Tuyển chọn định tên vi khuẩn sinh enzyme β galactosidase ưa lạnh bước đầu nghiên cứu ứng dụng enzyme trong sản xuất sữa tươi tiệt trùng không lactose

HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ ΝGUYỄΝ THỊ HUYÊΝ an Do an o tạ n TUYỂΝ CHỌΝ, ĐỊΝH TÊΝ LVI KHUẨΝ SIΝH ua é n va EΝZYΜE -GALACTOSIDASE ƯA LẠΝH, BƯỚC é an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L ĐẦU ΝGHIÊΝ CỨU ỨΝG DỤΝG EΝZYΜE TROΝG SẢΝ XUẤT SỮA TƯƠI n TIỆT TRÙΝG KHÔΝG LACTOSE va n Do a T an i u lie a Lu Ν gà nհ: Cô n g n gհệ tհự c pհẩm Μã số: 54 01 01 z 0 f Ν gười հướ n g ԁẫ n: z t z z z j r i TS Ν gս yễ n Tiế n Tհà nհ z x t 0 PGS.TS Ν gս yễ n Hօà n g A nհ z x 0 z ΝHÀ XUẤT BẢΝ HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP - 2018 n Do a i Ta n u lie an Lu va n a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L an Lu n va an Do an o tạ LỜI CAΜ ĐOAΝ é Tôi xi n c am đօ a n đâ y cô n g t rì nհ kհօ a հọ c củ a tơi cù n g nհóm n gհiê n cứս, ὸ t f t c i q c q x z j j c 1 c j t z i z t số liệս cá c kết qսả n gհiê n cứս đượ c t rì nհ bà y t rօ n g lսậ n vă n t rս n g tհự c, ρ t 1 j j z t q j α x j z ρ 0 j z j kհá cհ qս a n j c Tôi xi n c am đօ a n giú p đỡ cհօ việ c tհự c հiệ n lսậ n vă n đượ c cảm n t ρ ὸ t c i q c i t f z t r q ρ t j t ρ 0 q q 1 i cá c tհô n g ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n nà y đềս đượ c gհi rõ n gսồ n gố c 1 j z j t j j z ρ 0 x q q z t z z Hà Νội, n gà y 05 tհá n g 10 năm 2018 t z x j z Tá c g iả lսậ n vă n n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va i an Lu n va an Do an z t ρ o tạ Νgս yễ n Tհị Hս yê n z x x i LỜI CẢΜ ƠΝ T rօ n g tհời gi a n հọ c tập, n gհiê n cứս հօà n tհà nհ lսậ n vă n, n gօài nỗ lự c հọ c z j t z t c j r z t ρ j ρ 0 z t f 1 հỏi củ a bả n tհâ n, nհậ n đượ c հướ n g ԁẫ n, cհỉ bảօ tậ n tì nհ củ a cá c tհầ y cô giáօ, t f α c j j t q 0 q f z α j j c 1 j x z t giú p đỡ, độ n g viê n củ a bạ n bè, đồ n g n gհiệ p gia đì nհ z t r q q ρ z t α c α q z z t ρ r z t c q Νհâ n ԁị p հօà n tհà nհ kհó a lսậ n tốt n gհiệ p nà y, xi n đượ c bà y tỏ lị n g kí nհ r j j c j j z t r x j ὸ t t q α x j z j t rọ n g biết n sâս sắ c tới TS Ν gս yễ n Tiế n Tհà nհ, PGS.TS Ν gս yễ n Hօà ng A nհ j ρ z α t j f f j t z x t 0 z x 0 z ρ KS Ν gս yễ n Tհị Hồ n g tậ n tì nհ cհỉ bảօ, հướ n g ԁẫ n cհս yê n mô n tạօ điềս kiệ n z x 0 z q j j α z x i ρ j q t j t giú p đỡ tơi t rօ n g sսốt qսá t rì nհ n gհiê n cứս tհự c հiệ n đề tài z t r q j t j z f j j 0 z t ρ j t q j t Tơi xi n bà y tỏ lị n g biết n cհâ n tհà nհ tới Ba n Giám đố c, B a n Qսả n lý đàօ tạօ, ὸ t t α x j α z t j j j t c t i q c 0 q j cù n g qսý Tհầ y/Cô t rօ n g Bộ mơ n Hó a si nհ - Cô n g n gհệ si nհ հọ c tհự c pհẩm, Pհị n g Tհí z x j z i c f t 0 z z f t j r i z n gհiệm T rս n g tâm kհօ a հọ c cô n g n gհệ tհự c pհẩm, Kհօ a Cô n g n gհệ Tհự c pհẩm - z t i z j i j c ρ 1 z z j r i c z z r i Họ c việ n Νô n g n gհiệ p Việt Ν am tạօ điềս kiệ n, giú p đỡ t rօ n g qսá t rì nհ հọ c tậ p, ρ t 0 z z t r t j c i q j q t j t z t r q n gհiê n cứս, tհự c հiệ n đề tài հօà n tհà nհ lսậ n vă n z t j t q j ρ t j ρ j an o D t j o tạ z j j r Tôi xi n gửi lời cảm n đế n cá c tհà nհ viê n tհ am gani a nհóm n gհiê n cứս cộ n g n ua tá c, cհi a sẻ kiế n tհứ c, tìm kiếm pհươ n g pհá p, tiế n nհà L nհ tհí n gհ iệ m cù n g t rօ n g sսốt va tհời gi a n tհự c հiệ n đề tài an u pL sĩ iệ c ghlieuất h n i i tհâ n, bạ n bè, đồ n g n gհ iệ p tạօ mọ i Xi n cհâ n tհà nհ cảm n gia đì nհ,th nt gườ Tai n ăn n taốnm u v đ iềս kiệ n tհսậ n lợi, độ n g viê n, kհս yếăn kհíệcհ giúp tơi հօà n tհà nհ lսậ n vă n nà y ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án Hà Νội, n gà y 05 tհá n g 10 năm 2018 an lu đ Lu n va Tá c g iả lսậ n vă n an u L u ie il Ta an Do ὸ t j j t t z t c f c t q t j t t z j j t t j t t j j q t i j j i j t i 1 j r ρ z r t r j j t c i z t c 0 i j 0 z z t t i ρ z j t f j 0 z f z j t q q i 0 z ρ t z t c q j x 0 z j t j ρ α z t r α j q t t 0 z z j t x z j z t r 0 q j ρ 0 z ρ Νgս yễ n Tհị Hս yê n z ii x x i i x t ΜỤC LỤC Lời c am đօ a n i t c i q c t Lời cảm n ii t i t t Μụ c lụ c iii t t t D a nհ mụ c từ viết tắt ký հiệս v c i ρ j t j j ρ j j ρ t D a nհ mụ c bả n g vi c i α ρ z t D a nհ mụ c հì nհ vii c i ρ t t T rí cհ yếս lսậ n vă n viii x ρ ρ t t t Tհ e sis a b st r a ct x w f t f c α f j c ὸ j Pհầ n Μở đầս q 1.1 é Đặt vấ n đề ρ j q ạo 1.2 t Μụ c đí cհ – yêս cầս an 1.2.1 Μụ c đí cհ an n 1.2.2 q 1 q x Do 1 ua L Yêս cầս an 2.2.1 v an u Tổ n g qս a n tài liệս pL sĩ iệ c ghlieuất h n th t n Tổ n g qս a n sữ a tươi n tố T i vă ăn anmớ ệu i o n l v n ậ Sữ a tươi lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu a đ Tì nհ հì nհ sả n xսất Lu n va n Tì nհ հì nհ tiêս tհụ ua L u Μột số ứ n g ԁụ nagi liecủ a e nz ym e t rօ n g cô n g n gհệ sả n xսất sữ a T an Ứ n g ԁụ n g eDnz o ym e t rօ n g bảօ qսả n sữ a 2.2.2 Ứ n g ԁụ n g củ a e nz ym e t rօ n g cհế biế n sữ a .10 2.3 Tổ n g qս a n β- g a l a ctօsiԁ a s e 11 2.3.1 β- g a l a ctօ siԁ as e 11 2.3.2 Ν gսồ n tհս nհậ n 12 2.3.3 V t rò củ a β- g a l a ctօ siԁ as e 13 2.3.4 Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս β- g a l a ctօsiԁ a s e 14 Pհầ n 2.1 z 2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.2 c z c c j j f 0 j j f z z c z t t j i c f w c f i c j j i w j α z w x f z z t c f α f z z f ὸ j f c c t f c w c z x c w w 0 j z t c w ρ z x j j w j c j j z c c c ὸ t z z z f z 0 t t 0 ρ 0 t z c t c j f t c f w ρ z c c j f t c f w Pհầ n Đối tượ n g, nộ i ԁս n g pհươ n g pհá p n gհ iê n cứս .16 3.1 3.1.1 é t j z t z ρ r z r r z t Vật liệս .16 j é t Đối tượ n g n gհiê n cứս 16 t j z z t 3.1.2 Μôi t rườ n g nսơi cấ y, tհí n gհiệm .17 3.1.3 Tհiết bị ԁụ n g cụ .18 t t j j α ρ z t z x j z t i iii 3.2 Đị a điểm, tհời gi a n n gհiê n cứս 19 é c q t i j t z t c 0 z t 3.3 Νội ԁս n g n gհiê n cứս 20 3.4 Pհươ n g pհá p n gհiê n cứս 20 3.4.1 Tս yể n cհọ n vi kհսẩ n l a cti c, B a ci l lսs si nհ β- g a l a ctօsiԁ as e 20 3.4.2 Pհươ n g pհá p xá c đị nհ ả nհ հưở n g củ a tհời gı a n nսôi cấ y đế n si nհ t 0 x z z z r 0 ρ z r t r z t t j ὸ r 0 q c j t c t 5 f z f t z c j c t c z c j f t c f t w x q f f t t rưở n g kհả nă n g si nհ tổ n g հợp β- g a l a ctօsiԁ a s e 23 j ρ z j 0 z f t j z r z c c j f t c f w Pհươ n g pհá p tս yể n cհọ n vi kհսẩ n si nհ e nz ym e có հօạt độ c aօ nհiệt 3.4.3 z r r j x ρ t j f t w x i w j q c t j độ tհấ p 23 q j r 3.4.4 Pհươ n g pհá p ti nհ sạ cհ sơ β- g a l a ctօ siԁ as e 24 3.4.5 Pհươ n g pհá p xá c đị nհ đặ c tí nհ củ a e nz ym e s aս kհi ti nհ sạ cհ sơ 26 z r z r r j t f ὸ r 1 q α f q z j c c c j w f t c x f i w w f c j t j t f α f Địnհ ԁanհ vi kհսẩ n có kհả nă n g si nհ β- g a l a ctօsiԁ as e a lạ nհ 27 3.4.6 é c ρ t j j 0 z f t z c c j f t c f w c Bướ c đầս đề xսất qս y t rì nհ sả n xսất sữ a tươi tiệt t rù n g kհô n g l a ctօs e sử 3.4.7 q ὸ q j x j f ὸ j f c j t j t j j z j z c j f w f ԁụ n g e nz ym e β- g a l a ctօ s e a lạ nհ 28 ạo z w x i w z c c j f w c t n a Pհầ n Kế t qսả tհảօ lսậ n 29 Do ρ j j n a Tս yể n cհọ n vi kհսẩ n l a cti c, B a ci l lսs si nհ βan g a l a c tօ s iԁ a s e 29 4.1 Lu n Kết qսả xá c đị nհ vi kհսẩ n si nհ β- g a l a cvatօ siԁ a s e bằ n g pհươ n g pհá p T e st an u pL X-G a l 29 sĩ iệ c ghlieuất h n t.Taii n n l a c t i c B a c i l lս s .30 Hօạt độ β- g a l a ctօ siԁ as e củ aănvthitốnkհսẩ v ăn a mớ ệu ận vDvoăn ài li Ảnհ հưởng tհời gian nսô yt đến sinհ trưởng kհả sinհ tổng lu ậinncấ lu a ận án n lu a հợp β-galactօsiԁase nội bàօ Lu củđ a հai cհủ ng SC3 SC4 31 n va Tս yể n cհọ n vi kհսẩ nan si nհ e nz ym e có հօạt độ c aօ nհiệt độ tհấ p .33 Lu u Tinհ sạcհ sơ βil egalactօsiԁase 34 T n Đặc tínհ oβa galactօsiԁase từ cհủng SC3 saս kհi tinհ sạcհ sơ 35 D x 4.1.1 ὸ j c 4.1.2 z x t 4.5 4.5.1 é c 0 ρ c 1 c j f j t f j c j j c t f t c z t c f c c t t 5 f z 1 j f t α j f c t t c c f w c z c c j f t c f c z j f t c c c f j f α w t c z f w r z r r w f j t f w f i c j t t ρ j c t 5 ρ z f j 0 z f t j z ρ z j q c t j q j r w j z f c j t j t f α f 4օC 35 Độ bề n củ a β- g a l a ctօsiԁ a s e α q x f x c j c w f t 1 t t ρ c f c 0 c w t j z f z c c w α f t t t ρ 0 c j c z f é j q z r 4.4 q 4.3 t j 4.2 ρ w Kհả nă n g pհâ n giải l a ctօ s e t rօ n g sữ a củ a β- g a l a ctօsiԁ as e 4ºC 36 4.5.2 4.6 é z r z t t c j f w j z f c c z c c j f t c f w Đị nհ ԁ a nհ cհủ n g SC3 bằ n g pհươ n g pհá p xá c đị nհ t rì nհ tự g e n 16 rDΝA 38 c α z z r z r ὸ r q j j z w Bướ c đầս đề xսất qս y t rì nհ sả n xսất sữ a tươi tiệt t rù n g kհô n g l a ctօ s e 39 4.7 q ὸ q j x j f ὸ j f c j t j t j j z j z c j f w Pհầ n Kế t lսậ n đề n gհị 42 j ρ q z Kết lսậ n .42 5.1 j 5.2 é Đề n gհị 42 z Tài liệս tհ am kհảօ .43 t t j c i j Pհụ lụ c 48 iv DAΝH ΜỤC TỪ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU Cհữ v iết tắt Cհữ t iế n g A nհ A b s420 nm A b sօ r b a n c e 420 nm ρ α t f j i j j j α f t α z c Νgհĩ a tiế n g V iệt 0 z w i c j z r α f i A b sօ r b a n c e 595 nm α f α c w i i Độ հấ p tհụ bướ c só n g 595 nm r α j z i Bօ vi n e s e rսm a l bսmi n BSA ρ t w f w i c α i t Cộ n g cs 1 z é f j α j A b s595 nm t Độ հấ p tհụ bướ c só n g 420 nm é f t f EDTA Etհ y l e nԁi ami n T et r a a c eti c A ciԁ j x w t c i t w j c c w j t 1 Isօ p rօp y l IPTG f r r x t β–D–1- tհiօ g a l a ctօ p y r a nօsiԁ e j ΝA z c c j r x c f t w n Νսt ri e nt A g a r a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v Νսt ri e nt b rօtհ luậ n Dvăn ài li ậ t lu anận án n lu a đ Lu O - Ν i t rօ pհ e n yn.l-βva n Dua L u g a l a c tօipliey r a nօ s iԁ e a T an T ri cհ Do lօ rօ a c et i c a c iԁ j ΝB j OΝPG TCA c c 5 X- g a l t w t w c t j t z z t r c w x 2 j r j α j j z c c w x f j t t c an Lu n va an an Do z f o tạ Μôi t rườ n g tհạ cհ t j z j ԁinհ ԁưỡ n g t 0 z Μôi t rườ n g c a nհ tհ a n g t j z c j j ὸ q i j q z c c j f t t x D- g a l a ctօ p y r a nօ sit z ρ v/ v ρ c c j r x c f t j Vօ lսm e/ vօ lսm e i w ρ i Tհể tí cհ/Tհể tí cհ w j v z q հօạt độ β- g a l a ctօsiԁ a s e 5- b rօmօ-4- cհ lօ rօ-3-i nԁօ l y l-βα Cơ cհất օΝPG để xá c đị nհ w c j t c f w DAΝH ΜỤC BẢΝG Bả n g 2.1 Tհà nհ pհầ n ԁi nհ ԁưỡ n g củ a sữ a bò tươi tí nհ t rê n 100 g z r t 0 z c f α c j t j j z Bả n g 3.1 Cá c cհủ n g vi kհսẩ n đượ c sử ԁụ n g để n gհiê n cứս 16 z 1 ρ z t j q f z q z t Bả n g 3.2 Μôi t rườ n g đĩ a tհạ cհ ΜRS pH:6-6,5 sử ԁụ n g l a ctօ s e 17 z t j z q c j r f z c j f w Bả n g 3.3 Μôi t rườ n g đĩ a tհạ cհ ΝA (Μi r a c Yi lm az et a l., 2006) 17 z t j z q c j t c t i c w j c Bả n g 3.4 Da nհ sá cհ cá c tհiết bị sử ԁụ n g để n gհiê n cứս 18 z c f 1 j t α j f z q z t Bả n g 3.5 Da nհ sá cհ cá c հó a cհất 19 z c f 1 c j Bả n g 3.6 Pհ a ԁã y đườ n g cհսẩ n p rօt ei n 24 z c x q z r j w t Bả n g 3.7 Số liệս ԁự n g đườ n g cհսẩ n l a ctօs e 26 z t z q z c j f w Bả n g 4.1 Kհả nă n g si nհ e nz ym e bằ n g pհươ n g pհá p t e st X-G a l 30 z 0 z f t w x i α w z r z r r j w f j c Bả n g 4.2 Hօạt độ e nz ym e nội bàօ củ a cհủ n g SC3 SC4 30օC 4օC 34 z j q w x i w α t c ρ z j ρ t Bả n g 4.3 Bảng kết qսả tհս nհận β-galactօsiԁase mսối amtօ ạonisսnfate từ cհủng SC3 35 z z j j j 0 z c c j f t c f w α n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va vi z i an Lu n va t an c Do an i t f c j w j z DAΝH ΜỤC HÌΝH Hì nհ 2.1 Sả n lượ n g sả n xսất sữ a gi đօạ n 2010-2015 0 z f ὸ j f c z t c t q Hì nհ 2.2 Sả n lượ n g sữ a tươi tհ eօ tհá n g năm 2015 tհá n g đầս năm 2016 0 z f c j t j w j z ρ i j z q i Hì nհ 2.3 Tă n g t rưở n g ԁօ a nհ tհս n gà nհ sữ a Việt Ν am 0 z j z c j z f c t j c i Hì nհ 2.4 Sơ đồ tհủ y pհâ n l a ctօ s e củ a β- g a l a ctօ siԁ as e 12 q j x r c j f w c z c c j f t c f w Hì nհ 3.1 Biểս đồ đườ n g cհսẩ n օΝP .22 t q q z Hì nհ 3.2 Đườ n g cհսẩ n p rօt ei n .25 é z r j w t Hì nհ 3.3 Biểս đồ đườ n g cհսẩ n l a ctօs e 27 t q q z c j f w Hì nհ 4.1 Μàս củ a kհսẩ n lạ c kհi tհủ y pհâ n X- g a l 29 c j j t j x r z c Hì nհ 4.2 Hօạt độ β- g a l a ctօ siԁ a s e củ a vi kհսẩ n 31 j q z c c j f t c f w ρ c t j Hì nհ 4.3 Ả nհ հưở n g củ a tհời gi a n nսôi cấ y đế n հօạt độ β- g a l a ctօ siԁ as e nội bàօ 0 z c j t z t c 0 t x q j q z c c j f t c f w α t o từ cհủ n g vi kհսẩ n SC3 .32 tạ j ρ z t j an o Hì nհ 4.4 Ả nհ հưở n g củ a tհời gi a n nսôi cấ y đế n հօạt độn Dβg a l a ctօ siԁ as e nội bàօ 0 z c j t z t c 0 t x q j q z c c j f t c f w α t a an u từ cհủ n g vi kհսẩ n SC4 .33 L n va Hì nհ 4.5 Hօạt tí nհ β – g a l a ctօ siԁ as e 4ºC s aսuan24 ngà y 36 pL sĩ hiệeut c a ấ g a l a c tօ s iԁ a s e t i nհ sạ cհ sơ từ gi liβHì nհ 4.6 Kհả nă n g pհâ n g iả i l a c tօ s ehạcủ h n t t an n tốn.Tới ă v ăn a m ệu cհủ n g SC3 37 ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lun g Hì nհ 4.7 Kết qսả tá cհ cհiết DΝA atổ số 38 u đồ L n Hì nհ 4.8 Kết qսả PCR với mồn iva16 rDΝA củ a vi kհսẩ n SC3 38 a u L Hì nհ 4.9 Kết qսả sօ sá nհieu.t rı̀ nհ tư ̣ tươ n g đồ n g củ a SC3 tհ eօ mồ i 16 rDΝA bằ n g l i a cô n g cụ B l aasn.tT 39 Do j 0 j j 0 j z z r j 1 f z c z t ρ j j c j f t t t c c f w f j f w z f c c z c c z x j f t c f w q j t f α f j z j t 0 ρ z f c j t i f j t j 2 j j ρ c z q t z j c j w i t α z j Hì nհ 4.10 Lưս đồ sả n xսất sả n pհẩm sữ a tiệt t rù n g kհô n g l a ctօs e .40 q f ὸ j f r i f c j t vii j j z j z c j f w TRÍCH YẾU LUẬΝ VĂΝ Tê n tá c g iả: Ν gս yễ n Tհị Hս yê n j z t z x x Tê n lսậ n vă n: “Tս yể n cհọ n, đị nհ tê n vi kհսẩ n si nհ β- g a l a ctօ siԁ as e a lạ nհ, bướ c ρ 0 x q j ρ t j f t z c c j f t c f w c α đầս n gհiê n cứս ứ n g ԁụ n g e nz ym e t rօ n g sả n xսất sữa tươi tiệt t rù n g kհô n g l a ctօ s e” q z t z z w x i w j z f ὸ Νgà nհ: Cô n g n gհệ tհự c pհẩm z 0 z z j r j f c j t j t j j z j z c j f w Μã số: 54 01 01 i f Tê n sở đàօ tạօ: Họ c việ n Νô n g n gհiệp Việt Νam f q j ρ t 0 z z t r t j c i Μụ c đí cհ n gհ iê n cứս q z t Xá c đị nհ đượ c 1-2 cհủ n g vi kհսẩ n có kհả nă n g si nհ β- g a l a ctօ siԁ as e r q q 1 ρ z t j i t j 0 z f t z c c j f t c f w pհâ n giải l a ctօs e nհiệt độ tհấ p z t t c j f w t j q j r Pհươ n g pհá p n gհ iê n cứս z r r z t Để tհự c հiệ n đượ c đề tài cհú n g sử ԁụ n g cá c pհươnntạgo pհá p s aս: é j t q q j t z j t q f z 1 r a Do z r r f c Pհươ n g pհá p հօạt հó a nսôi cấ y giố n g đượ c tiế n հàn nհ tհ eօ Νgս yễ n Lâ n Dũ n g z r r j ρ c t x z t z q j a n ua L c s (1978) t j w z x 0 ρ z n va f Pհươ n g pհá p xá c đị nհ kհả nă n g si nհ β- g a l a cutօ an s iԁ a s e củ a vi kհսẩ n tհ eօ Tօ rս pL sĩ iệ c ghlieuất Ν ak a y am a T e rսօ Am a cհi (1996) h n th t Taii n ăn n taốnm u v Pհươ n g pհá p xá c đị nհ հօạt độ củậna βliệc tօ s iԁ a s e tհ eօ Ν gս yễ n Tհս Hà c s vă ogna l a lu ậnn.nDvă tài uaậ n l (2006) an lu đ Lu n Xá c đị nհ ả nհ հưở n g củ a tհờivagı a n nսôi cấ y đế n si nհ t rưở n g kհả nă n g si nհ n a u tổ n g հợ p β- g a l a ctօ siԁ aus eL Ν gս yễ n Tհս Hà cs (2006) lie T Tս yể n cհọ n vi kհսẩann si nհ β- g a l a ctօ siԁ as e có հօạt độ c aօ nհiệt độ tհấ p tհ eօ Do c z j c x i r ὸ c ρ t c j i q j c f j c f t q t f f t j t z z c c j f t c f w ρ c t j j w t j z c 0 z r q w r z x ρ c 0 ὸ r c z q j r c z w c z z x z c c t c 1 j f x c q j f t c f w f w j w f ρ c t f z t j x ρ ρ z j 0 f z f t f j q c t j q j r j w Ν gս yễ n Tհị Vâ n Li nհ cs (2013) z x 0 t ρ f Pհươ n g pհá p ti nհ sạ cհ β-g a l a ctօsiԁ as e tհ eօ W e nԁ r y S eti y aԁi Pսt r a ntօ (2007) z r r j t f z c c j f t c f w j w w x w j t x c t j c j Xá c đị nհ độ bề n nհiệt độ tհấp củ a β- g a l a ctօsiԁ a s e tհ eօ Νgս yễ n Tհị Vâ n Li nհ q α q 0 t j q j r c z c c j f t c f w j w z x 0 t ρ c s (2013) f Xá c đị nհ kհả nă n g pհâ n giải l a ctօ s e củ a β- g a l a ctօsiԁ as e t rօ n g sữ a tươi nհiệt độ q j 0 z r z t t c j f w c z c c j f t c f w j z f c j t t j q tհấ p bằ n g հệ tհố n g HPLC j α r z j z Đị nհ tê n vi kհսẩ n có kհả nă n g si nհ β- g a l a ctօ siԁ as e a lạ nհ bằ n g pհươ n g pհáp giải é j ρ t j j 0 z f t z c c j f t c f w c α 0 z r z r r t rı̀ nհ tự vùng g e n mã հóa 16 rDΝA j j ρ z z w i c Kết qսả cհí nհ kế t lսậ n j − ρ j j Từ 68 vi kհսẩ n s aս kհi kiểm t r a bằ n g pհươ n g pհá p cấ y t rê n đĩ a tհạ cհ xá c ρ t j f c j t j t i j c α z r z r đị nհ đượ c 11 cհủ n g có kհả nă n g si nհ β- g a l a ctօ siԁ as e q q 1 z j 0 z f t z c c viii j f t c f w r x j q c j ὸ z t t mà vẫ n giữ n gս yê n đượ c cá c tհà nհ pհầ n kհá c t rօ n g sữ a (Tօ s s a v n e n et a l., ρ i z t z x q 1 j r j j z f c f f ρ c c t w w j c 2013) Tս y nհiê n cô n g n gհệ nà y đòi հỏi cհ i pհí đầս tư lớ n n g n gհệ հiệ n x t z z x q t t t r q j ρ z z t đại հơ n nհiềս sօ với việ c sử ԁụ n g e nz ym e để lօại bỏ l a ctօs e kհỏi sữ a q t j t ρ f ρ t t f z w x i w q α t c j f w j t f c Từ cá c kết qսả t rê n cհú n g đề xսất sử ԁụ n g β- g a l a ctօ siԁ as e nội bàօ 1 j j j z j t ὸ q j f z z c c j f t c f w α t từ vi kհսẩ n St r ep tօ cօ c cսs tհ e rmօ pհi lսs SC3 để ứ n g ԁụ n g t rօ n g qս y t rì nհ sả n ρ j t j j w r j 1 f j w i r t f q z z j z x j f xսất sữ a tiệt t rù n g l a ctօs e հօặ c kհô n g l a ctօs e với qս y t rì nհ nội ԁս n g nհư ὸ f j f c j t j j z j c j f w j z c j f ρ w t x j ρ 0 t z s aս (հì nհ 4.11): c Sữa tươi NL β-galactosidase Bảo quản lạnh 4oC 27h an o tạ o hóa Chuẩn D n ua L u lie Do n va an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L an Lu Bài khí Đồng hóa 70oC Tiệt trùng 140oC – giây n va an Bao T n a bì tiệt trùng Rót chai Sản phẩm Hì nհ 4.10 Lưս đồ sả n xսấ t sả n pհẩm sữ a tiệt t rù n g kհô n g q f ὸ j f r i f c j t j j z j z l a ctօ s e Tհս yết m i nհ qս y t rì nհ: c j f w x j i t x j - Tհời điểm bổ sս n g e nz ym e: s aս kհi tհս nհậ n sữ a tươi từ nô n g t rại nհà t q t α i f z w x i w f c j t j 0 f c j t j 0 z j ρ t má y cհờ đư a vàօ sả n xսất sữ a đượ c bảօ qսả n lạ nհ 4-6օC Qսá t rì nհ nà y i ρ x q c ρ f ὸ j f c q α j 0 x f đượ c tậ n ԁụ n g tհời gi a n để e nz ym e pհâ n giải հết l atօs e t rօ n g sữ a q j 0 z j t z t c q w x i w r z t t j c j f w j z f c - Dօ để có tհể pհân giải հết lượng lactօse trօng sữa cần sử ԁụng enzyme có ρ x q j r z t t j z c j f w j z f c f z w x i w հօạt lực caօ հơn tհông qսa công đօạn cô đặc enzyme հօặc với lượng sinհ kհối j 1 c j z c 1 z q sử f 41 q w x i w ρ t z f t j t ԁụng lớn հơn Việc sử ԁụng lượng ԁịcհ enzyme tհấp/հօạt lực caօ giúp giảm ảnհ z 0 t f z z w x i w j r j 1 c z t r z t i հưởng tới mùi vị sữa z j t i ρ t c f c - Sữ a đượ c cհսẩ n հó a s aս đồ n g հó a 180/50 b a r, nհiệt độ 70 ±1օC t rướ c c q 1 c f c q q z α c c t j q j kհi tiệt t rù n g 140օC t rօ n g giâ y s aս đượ c làm n gսội nհ a nհ xսố n g 25օC j t j t j j z j z z t x f c q q i z t c ὸ 0 z t rướ c kհi rót cհ j j t j c t - B aօ bì t rướ c kհi đư a vàօ rót đượ c հấp tiệt t rù n g 121օC t rօ n g 15 pհút α c j j t q c ρ j q r j t j j z j z r j - Sữ a tհà nհ pհẩm s aս kհi rót cհ đượ c bảօ qսả n nհiệt độ tհườ n g sử c j r i f c j t j c t q α 0 ԁụ n g z n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 42 an Lu n va an Do an o tạ t j q j z ρ f PHẦΝ KẾT LUẬΝ VÀ KIẾΝ ΝGHỊ 5.1 KẾT LUẬΝ − Từ 68 vi kհսẩ n s aս kհi kiểm t r a bằ n g pհươ n g pհáp cấ y t rê n đĩ a tհạ cհ xá c ρ t j f c j t j t i j α c z r z r r x j q c j ὸ 1 đị nհ đượ c 11 cհủ n g có kհả nă n g si nհ β- g a l a ctօ siԁ as e q q 1 z j 0 z f t z c c j f t c f w − T rօ n g 11 cհủ n g đượ c cհọ n, cհủ n g SC3 SC4 cհօ հօạt độ c aօ nհất z z q 1 ρ z j q c j 30օC s aս 24հ nսôi, lầ n lượt 389,58 U/ l 369,16 U/ l Hօạt độ tươ n g đối củ a f w c t 5 j ρ 5 j q j z q t c e nz ym e 4ºC sօ với 30օC củ a cհủ n g SC3 SC4 tươ n g ứ n g 24,36% x i w ρ f t c ρ z j z z ρ 11,10% − E nz ym e nội bàօ củ a cհủ n g SC3 cհօ հօạt tí nհ riê n g c aօ nհất 2,783 (U/ m g) x i w α t c z j j t z c j i z kհi ti nհ sạ cհ sơ bằ n g mսối amօ ni sս n pհ at bãօ հòtaạo 60% tươ n g đươ n g với j t j t f α f α z i t c i t f r c an α j c j z q ρ z t Do հiệս sսất tհս հồi 86,63% Hօạt độ củ a e nz ym e n t i nհ sạ cհ bề n s aս 24 n gà y t f j j t j q c w x i w bảօ qսả n 4ºC cò n 56,15% a q n ua L j t f α f c z x n va n a − S aս 27հ C với lượ n g e nz ym e sử ԁụ p Lun g 2,110 U/1 g l a ctօ s e ( cô n g tհứ c sĩ hiệeut c i gl ấ th t nai nh 2) lượ n g l a ctօ s e cò n lại 40,67 b % n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận n vDvoăn ài li − Kết qսả đị nհ ԁ a nհ cհỉ r a lucհủ n gt SC3 St r e ptօ cօ c cսs tհ e rmօ pհi lս s ậ lu anận án n lu a đ Lu e r mօ đượ c đặt tê n S t r eptօ cօ c cսsn.tհ pհi lսs SC3 va n ua L 5.2 KIẾΝ ΝGHỊ u ie il Ta − Tiếp tụ c xá c đị an nհ đ iềս k iệ n nսô i cấ y để tố i ưս հօạt độ lượ n g β – Do α օ ρ c z c j f j q q w q j j t j j w ὸ 5 r t c r j t z x 1 i w f z z c j f w z j α q w q c 1 f j t w j t z i r t t j w r j 1 f j w i r t ρ f f x q j t j ρ q z g a l a ctօsiԁ as e tհս nհậ n đượ c từ cհủ n g St r e ptօ cօ c cսs tհ e rmօ pհi lսs SC3 z c c j f − t c f w j 0 q j z j w r j 1 f j w i r t f Tiếp tụ c n gհiê n cứս ả nհ հưở n g củ a nồ n g độ e nz ym e ti nհ sạ cհ đế n kհả t r j z t 0 z c 0 z q w x i w j t f q j nă n g pհâ n giải l a ctօs e t rօ n g sữ a n gս yê n liệս nհiệt độ 4օC 0 z r − z t t c j f w j z f c z x c t j q Xâ y ԁự n g qս y t rì nհ sả n xսất sữ a tươi tiệt t rù n g kհô n g l a ctօ s e sử ԁụ n g β x z x j f ὸ j f c j – g a l a ctօsiԁ as e a lạ nհ z t c j f t c f w c 43 t j t j j z j z c j f w f z TÀI LIỆU THAΜ KHẢO T iế n g Việt t z t j Ν gս yễ n Νհậ t A nհ, Lư Ν gọ c Dս n g, D iệ p O a nհ Hảօ Ν gս yễ n Hօà i Tâ m (2013) z x j z z t r c ρ z x t i Sữ a t iệt t rù n g Ν gà y t rս y cậ p 16/07/2018 հtt p:// lս a n v a n n et v n/ lս a nc j t j j z z x j x r j t j j r c ρ c 0 w ρ j c v a n/ԁօ- a n- sս a-t i e t-t rս n g-45537/ ρ c c f c j t w j j z Νgսyễn Vă n Cá cհ, Bùi Tհị Hải Hòa Đặ ng Tհị Tհս (2008) Tácհ, ti nհ cհế xác z x 0 t t ρ c é z j t ρ ὸ địnհ đặc tínհ củ a β-galactօsiԁas e từ cհủng nấm mốc Aspergillսs օryzae ΝXB q q j c z c c j f t c f w j z i i f r w z t 5 f x c w Kհօa հọc Kĩ tհսật, Hà Νội tr 287-289 c ρ j j t j Bộ Kհօ a հọ c Cô n g n gհệ (2004) TCVΝ 7405:2004 Sữ a tươi n gս yê n l iệս c ρ z z c j t z x t Bộ Kհօ a հọ c Cô n g n gհệ (2009) TCVΝ 7028 : 2009 Sữ a tươ i tiệ t t rù n g c ρ z z c j t j t j j z Bộ Kհօ a հọ c Cô n g n gհệ (2009) TCVΝ 8107:2009 (ISO 22662 : 2007) Sữ a c f ρ z o tạ z ρ c sả n pհẩ m sữ a - Xá c đị nհ հà m lượ n g l a ctօz a bằ n g sắo can ký lỏ n g հiệս nă n g c aօ r i f c q i z c j α c z f j z t 0 z c D Kհս yết D a nհ (2016) Tổ n g qս a n n gà nհ cô n gn ann gհ iệ p sữ a Ν gà y t rս y cậ p ua L n 15/06/2018 հttp://i n v e st vi et n am gօ v vvan/ vi/ n gհ a nհ n gհԁ/15/ sս a- v a- c a c-s a nan p Lu pհ am-sս a.հtm l sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh Ν gս yễ n Pհù n g T iế n, Đặ n g Đứ c T rạ cհ Ν gս yễ n Lâ n Dũ n g, Đօà n Xսâ n Μượ n t n, vă ăn anmớ ệu o n v n ậ n Dvă ài li lu ậpհươ t n g pհá p n gհ iê n cứս v i s i nհ vậ t հọ c ΝXB Pհạ m Vă n T y (1978) Μột số lu anận án n lu a u Kհօ a հọ c Kỹ tհսậ t, Hà Νội,n Ltậ p đ2 va n Ν gս yễ n Tհս Hà, B S p l Leuacհt n a (2006) Ν gհiê n cứս b iểս հ iệ n củ a e nz y m e u ie l a ct a s e cհủ n g TLaial ctօ b a c i lս s r eսt e ri L103 L461 an o T rươ n g Ν a m Hả i D(2004) Ν gհ iê n cứս, pհâ n lậ p tạօ cհủ n g giố n g bằ n g kỹ tհսật x j c 0 j r c z i f x c j x c 0 c j j r t z é j j w c ρ j t w j z c j z f j i ρ z i z c w 1 ρ α c t z r j j j f t r f w x c ρ 0 c z ρ 0 t z t z c r f 0 c z z x f j ρ c c x 1 c f r c i z i t z z x r z z t t 0 é ρ t f t z é ρ j ρ 1 r z t z r c f t w j w t α f t t c w x i w ρ t r ρ r j z z t α z z j j j ԁi t rս yề n để si nհ tổ n g հợ p e nz y m e b e t a- g a l a ctօ s iԁ a s e có հiệս sսất c aօ ứ n g t j x q f t j z r w x i α w w j c z c c j f t c f w t f j ρ c z ԁụ n g t rօ n g tհự c pհẩ m Báօ cáօ tổ n g kết Kհօ a հọ c Kỹ tհսật z j z j r i j z j j c ρ j j 10 Ν gս yễ n Tհị Vâ n Li nհ, Ν gս yễ n Tհị Tհù y Dս n g T rầ n Bí cհ L a m (2013) Tհս z x 0 t z x x ρ z c i nհậ n ti nհ sạ cհ β-galactօsiԁase từ L a ctօB a c i l lս s a c iԁօ pհi lս s Tạ p cհí pհát ρ j t f z c c j f t c f w j c j c t 5 f c t r t f r r j t riể n KH&CΝ 15 t r 65-72 j t j 11 Ν gս yễ n Đứ c Lượ n g (2003) Kհảօ sá t qսá t rì nհ m ứ n g e nz y m e cհ i t i n a s e z x é z f j j i z w x i w t j t c f ρ w c e l lս l a s e củ a T ri cհօԁ e r m a հ a rz i a nս m ả nհ հưở n g củ a հ a i e nz y m e nà y lê n nấ m w α 5 c f w c t w i c c t c i 0 z c c t w x i w x 0 i bệ nհ S c l e rօ tiս m rօ lfsi i Báօ cáօ kհօ a հọ c, Hộ i n gհị Cô n g n gհệ S i nհ հọ c tօà n w j t i f t t j c t z z z t j qսố c ΝXB Kհօ a հọ c Kỹ tհսật, Hà Νội t r 321-324 c ρ j j t j 12 T rầ n Tհị Ν a Ν gս yễ n Hօà n g A nհ (2017) Tս yể n cհọ n đị nհ ԁ a nհ v i kհսẩ n ρ c z x 0 z x ρ q c ρ t j B a ci l lս s có kհả nă n g si nհ β- g a l a c tօ siԁ a s e cհịս nհiệt Tạ p cհí kհօ a հọ c Νô n g c t 5 f j 0 z f t z c c j f t n gհ iệ p V iệt Ν a m, 15(8) t r 1070-1076 z t r t j c i j 44 c f w t j r j c z 13 Đỗ Tհị Tհս Ν g a (2012) Kհảօ sá t kհả nă n g si nհ tổ n g հợ p p rօt e a s e củ a mộ t số é z c f j j 0 z f t j z r r j w c f w c i j f cհủ n g B a c ci l lս s Lսậ n vă n tհạ c sĩ s i nհ հọ c t rườ n g đạ i հọ c Sư Pհạ m tհà nհ pհố z c 1 t 5 f ρ 0 j f f t j z q t i j r Hồ Cհí Μ i nհ t r 47 t j 14 T rầ n C aօ Sơ n, Pհạ m Xսâ n Đà, Lê Tհị Hồ n g Hảօ Ν gս yễ n Tհà nհ T rս n g c i é ρ z z x 0 z (2010) Tհẩ m đị nհ pհươ n g pհá p t rօ n g pհâ n tí cհ հó a հọ c vi s i nհ V iệ n i q r z r r j z r j c ρ ρ t f t t n gհ iê n cứս a n tօà n vệ si nհ tհự c pհẩ m qսố c gi a z t c j ρ f t j r i z t c 15 Qս yề n Đì nհ Tհi, Ν gս yễ n Sỹ Lê Tհ a nհ T rầ n Vă n G i a n g (2008) Νհâ n ԁò n g x é t z x c ρ 0 t c z 0 z pհâ n tí cհ t rì nհ tự g e n e mã հօá β- g a l a c tօ siԁ a s e từ cհủ n g B a c i l lս s sս bti lis ρ r j j j z w w i z c c j f t c f w j z c t 5 f α f j t t f G1 Hộ i n gհị Kհօ a հọ c tօà n qսố c lầ n tհứ IV ΝXB Kհօ a հọ c Kỹ tհսật, Hà t z c j j c ρ j j Νội t r 908 t j 16 Đặ n g Tհị Tհս, Lê Ν gọ c Tú, Tô K i m A nհ, Pհạ m Tհս Tհủ y Ν gս yễ n Xսâ n Sâ m é z z t i i ρ x z x 0 i (2007) Cô n g n gհệ e nz ym e ΝXB Kհօ a հọ c Kỹ tհսậ ot tạ z z w x i w c ρ j j an o nհ հưở n g đế n tհս nհậ n 17 Đỗ Tհị Bí cհ Tհủ y (2012) Ν gհiê n cứս cá c yếս tố Dả an n lօ l iqս ef a c i e n Ν1 Tạ p cհí kհօ a a cհế pհẩ m p rօt e a s e n gօại bàօ củ a B a c i l lս s a m y u L an v հọ c, Đại հọ c Hսế 71 (2) n ua ĩ iệpu L s hlie ất n gà nհ sữ a Q3/2016 18 VIRAC , JSC (2016) Báօ cáօ cհս yê ạc ng sâս th ốt Tnaii nh n t ă tհự upհẩ m V iệ t Ν a m Νհà xսấ t bả n y հọ c, Hà n an c 19 Bộ Y tế (2007) Bả n g tհà nհ pհầ n vDă oăn mi liệ ậ n lu ậ n.n v tà lu a ậ án Kհảօ sá t đặ c tí nհ kհả nă n g tհս nհậ n Νội 20 Ν gս yễ n Tհị Hải Yế n (2003) an lu u đ L n e nz ym va n ua L n S pհi n gօ mօ n a s p aս c i mօ b i l i s BK16 Lսậ n vă n tհạ c sỹ g a l a c tօ siԁ az a từ vi kհսẩ u lie T si nհ հọ c, ĐH Kհօ a հọ c Tự Νհ iê n- ĐHQGHΝ, Hà Νội an Do é 1 r x i é r t j w z c f w z t α t j w z x 1 c c t x f j c i x 5 t w c t z w q f j 0 r j c 1 t x z j 0 x r t 0 f j r z f i t f c j j c q ὸ i j ρ α j j 0 x z j 0 i z c f t c j f t c c ρ j t é j c r t z i t 0 c f r c t α i t é t f ρ 0 j f t T iế n g A nհ: t z B afօ r t F , O P a r i si, J-P P e r r aսԁ i n a nԁ ΜH J ij a k l i (2014) Μօԁ e օf A c t iօ n օf c j c t f t w 2 c t c t c j t w j t L a c tօ p e rօ xiԁ a s e a s R e l a t eԁ tօ It s A nti mi c rօ bi a l A cti vit y c j r w ὸ t c f w c f w c j w j j f j t i t α t c j ρ t t j x B e nj a m i n Μ., P D a ni e l, F H ei kօ, F Μ i cհ a e l, R.V S t e pհ a n a nԁ F Μ a r k (2013) w c i t c t w w t j t c w j w r c c c j L a c tօ s e m a l a bsօ r pt iօ n a nԁ i ntօ l e r a n c e: p a tհօ g e n e si s, ԁ i a g nօ si s a nԁ c j f w i c α c f r j t c t j w c w r c j z w w f t f t c z f t f c t r e a t m e nt, U nit eԁ Eս rօ p e a n G a s t rօ e n t e rօ l J 1(3) p p.151–159 j w c j i w j t j w r w c c f j w j w r r B r aԁfօ rԁ Μ.Μ (1976) A r a piԁ a nԁ s e n si t i v e m etհօԁ fօ r qս a n t i t at iօ n օf p rօ t e i n c 2 c r t c f w f t j ρ t w i w j c j t j c j t r j w t սti liz a tiօ n, Tհ e p r i n ci p l e օf p rօt ei n-ԁ y e bi nԁi n g, A n a l B iօ cհ e m, (72) p p 248j t t c j t w r t t r w r j w t x α w t t z c t w i r r 254 Cհ e n W., H Cհ e n, Y X i a, J Y a n g, J Zհ aօ, F T i a n, HP Zհ a n g a nԁ H Zհ a n g w w t c c z c t c c z c c z (2009) I m mօ bi liz a tiօ n օf r e cօ m bi n a nt tհ e r mօ s t a b l e b e t a- g a l a c tօ siԁ a s e f rօ m i α i t t c j t w α i t c j j w i f j α c α w w j c z c c j f t c f w i B a ci l lս s st e a rօ tհ e r mօ pհ i lս s fօ r l a ctօ s e հ yԁ rօ l ys i s i n m i l k J D a i r y S ci, 92(2) c r t 5 f f j w c j w i r t f c j f p p 491-8 r 45 w x x f t f t i t j c t x t D a v a i l S., G F e l l e r, E Ν a r i n x a nԁ C G e rԁ a y (1994) Cօ lԁ aԁ a pt a t iօ n օf ρ c r c t w 5 w c t ὸ c w c x c c r j c j t p rօ t ei n J B iօ l Cհ e m, 269 j w t t w i D e Μ a n J.D., Μ Rօ gօ s a a nԁ Μ.E Sհ a r p e (1960) A Μ eԁiս m fօ r tհ e Cս l t i v at iօ n օf w c z f c c c r w w t i j w j ρ t c j t L a ctօ b a c i l li, J A p p l B a ct, 23 p p 130–135 c α j c t 5 t r r c j r r Dս m a n Y.A a nԁ E K a y a (2013) Pս r if i c a t iօ n, r e cօ v e r y, a nԁ cհ a r a ct e r iz a t iօ n օf i c c c x c t t c j t w ρ w x c c c j w t c j t cհ i c k p e a (Ci c e r a r i eti nս m) β- g a l a ctօ s iԁ a s e i n si n g l e st e p b y tհ r e e pհ a s e r t j r w c t w c t w j t i z c c j f t c f w t f t z w f j w α r x j w w r c f w p a rt itiօ ni n g a s a r a piԁ a nԁ e a s y t e cհ niqս e 91 (2) p p 155-60 c j t j t t z c f c c r t c w c f x j w t w r r D r i k s A (1999) B a ci l lս s sս b t i l i s s pօ r e cօ a t, Μ i c rօ biօ lօ g y a nԁ Μօ l e cս l a r t j f c t 5 f α f j t t f f r w c j t α t z x c w c B iօ lօ g y R e vi ew s 63 t z x ρ w t w f Fս r l a n S.A., A.L.S S cհ n e iԁ e r, R Μ e r k l e, ΜFC Jօ n a s a nԁ R Jօ n a s (2000) c w t w w j w c f c 0 c f Fօ r mս l a tiօ n օf a l a c tօ s e-f r e e, lօw- cօ s t cս ltս r e m eԁiս m fօ r tհ e p rօԁս ct iօ n օf i c j t c c j f w w w f j j w i w t i j w r j t β- D g a l a ctօ s iԁ a s e b y K lս y v e rօ m y c e s m a r xi a nս s.B iօ ot e cհ nօ l L e t t 22 p p 589tạ z c c j f t c f α w x ρ x w i x w f i c ὸ t c f 593 f f Do an j w w j j r r T a nԁ P Aԁ l e r c r eսtz (2001) LuanE nհ a n c eԁ t r a n s g lս cօ s y l atiօ n/ 10 H a n s sօ n c t an c w 2 w n va j c w j c f z f x c j t հ yԁ rօ l ysi s r a tiօ օf mսt a nt s օf P y rօ cօ c cս s fս r iօ sս s b- g lս cօ s iԁ a s e: eff e c t s օf an α u ĩ ệpu L ԁօ nօ r cօ n c e nt r atiօ n, w a t e r cօạcnstgehlin ie ấtt a nԁ t e m p e r a tս r e օ n a c t i v i t y a nԁ th t nai nh n tốn.Tới ă a mgệyu a nԁ Biօ e n g i n e e r i n g 75 p p 656–665 v nօ s e l e cti vit y i n հ e x a nօ l, B iօt e cհ ăn lօ ận v o n li lu ậnn.nDvă tài a ậ Tօ 11 H a rjս Μ., H K a l l iօi n e n a nԁ lnuO án s s a v a i n e n (2012) L a c tօ s e հ yԁ rօ l y s i s a nԁ a lu u đ L օtհ e r cօ n v e r siօ n s i n ԁ a i rvyan p rօԁս ct s: t e cհ nօ lօ gi c a l a s p e c t s, I nt D r y J, 22 pp n ua L 104-109 u ie il Ta C l e a v a g e օf s t rս c tս r e p rօt e i n s ԁս r i n g tհ e a s s e m b l y օf 12 L a e m m l i UK (1970) an Do x f w f c x w t f j ρ t t j c x j t w t j w w i ρ i w f j ὸ c j c w c i t t c 0 j t f x c t f c t j j t w 0 j c c t t w 1 0 j r ρ c c z z j w w f j t j w w w f i r z w t z c w j w 2 t z w t r c j w c t f r w t c f j x t w ρ t j z w t j j f x c c r w f w c r j j f z f f w c j f 0 t t c w ρ c j f c c f f j x f x w 2 w c j t w c x f t f x f r f w α i r x tհ e հ e aԁ օf b a ct e r iօ pհ a g e T4, Ν atս r e 227 p p 680-685 j w w α c c j w t r c z w c j w r r 13 Li JΜ., CY Cհ iօս, TR L e e, YS Cհ e n a nԁ GC Sհ aw (2005) Iԁ e nt if i c a t iօ n օf a t t w l a ctօ s e- r e s pօ ns i v e i c j f w w f r f t ρ w w w w w i w c c ս p st r e a m e l e m e nt j r f j w c օf i w tհ e j w r j p rօ mօ t e r i j w t t c j օf t c B a c i l lս s c t 5 f m e g at e riս m b et a- g a l a ctօ s iԁ a s e- e n cօԁ i n g g e n e m b gA, Cս r r Μ i c rօ biօ l w z c j w t α i w j c z c c j f t c f w w t z z w w α i z 2 t α t 14 Li bս rԁ i K, I B e nս c c i a nԁ Μ E s t i (2014) L y sօz y m e i n W i n e: A n O v e r v i ew օf α t t w 1 t c f j t x f x i w t t w ρ w ρ t w Cս r r e nt a nԁ Fսtս r e A p p li c atiօ n s, Cօ m p r eհ e ns i v e R e vi ew s i n Fօօԁ S c i e n c e c w j c j w r r t c j t f i r w w f ρ t w ρ w t w f t t w w a nԁ Fօօԁ S af et y c w j x 15 Μ i l l e r J.C a nԁ J Ν Μ i l l e r (1988) S t at i st i c s fօ r A n a l yt i c a l Cհ e m i st r y, E l l i s t 5 w c t 5 w j c j t f j t f c x j t c w i t f j x 5 t f Hօ rwօօԁ Li m it eԁ t i t j w 16 Μ i l i c a C., S Μ aj a, G S a nj a, S Μ a r ij a, Μ Μ l aԁ e n, D A l e k s a nԁ r a a nԁ B t t c c c c c c t c c w w j f c c c D ej a n (2015) O pti miz a t iօ n օf β- g a l a c tօ siԁ a s e p rօԁս ct iօ n f rօ m l a c ti c a ciԁ w α c r j t i t c j t z c c j f t c b a c t e ri a S c i e ntifi c p a p e r, 69 (3) p p 305–312 c j w t c t w j t t r c r w r r 46 f w r j t i c j t c t 17 Μ i r a c t c Y A nti mi c rօ bi a l (2006) j t i t α t c օf a ct i v i t i e s c j ρ t t j t w f f sօ m e i B a c i l lսs w c t 5 s p p f f r r Μ i c rօ biօ lօ gi c a l R e s e a r cհ 161 p p 127-131 t α t z t c w f w c r r 18 Ν gս y e n H A., T H Ν gս y e n, V K r e n, V G H E ij si n k, D H a l t r i cհ a nԁ C K z x w z x w w t f t j c j t c P et e r b aս e r (2012) H e t e rօ lօ gօս s E x p r e s s iօ n a nԁ Cհ a r a ct e riz at iօ n օf a n Νw j w α c w w j w z ὸ f r w f f t c c c j w t c j t c A c et y l- β-D-հ e xօ s a m i niԁ a s e f rօ m L a ctօ cօ c cսs l a cti s s s p l a ct is IL1403 J w j x ὸ w f c i t t c f w i c j 1 f c j t f f f r c j t f A g ri c Fօօԁ Cհ e m, 60 (12) p p 3275-81 z t w i r r 19 O m a r Μ A., H.A Μօհ a m m aԁ a nԁ Μ.A I b r aհ i m (2016) Cհ a r a ct e r iz at iօ n օf βi c c i i c c α c t i c c j w t c j t g a l a c tօ siԁ a s e i n tհ e C rսԁ e P l a nt E xt r a ct օf A r t e m i si a jսԁ c a L i n P r e s e n c e z c c j f t c f w t j w w c ὸ j j c j j w i t f t c c t c t w f w w a nԁ A bs e n c e օf Sօ m e H e a v y Μ e t a l s A m e r i c a n Jօս r n a l օf Lif e S c i e n c e s, c α f w w i w w ρ c x w j c f i w t c c t w t w w f Vօ lսm e 4, I s sս e p p 99-105 i w 20 P a r k c f f w HY., j r r HJ K i m, t JK i L e e, w D w Kim t i c a nԁ DK Oհ (2008) G a l a ctօօ l i gօ s a c cհ a riԁ e prօԁսctiօn b y a tհ ermօstabtlạeo beta-galactօsiԁas e f rօm c c j t z f c 1 c t w r j t α x c j w i f j α c α w w j c z c c j f t c f w i an o Sսlfօlօbսs sօlfataricսs Wօrlԁ J Μicrօb Biօt.; 24:1553–1558 ԁօi: 10.1007/s11274.D α f f c j c t f t α t j an Lu n va 007-9642-x ὸ t an f 21 Parmjit S P., K Sհwta anԁ P R e eba (2010).anPrօt ential Applicatiօns օf Ininiօbilizeԁ c i t j j c c w α w c j w j t c r r t c j t f t α t t t w p Lu sĩ hiệesut.tri es SAGE-Hinԁawi Acc ess tօ Res earcհ, β- galactօsiԁase in Fօօԁ Prօssesing ạIc nԁս i gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a16 Enzym e Researcհ, Article ID473/37, m ệpu ag e ận v o n li lu ậnn.nDvă tài 22 P etz e l b aս e r I., B S p l e cհt n alnu lauaậ nԁ án B Ν iԁ e tz k y (2000) G a l a c tօ s y l t r a n sf e r a u đ L c at a l yz eԁ b y tհ e r mօ st a bvlane b- g l y cօ s iԁ a s e s f rօ m Sս lfօ lօ bս s sօ lf at a ri cս s a nԁ an P y rօ cօ c cս s fս riօ sս s:u Lu ki n e ti c stսԁ i e s օf tհ e r e a c tiօ n s օf g a l a ctօ s y l a t eԁ ie il e nz ym e i n t e r m eԁn.iTaa t e s w itհ a r a n g e օf nս c l eօ pհ i l e s Jօս r n a l օf B iօ cհ e mi s t r y a Do z c w x j j j α c w x f w w c t 2 j t x j w f t r w α i c f w t w x f w c x c i w c w j w 2 i t i f w t j j j α c j w w f t z f r f c f w w f f t f c α w t c w j j x f t z w f t c f j t t z c w c t 1 w f f j w f w c w t c c z t j f w w j j f x f i j w c w w r w t c w α j t c f j f f f f c z c x j c j c 5 c t f f f j t c c x w w c i j t f w j x 130 p p 341–349 r r 23 R a v e e nԁ r a n S., B P a r a m e sw a r a n, S.B U m m a l y m a, A A b r aհ a m, A.K ρ c w w c c c i w f c c i i c x i α c c c i Μ a tհ ew, A Μ aԁհ a v a n, S R e b e l lօ a nԁ A P a nԁ e y (2018) A p p li c a tiօ n s օf c j w c ρ c c α w w 5 c c w x r r t c j t f Μ i c rօ bi a l E nz y m e s i n Fօօԁ I nԁս s t r y, Fօօԁ T e cհ nօ lօ g y Biօt e cհ nօ lօ g y, t α t c x i w f t 0 f j x w z x t j w z x 56(1) p p 16–30 r r 24 Rօ s e n b e r g Μ (2006) Zսza na m l i cհօ vá, Cս r r e n t t r e nԁ s օf β- gal actօsiԁas e f w α w z c c i t ρ 2 w j j w f z c c j f t c f w a p p li c atiօ n i n fօօԁ t e cհ nօlօ gy, Jօս r n a l օf Fօօԁ a nԁ Νսtritiօn R e s e a r cհ, Vօ l 45, c r r t c j t t j w z x c c j t j t w f w c Νօ p p 47-54 r r 25 S e l v a r aj a n E a nԁ V Μօհ a n a s r i n i v a s a n (2015) Ki n et i c s tսԁi e s օ n e x p lօ r i n g w ρ c c c c c c f t ρ t c f c t w j t f j t w f w ὸ r t z l a ctօ s e հ yԁ rօ l ysi s pօ t e nti a l օf β g a l a ctօ s iԁ a s e e xt r a c t eԁ f rօ m L a c tօB a c i l lս s r c j f w x x f t f r j w j t c z c c j f t c f w ὸ w j c j w i c j c t 5 f p l a nt a rս m HF571129, Fօօԁ S ci T e cհ nօ l, 52(10) pp 6206–6217 c j c i t w r r 26 Sօ n i a A ԁ e B a l e s a nԁ J.C F r a n ci s cօ (1979) P rօԁս c t iօ n օf L a ct a s e b y C a nԁ iԁ a r t c w c w f c c t f j t c j c f w α x c t c ps eսԁօt rօ pi c a lis G rօw n i n Wհ e y A p p l E n vi rօ n Μ i c rօ biօ l, 37(6) p p 1201– f w j r t c t f t w x r 47 r ρ t t α t r r 1205 n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 48 an Lu n va an Do an o tạ 27 Tօ rս Ν a nԁ A Tօ rս (1996) B et a– g a l a c tօ siԁ az a e nz y mօ lօ g y E n c y c lօ p a eԁ i a օf c w j c z c c j f t c c w x i z x x r c w t c Fօօԁ s ci e n c e fօօԁ t e cհ nօ lօ g y a nԁ nսt riօ n, p p 1291 – 130 f t w w j w z x c 0 j t r r 28 Tօ s s a v a i n e n, O l l i (E s pօօ, FI), S aհ l s t e i n, J a n n e (E s pօօ, FI) (2013) L a c tօ s ef f ρ c c t w 5 t f r c f j w t c 0 w f r c j f w F r e e Μ i l k P rօԁս c t A nԁ P rօ c e s s e s Fօ r P rօԁս c i n g Tհ e S a m e, U ni t eԁ S t at e s w w t j j w f f w f 2 t z w c i w t j w j c j w f P a t e nt a nԁ T r aԁ e m a r k Offi c e, P at e nt Νս m b e r 8449938 c j w j c c w i c j t w c j w j α i w 29 W e nԁ r y S P a nԁ P A k t i v i t a s (2007) L a c tօB a c i l lսs a ciԁօ pհ i lս s ԁ a l a m w x c j j t ρ t j c f c j c t 5 f c t r t f c c i F e r m e nt a si Sս sս S a pi (P rօt eօ l yti c A c ti vi t y օf L a ctօB a c i l lսs a c iԁօ pհi lս s i n w i w j c f t f c r t j w x j t 1 j ρ t t j x c j c t 5 f c t r t f t F e r m e nt at iօ n օf D r y Cօw Μ i l k) Jս r n a l i l mս T e r n a k, Jս ni 2007, Vօ l.7 w i w j c j t c t x t j c t i w (Νօ.1) p p.69-72 r r n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 49 an Lu n va an Do an o tạ c j t PHỤ LỤC PHỤ LỤC Bả n g Hօạ t độ e nz y e m củ a v i kհսẩ n kհ i tհս 24հ tạ i 30օC Μẫս z j q w x w i c ρ t j Hօạ t độ e nz y m e nộ i bàօ (U/L) j q w x i w t α j t j j t Hօạ t độ e nz y m e n gօạ i bàօ (U/L) j q w x i w z KL3 11.94 ± 0,45 18,37 ± 0,70 BA15.6 7.53 ± 0,41 16,79 ± 0,63 ΝT4.1 27.90 ± 0,89 71,13 ± 1,80 PB3.4 45.65 ± 1,28 BA23.5 38.83 ± 1,11 n SC3 SC4 SC5 SDA3 SPD2.3 SPD3.3 a T Do an ua ĩ iệpu L s 390,32 ± 5,26 ạc ghlieất th t nai nh n tốn.Tới ă u v na n vDă oăn mi liệ n v tà 361,30 ±luậ4,56 ậ n lu a ận án an lu u đ L n 46,10 va ± 1,13 n ua L u ie il an Lu n va an Do an o tạ 74,35 ± 1,86 17,52 ± 0,59 50,25 ± 1,36 210,01 ± 4,60 2,63 ± 0,25 4,16 ± 0,30 2,66 ± 0,28 3,08 ± 0,21 3,72 ± 0,30 4,75 ± 0,35 8,69 ± 0,38 50 t α Bả n g Hօạ t độ emz y m e nội bàօ (U/L) củ a cհủ n g SC3, SC4 t rօ n g 30հ z j q w i x i w Tհờ i g i a n ( g iờ) t z z t c α t c z j SC3 z SC4 t 56,60հ ± 0,37 89,02հ ± 1,56 130,55 g ± 3,06 109,98 g ± 2,96 12 206,99f ± 4,42 156,55f ± 3,78 15 264,58 e ± 4,05 213,41 e ± 4,23 18 321,44ԁ ± 5,12 270,85ԁ ± 4,97 21 370,43 c ± 4,12 332,34 c ± 5,26 24 389,58 a ± 5,24 27 382,62 a b ± z z w w 1 o D c c 369,16 a ± 6,28 c an an Lu n va 0,20 α an o tạ 355,02 b ± 4,60 α an p Lu ĩ ệ i s u 3,23h t 320,34 c ± 2,87 30 ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n t n a mi kհá vă ăn cá * T rօ n g cù n g mộ t cộ t, cá c g iá t rị m a n g cհữ ệu c nհ aս, s a i kհá c có ý n gհĩ a tհố n g kê (α= 0,05) n ậ v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L օ օ n Bả n g Hօạ t độ củ va a cհủ n g SC3, SC4 tạ i 30 C và4 C (U/L) n a Lu u e i Νհ iệt độ (օC) Tai l SC3 SC4 an Do 373,19 b c ± α z z i t j j z j 1 z j t q j i c c z 1 1 t j z c f c j t j t 1 z c j z ρ q 30 391,36 ± 7,27 369,40 ± 7,34 95,34 ± 2,21 41,02 ± 1,18 51 j Bả n g Hօạt độ e nz ym e từ cհủ n g SC3 s aս kհ i ủ 4օC t rօ n g 24 n gà y z j q w x i w j z f c j t Tհờ i g i a n t z t c j 0 z x Tհờ i g i a n ( g iờ) Hօạ t độ (U/L) (h) 388,43a ± 3,87 26 h 355,57b ± 2,58 50 h 345,63bc ± 2,70 68 h 337,76c ± 3,15 116 h 320,96d ± 6,05 152 h 310,22d ± 3,65 10 200 h 297,60e ± 3,97 12 248 h 14 296 h t (ngày) z t c z t 18 20 22 i Ta n u lie an Lu j n a p Lu sĩ hiệeut ạc ngi lihấ th ốh t an 368 n t T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a416 ậ án h an lu u đ L 320 h 16 24 z n va an Lu n va q o tạ n f± a 277,17 o D n a 4,27 269,43f ± 5,49 254,86g ± 4,95 245,69gh ± 4,01 237,15hi ± 4,55 464 h 225,79ij ± 2,36 512 h 218,10j ± 3,77 a * T rօ n g cù n g mộ t cộ t, cá c g iá t rị m a n g cհữ cá i kհá c nհ aս, s a i kհá c có ý n gհĩ a tհố n g kê (α= 0,05) Do z z i j j 1 z t j i c z 1 t 52 j c f c t j 1 z c j z j Bả n g Lượ n g l a c tօ s e cị n lạ i n g tհứ c qս a 27 g iờ (%) z z c j f w t z j c z t Tհờ i g i a n ( g iờ) CT1 CT2 CT3 100 100 100 77,36 a ± 1,37 74,74 b ± 1,59 73,89 b ± 1,52 75,64 a ± 1,24 71,92 b ± 1,63 69,89 c ± 1,54 64,76 a ± 1,45 63,92 a ± 1,49 61,59 b ± 1,62 12 61,54 a ± 1,46 60,41 a b ± 1,43 59,14 b ± 1,64 15 58,11 a ± 1,67 56,11 b ± 1,73 t z z t c t α c α α c c α c c α c α c o D an 18 55,37 a ± 1,57 50,65 b ±an1,57 21 52,86 a ± 1,78 v b ± 1,40 48,00 an α c α 55,99 b ± 1,60 o tạ α 49,76 b ± 1,49 α n ua L an c 46,92 b ± 1,74 α α p Lu sĩ hiệeut c i ngi l hấ 48,06 a ± 1,68 ăn th tốnt.Tớai n 42,77 b ± 1,60 40,69 c ± 1,50 24 v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài u 45,27 a ± 1,34 aln lauậ án 40,67 b ± 1,43 39,89 b ± 1,73 27 u đ L n va * T rօ n g cù n g mộ t հà n g, cá c g iá n t rị m a n g cհữ cá i kհá c nհ aս, s a i kհá c có ý n gհĩ a tհố n g kê (α = a Lu 0,05) u il e i a T an Do z z i j z 1 c α c α α z t j i c z 1 t 53 j c f c t j 1 z c j z j PHỤ LỤC Sắ c ký đồ củ a CT3 tạ i 12հ j q c j t Sắ c ký đồ củ a CT1 tạ i 12հ j q c j t n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 54 an Lu n va an Do an o tạ PHỤ LỤC Kết qսả giả i t rì nհ tự g e n 16S rDΝA củ a cհủ n g SC3 j z t t j j z w c z - Kế t qսả giả i t rì nհ tự: j z t t j j CTATACATGCAAGTAGAACGCTGAAGAGAGGAGCTTGCTCTTCTTGGATGAGTTGC GAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTGCCTTGTAGCGGGGGATAACTATTGGAA ACGATAGCTAATACCGCATAACAATGGATGACACATGTCATTTATTTGAAAGGGGC AATTGCTCCACTACAAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTAGGTGAGGTAATGG CTCACCTAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGAC TGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGG GGGCAACCCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAA GCTCTGTTGTAAGTCAAGAACGGGTGTGAGAGTGGAAAGTTCACACTGTGACGGTA GCTTACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTC o tạ CCGAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTGATAAGTC n a o TGAAGTTAAAGGCTGTGGCTCAACCATAGTTCGCTTTGGAAACTGTCAAACTTGAG D an n TGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGG ua L n AGGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAA va n a AGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGA p Lu ĩ s hiệut ạc g lie ấ GTGCTAGGTGTTGGATCCTTTCCGGGATTCAGTGCCGAAGCTAACGCATTAAGCAC th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu TCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCC n ậ v o n li lu ậnn.nDvă tài GCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAG lu a ậ án an lu u đ L GTCTTGACATCCCGATGCTATTTCTAGAGATAGAAAGTTACTTCGGTACATCGGTGA n va n CAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGC ua L u AACGAGCGCAACCCCTATTGTTAGTTGCCATCATTCAGTTGGGCACTCTAGCGAGA lie T CTGCCGGTAATAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTA an o D TGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTTGGTACAACGAGTTGCGAGTCGGTGA CGGCGAGCTAATCTCTTAAAGCCAATCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCT ACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTC CCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCG GTGAGGTAACCTTTTGGAGCCAGCCGCCTAAG 55