial C hemistry 7th ed (19992017) NY, NY: John Wiley & Sons Online Posting Date: June 15, 2000 Website 20 https://www.immunology.org/public-information/bitesized- immunology/experimental-techniques/enzyme-linked-immunosorbent-assay iii