Nghiên cứu tổng hợp tạp chất liên quan a (5 amino 1h pyrazol 4 carboxamid) của allopurinol

BỘ Y TẾ NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP TẠP CHẤT LIÊN QUAN A (5-AMINO-1H-PYRAZOL-4-CARBOXAMID) CỦA ALLOPURINOL LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC Ths LỮ THIỆN PHÚC DS NGUYỄN MẠNH QUÂN Cần Thơ - 2018 ỜI CẢM ƠN ận văn tốt nghiệp này, đầu tiên, xin cảm ơn cần, chăm sóc, ủng hộ xin gửi lời cảm ơn đến thầy Ths Lữ Thiện Phúc trực tiếp hướng dẫn, cung cấp cho em kiến thức quý báo tạo điều kiện mặt để em hồn thành tốt đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy, cô khác Liên Bộ mơn Hóa phân tích – Kiểm nghiệm – Độc chất: thầy TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ, cô PGS.TS Nguyễn Thị Ngọc Vân, cô Ths Dương Thị Trúc Ly, cô Nguyễn Thị Đặng, anh Đỗ Trung Hiền tận tình giúp đỡ, hỗ trợ em suốt trình em làm đề tài Liên Bộ môn Cũng nhân đây, em xin gửi lời cảm ơn đến chị Dược sĩ Thu Hường anh chị làm đề tài kiểm nghiệm khóa 38, đặc biệt anh Dược sĩ Quốc Phú giúp đỡ em trình em thực đề tài Mình xin cảm ơn bạn làm đề tài kiểm nghiệm khóa 39, đặc biệt Duy Thái Nhật Tồn ln bên cạnh, giúp đỡ suốt thời gian vừa qua Bên cạnh đó, xin gửi lời cảm ơn đến bạn làm đề tài Hóa dược, Dược liệu, Bào chế hỗ trợ nhiệt tình trình thực đề tài Cảm ơn người bạn thân thiết lớp Dược khóa 39 ln cổ vũ, động viên để hoàn thành tốt đề tài I CAM ĐOAN ứu riêng hướng dẫn Thầy DS Nguyễn Mạnh Quân Các kết quả, số ừng cơng bố cơng trình Cần Thơ, ngày 12 tháng 06 năm 2018 Sinh viên Võ Thị Cẩm Nhung i MỤC LỤC i iv v DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ vii ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ ALLOPURINOL 1.1.1 Tính chất vật lý 1.1.2 Tính chất hố học .3 1.1.3 Tính chất dược lý 1.1.4 Tổng hợp allopurinol nghiên cứu .4 1.1.5 Các tạp chất allopurinol .6 1.1.6 Kiểm nghiệm allopurinol 1.2 TẠP CHẤT A CỦA ALLOPURINOL 1.2.1 Tính chất vật lý 1.2.2 Nguồn gốc phát sinh 1.2.3 Độc tính 1.2.4 Các cơng trình nghiên cứu tạp A 10 1.2.5 Kiểm nghiệm tạp A allopurinol 11 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU VÀ TRANG THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 20 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu .20 2.1.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 20 2.1.3 Nguyên liệu dùng nghiên cứu 20 2.1.4 Dụng cụ thiết bị 21 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 ii ằng phương pháp phân hủy allopurinol .22 ẩm tổng hợp 23 ết sản phẩm tổng hợp .24 ẩm tổng hợp 25 ởng đến hiệu suất tổng hợp tạp A 26 ịnh độ tinh khiết tạp A HPLC đầu dò PDA 27 2.2.7 Ứng dụng xác định độ tinh khiết tạp A HPLC đầu dò PDA 29 Chương KẾT QUẢ .30 3.1 KẾT QUẢ TỔNG HỢP TẠP A CỦA ALLOPURINOL 30 3.1.1 Phân hủy allopurinol NH3, NaHCO3 NaOH .30 3.1.2 Hiệu suất phản ứng allopurinol với NH3, NaHCO3 NaOH 31 3.2 KẾT QUẢ TINH CHẾ SẢN PHẨM TỔNG HỢP 31 3.3 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH SƠ BỘ ĐỘ TINH KHIẾT SẢN PHẨM TỔNG HỢP 32 3.3.1 Kết sắc ký lớp mỏng 32 3.3.2 Kết đo nhiệt độ nóng chảy 33 3.4 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC SẢN PHẨM TỔNG HỢP 34 3.4.1 Phổ UV – Vis 34 3.4.2 Phổ hồng ngoại 35 3.4.3 Phổ khối lượng 35 3.4.4 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân .37 3.5 ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC YẾU TỐ ĐẾN HIỆU SUẤT TỔNG HỢP TẠP A 39 3.5.1 Ảnh hưởng nồng độ NaOH 39 3.5.2 Ảnh hưởng thể tích NaOH 39 3.5.3 Ảnh hưởng nhiệt độ phản ứng 40 3.5.4 Ảnh hưởng thời gian phản ứng 40 3.5.5 Ảnh hưởng pH 41 3.6 KẾT QUẢ XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH ĐỘ TINH KHIẾT CỦA TẠP A BẰNG HPLC ĐẦU DÒ PDA 43 iii 43 44 47 48 XÁC ĐỊNH ĐỘ TINH KHIẾT TẠP A BẰNG 49 51 4.1 NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP VÀ TINH CHẾ TẠP A 51 4.1.1 Tổng hợp tạp A 51 4.1.2 Nghiên cứu tinh chế sản phẩm tổng hợp 52 4.2 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC TẠP A CỦA ALLOPURINOL 53 4.2.1 Phản ứng hóa học .53 4.2.2 Phổ khối lượng 54 4.2.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân .55 4.3 CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN HIỆU SUẤT TỔNG HỢP 55 4.3.1 Ảnh hưởng nồng độ NaOH 55 4.3.2 Ảnh hưởng thể tích NaOH 56 4.3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ phản ứng 57 4.3.4 Ảnh hưởng thời gian phản ứng 57 4.3.4 Ảnh hưởng pH 58 4.4 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH ĐỘ TINH KHIẾT TẠP A CỦA ALLOPURINOL BẰNG HPLC ĐẦU DỊ PDA 60 4.5 TÍNH MỚI VÀ HIỆU QUẢ KINH TẾ CỦA ĐỀ TÀI 65 KẾT LUẬN .67 KIẾN NGHỊ 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iv C CÁC TỪ VIẾT TẮT Ý nghĩa Hệ số bất đối Dược điển Anh DĐVN Dược điển Việt Nam DMSO Dimethyl sulfoxid HPLC High performance liquid chromatography IR Infrared Hồng ngoại k’ Capacity factor Hệ số dung lượng MS Mass spectrometry Khối phổ N Number of theoretical plate Số đĩa lý thuyết NMR Nuclear Magnetic Resonance PDA Photodiode array Dãy diod quang Rs Resolution Độ phân giải RSD% Relative standard deviation % S Peak area SKLM Sắc ký lớp mỏng tR Retention time tt/tt Sắc ký lỏng hiệu cao Cộng hưởng từ hạt nhân Độ lệch chuẩn tương đối Diện tích đỉnh Thời gian lưu Thể tích/thể tích Sắc ký lỏng UPLC Ultra performance liquid chromatography USP United States Pharmacopoeia Dược điển Mỹ UV - Vis Ultraviolet – Visible Tử ngoại – khả kiến siêu hiệu v ỤC CÁC BẢNG a allopurinol theo USP 41 allopurinol theo USP 41, BP 2016 ểm tra tạp A nguyên liệu allopurinol theo 14 Bảng 1.4 Thời gian lưu tạp chất liên quan allopurinol theo BP 2016 14 Bảng 1.5 Chương trình gradient kiểm tra tạp A nguyên liệu allopurinol theo USP 41 15 Bảng 1.6 Thời gian lưu tạp chất liên quan allopurinol theo USP 41 16 Bảng 1.7 Thời gian lưu tạp chất liên quan allopurinol theo DĐVN IV 17 Bảng 2.1 Nguyên liệu dùng cho tổng hợp, xác định độ tinh khiết cấu trúc tạp A 20 Bảng 2.2 Dụng cụ sử dụng nghiên cứu 21 Bảng 2.3 Trang thiết bị sử dụng nghiên cứu 21 Bảng 3.1 Hiệu suất phản ứng trung bình allopurinol với NH3, NaHCO3 NaOH 31 Bảng 3.2 Hiệu suất tinh chế 31 Bảng 3.3 Kết đo nhiệt độ nóng chảy 33 Bảng 3.4 Biện giải phổ 13C sản phẩm tổng hợp 38 Bảng 3.5 Kết khảo sát ảnh hưởng nồng độ NaOH 39 Bảng 3.6 Kết khảo sát ảnh hưởng thể tích NaOH 39 Bảng 3.7 Kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ phản ứng 40 Bảng 3.8 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian phản ứng 40 Bảng 3.9 Kết khảo sát ảnh hưởng pH kết tủa allopurinol lại sau phản ứng 41 Bảng 3.10 Kết khảo sát ảnh hưởng pH kết tinh tạp A 41 vi ằng quy trình với điều kiện tốt 42 ng 43 47 48 49 Bảng 3.16 Độ xác khác ngày 49 Bảng 3.17 Độ tinh khiết tạp A từ quy trình tổng hợp với điều kiện tốt yếu tố 49 Bảng 4.1 Điều kiện sắc ký thăm dò – thành phần pha động 61 Bảng 4.2 Điều kiện sắc ký thăm dò – pH nước acid phosphoric 62 Bảng 4.3 Kết khảo sát pH nước acid phosphoric 63 Bảng 4.4 Điều kiện sắc ký thăm dò – tốc độ dòng 63 Bảng 4.5 Kết khảo sát tốc độ dòng 64 Bảng 4.6 Điều kiện sắc ký thăm dò – nhiệt độ cột 64 Bảng 4.7 Kết khảo sát nhiệt độ cột 65 vii Ẽ, SƠ ĐỒ p A ịch sau phản ứng phân hủy allopurinol 30 ế 32 ẩm tổng hợp sắc ký lớp mỏng 33 Hình 3.4 Phổ UV – Vis sản phẩm tổng hợp 34 Hình 3.5 Phổ hồng ngoại sản phẩm tổng hợp 35 Hình 3.6 Phổ MS1 độ phân giải cao sản phẩm tổng hợp 35 Hình 3.7 Phổ MS1 sản phẩm tổng hợp 36 Hình 3.8 Phổ MS2 sản phẩm tổng hợp chế độ Daughter product ion 37 Hình 3.9 Phổ 13C – NMR tạp A 38 Hình 3.10 Overlay sắc ký đồ dung môi pha mẫu, tạp A, allopurinol, hỗn hợp allopurinol tạp A bước sóng 220nm 44 Hình 3.11 Overlay sắc ký đồ dung môi pha mẫu, tạp A, allopurinol, hỗn hợp allopurinol tạp A chế độ Max plot 44 Hình 3.12 Overlay sắc ký đồ tạp A mẫu tạp A bị phân hủy UV 220nm 45 Hình 3.13 Overlay sắc ký đồ tạp A mẫu tạp A bị phân hủy chế độ Max plot 45 Hình 3.14 Hình ảnh 3D pic tạp A 46 Hình 3.15 Phổ UV –Vis tạp A 46 Hình 3.16 Kiểm tra độ tinh khiết pic tạp A 46 Hình 3.17 Đường tuyến tính biểu diễn diện tích pic theo nồng độ phân tích 48 Hình 4.1 Ảnh hưởng tác nhân kiềm đến hiệu suất tổng hợp 51 Hình 4.2 Cơ chế phân hủy allopurinol 52 Hình 4.3 Kết tủa trắng BaSO4 53 Hình 4.4 Sự phân mảnh tạp A 54 Hình 4.5 Ảnh hưởng nồng độ NaOH đến hiệu suất tổng hợp 55 Hình 4.6 Sản phẩm tạo thành điều kiện NaOH 2M, 3M 4M 56