Tổng hợp tạp chất liên quan d (ethyl 5 amino 1h pyrazol 4 carboxylat) và tạp ethyl (e

TỔNG HỢP TẠP CHẤT LIÊN QUAN D (ETHYL 5AMINO-1H-PYRAZOL-4-CARBOXYLAT) VÀ TẠP ETHYL-(E/Z)-3-(2-CARBETHOXY-2CYANOETHENYL)AMINO-1H-PYRAZOL-4CARBOXYLAT CỦA ALLOPURINOL LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC CẦN THƠ – 2018 TỔNG HỢP TẠP CHẤT LIÊN QUAN D (ETHYL 5AMINO-1H-PYRAZOL-4-CARBOXYLAT) VÀ TẠP ETHYL-(E/Z)-3-(2-CARBETHOXY-2CYANOETHENYL)AMINO-1H-PYRAZOL-4CARBOXYLAT CỦA ALLOPURINOL LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC ThS LỮ THIỆN PHÚC TS ĐỖ CHÂU MINH VĨNH THỌ Cần Thơ – 2018 ỜI CẢM ƠN ứu Liên mơn Hóa phân tích – Kiểm nghiệm ỗi buồn, thuận lợi, khó khăn, cuối tơi ệp khơng qn gửi lời cảm ơn chân Cảm ơn Cha, Mẹ, người kính trọng, yêu thương Cảm ơn Anh hai tiếp sức cho em vật chất lẫn tinh thần Cảm ơn thầy ThS Lữ Thiện Phúc, người hỗ trợ truyền đạt kiến thức cho em trình làm nghiên cứu Thầy gương sáng cho em học hỏi để hồn thiện Cảm ơn thầy TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ, người tạo điều kiện cho em nhiều để hoàn thành nghiên cứu Thầy ln nguồn động lực cho hệ sinh viên tham gia nghiên cứu khoa học Cảm ơn thầy DS Nguyễn Mạnh Quân, người thầy người anh quan tâm, giúp đỡ em nhiều, truyền cho em nhiều kinh nghiệm quý giá để làm hành trang trường Cảm ơn cô Ngọc Vân, cô Trúc Ly, cô Đặng, anh Hiền hỗ trợ em thực đề tài nghiên cứu Cảm ơn chị Trang, chị Hường, chị Thảo, chị Thúy Ngọc, anh Hạnh, chị An, chị Xương, chị Như Ngọc, chị Mộng Ngọc, anh Thi, anh Phú, anh Dương, anh Truyền cho em nhiều lời khuyên bổ ích Em biết ơn quen biết anh, chị người tài giỏi Đặc biệt cảm ơn hai bạn Cẩm Nhung Duy Thái bên suốt trình làm đề tài, tin kỷ niệm quý thời sinh viên Và gửi lời cảm đến ơn thầy, cô môn Dược liệu, Hóa dược bạn làm đề tài khóa 39 Cảm ơn người nhiều! I CAM ĐOAN trình nghiên cứu riêng tơi hướng ện Phúc thầy TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ ận văn trung thực chưa công Cần Thơ, ngày 14 tháng năm 2018 Sinh viên Nguyễn Nhật Toàn i MỤC LỤC i iv v DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ vi ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ALLOPURINOL .3 1.1.1 Tính chất lý hóa 1.1.2 Dược lực học 1.1.3 Dược động học 1.1.4 Tổng hợp allopurinol nghiên cứu .4 1.1.5 Các tạp chất allopurinol .5 1.2 TẠP D CỦA ALLOPURINOL 1.2.1 Tính chất vật lý 1.2.2 Nguồn gốc phát sinh 1.2.3 Độc tính 1.2.4 Các công trình nghiên cứu tạp D 1.2.5 Giới hạn tạp D allopurinol 1.3 TẠP ETHYL-(E/Z)-3-(2-CARBETHOXY-2-CYANOETHENYL)AMINO-1HPYRAZOL-4-CARBOXYLAT CỦA ALLOPURINOL 1.3.1 Tính chất vật lý 10 1.3.2 Nguồn gốc phát sinh 10 ii 10 -(E/Z)-5-(2-carbethoxy-2-4-carboxylat 11 -5-(2-carbethoxy-2-cyanoethenyl)amino 11 12 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 12 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu .12 2.1.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 12 2.1.3 Nguyên liệu dùng nghiên cứu 12 2.1.4 Dụng cụ thiết bị 12 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.2.1 Tạp D allopurinol .13 2.2.2 Tạp ethyl-(E/Z)-5-(2-carbethoxy-2-cyanoethenyl)amino-1H-pyrazol-4carboxylat allopurinol 16 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 20 3.1 TẠP D CỦA ALLOPURINOL 20 3.1.1 Kết tổng hợp tạp D allopurinol 20 3.1.2 Kết tinh chế tạp D 21 3.1.3 Kết sơ độ tinh khiết tạp D .21 3.1.4 Kết quy trình xác định độ tinh khiết tạp D HPLC-PDA 22 3.1.5 Kết xác định cấu trúc tạp D .25 3.1.6 Kết xác định độ tinh khiết tạp D HPLC-PDA 29 3.2 TẠP ETHYL-(E/Z)-5-(2-CARBETHOXY-2-CYANOETHENYL)AMINO-1HPYRAZOL-4-CARBOXYLAT (TẠP F – USP 38) CỦA ALLOPURINOL .31 iii -2-cyano-3-hydrazinylacrylat 31 -5-(2-carbethoxy-2-cyanoethenyl)amino-1H .34 45 45 45 4.1.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến phản ứng 45 4.1.3 Xác định tạp D phương pháp phổ nghiệm 48 4.1.4 Kiểm tra độ tinh khiết tạp D HPLC – PDA 49 4.2 TỔNG HỢP TẠP ETHYL-(E/Z)-5-(2-CARBETHOXY-2CYANOETHENYL)AMINO-1H-PYRAZOL-4-CARBOXYLAT (TẠP F – USP 38) CỦA ALLOPURINOL 52 4.2.1 Cơ chế phản ứng .52 4.2.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến phản ứng 53 4.2.3 Xác định tạp F phương pháp phổ nghiệm 54 4.2.4 Kiểm tra độ tinh khiết tạp F HPLC – PDA .55 KẾT LUẬN 57 KIẾN NGHỊ 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iv Ý nghĩa factor DĐVN HLA-B HPLC 10 11 12 13 15 16 17 18 19 20 21 22 23 IR k’ MS N NMR PDA Rs RSD% S SKLM tR TFA USP UV – Vis WHO Dược điển Việt Nam The human leukocyte antigen B High performance liquid chromatography Infrared Capacity factor Mass spectrometry Number of theoretical plate Nuclear Magnetic Resonance Photodiode arrays Resolution Relative standard deviation % Peak area Sắc ký lớp mỏng Retention time Acid trifluoroacetic United States Pharmacopeia Ultraviolet – Visible World Health Organization Hệ số bất đối Dược điển Anh Điện di mao quản Kháng nguyên bạch cầu B người Sắc ký lỏng hiệu cao Hồng ngoại Hệ số dung lượng Khối phổ Số đĩa lý thuyết Cộng hưởng từ hạt nhân Dãy diod quang Độ phân giải Độ lệch chuẩn tương đối Diện tích đỉnh Thời gian lưu Dược điển Mỹ Tử ngoại – khả kiến Tổ chức Y tế giới v ỤC CÁC BẢNG 38 2.1 2.2 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 3.10 3.11 3.12 ợc điển 5-(2-carbethoxy-2-cyanoethenyl)aminodược điển Mỹ 41 Nguyên liệu dùng cho tổng hợp Dụng cụ thiết bị sử dụng nghiên cứu Kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ khảo sát đến phản ứng dựa SKLM Kết khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ nguyên liệu/hydrazin đến phản ứng dựa khối phổ Hiệu suất trình tổng hợp – tinh chế tạp D So sánh độ dịch chuyển hóa học SPTH (tạp D) chuẩn tạp D allopurinol Tính tương thích hệ thống Kết khảo sát ảnh hưởng thể tích hydrazin hydrat đến hiệu suất tổng hợp Kết khảo sát ảnh hưởng pH đến hiệu suất tổng hợp Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian phản ứng đến hiệu suất tổng hợp Kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ phản ứng đến hiệu suất tổng hợp Kết khảo sát ảnh hưởng lượng SPTG đến hiệu suất tổng hợp Kết khảo sát ảnh hưởng thể tích ete đến hiệu suất tổng hợp Tính tương thích hệ thống Trang 11 12 12 20 20 21 22 27 31 31 31 31 35 35 36 vi Ẽ, SƠ ĐỒ Trang 21 21 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 3.10 3.11 3.12 3.13 3.14 3.15 3.16 3.17 3.18 3.19 3.20 3.21 3.22 3.23 3.24 3.25 ẫu, dung môi pha động, tạp D, nguyên liệu, hỗn hợp tạp D – nguyên liệu 250nm Overlay sắc ký đồ dung môi pha mẫu, dung môi pha động, tạp D, nguyên liệu, hỗn hợp tạp D – nguyên liệu chế độ max plot Hình ảnh 3D pic tạp D Kiểm tra độ tinh khiết pic tạp D Phổ UV – Vis tạp D Phổ IR tạp D Phổ MS tạp D chế độ ESI+ Phổ MS chế độ daughter product ion tạp D Phổ 13C – NMR tạp D Công thức cấu tạo sản phẩm tổng hợp (tạp D allopurinol) Sắc ký đồ tạp D trước tinh chế chế độ Max plot Hình ảnh 3D tạp D trước tinh chế Sắc ký đồ tạp D sau tinh chế chế độ Max plot Hình ảnh 3D tạp D sau tinh chế SPTG Độ tinh khiết SPTG SKLM Phổ UV – Vis SPTG Phổ IR SPTG Phổ MS SPTG Tạp F Độ tinh khiết tạp F SKLM Overlay sắc ký đồ dung môi pha mẫu, dung môi pha động, tạp F, nguyên liệu, SPTG, hỗn hợp tạp F – nguyên liệu – SPTG 250nm Overlay sắc ký đồ dung môi pha mẫu, dung môi pha động, tạp F, nguyên liệu, SPTG, hỗn hợp tạp F – nguyên liệu – SPTG chế độ max plot 23 23 24 24 25 25 26 26 28 28 29 29 30 30 32 32 33 33 34 35 35 37 37