0833 nghiên cứu sàng lọc phân lập và nhận dạng các hoạt chất axit béo axit arachidonic và prostaglandin từ rong đỏ biển luận văn tốt nghiệp

VIỆNHÀN LÂM KHOA HỌC VÀCÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌCVIỆN KHOA HỌCVÀ CÔNG NGHỆ …… ….***………… LÊTẤT THÀNH NGHIÊNCỨUSÀNGLỌC,PHÂNLẬPVÀNHẬNDẠNGCÁCHO ẠT CHẤT AXIT BÉO, AXIT ARACHIDONICVÀPROSTAGLANDINTỪRONGĐỎBIỂN Chuyên ngành:Hóa học hợp chất thiên nhiênMãsố: 62 44 01 17 TÓMTẮT LUẬNÁN TIẾN SĨHÓA HỌC HàNội - 2016 Cơngtrìnhđượchồnthànhtại:HọcviệnKhoahọcvàCơngnghệ-ViệnHàn lâmKhoahọc Cơng nghệViệtNam Ngườihướngdẫnkhoahọc1:GS.TS.PhạmQuốcLong Ngườihướngdẫnkhoahọc2:TSKH.AndreyB.Imbs Phảnbiện1:PGS.TS.HồngThanhHương Phảnbiện2:GS.TS.LãĐìnhMỡi Phảnbiện3:PGS.TS.TrầnThuHương Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án tiến sĩ tạiPhòng họp tầng 2, Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên, Viện Hàn lâmKhoa họcvàCơngnghệViệt Nam Vàohồi…… giờ……,ngày…… tháng… năm2016 Cóthểtìmhiểuluậnántại: - ThưviệnHọcviệnKhoahọcvàCơngnghệ - ThưviệnQuốcgiaViệtNam I GIỚITHIỆULUẬNÁN Tínhcấpthiết Nhóm axit béo C20 đa nối đơi, điển hình axit arachidonic(AA) axit eicosapentaenoic (EPA), có vai trị quan trọng trongnhóm chất lipit thể động vật bậc cao chúng tiền chất để sinhtổng hợp eicosanoid nhóm phân tử dẫn truyền tín hiệu sinhhọc (còn gọi hoocmon tổ chức) prostaglandin, prostacyclin,leukotrien, vàthromboxan Axit arachidonic thành phần phospholipit cấu tạonên màng tế bào não, bắp gan thường phân lập từ lipitcủa gan, trứng loài cá biển AA thành phần lipit số lồi rong biển Axit arachidonic có tác dụng kích hoạt hệenzyme NADPH oxygenase giúp hoạt hố q trình trao đổi oxi, kích hoạtcác kênhionK +, Ca2+… Cácprostaglandin(PG)đượchìnhthànhtừcáccácaxitbéoC20đanốiđ ơiquaqtrìnhchuyểnhốbằngenzymtrongcơthểvàcóchứcnăngsinhhọ c quan t rọn gđối vớ i động v ật Chúng m ột m ắtxíc hquantrọng trongchuỗiphản ứngmiễndịchcủacơthể,liênquanđếncáchiệntượngquant r ọ n g n h v i ê m t ấ y v u n g t h C h ú n g c ũ n g t c đ ộ n g l ê n k h ả n ă n g chịuđựngcủahệcơphẳng,hệ bàitiết,hệtiêuhóavàhệtuầnhồntrongcơthểsống.Chínhvìvậy,chúngcũngđượcsửdụnglàm thuốcđểđiềutiếtcácqt r ì n h t h ụ t h a i , m a n g t h a i v s i n h đ ẻ v v ìt h ế đ ợ c c o in h m ộ t c hấ t hormon.C c p r o s t a g l a n d i n đ ợ c c c n h k h o a h ọ c n g h i ê n c ứ u t ổ n g h ợ p haytìmkiếmtừcácnguồnnguyênliệutựnhiên,đặcbiệtlànguồn sinhvậtbiểnv đ ã đ ợ c p h t h i ệ n t r o n g m ộ t s ố l o i r o n g Đ ỏ b i ể n c ù n g v i h m lượngcaocácaxitbéokhơngnođanốiđơi.Vìthếrongđỏbiểnđượcđánhgiálàng uồnngunliệutựnhiêntiềmnăngđểkhaitháccáchoạtchấtnày Trên sở phân tích nêu trên, chúng tơi lựa chọn rong Đỏ làđối tượng nghiên cứu với đề tài:“Nghiên cứu sàng lọc, phân lập nhậndạngc c h o t c h ấ t a x i t b é o , a x i t a r ac h i d o n i c v p r o s t a g l a n d i n t r o n g Đỏbiển” Mụctiêucủaluậnán Mục tiêu rộng luận án điều tra, khai thác tài nguyên lipit cácloàirong đỏ biển đỏ củaViệtNam.Các mục tiêucụ thể bao gồm: Sàng lọc hóa học, xây dựng ngân hàng liệu hàm lượng lipit,thành phần axit béo prostaglandin mẫu rong đỏ biển đại diệncho loài, địa phương, điều kiện sinh trưởng, nuôi trồng thờikỳt h u h o c h k h c n h a u X c đ ị n h c c y ế u t ố ả n h h n g đ ế n s ự t í c h l ũ y lipitvàcácthànhphầnnêutrên - Tìm kiếm lồi rong Đỏ biển Việt Nam có tiềm thu nhậncácthànhphầnlipitcógiátrị,đặcbiệtlàcácaxitbéoC20đanốiđơivàcácprostaglandin - Thử nghiệm ni trồng số lồi rong đỏ chọn lọc, có:một lồi rong Đỏ có giá trị di thực từ LB Nga; loài rong Đỏ ViệtNam Xác định động thái hình thành, tích luỹ axit béo PG trongqtrìnhni trồng - Xây dựng phương pháp phân lập hoạt chất AA, PG từ lồirongĐỏbiển Nộidungnghiêncứucủaluậnán - Phântích hàmlượng lipitvà thành phần axitbéo của68 mẫu rong đỏ ViệtNamvà01mẫurongđỏLBNga - Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến hình thành tích luỹ lipitvàcácaxit béocủarongĐỏ - Sử dụng phương pháp phân tích thành phần PCA phươngpháp phân tích chùm để xử lý tập liệu thành phần axit béo cácmẫu rong đỏ, tìm mối quan hệ mẫu với với thànhphầnaxit béo - Sàng lọc hoạt chất prostaglandin axit arachidonic cácmẫurongĐỏbiểnthuthậpđược - Khảo sát số điều kiện sinh trưởng phát triển loài rong câuGracilaria vermiculophyllathu từ vùng biển Viễn Đông - Liên bang Ngatrong điều kiện PTN để theo dõi biến động hàm lượng axit béo vàprostaglandintrongqtrìnhni trồng - Phân lập, nhận dạng chứng minh cấu trúc PGE 2, PGE3và axitarachidonic từ loài rong Đỏ có tiềm thu biển Việt Nam biển ViễnĐơng–LiênBangNga Nhữngđónggópmớicủaluậnán Tập liệu hàm lượng lipit, thành phần axit béo prostaglandincủa 69 mẫu đại diện cho 25 loài thuộc họ rong đỏ biển ViệtNam thu địa phương, điều kiện sinh trưởng, nuôi trồng vàthời kỳ thu hoạch khác với 01 mẫu rong đỏ Liên bangNga; Kết xác định đánh giá nhóm axit béo có giá trị caothuộc dãy omega-3, omega-6, axit béo khơng no thiết yếuPUFA HUFA, lần xác định axit C22:6n-3(DHA) có trong5mẫurongđỏ Kết sử dụng phương pháp phân tích PCA phân tích chùm xửlý tập số liệu 12 thành phần axit béo yếu 69 mẫu rong đỏthuđượcchophépphânbiệtkhárõràngcácmẫuthuộc3họGracilariacea e, Hypneaeceae Ceraminaceae mối liên hệ củachúngvới Phương pháp xác định định tính định lượng PGE 2từ lồi rongĐỏbiển.Từđó sàng lọc tìmPGE 2trong 69 mẫu nghiên cứu vàxác định loài rong Câu có hàm lượng PGE 2cao có khảnăngkhai tháchoạt chất Kết khảo sát biến động tích luỹ hàm lượng axit béo vàprostaglandincủalồirongGracilariavermiculophyllaLB Ngatrongq trìnhnitrongphịng thínghiệm ViệtNam Phân lập, nhận dạng chứng minh cấu trúc hoạt chấtPGE2,PGE3vàAAtừnguyên liệu rongĐỏ biển Ýnghĩakhoahọcvàthựctiễncủaluậnán - Luậná n đ ã b ổ s u n g c h o k h o d ữ l i ệ u đ i ề u t r a c b ả n t i n g u y ê n HCTNbiểncủaViệtNamcácsốliệuvềhàmlượnglipit,thànhphầncácaxit béo hàm lượng prostaglandin 70 mẫu đại diện cho 25 lồi thuộc9họrongĐỏbiểncủaViệtNam, cósosánhvới1mẫurongbiểncógiátrịkinhtếcủaLBNga - phương pháp phân lập, nhận dạng PGE2, PGE3 axit arachidonictrong rong đỏ biển với kết nghiên cứu động thái tích luỹ hoạtchấtn y l c s k h o a h ọ c c h o v i ệ c s n g l ọ c v đ ị n h h n g k h a i t h c nguồnhoạtchất từcác nguồn rongbiển ViệtNam Bốcụccủaluậnán Luận án gồm 133 trang, có 37 hình, 15 bảng, biểu đồ Bốcục luận án: Mở đầu (3 trang); Chương 1: Tổng quan (36 trang);Chương 2: Đối tượng phương pháp nghiên cứu (13 trang), Chương 3:Thực nghiệm(8trang); Chương4: Kết thảo luận (60 trang); Kếtluậnvàkiếnnghị(3trang);Tàiliệuthamkhảo(9trang);Ngồiracịncó5 1trangphụlụcvớicáchìnhphổ,kếtquảphântíchTLC,GCvàGC-MS,HPLC, NMR II NỘIDUNGCỦALUẬNÁN MỞĐẦU Phần mở đầu đề cập đến ý nghĩa khoa học, tính thực tiễn, đối tượngvànhiệmvụnghiêncứucủaluậnán CHƯƠNG1.TỔNGQUAN Trong phần tổng quan, luận án giới thiệu chung lớp chất lipit, cácaxit béo (đặc biệt axit béo có hoạt tính sinh học axit arachidonic)và prostaglandin phương pháp nhận dạng, phân lập lớp chất lipit,axit béovàcáchợpchất AA, PG Luậná n đ ã t ổ n g h ợ p v đ n h g i t i ề m n ă n g n g u y ê n l iệ u r o n g b i ể n Việt Nam từ số cơng trình nghiên cứu rong biển, tập trungvàođối tượngrongĐỏbiển Việc đánh giá tổng quan tài liệu cho thấy, nguồn hoạt chất axit béo,đặc biệt eicosanoit prostaglandin có hoạt tính mạnh nồng độthấpvàđãc ón hi ề uứ n gd ụn glàm t h u ố c Việc tìm ki ế m n g u n ho tchấ t từ nguồn nguyên liệu có khả tái tạo cao rong biển có ý nghĩakhoahọcvàthựctiễn.ĐâycũnglàvấnđềmớitrênthếgiớivàViệtNam ỞViệt Nam, nghiên cứu đóng góp thêm số liệu điều tra cơbản lớp chất lipit hoạt chất sinh học từ lớp chất đối tượngrong Đỏ biển Nghiên cứu có giá trị thực tiễn cao mở triển vọngnuôi trồng, khai thác phát triển nguồn nguồn lợi rong biển phục vụ pháttriểnkinhtếvùngvenbiển CHƯƠNG2.ĐỐITƯỢNGVÀPHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU 2.1 Đốitượngnghiêncứu Đối tượng nghiên cứu 69 mẫu họ thuộc ngành rong đỏRhodophyta họ: Gracilariaceae (47 mẫu loài), Hypneaceae(10mẫucủa7loài), Ceramiaceae(4mẫucủa 3loài), Bangiac eae(2mẫu loài), Hylamaniaceae (2 mẫu loài), Bonnemaisioniaceae (1mẫu),Phyllophoraceae(1mẫu),Rhodymeniaceae(1mẫu),Halymeniaceae(1 mẫu) Vị trí thu mẫu: 68 mẫu thu biển Việt Nam từ Quảng Ninh đến NinhThuận;01 mẫu thu tạivùngbiễn Viễn Đông – Liên bangNga 2.2 Phươngphápnghiêncứu 2.2.1 Phươngphápthuvàbảoquảnmẫu Việc thu mẫu vùng triều dựa vào quy phạm tạm thời điều tra tổnghợp biển (phần rong biển) Uỷ ban KHKT Nhà nước ban hành năm1981.KhảosátvùngdướitriềudựavàotàiliệuhướngdẫncủaWilkinso n&Baker 1997bằngthiết bị lặn SCUBA Mẫu rong biển sau thu (khoảng kg tươi) rửa bằngnước mặn sau rửa nước bảo quản nhiệt độ4OC,sauđóchiađơivàbảoquảnbằngtủlạnhsâuở-20OCvà-47OC 2.2.2 Phươngphápphânlập,táchchiếtlipit,axitbéo,AA,PG 2.2.2.1 Phươngphápchiếtlipittổng Chiết lipit tổng phương pháp đặc hiệu Bligh&Dyer, 1959, sửdụnghệdungmôiCHCl 3:CH 3OHvớitỉlệ1/2(v/v) 2.2.2.2 Phươngpháp phân lập cácaxitbéo,AA,PG Để phân lập axit béo, axit arachidonic, prostaglandin từ rong đỏsửd ụ n g c c p h n g p h p s ắ c k í l p m ỏ n g ( T L C ) , s ắ c k í l p m ỏ n g đ i ề u chế,sắckícộtápxuấtthường(CC),sắckílỏnghiệunăngcao(HPLC) 2.2.3 Phươngp h p x c đ ị n h t h n h p h ầ n , h m l ợ n g v c ấ u t r ú c c c axitbéo,AA,PG 2.2.3.1 Cácphươngphápxácđịnhthànhphần,hàmlượngcáchợpchất Thànhphầnvàhàmlượngaxit béoxácđịnhtheophươngphápISO/FDIS659:1998,sửdụngGC-FIDvàGC-MS Xácđịnhhàmlượngprostaglandin(dạngđãđượcmethylvàsilylhoá)bằngGCMS 2.2.3.2 Cácphươngpháp nghiêncứu cấutrúccáchợp chất Sử dụng phương pháp phổ khối lượng ion hoá phun mù điện tử ESIMS, phổ khối bắn phá điện tử EI-MS, phổ khối phân giải cao LCMS-ITTOF, phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều 1H-NMR,13CNMR, DEPT phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân hai chiều 1H1 HCOSY, HSQC, HMBC, NOESY 2.2.4 Phươngphápphântíchcấutửchính Phương pháp phân tích cấu tử (PCA, Principle ComponentAnalysis) phân tích chùm (cluster analysis) sử dụng để xử lý cácsố liệu đa biến thành phần axit béo mẫu rong đỏ nhằm tìm racácm ố i t n g q u a n c ủ a c h ú n g v i n h a u P h ầ n m ề m S t a t i s t i c a - P C A đượcsửdụngđểthựchiệnphépphântíchcấutửchínhvàphầnmềmSurfer32đượcsửdụngđểthựchiện phép phân tích chùm Các số liệu xử lýtrước khiphântích bằngphần mềmMicrosofExcel CHƯƠNG3.THỰCNGHIỆM Cácmẫuđượctiếnhànhnghiêncứutheosơđồchungnhưsau: 3.1 Chiếttáchvàxácđịnhhàmlượnglipittổng Cân 100 gam mẫu rong biển tươi, nghiền nhỏ máy xay, chiếtbằng hệ dung môi CHCl 3:CH3OH tỉ lệ 1:2 (100ml CHCl 3: 200ml CH3OH),siêu âm Bổ sung 100ml CHCl 3, thêm 100ml nước cất, lắc đều,đợi phân lớp lấy phần dung dịch phía dưới, rửa lại nước cất thêm 2lần sau làm khan Na 2SO4 Cơ cất loại dung môi thu lipit tổng(phươngpháp chiếtđược lặp lại3 lần lấy giá trịtrung bình) 3.2 Xácđịnhthànhphầnvàhàmlượngcácaxítbéo Lấy10mglipittổngđượchịatanvới1mln-hexantronglọnhỏnútkín,bổsung 25ml dung dịch CH3ONa 30% lắc kĩ phút Thêm vào 20mgNa2SO4loạisạch,lắckĩvàđemlytâmởchếđộ5000vịng/phúttrong1phút.Dịchtron g,sạchởphatrênđượctáchriêng,kiểmtratrênsắckíbảnmỏng(TLC) TiếnhànhphântíchtrênmáysắckíkhíGC,nhậndạngaxitbéobằngphầnmềmchuy êndụng,tínhtốnchuyểnđổiquagiátrịthờigianlưutươngđươngECL(Equivalent Chain Length) có sử dụng hệ chấtchuẩn axit béo C16:0 C18:0.Kếtquảđượctínhtheocơngthức: 2(lgRTx–logT16:0) lgRT18:0–lgRT16:0 3.3 Sànglọcđịnhtính,địnhlượngprostaglandin 3.3.1 Phântíchđịnhtínhprostaglandin Lấy 25g rong tươi, nghiền nitơ lỏng, bổ sung 50ml nước cất,khuấy máy khuấy từ thời gian 60 phút nhiệt độ 5-6 0C Nhỏ từtừaxitHClđặc vàkiểm tra chođếnkhipH =2-3,khuấy tiếp60phút Chiết etyl axetat 50ml (2 lần), để phân lớp thu phần dịch phíatrên Cơ cất chân khơng nhiệt độ < 30 0C thu cặn chiết etyl axetat Kiểmtra mỏng silicagel 60 GF 254với hệ dung môi dioxan:benzen:axitaxetic (30:50:2), thuốc thử dung dịch H 2SO4/MeOH 5%, phát địnhtính PGE2có màu vàng nhạt, sử dụng chất chuẩn PGE 2có độ tinh khiết93%cungcấpbởi hãngsigma 3.3.2 PhântíchđịnhlượngPGE2trongcácmẫurongĐỏ Dịch chiết etyl axetat metyl silyl hoá xác định hàm lượngPGE2bằng GC-MS Nhận dạng prostaglandin phần mềm chuyên dụng,tínhtốnchuyểnđổiquagiátrịthờigianlưutươngđươngECL,sửdụnghệchất ECL=±16 chuẩn PGB2vàPGE2 Tính tốn hàm lượng PGE 2có g rong tươi(µg/ grongtươi) 3.3.3 Khảo sát biến động tích luỹ prostaglandin axit béo trongqtrìnhsinhtrưởngvàpháttriểncủalồirongcâuGracilariavermicul ophylla Nga ni PTNởViệtNam Mơ tả chi tiết cách bố trí thí nghiệm theo dõi sinh trưởng pháttriển lồi rongG vermiculophyllani phịng thí nghiệm Thumẫuvà phân tích đánh giábiến động hàmlượng PG,cácaxitbéo 3.4 PhânlậpprsotaglandintừrongĐỏ 3.4.1 PhânlậpPGE2từlồirongcâuGracilariavermiculophylla SơđồphânlậpPGE2gồm cácbước:Xửlímẫu;Chiếtdịchtổngbằngetylaxetat;Phân lập vàtinh chế PGE2bằng HPLC điều chế  CácdữliệuphổcủaPGE2phânlậpđược: Hợpchấtphânlậpđượcdạngbột,màuvàng.Điểmnóngchảy65,5– 660C.Rf=0,5(TLC,silica-gel,C6H6:EtOAc1:1,màuvàng,H2SO410%/MeOH) PhổkhốiESI-MS:m/z=375[M+Na]+ Phổ1H-NMR(500MHz,CDCl3&CD3OD),ppm:5,62(1H,m,H14);5.58(1H,m,H-13);5,43(1H,m,H-5);5,34(1H,m,H-6);4,06(2H, m,H-11,H-15);2,70(1H,ddd,J=1.5,7.5,18.0Hz,H-10a);2,42(1H,m, H-12); 2,35(2H, m,H-7); 2,29(2H, t,J=7,5Hz,H-2); 2,18(1H, m,H-8); 2,17(1H,m,H-10b);2,09(2H,m,H-4);1,67(2H,qd,J=2,0;7,5Hz,H3);1,58(1H,m,H-16a);1,48(1H,m,H-16b);1,30-1,40(6H,m,H-17,H18,H-19)và0,91(3H,t,J=7.0Hz,H-20) Phổ13C-NMR(125MHz,CDCl3&CD3OD),ppm:2 , ( C ) ; 177,0( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C 6);73,4(C15);7 , ( C- 1 ) ; 5, ( C - ) ; , ( C- ) ; , ( C - ) ; 7, ( C 16);34,1 (C-2);3 , ( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C - ) ; , ( C ) ; , (C-19)và14,3(C-20) 3.4.2 Nhậnb i ế t P G E 3từl o i r o n g c â u G r a c i l a r i a v e r m i c u l o p h y l l a VềchỉsốPUFA/ SFA:Giátrịcủachỉ sốnàythấphơnnhiềus ovớihaihọro n g Câ u v ron gĐ n g , tru ng bìn h l 0, 4,d ao độ ng từ 0, đ ế n0,9 Về số n3/n6:Giá trị trung bình 0,54, dao động từ đến 2,44.Trong12mẫucó50%sốmẫuđạtmức>0,1là:N4(2,44),CC1(1,67),N9 (0,97),N7(0,6),T12(0,35)vàN1(0,24) 4.1.2.4 Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến tích luỹ lipit hìnhthànhcác axit béocủarongĐỏ Chúng tơi tìm hiểu sâu biến động tích luỹ lipit axit béocũng hình thành chúng mẫu đặc trưng cho họ, chi vàcác loàirongĐỏ thuở số vùngsinh thái biển  Đúckếtcácyếutốảnhhưởngtrêncơsởsốliệucủacácmẫurong ĐỏthutạiđảoCồnCỏ-QuảngTrị Cồn Cỏ - Quảng Trị đặc trưng vùng biển miền Trung có khí hậuchủ yếu nắng, nóng năm Chúng tơi nghiên cứu 11 mẫu 11loài thuộc họ rong Đỏ (bảng 4.3) đặc trưng cho họ rong Đỏ khácnhautrongmột vùngsinhthái Kết nghiên cứu cho thấy việc sinh tổng hợp axit béo khơng chỉrấtkhácbiệtgiữacácmẫukháchọmàcịnởnhữngcặpmẫucủacáclồicó quanhệphátsinhsinhvậtgầngũi(cùngchi) nhưN2/N6,N4/N7vàN5/CC2 Minh chứng qua hàm lượng AA (C20:4n-6) EPA (C20:5n-3).Chẳng hạn mẫu N6 hàm lượng AA cao (22,35%) ởmẫu N2 lại vằng mặt hoạt chất Tương tự mẫu N7 khôngphát AA EPA hàm lượng hoạt chất N4 lầnlượtlà1,7và6,24%tổngaxit béo  Đúckếtcácyếutốảnhhưởngtrêncơsởsốliệucủacácmẫurong ĐỏthutạikhuvựcPhùLong-HảiPhòng Khu vực Phù Long – Hải Phịng khu vực điển hình cho vùng biểnĐơng Bắc, nơi có mùa đơng lạnh năm, tập trung nhiều lồi thuộcchirongCâu Chúng tơi thuth ậ p đư ợc 4l oài thuộc c hirongCâ utại k huvực Kết nghiên cứu cho thấy hàm lượng lipit mẫu mứctrung bình thấp Về thành phần axit béo, chúng có đặc trưng tương tựnhư8họrongĐỏkhácthutại CồnCỏ-QuảngTrịlà(1)hàmlượngaxit béo no cao, (2) tỷ lệ hàm lượng axit béo no thấp hàm lượng axitbéo khơng no PUFA HUFA cao ngược lại, (3) hàm lượng axit béo họomega-6 cao omega-3 Các tính chất phù hợp với đặc trưngchung họ thuộc ngành rong Đỏcông bố trước Kếtquảnghiêncứucũngchothấy,trongmộtchirong câuGracilariac ũ n g c ó s ự b i ế n d ị v ề t h n h p h ầ n c c a x i t b é o V í d ụ t h ấ y r õ nhấtởmẫuA22(loàiGracilaria gigas)xuất axit mạch dài C21:0,C22:2n6,C 2 : n - , C 2 : n - ( D H A ) t r o n g k h i đ ó k h n g p h t h i ệ n loài cùngthuộcchi rongCâu  Đúckếtcácyếutốảnhhưởngtrêncơsởsốliệucủacácmẫurong Đỏthutạicáctỉnhkhácnhaukhácnhau Nghiên cứu tiến hành mẫu loài rong Câu chỉvàng thu tỉnh, thành khác (từ Quảng Ninh đến Bình Thuận) 1mẫu xuất xứ từ mẫu T28 nuôi PTN Viện (nhiệt độ phịngni 20-220C) để xem xét hình thành tích luỹ axit béo 1loàitrongcácđiềukiệnsinh thái khácnhau Kết nghiên cứu cho thấy, mẫu rong Câu vàng thutrảidàitrên8tỉnhkhácnhaunhưngsựtíchluỹlipitvàaxitbéonokhơngcó nhiềubiếnđộng.ĐiềuđángchúýnhấtlàaxitC20:4n-6cómặtở8/8mẫu, song hàm lượng khác biệt Điều cho thấy hìnhthànhvàtíchluỹaxitbéonhómaxitbéokhơngno tuyđượcquyếtđịnhvàobản chất sinh học lồi song chịu tác động khơng nhỏ điều kiệntựnhiên Khi so sánh mẫu rong Câu vàng (Gracilaria tenuistipitata)thutự nhiên (mẫu T28) mẫu nuôi PTN, hàm lượng lipit tổng khơngthay đổiđángkểtuynhiênthànhphầncácaxitbéothìbiếnđộngrấtđángchú ý Mẫu rong nuôi phát sinh thêm axit C15:1n-7, C15:1n-5, C16:1n-9,C17:0vàC20:3n-6.HàmlượngaxitC16:0đặc trưngchohọaxitbéonocủa mẫu rong thu tự nhiên giảm 23,2% so với tổng axit béo đóaxit C20:4n-6 tăng 10,03% Như nhận định điều kiện nhiệt độtrong trình sinh trưởng rong ảnh hưởng lớn đến thành phần hàmlượngaxitbéotheohướnggiảmaxitbéonovàtăngcácaxitbéokhôngno 4.1.3 Sử dụng phương pháp PCA phương pháp phân tích chùm để xửlýtậpdữliệuvềthànhphầnaxitbéo củacác mẫu rong đỏ Từ6 m ẫ u r o n g Đ ỏ c h ú n g t ô i đ ã x c đ ị n h đ ợ c a x i t b é o c h í n h yế ul C : , C : , C : , C : n - , C : , C : n 9,C18:1n-7, C18:2n-6, C20:3n-6, C20:4n-6, C20:5n-3 C22:0 Các mẫu rong Đỏ phânbố giản đồ chiều hình 4.1 thể rõ rệt họGracilariaceae,Hypneaceae, Ceramiaceae Hình4.1.KếtquảphântíchPCAcủacáclồirongĐỏ F2 2.50 Ban2 Hyl1 2.00 Rho 1.50 1.00 0.50 Gra35 Gra31 Gra23 Gra38 Gra1G9r GG Gra12GraG2r7a Gra26 1281 a28 2r4a GGrara3306 Gra37 Gra42 Gra32 Gra33 Gra10 Gra29 Gra6 GrGar1a325 Gra Gra40 Gra16 Gra1 Gra46 0.00 -0.50 Gra39 GrBa1 a1n1 Gra45 Gra22 Cer2 Hyp9 Hyp2 Bon Hyp1 Hyp6 -2.00 GraNga Cer1 Cer4 Hyp4 -1.50 Gra20 Cer3 G Gra14 Gra43 Gra7ra17 Gra34 GrGa2ra9Hy Gra44 p10Gra5 Gra Gra8 Hyp5 -1.00 Hal Hyp8 Hyp3 Hyp7 Hyl2 Phy -2.50 Gra15 -1.50- 0 - 0.00 4.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 F1 Sử dụng phần mềm SURFER 32, biểu diễn biểu đồ phânloại hình 69 mẫu rong đỏ theo liệu thành phần hàmlượng cácaxitbéochính yếunhư hình4.2dướiđây Hình4.2.Sơđồcâyphânloại69lồirongđỏdựavàothànhphầnvà hàmlượngcác axit béo chínhyếu 20 GraNga Hyl2 Gra15 Ban2 Ban1 Gra11 Phy Hyl1 Hal Rho Hyp2 Gra8 Hyp9 Hyp8 Hyp10 Gra34 Hyp3 Gra44 Hyp6 Hyp4 Hyp1 Hyp7 Hyp5 Bon Gra23 Gra25 Gra9 Gra7 Gra4 Gra3 Gra38 Gra41 Gra33 Gra40 Gra29 Gra1 Gra10 Gra6 Gra5 Gra2 Gra45 Gra46 Gra42 Gra39 Gra37 Gra21 Gra26 Gra31 Gra32 Gra36 Gra30 Gra28 Gra24 Gra27 Gra19 Gra35 Gra18 Gra43 Gra20 Gra17 Gra12 Gra13 Gra16 Gra14 Gra22 Cer2 Cer1 Cer3 Cer4 LinkageDistance Tree Diagram for Variables Single Linkage Euclidean distances 25 15 10 4.2 Kếtquảsànglọcprostaglandinvàaxitarachidonictừcáclồirong đỏthuthậpđược 4.2.1 KếtquảkhảosátđịnhtínhPGE2 Chúngtơiđãtiến hành khảosátđịnh tínhPGE2của cácmẫu rongĐỏ bằngphươngphápsắckýbảnmỏng(TLC) Hình4.3.SắckílớpmỏngđịnhtínhPGE2 (a).CácmẫucóvếtPGE2,(b).CácmẫukhơngcóvếtPGE2 Kết phân tích cho thấy có tín hiệu xuất PGE 2ở 39mẫu, tín hiệu rõ ràng mẫu rong Nga (kí hiệu TAX hay M0)và 38 mẫu rong Đỏ Việt Nam Tuy nhiên, xuất tín hiệu rấtkhác nhau, đa phần mẫu xuất tín hiệu dạng vết, có mẫuxuất tín hiệu PGE2rõ ràng cácmẫu T5,A3,A7,A16 4.2.2 KếtquảkhảosátđịnhlượngPGE2 Kết phân tích định lượng PGE 2đã xác định 15 mẫu (T5,T22,T , A , A , A , A , A7 , A1 6, N , N , N , CC2 , T2 v TA X ) c ó hàm lượng PGE2 từ 0,3 – 21,52µg/g rong tươi Trong hàm lượng caonhấtl m ẫ u r o n g C â u N g a T A X ( l o i G r a c i l a r i a v e r m i c u l o p h y l l a ),t i ế p theolà2mẫurongCâuViệtNamlàmẫuA16(loàiGracilaria gigas), mẫuT5 (loàiGracilaria tenuistipitata)với hàm lượng 3,6 3,4 µg/ grongtươi So sánh tương quan hàm lượng PGE 2và AA 39 mẫu rongĐỏ( b ả n g ) c h o t h ấ y , c c m ẫ u c ó h m l ợ n g A A c a o t h ì c ó k h ả n ă