Ứng dụng các kỹ thuật sắc ký để phân tích chất độc psilocybin và psilocin trong nấm thần

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ KHOA DƯỢC LBM HĨA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT    BÀI BÁO CÁO SEMINAR ĐỘC CHẤT HỌC ỨNG DỤNG CÁC KỸ THUẬT SẮC KÝ ĐỂ PHÂN TÍCH CHẤT ĐỘC PSILOCYBIN VÀ PSILOCIN TRONG “NẤM THẦN” Hướng dẫn: PGs.Ts Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ Thực hiện: Nhóm – Dược K45 Cần Thơ – 8/2022 TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ KHOA DƯỢC LBM HĨA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM – ĐỘC CHẤT    BÀI BÁO CÁO SEMINAR ĐỘC CHẤT HỌC ỨNG DỤNG CÁC KỸ THUẬT SẮC KÝ ĐỂ PHÂN TÍCH CHẤT ĐỘC PSILOCYBIN VÀ PSILOCIN TRONG “NẤM THẦN” STT Họ tên MSSV Huỳnh Thanh Huynh 1953030019 Lâm Quang Khải 1953030020 Huỳnh Kim Lân 1953030027 Mai Trọng Hoàng Long 1953030031 Nguyễn Hồ Trung Nhân 1953030042 Trần Dũng Tâm 1953030058 Trương Phú Vinh 1953030096 Trần Hữu Lộc 1953030097 Nguyễn Minh Tuấn Anh 1953030101 i MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Nguồn gốc, thành phần hóa học, tính chất lý hóa 1.1 Nguồn gốc 1.2 Thành phần hóa học “nấm thần” 1.2.1 Psilocybin 1.2.2 Psilocin 1.3 Điều chế tổng hợp Độc tính, chế gây độc xử trí ngộ độc “Nấm thần” 2.1 Độc tính 2.2 Cơ chế gây độc 2.3 Xử trí ngộ độc “ Nấm thần” 10 Phân tích, so sánh phương pháp định tính, định lượng psilocybin psilocin “nấm thần” 11 3.1 Phương pháp miễn dịch 11 3.1.1 Chuẩn bị mẫu 11 3.1.2 Tiến hành 14 3.2 Phương pháp GC-MS 14 3.2.1 Giới thiệu phương pháp 14 3.2.2 Định tính định lượng phương pháp GC-MS 15 3.3 Phương pháp LC-MS 19 3.3.1 Giới thiệu phương pháp 19 3.3.2 Tiến hành 20 3.4 Phân tích, so sánh, bàn luận: 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO 26 ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Stt Chữ viết tắt 5-HT Nghĩa tiếng Anh CE Collision Energy DMT N-dimethyltrytamine DP Decoding Potential Tiềm giải mã ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Phản ứng miễn dịch enzyme GC - MS Gas Chromatography– Mass Spectrometry hệ thống sắc ký quang khối phổ HAT Hypoxanthine-AminopterinThymidine HPLC High-Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao IS Internal Standard Tiêu chuẩn nội Liquid Chromatography– Mass Spectrometry Sắc ký lỏng - khối phổ 10 LC-MS Nghĩa tiếng Việt 5-hydroxytryptamine 11 LC-MS/MS Liquid Chromatography - Tandem Sắc ký lỏng khối phổ Mass Spectrometry song song 12 LLOQ Lower Limit Of Quantification Giới hạn Định lượng thấp 13 LOD Limit of Detection Giới hạn phát 14 MSTFA N-Methyl-Ntrimethylsilyltrifluoroacetamide 15 PCG Psilocin Glucuronide 16 Psi Psilocin 17 Pyb Psilocybin 18 QC Quality Control Kiểm tra chất lượng iii Stt Chữ viết tắt 19 RT Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng Việt Retention Time Thời gian lưu 20 SIM Selected Ion Monitoring Kĩ thuật phân tích dấu vết 21 TMS Trimethylsilyl 22 UGTs Uridine 5'-diphosphoglucuronosyltransferase iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tiến trình rửa giải gradient cho hiệu suất cực cao sắc ký lỏng – khối phổ song song (UHPLC – MS/MS) 22 Bảng Quá trình chuyển đổi theo dõi nhiều phản ứng (MRM) thời gian lưu chất phân tích chất chuẩn nội (IS) cho UHPLC–MS/MS 22 v DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1 Nấm vàng Cuba Hình Nấm phiến đốm xanh Hình Cấu trúc psilocybin Hình Con đường sinh tổng hợp psilocybin “nấm thần” Hình Cấu trúc psilocin Hình Sự chuyển hóa psilocybin thể Hình Đặc điểm hình thái loại nấm sử dụng nghiên cứu 11 Hình Tóm tắt tổng hợp dẫn xuất haptenic liên hợp chúng với protein mang để tạo mAbs chống lại Pyb (tuyến A) Psi (tuyến B) 12 Hình 3 ELISA để xác định hàm lượng Pyb Psi nấm 13 Hình Phản ứng nhóm Hydroxyl (Silyl hóa) với MSTFA 15 Hình So sánh khối phổ dẫn xuất psilocybin-TMS hợp chất từ dịch chiết nước tiểu 18 Hình Sắc ký đồ ion dịch chiết huyết 18 Hình Các sắc ký đồ theo dõi ion chọn psilocin (a) psilocybin (b) nấm gây ảo giác phân tích cơng nghệ sắc ký khí - khối phổ 25 vi ĐẶT VẤN ĐỀ Trong “trào lưu” sử dụng số ma túy bánh lười, khát… “nấm thần” lên thú vui sành điệu phận giới trẻ Điều nguy hiểm có nhiều trang mạng giới thiệu cách trồng, nơi mua, chí cam kết sẵn sàng vận chuyển cho đặt từ gam nấm trở lên, đồng thời có nhiều video chia sẻ cách chuẩn bị, cách sử dụng báo trước “trải nghiệm” sử dụng loại nấm [15] Được trồng làm chất gây nghiện ứng dụng điều trị cho số bệnh lý thần kinh trung ương nên “ngộ độc nấm” việc tránh khỏi thường gặp nước châu Âu “Nấm thần” loại ma túy nguy hiểm hay gọi nhiều tên như: “Nấm ảo giác”, “Nấm ma thuật”, “Nấm thức thần”… mọc tự nhiên nhiều nơi giới Bắc mỹ, Mexico, Nam Mỹ, bán đảo Scandinavia vài vùng Châu Á, người dân Châu Mỹ sử dụng nấm thần lâu trước người Châu Âu đặt chân đến vùng đất [43] Có nhiều trường hợp tử vong sử dụng liều “nấm thần”, psilocin psilocybin hai hoạt chất có nấm bị đưa vào Công ước Liên Hiệp Quốc từ năm 1971 bị cấm hầu hết quốc gia giới Ở Việt Nam, psilocybin psilocin có danh mục cấm từ năm 1995 [44] Với phát triển không ngừng khoa học kỹ thuật, người biết ứng dụng phương pháp kỹ thuật sắc ký để phân tích chất độc psilocin psilocybin có “nấm thần” Năm 1981, Michael Wiliam Beug Jeremy Bigwood sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao sắc ký lớp mỏng để phân tích định lượng psilocybin psilocin có lồi Psilocybe baeocystis [5] Năm 1999, Thomas Keller cộng phân tích psilocybin psilocin Psilocybe subcubensis phép đo phổ di động ion sắc ký khí - khối phổ [21] Năm 2021, Liying Zhou cộng ứng dụng ưu kỹ thuật sắc ký việc phân tích định lượng chất độc psilocin psilocybin có tóc người sử dụng “nấm thần” [42] Đặc biệt tìm thấy nhiều tự nhiên Việt Nam [44] Tuy nhiên chưa có cơng bố nước việc sử dụng phương pháp sắc ký phân tích chất độc “nấm thần” Vì chúng tơi định tiến hành bàn luận việc “Ứng dụng kỹ thuật sắc ký để phân tích chất độc psilocybin psilocin “nấm thần”” để làm tiền đề cho nghiên cứu sau Nguồn gốc, thành phần hóa học, tính chất lý hóa 1.1 Nguồn gốc [44] “Nấm thần” gọi với nhiều tên “Nấm Psilocybe”, “Nấm ảo giác”, “Nấm ma thuật” hay “Nấm thức thần” mọc tự nhiên nhiều nơi giới Bắc mỹ, Mexico, Nam Mỹ, bán đảo Scandinavia vài vùng Châu Á, đặc biệt tìm thấy tự nhiên Việt Nam Trong tự nhiên “nấm thần” có nhiều loại, Việt Nam có loại phổ biến: – Nấm vàng Cuba (Psilocybe cubensis): có màu nâu đỏ phớt nâu phớt vàng Mũ nấm rộng từ 1,5 – 10 cm, hình nón hình oval Khi khơ màu sắc biến đổi sang trắng nâu trắng vàng, vàng hồn tồn nâu vàng Thịt nấm có màu trắng, đổi màu xanh dương bị dập Bào tử có màu nâu tím thẫm đen Thường mọc phân gia xúc trâu, bò, ngựa chất xác thực vật, xơ dừa… Hình 1 Nấm vàng Cuba – Nấm phiến đốm xanh (Panaeolus cyanescens): mũ nấm có đường kính từ 1,5 – cm, khơng dẻo, có màu nâu ẩm, màu xám trắng khơ Bào tử có màu thẫm đen, bầm dập có màu xanh dương, mặt mũ màu xám đen, mặt có vết chấm Thường mọc gần bãi phân gia xúc Phân bổ vùng khí hậu nhiệt đới cận nhiệt bán cầu Bắc Nam Máu nước tiểu chứa psilocybin psilocin chi nấm Psilocybe kiểm tra Bằng phân tích GC-MS hai chất dịch thể, psilocin phát Thuốc thử – Psilocin (100 µg/ml methanol) lấy từ Sigma-Aldrich (Merck KGaA) D3morphine tổng hợp phịng thí nghiệm – β-Glucuronidase từ vi khuẩn E coli K-12 (Boehringer Mannheim) – MSTFA (MachereyNagel/Duren) Thiết bị đo đạc – Máy sắc ký khí/khối phổ Hewlett-Packard 5995A kết nối với Máy trạm 59970A – Cột mao quản HP Ultra-1 (12 mx0,2 mm I.D.X độ dày màng 0,33 um) – Khí mang: Heli 5.0 Tiến hành Pha dung dịch gồm 25 ng d3-morphin 40 μl metanol thêm vào 0,5 ml huyết nước tiểu, vào mẫu song song, bổ sung 10 μl dung dịch glucuronidase để thủy phân glucuronid Các mẫu pha loãng với ml dung dịch đệm phosphat pH Điều hòa cột: dung dịch sau hút qua cột Varian Certify LRC 300 mg: ml metanol, ml dung dịch đệm photphat pH Thêm mẫu: mẫu chuẩn bị hút qua cột đến ml/phút cột khô Rửa cột: ml nước, ml đệm axetat pH 4, ml metanol /nước (30% v/v) Sau đó, cột làm khô chân không phút Rửa giải mẫu: trình rửa giải thực với metanol/conc amoni hydroxit (98 + v/v) chân không nhẹ, với ml sau với ml Tạo dẫn xuất: Dung dịch làm bay điều kiện nitơ 40°C sau thêm 50 µl MSTFA, ống đậy lại parafilm đun nóng 15 phút 80°C 16 Thể tích tiêm 10 ul Máy dò sử dụng chế độ tác động điện tử (El) 70 Khối phổ ghi lại phạm vi khối lượng m/z 50-550 Các phép phân tích định tính định lượng thực cách sử dụng chế độ theo dõi đơn ion (SIM) cách so sánh thời gian lưu phong phú tương đối ba ion (psilocin-di-TMS 290, 291, 348) tương ứng bốn ion (d3-morphin-di-TMS 404, 417, 432, 433) Các số trì tính đến 2099 psilocin-di-TMS 2520 d3morphine-di-TMS Kết Khoảng hiệu chuẩn từ đến 10 ng psilocin d3-morphin dạng dẫn xuất di-TMS tương ứng với nồng độ từ 10 đến 100 ng/ml huyết nước tiểu Có độ tuyến tính phạm vi (R> 0,99)[2] Việc thu hồi psilocin d3 - morphin sau bổ sung 25 ng/ml đến 0,5 ml huyết gần hoàn thành Thu hồi psilocin liên quan đến d3-morphin theo tiêu chuẩn nội 98% với độ lệch chuẩn 12% (n = 3) Giới hạn phát khoảng ng/ml huyết Bằng phân tích GC-MS hai chất dịch thể, psilocin phát mẫu phân tích Trong nước tiểu, phổ khối lượng hồn chỉnh đạt Hình chứng minh điều Từ phổ đối chiếu liệu hệ thống cho thấy có psilocybin 17 Hình So sánh khối phổ dẫn xuất psilocybin-TMS hợp chất từ dịch chiết nước tiểu Hình cho thấy sắc ký đồ ion mẫu huyết Các đỉnh khối lượng đặc trưng 290, 291 348 psilocin-di-TMS có thời gian lưu 4,54 phút cường độ dự kiến Hình Sắc ký đồ ion dịch chiết huyết (dẫn xuất psilocin-di-TMS đánh dấu mũi tên) 18 3.3 Phương pháp LC-MS 3.3.1 Giới thiệu phương pháp Sắc ký lỏng - khối phổ (LC–MS) kỹ thuật hóa học phân tích kết hợp khả phân tách vật lý sắc ký lỏng (hoặc HPLC) với khả phân tích khối lượng khối phổ (MS) Sắc ký cặp - Hệ thống MS phổ biến phân tích hóa học khả riêng lẻ kỹ thuật tăng cường cách tổng hợp Trong sắc ký lỏng phân tách hỗn hợp có nhiều thành phần, khối phổ cung cấp thơng tin phổ giúp xác định (hoặc xác nhận danh tính nghi ngờ của) thành phần tách MS không nhạy mà cung cấp khả phát chọn lọc, giảm nhu cầu tách sắc ký hồn tồn LC-MS thích hợp cho chất chuyển hóa khả bao phủ tốt nhiều loại hóa chất Kỹ thuật song song sử dụng để phân tích hợp chất sinh hóa, hữu vơ thường tìm thấy mẫu phức tạp có nguồn gốc sinh học mơi trường Do đó, LC-MS ứng dụng nhiều lĩnh vực bao gồm công nghệ sinh học, giám sát môi trường, chế biến thực phẩm dược phẩm, hóa chất nơng nghiệp công nghiệp mỹ phẩm Từ đầu năm 2000, LC-MS (hay cụ thể LC-MS/MS) bắt đầu sử dụng ứng dụng lâm sàng Vì psilocin dễ dàng bị oxy hóa q trình chuẩn bị mẫu psilocybin dephosphoryl hóa thành psilocin thể người phosphatase kiềm, nên việc xác định cách xác đáng tin cậy lượng vết psilocin psilocybin mẫu sinh học khó khăn Một số phương pháp phát triển để xác định chất psilocin psilocybin phòng hỗn hợp gây ảo giác [21], nước tiểu [14] mẫu máu [36] Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) phát tia cực tím (UV) sử dụng để phân tích psilocin psilocybin nấm gây ảo giác [7] huyết tương [8] Do chuyển hóa psilocin diễn nhanh chóng khơng ổn định tác động ánh sáng khơng khí, việc phân tích psilocin chất béo thể tương đối 19 khó khăn [2] nên việc sử dụng tóc thuận tiện dễ thu thập sử dụng HPLC cho kết xác 3.3.2 Tiến hành Chuẩn bị mẫu chuẩn mẫu kiểm tra chất lượng Dung dịch gốc hỗn hợp có chứa psilocin psilocybin pha lỗng với metanol để đạt nồng độ 10 μg/mL Từ dung dịch này, Pha loãng với nồng độ 1000, 100 10 ng / mL metanol chuẩn bị Dung dịch chuẩn nội gốc chuẩn bị cách trộn 100 μg/mL psilocind10 psilocybin-d4 metanol Dung dịch chuẩn nội gốc pha loãng với metanol để tạo dung dịch chuẩn nội nồng độ 100 ng/mL Chuẩn hiệu chuẩn chuẩn bị cách trộn mẫu tóc khơng chứa psilocin psilocybin với dung dịch để thu nồng độ xác 5, 10, 50, 100, 200, 400 500 pg/mg psilocin psilocybin Nồng độ thấp (5 50 pg/mg), trung bình (100 pg/mg) cao (400 pg/mg) sử dụng cho mẫu kiểm tra chất lượng (QC) Tất dung dịch gốc chuẩn, dung dịch làm việc mẫu QC bảo quản 20°C Chuẩn bị mẫu rắn Một lượng thích hợp nấm khả nghi cắt kéo Hai mươi miligam nấm cân cho vào ống nghiền mL, mL dung môi chiết (metanol) thêm vào Mẫu đặt máy nghiền lạnh Shanghai Jing Xin JXFSPRP-CLN mài hai lần nhiệt độ ° C Các thông số thiết lập sau: tốc độ, 2500 vòng / phút; số lần chạy, 15 lần; thời gian giá trị, 60 s; mài, 18 m / s Sau đó, mẫu ly tâm 13.500 × g phút Tổng cộng 200 μL phần phía cho trực tiếp vào lọ lấy mẫu tự động để phân tích GC-MS Sau đó, phần phía pha loãng 10.000 lần với axit formic 0,1% nước phân tích trực tiếp LC–MS/MS Các mẫu tóc rửa liên tiếp ba lần axeton để loại bớt tạp Sau sấy khô nhiệt độ phịng, tóc cắt thành đoạn dài 1–2 mm kéo Sau đó, 20 mg tóc 20 cân cho vào ống nghiền mL, thêm 0,5 mL dung môi chiết (bao gồm 0,1% axit formic - nước chứa ng chuẩn nội) Sau đó, mẫu đặt vào máy nghiền lạnh Shanghai Jing Xin JXFSPRP-CLN để nghiền theo chế độ nấm Mẫu ly tâm hai lần 14,100 × g phút lần Cuối cùng, 200 μL chất phía pipet vào lọ lấy mẫu tự động, μL bơm vào LC–MS/MS Thiết bị Phân tích LC–MS/MS thực cách sử dụng hệ thống Acquity ™ Ultra Performance LC áp suất cực cao khối phổ kế tứ cực Sciex 6500 Plus Q-trap ™ trang bị với giao diện Tur bolon Spray Dữ liệu phân tích phần mềm MultiQuant 3.0.2 Các chất phân tích tách cột Waters Acquity TM UPLC HSS T3 (100 × 2,1 mm i.d., kích thước cụ thể 1,8 μm) sử dụng rửa giải gradient tuyến tính Pha động A gồm 0,1% axit fomic nước Pha động B axetonitril Gradient lập trình Bảng Tốc độ dịng đặt thành 0,2 mL / phút Tổng thời gian chạy phút thể tích tiêm μL Nhiệt độ lấy mẫu tự động trì 4°C Khối phổ kế vận hành với chế độ ion hóa tia điện cực dương chế độ giám sát nhiều phản ứng (MRM) Các thông số khối phổ thiết lập sau: nhiệt độ nguồn ion, 500 ° C; khí rèm, 20 psi (nitơ); điện khỏi ô va chạm, V; nguồn ion khí 1, 30 psi; nguồn ion khí 2, 30 psi; điện vào, 10 V; điện áp phun ion, 5000 V; khí phân ly kích hoạt va chạm, thấp Thời gian chuyển đổi lưu giữ MRM trình bày Bảng 21 Bảng Tiến trình rửa giải gradient cho hiệu suất cực cao sắc ký lỏng – khối phổ song song (UHPLC – MS/MS) [5] Bảng Quá trình chuyển đổi theo dõi nhiều phản ứng (MRM) thời gian lưu chất phân tích chất chuẩn nội (IS) cho UHPLC–MS/MS [5] Tiềm giải mã (DP), lượng va chạm (CE), thời gian lưu (RT) Phương pháp thẩm định Phương pháp phải thẩm định bao gồm độ chọn lọc, độ nghiêng tuyến tính, giới hạn phát (LOD), giới hạn phép định lượng (LLOQ), độ xác, độ chụm, độ hoàn thiện ma trận độ thu hồi 22 Tính chọn lọc Tính chọn lọc đánh giá cách phân tích mẫu tóc từ 10 nguồn khác để tìm hợp chất nội sinh tiềm tàng tóc chất chuẩn nội can thiệp vào sắc tố chất phân tích Độ tuyến tính, giới hạn phát LOD giới hạn định lượng thấp LLOQ Chất hiệu chuẩn chuẩn bị nồng độ 5, 10, 50, 100, 200, 400 500 pg / mg cho psilocin psilocybin Độ tuyến tính xác định cách phân tích xử lý bảy hiệu chuẩn tạo đường chuẩn với / x trọng số, hai phân tích độc lập thực cho tập hợp LOD LLOQ đánh giá mẫu lông trắng có gai với nồng độ chất phân tích giảm dần LOD xác định nồng độ chất phân tích thấp với tỷ lệ tín hiệu nhiễu (S / N) LLOQ xác định nồng độ tuyến tính thấp với S / N≥10 có độ xác chấp nhận xác Độ xác độ xác Độ xác độ xác nghiên cứu mẫu tóc cách đo sáu lần lặp lại mẫu LLOQ QC 5, 10, 100 400 pg / mg Các lựa chọn ngày ngày đánh giá tỷ lệ phần trăm biến thiên (% CV) Độ xác đánh giá dựa tỷ lệ phần trăm nồng độ danh nghĩa đo (giá trị trung bình nồng độ đo / danh nghĩa × 100) Độ xác khơng vượt q ± 15% nồng độ thấp, trung bình cao, ngoại trừ LLOQ, khơng vượt q ± 20% Độ xác phải nằm khoảng 85–115% nồng độ thấp, trung bình cao, ngoại trừ LLOQ, khơng nằm phạm vi 80–120% Hiệu ứng ma trận Các mẫu chia thành ba nhóm: mẫu có trước chiết, mẫu sau chiết xuất dung dịch chuẩn 0,1% axit fomic nước (mẫu gọn) Giá trị efect ma trận diện tích đỉnh mẫu sau chiết chia diện tích pic dung dịch chuẩn 0,1% formic axit nước Sự phục hồi tính diện tích đỉnh trước chiết xuất mẫu chia cho diện tích pic mẫu sau chiết xuất 23 3.4 Phân tích, so sánh, bàn luận: Phương pháp miễn dịch Sử dụng kết hợp chiết xuất / ELISA chọn, phát Pyb Psi với bốn loại nấm ăn phổ biến (Hình B) Những kết ELISA mở hướng tiếp cận hóa chất miễn dịch thuận tiện để phát nấm gây ảo giác bất hợp pháp Họ tạo hai mAbs chống lại Pyb Psi Đây báo cáo mô tả thành lập dịng nhân hybridoma bí mật kháng thể chống Pyb Các ELISA tạo cách sử dụng mAbs phát thành công Pyb Psi mẫu P cubensis khô; ELISA cơng cụ đầy hứa hẹn để xác định loại nấm gây ảo giác bất hợp pháp sản phẩm liên quan chúng Bởi khả phản ứng chéo thấp chúng dấu hiệu cho thấy tính đặc hiệu chúng, mAbs cho phép phát triển hệ thống hóa chất miễn dịch khác phù hợp để sử dụng chỗ, ví dụ, máy sắc ký miễn dịch máy cảm biến miễn dịch Các quy trình xác định nấm có chứa Pyb / Psi số nấm hái phát triển tương lai Các ELISA cần phải nhạy để xác định nồng độ Pyb Psi huyết nước tiểu động vật người sau ăn nấm ma thuật [31] Nếu lực ống nghiệm phát triển hơn, tức là, thao tác di truyền mAbs tại, cung cấp đột biến kháng thể với lực cải thiện nhiều Dựa điều ấy, họ tạo đoạn kháng thể đột biến chống lại dẫn xuất haptenic nhỏ (như Pyb / Psi), có giá trị Ka so với, ví dụ, estradiol-17 [29], [17] cotinine tăng cường > 150 lần > 40 lần, tương ứng Các gen mã hóa miền VH VL mAb-Pyb # 74 mAb-Psi # 105 nhân để bắt đầu dự án Việc tạo ứng dụng đột biến trưởng thành lực kháng thể kháng Pyb kháng Psi báo cáo tương lai gần Phương pháp sắc ký đại Psilocybin dễ bị phân hủy nhiệt phân hủy cacboxy để tạo thành psilocin mà không tạo dẫn xuất điều kiện GC [14], [21] Do đó, phương pháp GC–MS phân 24 biệt psilocin psilocybin khơng có biến đổi dẫn xuất Ngồi ra, LC–MS LC–MS/MS có ưu điểm việc phân tích hợp chất dễ bị phân hủy nhiệt vốn có độ nhạy cao [38] Do đó, nên chọn sử dụng công nghệ LC–MS/MS, không yêu cầu tạo dẫn xuất để phân tích psilocin psilocybin nấm gây ảo giác Các điều kiện tách sắc ký tối ưu hóa để thu độ cộng hưởng tốt hình dạng pic tốt Hình Các sắc ký đồ theo dõi ion chọn psilocin (a) psilocybin (b) nấm gây ảo giác phân tích cơng nghệ sắc ký khí - khối phổ 25 TÀI LIỆU THAM KHẢO Agurell S, Nilsson JL (1968) "Biosynthesis of psilocybin Part II Incorporation of labelled tryptamine derivatives" Acta Chemica Scandinavica 22 (4): 1210–1218 Anastos N, Barnett NW, Pfeffer FM (2006) “Investigation into the temporal stability of aqueous standard solutions of psilocin and psilocybin using high performance liquid chromatography” Science & Justice 46 (2): 91–96 Azmitia EC (2010) "Evolution of serotonin: sunlight to suicide" In Müller CP, Jacobs BL (eds.) Handbook of the Behavioral Neurobiology of Serotonin London, UK: Academic Press p ISBN 978-0-12-374634-4 Archived from the original on April 4, 2017 Retrieved February 27, 2016 Battaglia, John "Pharmacological management of acute agitation." Drugs 65.9 (2005): 1207-1222 Beug MW, Bigwood J (March 1981) "Quantitative analysis of psilocybin and psilocin in Psilocybe baeocystis (Singer and Smith) by high-performance liquid chromatography and by thin-layer chromatography" J Chromatogr 207 (3): 379– 85 Beug, M W., & Bigwood, J (1982) “Psilocybin and psilocin levels in twenty species from seven genera of wild mushrooms in the Pacific Northwest, U.S.A.” Journal of Ethnopharmacology, 5(3), 271–285 Borner S, Borenneisen R (1987), “Determination of tryptamine derivatives in hallucinogenic mushrooms using high-performance liquid chromatography with photodiode array detection” J Chrotnatogr, 408,402–408 Chen J, Li M, Yan X, Wu E, Zhu H, Lee KJ, Chu VM, Zhan L, Lee W, Kang JS (2011) , “Determining the pharmacokinetics of psilocin in rat plasma using ultraperformance liquid chromatography coupled with a photodiode array detector after orally administering an extract of Gymnopilus spectabilis” J Chromatogr B, 879, 2669–2672 26 Chilton WS, Bigwood J, Jensen RE (1979) "Psilocin, bufotenine and serotonin: historical and biosynthetic observations" Journal of Psychedelic Drugs 11 (1–2): 61–69 10 Dinis-Oliveira, Ricardo Jorge "Metabolism of psilocybin and psilocin: clinical and forensic toxicological relevance." Drug metabolism reviews 49.1 (2017): 84-91 11 Eivindvik, K., K E Rasmussen, and R B Sund "Handling of psilocybin and psilocin by everted sacs of rat jejunum and colon." Acta pharmaceutica nordica 1.5 (1989): 295-302 12 Fricke, Janis, Felix Blei, and Dirk Hoffmeister "Enzymatic synthesis of psilocybin." Angewandte Chemie International Edition 56.40 (2017): 12352-12355 13 Gilbert J, Şenyuva H (2009) Bioactive Compounds in Foods John Wiley & Sons p 120 ISBN 978-1-4443-0229-5 Archived from the original on April 4, 2017 Retrieved February 27, 2016 14 Grieshaber AF, Moore KA, Levine B (2001), “The detection of psilocin in human urine” J Forensic Sci, 46, 627–630 15 Guzman G (1983) Genus Psilocybe: A Systematic Revision of Known Species Including the History, Distribution, and Chemistry of Hallucinogenic Species Beihefte Zur Nova Hedwigia Heft 74 Vaduz, Liechtenstein: J Cramer ISBN 9783-7682-5474-8 16 Hasler, Felix, et al "Acute psychological and physiological effects of psilocybin in healthy humans: a double-blind, placebo-controlled dose–effect study." Psychopharmacology 172.2 (2004): 145-156 17 H Oyama, S Yamaguchi, S Nakata, T Niwa, N Kobayashi, “Breeding” diagnostic antibodies for higher assay performance: a 250-fold affinitymatured antibody mutant targeting a small biomarker, Anal Chem 85 (2013) 4930–4937 18 I Morita, H Oyama, Y Kanda, M Yasuo, A Ito, M Toyota, Y Hayashi, T Yokoyama, N Kobayashi, “Enantioselective monoclonal antibodies for detecting ketamine to crack down on illicit use”, Biol Pharm Bull 41 (2018) 123–131 27 19 Jensen N, Gartz J, Laatsch H (June 2006) “Aeruginascin, a trimethylammonium analogue of psilocybin from the hallucinogenic mushroom Inocybe aeruginascens” (PDF) Planta Medica 72 (7): 665–6 20 Kargbo, Robert B., et al "Direct phosphorylation of psilocin enables optimized cGMP kilogram-scale manufacture of psilocybin." ACS omega 5.27 (2020): 1695916966 21 Keller, Thomas, et al "Analysis of psilocybin and psilocin in Psilocybe subcubensis GUZMAN by ion mobility spectrometry and gas chromatography–mass spectrometry." Forensic science international 99.2 (1999): 93-105 22 Lenz, Claudius; Wick, Jonas; Braga, Daniel; García‐Altares, María; Lackner, Gerald; Hertweck, Christian; Gressler, Markus; Hoffmeister, Dirk (20 January 2020) "Injury‐Triggered Blueing Reactions of "Magic" Mushrooms" Angewandte Chemie International Edition 59 (4): 1450–1454 23 May P "Psilocybin and Mescaline" University of Bristol Retrieved 28 November 2011 24 National Center for Biotechnology Information PubChem Compound Summary for CID 4980, Psilocin 25 Neal, J M., Benedict, R G., & Brady, L R (1968) “Interrelationship of phosphate nutrition, nitrogen metabolism, and accumulation of key secondary metabolites in saprophytic cultures of Psilocybe cubensis, Psilocybe cyanescens, and Panaeolus campanulatus.” Journal of Pharmaceutical Sciences, 57(10), 1661-1667 26 Nichols DE, Frescas S (1999) "Improvements to the synthesis of psilocybin and a facile method for preparing the o-acetyl prodrug of psilocin" Synthesis 1999 (6): 935–938 CiteSeerX 10.1.1.690.8071 doi:10.1055/s-1999-3490 27 Nichols, David E "Hallucinogens." Pharmacology & therapeutics 101.2 (2004): 131181 28 28 N Kobayashi, Y Kato, H Oyama, S Taga, T Niwa, P Sun, M Ohtoyo, J Goto, “Anti-estradiol-17 single-chain Fv fragments: Generation, characterization, gene randomization, and optimized phage display”, Steroids 73 (2008) 1485–1499 29 N Kobayashi, H Oyama, Y Kato, J Goto, E Söderlind, C.A.K Borrebaeck, “Twostep in vitro antibody affinity maturation enables estradiol-17-assays with more than 10-fold higher sensitivity”, Anal Chem 82 (2010) 1027–1038 30 O'Neil MJ, Smith A, Heckelman PE, Obenchain JR, Gallipeau JR, D'Arecca MA, eds (2001) The Merck Index: An Encyclopedia of Chemicals, Drugs, and Biologicals (13th ed.) Whitehouse Station, New Jersey: Merck p 1419 ISBN 9780-911910-13-1 31 P.P Wieczorek, D Witkowska, I Jasicka-Misiak, A Poliwoda, M Oterman, K Zieli nska, “Bioactive alkaloids of hallucinogenic mushrooms, in: A.U Rahman (Ed.)”, Studies in Natural Products Chemistry, 46, Elsevier, Amsterdam, 2015, pp 133–168 32 "Psilocybine" Hazardous Substances Data Bank U.S National Library of Medicine Archived from the original on August 13, 2018 Retrieved November 21, 2011 33 Reynolds HT, Vijayakumar V, Gluck-Thaler E, Korotkin HB, Matheny PB, Slot JC (April 2018) "Horizontal gene cluster transfer increased hallucinogenic mushroom diversity" Evolution Letters (2): 88–101 34 Sherwood, A M.; Kargbo, R B.; Kaylo, K W.; Cozzi, N V.; Meisenheimer, P.; Kaduk, J A (January 1, 2022) "Psilocybin: crystal structure solutions enable phase analysis of prior art and recently patented examples" Acta Crystallographica Section C: Structural Chemistry 78 (1): 36–55 35 Shirota O, Hakamata W, Goda Y (2003) "Concise large-scale synthesis of psilocin and psilocybin, principal hallucinogenic constituents of "magic mushroom" Journal of Natural Products 66 (6): 885–887 36 Sticht G, Käferstein H (2000), “Detection of psilocin in body fuids Forensic Sci Int”,113,403–407 29 37 Tittarelli, Roberta, et al "Recreational use, analysis and toxicity of tryptamines." Current neuropharmacology 13.1 (2015): 26-46 38 Troxler F, Seeman F, Hofmann A (1959) "Abwandlungsprodukte von Psilocybin und Psilocin Mitteilung über synthetische Indolverbindungen" [Modified products of psilocybin and psilocin Report on synthetic indole compounds] Helvetica Chimica Acta (in German) 42 (6): 2073–2103 39 Tylš, Filip, Tomáš Páleníček, and Jiří Horáček "Psilocybin–summary of knowledge and new perspectives." European Neuropsychopharmacology 24.3 (2014): 342-356 40 Wilson, Michael P., et al "The psychopharmacology of agitation: consensus statement of the american association for emergency psychiatry project Beta psychopharmacology workgroup." Western Journal of Emergency Medicine 13.1 (2012): 26 41 Wurst, M., Kysilka, R., & Flieger, M (2002) Psychoactive tryptamines from basidiomycetes Folia Microbiologica, 47(1), 3–27 42 Zhou, Liying, et al "Sensitive quantitative analysis of psilocin and psilocybin in hair samples from suspected users and their distribution in seized hallucinogenic mushrooms." Forensic Toxicology 39.2 (2021): 464-473 TRANG WEB: 43 http://benhvientamthanhanoi.com/nam-than-mot-loai-ma-tuy-moi-nguy-hiem.html 44 https://caynamviet.com/nam-thuc-than-la-gi 30