Phân tích, so sánh các phương pháp định tính, định lượng heroin trong mẫu dịch sinh học bằng định lượng miễn dịch và các kỹ thuật sắc ký hiện đại

MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH ẢNH - ii DANH MỤC BẢNG BIỂU -iii MỞ ĐẦU 1.1 Thực trạng -1 1.2 Lí nghiên cứu 1.3 Giải pháp 2 NỘI DUNG 2.1 Nguồn gốc, tính chất lý hóa -3 1.2.1 Nguồn gốc 1.2.2 Tính chất lý hóa: - 1.2.3 Thành phần hóa học: 1.2.4 Điều chế/ tổng hợp -9 2.2 Độc tính, chế độc tính xử trí ngộ độc [14], [15] 10 2.2.1 Độc tính 10 2.2.2 Cơ chế gây độc 12 2.2.3 Xử trí ngộ độc - 13 2.3 Phân tích, so sánh phương pháp định tính, định lượng heroin mẫu dịch sinh học định lượng miễn dịch kỹ thuật sắc ký đại ( Sắc kí lỏng, sắc kí khí) - 13 2.3.1 Sự chuyển hoá Tetrahydrocannabinol 13 2.3.2 Phương pháp miễn dịch enzym ELISA 14 2.3.3 Bộ dụng cụ phát nhanh (test nhanh) - 15 2.3.4 Phương pháp sắc kí đại 17 2.3.5 Bàn luận 18 Tài liệu tham khảo - 19 i DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Cây cần sa Hình Cơ chế xảy chu trình nội phân tử CBD thành Δ 9- THC[10] Hình Cơng thức hóa học cấu trúc mơ hình phân tử Tetrahydrocannabinol Hình Cơng thức hóa học cấu trúc mơ hình phân tử Cannabidiol Hình Quy trình tổng hợp THC Hình Quy trình tổng hợp CBD Hình Bộ xét nghiệm thuốc chẩn đốn FaStep - Nhà sản xuất: ACON Laboratories, Inc., USA ii DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng Các thành phần hóa học có cần sa iii MỞ ĐẦU 1.1 Thực trạng Trên giới nay, việc sử dung cần sa thường chia thành hai mục đích chính, gồm giải trí y tế (tại Việt Nam, cần sa chế phẩm từ cần sa thuộc chất ma túy tuyệt đối cấm sử dụng đời sống xã hội) Sử dụng cho mục đích y tế, dùng cần sa để giảm bớt triệu chứng đau, lo âu, ngủ, cảm giác ngon miệng Người sử dụng cần sa để có mục đích giải trí, hưởng thụ, giảm stress kích thích sáng tạo Thương sư du ng câ n sa se đem đê n cac hiê u ưng anh hương đê n tinh thâ n cung thê châ t Do đó, Cần sa loại chất kích thích giải trí phổ biến sử dụng để thay đổi trạng thái người sử dụng phụ thuộc Nó thường sử dụng để đạt cảm giác tức thời hưng phấn 1.2 Lí nghiên cứu Tetrahydrocannabinol (THC) thành phần cần sa, hợp chất tác động lên thần kinh ảnh hưởng đến cảm giác người sử dụng THC có loạt lợi ích y tế thường sử dụng để giảm đau, chống buồn nôn trầm cảm, số nhiều tác dụng khác Lượng THC cần sa phụ thuộc vào giống điều kiện khác nơi cần sa trồng, phát triển Ngày nay, số giống chứa trung bình từ 10-30% THC Chính mà Tội phạm ma t tiếp tục tăng, quy mô lớn, tinh châ t, phương thức, thủ đoạn ngày tinh vi, nguy hiểm manh động hình thức đưa cần sa vào hàng tiêu dùng mà loại thực liệu (như bánh, kẹo dẻo đồ ăn vặt khác) nhóm phổ biến hàng hóa tiêu dùng chứa cần sa mà đối tượng sử dụng chủ yếu trẻ em gây hệ lụy vô to lớn Từ trạng sử dụng mức độ nguy hại mà cần sa đem đến cho người sử dụng nó, đồng thời để phục vụ cho công tác giám định ma túy, báo cáo chúng em tập trung tìm hiểu phương pháp phát Tetrahydrocannabinol dẫn xuất cần sa hiệu quả, nhanh chóng nhằm kiểm tra phát đối tượng sử dụng cần sa 1.3 Giải pháp Xóa bỏ cần sa - Hồn thiện hệ thống pháp luật xử lý hành vi trồng cần sa Tuyên truyền, phổ biến pháp luật, kiến thức cần sa cho người dân biết để có biện pháp phòng ngừa - Nâng cao vai trò sở Đảng, quyền địa phương, tổ chức xã hội việc phòng ngừa tội phạm trồng cần sa - Tăng cường cơng tác phát hiện, triệt xố cần sa Quản lý chặc chẽ lĩnh vực y tế Mỗi cá nhân cần tự có ý thức khơng sử dụng chất cấm từ cần sa Gia đình, xã hội có trách nhiệm chung tay giúp đở cá nhân Cai nghiện Hiện nay, Pháp luật nước ta có Một số quy định pháp luật Việt Nam phòng, chống ma túy loại cần sa - Thứ nhất, Luật Phòng, chống ma túy (theo văn hợp số 13/VBHN-VPQH ngày 23/7/2013 Văn phịng Quốc hội) Khoản Điều quy định: “Cây có chứa chất ma túy bao gồm thuốc phiện (cây anh túc), cô ca, cần sa khác có chứa chất ma túy Chính phủ quy định” - Thứ hai, Bộ luật Hình năm 2015 (sửa đổi, bổ sung năm 2017) : quy định Các tội phạm ma túy - Thứ ba, Nghị định số 167/2013/NĐ-CP ngày 12/11/2013 Chính phủ quy định xử phạt vi phạm hành chính, Tại khoản Điều 21 “Vi phạm quy định phòng, chống kiểm soát ma túy” quy định mức phạt tiền từ 2.000.000 đồng đến 5.000.000 đồng hành vi trồng loại thuốc phiện, cần sa loại khác có chứa chất ma túy - Thứ tư, Nghị định số 73/2018/NĐ-CP ngày 15/5/2018 Chính phủ quy định danh mục chất ma túy tiền chất, nói rõ: Cần sa chế phẩm từ cần sa thuộc chất ma túy tuyệt đối cấm sử dụng y học đời sống xã hội; việc sử dụng chất phân tích, kiểm nghiệm, nghiên cứu khoa học, điều tra tội phạm theo quy định đặc biệt quan có thẩm quyền Đồng thời, cần sa chế phẩm từ cần sa không nằm danh mục chất ma túy dùng hạn chế phân tích, kiểm nghiệm, nghiên cứu khoa học, điều tra tội phạm lĩnh vực y tế theo quy định quan có thẩm quyền danh mục chất ma túy dùng phân tích, kiểm nghiệm, nghiên cứu khoa học, điều tra tội phạm lĩnh vực y tế, thú y theo quy định quan có thẩm quyền - Thứ năm, Thơng tư liên tịch số 17/2007/TTLT-BCA-VKSNDTC-TANDTCBTP ngày 24/12/2007 Bộ trưởng Bộ Công an, Viện trưởng Viện kiểm sát nhân dân tối cao, Chánh án Tòa án nhân dân tối cao, Bộ trưởng Bộ Tư pháp hướng dẫn áp dụng số quy định Chương XVIII “Các tội phạm ma túy” Bộ luật Hình năm 1999 (được sửa đổi Thông tư liên tịch 08/2015/TTLT-BCA-VKSNDTCTANDTC-BTP ngày 14/11/2015) có hướng dẫn số điểm quy định liên quan đến cần sa áp dụng điều luật Bộ luật Hình số tội phạm ma túy Như vậy, quy định pháp luật Việt Nam phòng, chống ma túy loại cần sa đến thời điểm tương đối đầy đủ Những cán làm cơng tác phịng, chống ma túy nói chung công chức, Kiểm sát viên trực tiếp thực nhiệm vụ công tác thực hành quyền công tố, kiểm sát điều tra, kiểm sát xét xử án hình ma túy nói riêng vận dụng để nghiên cứu, xem xét vận dụng xử lý vụ án ma túy liên quan đến cần sa NỘI DUNG 2.1 Nguồn gốc, tính chất lý hóa 1.2.1 Nguồn gốc Cây cần sa (canabis sativa) có nguồn gốc từ Ấn Độ Ba Tư, sau trồng phổ biến nước ôn đới nhiệt đới từ hàng trăm năm nhằm mục đích lấy sợi sử dụng lễ hội mang tính tâm linh Tính tới nay, chế phẩm/sản phẩm cần sa loại ma túy bị lạm dụng nhiếu thị trường ma túy lậu Việc trồng cần sa diễn khắp mọinơi, tất nước giới Nhựa cần sa sản xuất khoảng 65 nước giới, chủ yếu nước thuộc khu vực Bắc Phi Tây-Nam Á, đặc biệt Afghanistan Pakistan.[1] Châu Phi quê hương nước sản xuất nhựa cần sa hàng đầu giới Marốc, tiếng trồng cần sa Hầu hết nhựa cần sa bắt Châu Âu có nguồn gốc bn lậu từ Ma-rốc Nhựa cần sa từ Ma-rốc có đặc điểmđặc trưng giống với đặc điểm nhựa cần sa từ nước khác thí dụ nước thuộc vung đông nam Địa Trung Hải Afghanistan nước lớn thứ hai giới sản xuất nhựa cần sa Nhựa cần sa từ Afghanistan có đặc điểm giống với nhựa từ vùng khác tiểu lục địa Ấn Độ Li-Băng có thời nước cung cấp nhựa cần sa hàng đầu giới, khơng có nỗ lực triệt phá liên tục quan chức quyền địa phương, đứng đầu giới cung cấp nhựa cần sa Về cần sa, Châu Mỹ chiếm khoảng 55% sản lượng toàn cầu năm 2006, sau đến Châu Phi (khoảng 22%) Hầu hết cần sa sản xuất cho thị trường nội địa xuất sang nước láng giềng, cịn bị bn lậu giới [2] Cần sa có dạng : Marijuana, Hash hay Hashish Dầu Hashish Mari-ju-a-na hoa khô cần sa (Cannabis) Marijuana mạnh nằm đầu hoa gọi "heads" Màu sắc từ xám xanh đến xanh nâu, hình dạng mịn cỏ khô hay thô giống trà Marijuana thường vấn thành điếu để hút gọi "joints" hút ống điếu gọi "bong" Marijuana dùng để nêm canh trộn với bánh Trong ba dạng cần sa, Marijuana chứa chất THC tác dụng Hashish hay Hash nhựa cần sa Nhựa cần sa phơi khô ép lại thành cục, bán theo miếng có màu sắc từ nâu lợt đến đen "Hash" thường trộn với thuốc để hút, bỏ vào đồ ăn để ăn Hash mạnh marijuana Dầu Hashish (Hashish oil) chất dầu đặc chế biến từ Hash, sản phẩm cần sa mạnh Màu sắc từ nâu vàng đến đen Dầu Hashish thường bôi đầu điếu thuốc hay giấy điếu thuốc để hút Trong ba dạng trên, Marijuana chứa chất THC tác dụng Hình Cây cần sa 1.2.2 Tính chất lý hóa: [7] THC: Có độ hòa tan thấp nước, độ hòa tan tốt lipid hầu hết dung môi hữu cơ, đặc biệt hydrocarbon rượu CBD: Ở nhiệt độ phịng, cannabidiol chất rắn kết tinh khơng màu.[8] Trong mơi trường bazơ mạnh có mặt khơng khí, bị oxy hóa thành quinon.[9] Trong điều kiện axit, chuyển hóa thành THC,[10] xảy q trình nhiệt phân,[11] khơng xảy q trình đốt cháy (hun khói) Hình Cơ chế xảy chu trình nội phân tử CBD thành Δ 9- THC[10] 1.2.3 Thành phần hóa học: [10] Hiện nay, phân loại dựa tỉ lệ hợp chất sau: + THC cao, CBD thấp (hưng phấn hơn); + CBD cao, THC thấp (sáng suốt, minh mẫn hơn); + THC CBD cân (hưng phấn nhẹ) Thành phần chính, hoạt chất cần sa Delta-9-tetrahydrocannabinol (viết tắt THC) thành phần tạo tác động tâm sinh lý cần sa tìm thấy hoa cần sa Chất kích thích não giải phóng chất gọi dopamine, mang lại cho người sử dụng cảm giác hưng phấn, thư thái, khoái cảm tình dục Hình Cơng thức hóa học cấu trúc mơ hình phân tử Tetrahydrocannabinol CBD có tên gọi đầy đủ Cannabidiol Sau THC thành phần thứ hai cần sa Ngược với khả gây nghiện THC, CBD không gây hiệu ứng phê nên dùng y học nhiều Hình Cơng thức hóa học cấu trúc mơ hình phân tử Cannabidiol Thành phần Số hóa học D9-THC lượng thành phần 23 Các thành phần phổ biến 8α-hydroxy-Δ9-tetrahydrocannabinol, β-fenchyl Δ9 -tetrahydrocannabinolate, α-fenchyl Δ9 -tetrahydrocannabinolate, epi-bornyl Δ9 -tetrahydrocannabinolate, bornyl-Δ9–tetrahydrocannabinolate D8-THC Δ8-trans-tetrahydrocannabinol (Δ8-THC), Δ8-trans-tetrahydrocannabinolic acid-A (Δ8 - THCA), 10α-hydroxy-Δ8-tetrahydrocannabinol, 10βhydroxy-Δ8-tetrahydrocannabinol, 10aα-hydroxy-10-oxo-Δ8-tetrahydrocannabinol CBG 16 5-acetyl-4-hydroxy-cannabigerol, γ-eudesmyl-cannabigerolate CBC 4-acetoxycannabichromene, 7-hydroxycannabichromane CBD cannabidiolic acid (CBDA), cannabidiol monomethyl ether (CBDM), cannabidiol-C4 (CBD-C4), cannabidivarin (CBDV) CBND Cannabinodiol(CBND-C5) CBND-C3 (cannabinodivarin) CBE Cannabielsoic acidA(CBEAC5-A), cannabielsoin (CBE), cannabielsoic acid B (CBEA-C5 B), cannabielsoic acid B-C3 (CBEA-C3 B), C3-cannabeilsoin (CB3-C3) CBL Cannabicyclol (CBL), cannabicyclolic acid (CBLA), cannabicyclovarin (CBLV) CBN 11 8-hydroxycannabinolic acid-A 8-hydroxycannabinol CBT -trans-cannabitriol, trans-BT-C5, trans-cannabitriol (-trans-CBT-C5) Miscellaneou 30 Dehydrocannabifuran (DCBF-C5), s cannabifuran (CBF-C5) Total Cannabinoids Total 120 445 Cannflavin C, chrysoeriol, 6-prenylapigenin, Non- 4,5-dihydroxy-2,3,6-trimethoxy-9,10- cannabinoids dihydrophenanthrene Total 565 chemicals Bảng Các thành phần hóa học có cần sa [6] 1.2.4 Điều chế/ tổng hợp Quy trình tổng hợp THC:[12] Trong Cần sa , tetrahydrocannabinolic (THCA, THC chủ yế u xuất 2-COOH-THC) Geranyl dạng axit pyrophosphat axit olivetolic phản ứng, xúc tác enzym để tạo axit cannabigerolic, chu trình hóa enzym tổng hợp axit THC để tạo THCA Theo thời gian, đun nóng, THCA bị khử carboxyl , tạo THC Con đường sinh tổng hợp THCA tương tự đường tạo humulone axit đắng hoa bia Nó sản xuất phương pháp biến đổi genmen bia Hình Quy trình tổng hợp THC Quy trình tổng hợp CBD: [11] Cannabinoid phân thành hai loại, cannabinoid trung tính axit cannabinoid, dựa việc chúng có chứa nhóm cacboxyl hay khơng Được biết, thực vật tươi, hàm lượng cannabinoid trung tính thấp nhiều so với axit cannabinoid Do đó, THC CBD có nguồn gốc nhân tạo từ tiền chất axit chúng tetrahydrocannabinolic-axit (THCA) axit cannabidiolic (CBDA) cách khử cacboxyl hóa khơng phải enzym (Hình 6) Liên quan đến sinh tổng hợp cannabinoid, trước báo cáo việc xác định tinh chế enzym mới, tổng hợp THCA tổng hợp CBDA, thể cụ thể loại thuốc tương ứng (giàu THCA) loại chất xơ (giàu CBDA) Các enzym tổng hợp cannabinoid nghiên cứu mục tiêu hấp dẫn tiềm cho ứng dụng công nghệ sinh học khác chúng tạo tiền chất trực tiếp cannabinoid hoạt tính dược Ngồi ra, enzym xúc tác phản ứng sinh tổng hợp độc đáo, chu trình oxy hóa đặc hiệu nhóm geranyl axit cannabigerolic (CBGA) (Hình 6), chưa có phản ứng tương đương báo cáo Hơn nữa, mối quan hệ cấu trúc, chức di truyền tổng hợp THCA tổng hợp CBDA quan tâm Hình Quy trình tổng hợp CBD Hình thành sinh học THC CBD THCA synthase CBDA synthase xúc tác chu trình oxy hóa phân đoạn monoterpene CBGA để tạo thành THCA CBDA tương ứng Sau đó, THC CBD tạo từ THCA CBDA cách khử cacboxyl khơng enzym 2.2 Độc tính, chế độc tính xử trí ngộ độc [14], [15] 2.2.1 Độc tính Cần sa gọi marijuana/cannabis, loại chất tác động đến thần kinh từ Cannabis (gồm phận hoa cây) Chất kích thích thần kinh cần sa tetrahydrocannabinol (THC), 483 hợp chất biết bao gồm 65 loại cannabinoid khác 10 THC sử dụng y tế chất kích thích thèm ăn cho bệnh nhân mắc chứng chán ăn liên quan đến AIDS; sử dụng để điều trị nơn mửa liên quan đến hóa trị liệu ung thư, đau mãn tính bệnh đa xơ cứng, bệnh tăng nhãn áp rối loạn khác Cần sa sử dụng cách hút thuốc điếu thuốc lá, hít, cho vào thực phẩm (thường bánh quy, bánh hạnh nhân, trà) Thuốc cần sa điển hình chứa 1-3% THC, loại mạnh chứa tới 15% THC Hashish chứa 3–6% dầu băm 30–50% THC ( Nhựa từ làm khô nén thành khối gọi băm) Dronabinol có sẵn viên nang 2,5-, 5- 10 mg Độc tính liên quan đến liều lượng, có nhiều thay đổi riêng lẻ, phần bị ảnh hưởng mức độ dung nạp lần sử dụng trước Cần sa có tác dụng lên tâm thần sinh lý sử dụng Sau hút điếu hay sử dụng cần sa dẫn đến tình trạng hưng phấn, đánh trống ngực, nâng cao nhận thức cảm giác thay đổi nhận thức thời gian, sau khoảng 30 phút cho tác dụng tương đương dùng thuốc an thần Nhiễm độc nặng dẫn đến lo lắng, suy giảm trí nhớ ngắn hạn, suy nhược thể, ảo giác rối loạn tâm thần hoang tưởng cấp tính Việc sử dụng cần sa gây làm trầm trọng thêm chứng rối loạn tâm thần người bị tâm thần phân liệt rối loạn lưỡng cực Đôi khi, với liều thấp THC, tác động chủ quan dẫn đến tinh thần hoảng loạn Nhiễm độc cần sa cấp tính hạn chế khả lái xe dẫn đến tai nạn giao thông Sự lệ thuộc vào cần sa, hành vi thể chất, xảy 7–10% người dùng Các phát thể chất : bao gồm nhịp tim nhanh, hạ huyết áp đứng, nói lắp, kiểm soát Những biểu choáng váng, xanh xao, run tay kiểm soát quan sát thấy trẻ em sau chúng ăn phải thực phẩm có chứa cần sa 11 Các vấn đề sức khỏe khác - Sử dụng cần sa có liên quan đến nguy nhồi máu tim cấp, thường người có bệnh mạch vành tiềm ẩn, người không mắc bệnh, rối loạn nhịp tim bao gồm nhịp nhanh xoang rõ rệt, rung nhĩ, nhịp nhanh thất rung tim - Salmonellosis aspergillosis phổi báo cáo sử dụng cần sa bị ô nhiễm - Cần sa bị nhiễm paraquat (Paraquat hóa chất trừ cỏ cực độc, thuộc nhóm hợp chất ammonium bậc bipyridylium), paraquat bị phá hủy nhiệt phân, chưa có báo cáo độc tính paraquat hút cần sa - Sử dụng cần sa liều cao lâu dài có liên quan đến rối loạn tâm thần khác nhau, viêm phế quản mãn tính, tăng nguy bệnh tim mạch vành số loại ung thư Sử dụng đường tĩnh mạch : chiết xuất cần sa dầu băm gây khó thở, đau bụng, sốt, sốc, đơng máu nội mạch lan tỏa, suy thận cấp tử vong THC qua thai tích tụ với nồng độ cao đáng kể sữa mẹ 2.2.2 Cơ chế gây độc THC, liên kết với thụ thể anandamide não, có tác dụng kích thích, an thần gây ảo giác, tùy thuộc vào liều lượng thời gian sau tiêu thụ Có thể quan sát thấy giải phóng catecholamine (dẫn đến nhịp tim nhanh) ức chế phản xạ giao cảm (dẫn đến hạ huyết áp đứng) Chỉ khoảng 10–20% THC uống vào hấp thu vào máu, bắt đầu có tác dụng vòng 30–60 phút đạt nồng độ đỉnh sau 2–4 Nó chuyển hóa cách hydroxyl hóa thành chất chuyển hóa có hoạt tính khơng hoạt tính Thời gian bán thải 20–30 lâu người dùng thường xuyên 12 2.2.3 Xử trí ngộ độc Cấp cứu - Khử nhiễm sau uống - Dùng than hoạt đường uống điều kiện thích hợp - Khơng cần rửa dày cho uống than hoạt kịp thời - Tăng cường đào thải Các quy trình không hiệu lượng phân phối lớn cannabinoids Giải độc - Khơng có thuốc giải độc đặc hiệu Điều trị hỗ trợ - Nhịp tim nhanh xoang thường khơng cần điều trị cần thiết, kiểm soát thuốc chẹn beta - Hạ huyết áp tư đứng đáp ứng với tư cúi đầu dịch truyền tĩnh mạch - Hầu hết rối loạn tâm lý kiểm sốt cách trấn an đơn giản, cách sử dụng bổ trợ lorazepam, diazepam midazolam 2.3 Phân tích, so sánh phương pháp định tính, định lượng heroin mẫu dịch sinh học định lượng miễn dịch kỹ thuật sắc ký đại ( Sắc kí lỏng, sắc kí khí) 2.3.1 Sự chuyển hố Tetrahydrocannabinol Khi sử dụng cần sa, hoạt chất cần sa THC bị hấp thụ vào thể THC đồng hóa nhanh chóng sau tiếp xúc, chất hịa tan chất béo cao phân phối đến mơ mỡ, gan, phổi lách Sau đó, từ từ quay trở lại máu chuyển hóa, gây thời gian tương đối dài chy kì bán rã cuối Biến đổi sinh học enzym gan tạo nhiều chất chuyển hóa với C-11 THC chứa nhóm –OH chuyển hóa gan, qua q trình hydro hóa nhóm –CH3 tạo thành hợp chất hoạt động thần kinh 11-hydroxy-D9-tetrahydrocannabinol (THC-OH), thơng 12 qua q trình oxy hóa nhóm –OH xúc tác enzyme Cytochrome P450 (CYPs) gan tạo thành 11-nor-D9-tetrahydrocannabinol-913 carboxylic acid (THC-COOH)ở dạng không hoạt động chứa nhóm – COOH, hợp chất quan trọng để tiến hành phân tích Sau THC-COOH chứa nguyên tử Hydro linh động, tác dụng với axit glucuronic thể người thành dạng muối axit glucuronic, tiết vào nước tiểu chủ yếu dạng liên hợp axit glucuronic Q trình chuyển hóa thể qua sơ đồ sau: 2.3.2 Phương pháp miễn dịch enzym ELISA THC (Δ9-Tetrahydrocanabinol hoạt chất cần sa) định lượng phương pháp miễn dịch enzyme Xét nghiệm dựa vi khuẩn β galactosidase biến đổi gene để tạo hai mảnh vỡ Những mảnh vỡ tạo enzyme mà định lượng THC tác động lên THC tạo thay đổi màu sắc đo Trong khảo nghiệm, THC mẫu cạnh tranh với THC liên hợp mảnh hoạt động β Galactosidase vị trí gắn kết kháng thể Nếu THC có mẫu thử, liên kết với kháng thể mảnh vỡ tự tạo enzyme hoạt động 14 Nếu THC khơng có mặt mẫu thử THC liên hợp ức chế hoạt động mảnh vỡ β Galactosidase khơng hình thành enzyme hoạt động Lượng enzyme hình thành làm thay đổi độ hấp thụ tỷ lệ thuận với nồng độ THC mẫu thử Xét nghiệm THC nước tiểu sử dụng cut-off (COV) 25 ng/mL Với S mật độ quang đo mẫu thử + Kết dương tính khi: S ≥ COV + Kết âm tính khi: S < COV + Khi S = COV± 10% : không xác định Lặp lại xét nghiệm lần Nếu mẫu làm lại có S ≥ COV xem dương tính Ưu điểm Độ nhạy độ đặc hiệu cao Độ nhạy kỹ thuật ELISA tương đương với kỹ thuật miễn dịch phóng xạ cao kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang (0,1 µg/ml) ELISA phát kháng nguyên nồng độ 0,00001 µg/ml Nhược điểm Thời gian thực xét nghiệm ELISA cho lô xét nghiệm: 1- Qui trình thực phức tạp 2.3.3 Bộ dụng cụ phát nhanh (test nhanh) Nói chung, dụng cụ thử nghiệm ma túy hoạt động cách sử dụng phương pháp xét nghiệm miễn dịch Đây nơi hợp chất thuốc cụ thể chất chuyển hóa chúng (kháng nguyên), liên kết với kháng thể cụ thể xét nghiệm thuốc Trong thử thuốc, có hợp chất cạnh tranh gọi phức hợp thuốckháng thể Nó tương tự hợp chất ma túy thử nghiệm Nó cạnh tranh với hợp chất thuốc để liên kết với kháng thể xét nghiệm 15 Âm tính: Nếu mẫu nước tiểu khơng chứa thuốc chất chuyển hóa thuốc đem thử, hạt màu có kháng thể chảy lên que thử bị bắt giữ vị trí đặc biệt que thử, tạo thành vạch thuốc màu đỏ hồng Khi vạch thuốc có màu xuất , kết Âm tính với loại thuốc thử nghiệm Dương tính: Nếu mẫu nước tiểu có chứa thuốc chất chuyển hóa thuốc cụ thể xét nghiệm, hạt màu có kháng thể chảy qua vị trí đặc biệt dải khơng có vạch thuốc hình thành Khi khơng có vạch thuốc màu xuất , điều cho thấy kết Dương tính sơ cho loại thuốc thử nghiệm Hình Bộ xét nghiệm thuốc chẩn đốn FaStep - Nhà sản xuất: ACON Laboratories, Inc., USA Ví dụ: Bộ xét nghiệm thuốc chẩn đoán FaStep - Nhà sản xuất: ACON Laboratories, Inc., USA, cung cấp khả phát chất chất lượng cao thông qua xét nghiệm miễn dịch định tính Xét nghiệm phát chất gây nghiện chất chuyển hóa chúng nước tiểu mẫu huyết Thử nghiệm phát chất 16 ma tuý hoạt động theo nguyên tắc liên kết cạnh tranh chất ma tuý / chất chuyển hố với que thử Ưu điểm : dễ sử dụng, khơng cần xử lí mẫu, kết nhanh, độ nhạy cao, xét nghiệm đồng thời nhiều chất ma tuý mẫu dịch sinh học Nhược điểm: Phản ứng chéo thành phần có cấu trúc tương tự, tồn tỉ lệ định dương tính giả âm tính giả mẫu thử 2.3.4 Phương pháp sắc kí đại 2.3.4.1 Sắc kí lỏng (LC) Quy trình xử lý mẫu (máu, nước tiểu, nước bọt, dịch não tủy…)[11] Ly tâm 1,5-2 ml dịch sinh học, hút lấy ml phần dịch phía Lắc phần dịch thu với 2ml đệm amoni cacbonat 0,01M (pH 9,3) có chứa sẵn chất chuẩn nội, quay ly tâm Thu lấy 2ml phần dịch phía để chiết pha rắn Cột pha rắn rửa qua dung dịch đệm amoni cacbonat 0,01M, để khô môi trường chân không phút, rửa giải hỗn hợp methanol - acid acetic (9:1) Dịch rửa giải làm khơ N2 25oC, hồn ngun dung môi pha động ly tâm tiếp tục Hút lấy 10 - 20µl dịch phía để nạp vào hệ thống HPLC Điều kiện sắc ký Dung môi pha động: amoni format- acetonitril (5:95); tốc độ dòng: 0,6 ml/phút; cột silicagel pha đảo Các loại đầu dò thường sử dụng: đầu dò khối phổ (MS) (ECD) [11] , đầu dò huỳnh quang (FLD) [11] , đầu dò điện hóa [12] 2.3.4.2 Sắc kí khí (GC) Quy trình xử lý mẫu [13] Tương tự phương pháp sắc ký lỏng, dịch thu sau chiết pha rắn bay dung mơi, hồn ngun etyl acetat phân tích hệ thống sắc ký khí Điều kiện sắc ký: Khí mang He, tốc độ dịng 1,5ml/phút, nhiệt độ 270oC Các loại đầu dò thường sử dụng: đầu dò khối phổ (MS) [13] 17 2.3.4.3 Vai trò phổ MS Phổ MS xây dựng dựa việc tìm mảnh phân tử ion hóa đo cường độ tín hiệu chúng Mỗi chất phân tích mẫu có phân mảnh riêng tăng tính đặc hiệu phương pháp sắc ký với đầu dò khối phổ.Các mảnh phân tử có tín hiệu mạnh dùng để định lượng, mảnh phân tử có tín hiệu yếu dùng để định tính Ưu điểm: độ nhạy, độ đặc hiệu cao, mẫu đa dạng (tóc, máu, nước bọt, nước tiểu, dịch não tủy…), Nhược điểm: quy trình xử lý mẫu phức tạp, u cầu kỹ thuật máy móc đại, khơng có tính động kiểm tra sàng lọc 2.3.5 Bàn luận Các phương pháp định tính, định lượng tồn ưu, nhược điểm Trên thực tế, việc lựa chọn phương pháp để thực tùy vào mục đích Kit test nhanh có ưu điểm tính động nên phù hợp cho xét nghiệm sàng lọc người dương tính với ma túy Các phương pháp định lượng miễn dịch có ưu điểm độ nhạy, sở để nghiêm cứu phát triển kit test nhanh Các phương pháp sắc ký có độ nhạy, độ đặc hiệu cao sử dụng để xác định lại kết test nhanh Bên cạnh phương pháp sắc ký đại có khả phân tích nhiều mẫu đặc biệt mẫu phức tạp nên ứng dụng mạnh mẽ nghiên cứu động học chất, nhờ mà xác định sản phẩm chuyển hóa cần sa thể Việc xác định sản phẩm chuyển hóa cơng cụ đắc lực ngành hóa pháp hình sự, giám định pháp y tìm nguyên nhân chết người sử dụng ma túy 18 Tài liệu tham khảo United Nations Office on Drugs and Crime (UNODC), 2014, World Drug Report 2014 United Nations Publication Del Mar Ramirez Fernandez, M., et al., 2008, Simultaneous analysis of THC and its metabolites in blood using liquid chromatography-tandem mass spectrometry J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 875(2): p 465-70 Puskar Basyal, Prerok Regmi, “Ethnobotany, Taxonomy and Phytochemistry of Cannabis sativa”, International Journal of Medicine & Biomedical Sciences (IJMBioS) Garrett ER, Hunt CA (tháng năm 1974) "Tính chất hóa lý, độ hòa tan liên kết protein delta9-tetrahydrocannabinol" Tạp chí Khoa học Dược phẩm Vol 63 Jones PG, Falvello L, Kennard O, Sheldrick GM, Mechoulam R (1977) "Cannabidiol" Acta Crystallogr B Mechoulam R, Ben-Zvi Z, Gaoni Y (August 1968) "Hashish – 13 On the nature of the Beam test" Tetrahedron Gaoni Y, Mechoulam R (1966) "Hashish – VII The isomerization of cannabidiol to tetrahydrocannabinols" Tetrahedron Küppers FJ, Bercht CA, Salemink CA, Lousberg RC, Terlouw JK, Heerma W (1975) "Cannabis – XV: Pyrolysis of cannabidiol Structure elucidation of four pyrolyticproducts" Tetrahedron Fellermeier M, Zenk MH (May 1998) "Prenylation of olivetolate by a hemp transferase yields cannabigerolic acid, the precursor of tetrahydrocannabinol" FEBS Letters 10 Taura F, Sirikantaramas S, Shoyama Y, Yoshikai K, Shoyama Y, Morimoto S (June 2007) "Cannabidiolic-acid synthase, the chemotype-determining enzyme in the fiber-type Cannabis sativa" 19 11 Maciej J Bogusz, Rolf-Dieter Maier, Manfred Erkens, Sarah Driessen, Determination of morphine and its 3- and 6-glucuronides, codeine, codeineglucuronide and 6-monoacetylmorphine in body fluids by liquid chromatography atmospheric pressure chemical ionization mass spectrometry Journal of Chromatography B, 703 (1997) 115–127 12 W Hanisch and L.V Meyer, Determination of the Heroin Metabolite 6- Monoacetylmorphine in Urine by High-Performance Liquid Chromatography with Electrochemical Detection Journal of Analytical Toxicology, Vol 17, 1993 13 S Chericoni, F Stefanelli, V Iannella, M Giusian, Simultaneous determination of morphine, codeine and 6-acetyl morphine in human urine and blood samples using direct aqueous derivatisation: Validation and application to real case Journal of Chromatography B, 949–950 (2014) 127-132 14 Benowitz, N.L., Chapter 98 Marijuana, in Poisoning & Drug Overdose, 6e, K.R Olson, Editor 2012, The McGraw-Hill Companies: New York, NY 15 Kelly, B.F and T.M Nappe, Cannabinoid Toxicity, in StatPearls 2022, StatPearls Publishing 20