BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN NGHIÊN CỨU HỆ GEN CHƯƠNG TRÌNH “NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ TIÊN TIẾN PHỤC VỤ BẢO VỆ VÀ CHĂM SÓC SỨC KHỎE CỘNG[.]
BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN NGHIÊN CỨU HỆ GEN CHƯƠNG TRÌNH: “NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ TIÊN TIẾN PHỤC VỤ BẢO VỆ VÀ CHĂM SÓC SỨC KHỎE CỘNG ĐỒNG”- MÃ SỐ: KC.10/16-20 BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ GEN THẾ HỆ MỚI TRONG SÀNG LỌC BỆNH PARKINSON CÓ YẾU TỐ DI TRUYỀN Mã số: KC.10.40/16-20 Chủ nhiệm đề tài: TS Nguyễn Đăng Tơn Cơ quan chủ trì: Viện Nghiên cứu hệ gen Viện Hàn lâm KH&CN VN HÀ NỘI, 2021 LỜI CẢM ƠN Chúng xin trân trọng cám ơn Lãnh đạo Bộ Khoa học Bộ Khoa học Cơng nghệ, Chương trình Nghiên cứu ứng dụng phát triển công nghệ tiên tiến phục vụ bảo vệ chăm sóc sức khỏe cộng đồng (KC10/16-20) tài trợ kinh phí để thực nhiệm vụ Chúng tơi xin trân trọng cảm ơn Lãnh đạo chuyên viên Vụ Khoa học ngành Kinh tế Kỹ thuật, Lãnh đạo chuyên viên Văn phòng Các chương trình trọng điểm quốc gia, Ban Chủ nhiệm Chương trình KC10/16-20 tạo điều kiện, hỗ trợ thủ tục để đề tài triển khai tiến độ Nhóm nghiên cứu xin trân trọng cảm ơn Lãnh đạo Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, Lãnh đạo Viện Nghiên cứu hệ gen chuyên viên Phòng QLTH giúp đỡ thủ tục trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn Lãnh đạo đơn vị hợp tác y bác sỹ (Học viện Quân y, bệnh viện Quân y 103, viện Lão khoa Trung ương, bệnh viên Trường đại học Y – Dược thành phố Hồ chí minh) triển khai điều tra, thu thập hồ sơ mẫu bệnh nhân Xin chân thành cảm ơn thành viên tham gia thực đề tài đồng hành Chủ nhiệm đề tài suốt trình thực Hà Nội, tháng 03 năm 2021 TM Nhóm nghiên cứu Chủ nhiệm đề tài TS Nguyễn Đăng Tôn i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN I MỤC LỤC II DANH MỤC CÁC HÌNH VI DANH MỤC CÁC BẢNG VIII DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT XI MỞ ĐẦU PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm bệnh Parkinson 1.2 Chẩn đoán bệnh PD 1.3 Các gen liên quan đến PD 11 1.4 Định hướng liệu pháp điều trị PD 22 1.4.1 Liệu pháp tế bào định hướng điều trị PD 22 1.4.2 Liệu pháp gen định hướng điều trị bệnh Parkinson 26 1.5 Những thách thức kỳ vọng nghiên cứu bệnh Parkinson 30 1.6 Tình hình nghiên cứu nước 32 PHẦN NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 Đối tượng nghiên cứu 36 2.2 Các thiết bị, dụng cụ sử dụng nghiên cứu 37 2.3 Phương pháp nghiên cứu 38 2.3.1 Tách chiết DNA tổng số 39 2.3.2 Xác định nồng độ DNA tổng số 40 2.3.3 Thiết lập thư viện DNA 40 2.3.4 Giải trình tự thư viện DNA làm giàu máy NextSeq 500 41 2.3.5 Xử lý liệu 41 2.3.6 Phát biến thể 42 2.3.7 Chú giải biến thể phân tích chuyên sâu 43 2.3.8 Phương pháp PCR 44 2.3.9 Phương pháp giải trình tự Sanger 46 2.3.9.1 PCR giải trình tự 46 2.3.9.2 Tinh sản phẩm PCR giải trình tự 47 ii 2.3.9.3 Biến tính sản phẩm PCR điện di mao quản máy giải trình 47 tự 2.3.10 Phương pháp MLPA 48 2.3.10.1 Thực phản ứng MLPA 49 2.3.10.2 Điện di mao quản phân tách đoạn 50 2.3.10.3 Phân tích kết phần mềm Coffalyzer 50 2.3.11 Real-time PCR 51 PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 53 THU THẬP MẪU BỆNH VÀ HỒ SƠ BỆNH NHÂN 53 3.2 XÁC ĐỊNH CÁC ĐỘT BIẾN ĐIỂM (SNV), INDEL CỦA CÁC GEN LIÊN QUAN ĐẾN BỆNH PARKINSON 58 3.2.1 Tách chiết DNA tổng số 58 3.2.2 Thiết lập thư viện, làm giàu đánh giá thư viện, giải tình tự tồn exome 64 3.2.2.1 Thiết lập thư viện, làm giàu đánh giá thư viện 64 3.2.2.2 Kết đánh giá liệu thô (Raw data) 65 3.2.3 Xác định thay đổi/đột biến điểm (SNV) Indel 72 3.2.3.1 Xác định SNV 72 3.2.3.2 Xác định indel 78 3.2.4 Xác định biến thể số lượng (copy number variation CNV) 84 3.2.5 Sàng lọc biến thể gen liên quan đến bệnh Parkinson 87 3.2.6 Các biến thể có tần số thấp 101 3.2.7 Các biến thể gen PRKN gen PINK1 104 3.2.8 Những đột biến liên quan đến bệnh Parkinson 111 3.3 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ GEN THẾ HỆ MỚI TRONG SÀNG LỌC BỆNH PARKINSON TRÊN ĐỐI TƯỢNG CÓ NGUY CƠ 115 3.3.1 Cơ sở khoa học để xây dựng quy trình 115 3.3.2 Mục đích phạm vi áp dụng 125 3.3.2.1 Mục đích 125 3.3.2.2 Phạm vi áp dụng 125 3.3.3 Các thiết bị nguyên vật liệu cần thiết iii 125 3.3.3.1 Các trang thiết bị 125 3.3.3.2 Nguyên vật liệu hóa chất 125 3.3.4 Sơ đồ quy trình 126 3.3.5 Thuyết minh bước quy trình 128 3.3.5.1 Tách chiết DNA tổng số 128 3.3.5.2 Định lượng DNA tổng số 129 3.3.5.3 Giải trình tự tồn hệ gen mã hóa (whole exome sequencing WES) 129 3.3.5.4 Xử lý liệu thu từ giải trình tự tồn hệ gen mã hóa 155 3.3.5.4 Giải trình tự Sanger 163 3.3.5.5 Phản ứng MLPA 165 3.4 ĐÁNH GIÁ QUY TRÌNH ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ GEN THẾ HỆ MỚI TRONG SÀNG LỌC BỆNH PARKINSON TRÊN CÁC ĐỐI TƯỢNG CÓ NGUY CƠ 169 3.4.1 Cơ sở việc đánh giá quy trình 3.4.1.1 Giải trình tự Sanger 169 170 3.4.1.2 Phương pháp khuếch đại đa đầu dò phụ thuộc vào phản ứng nối (Multiplex ligation-dependent probe amplification-MLPA) 171 3.4.1.3 Giải trình tự hệ giải trình tự tồn exon (WES Whole exome sequencing) 173 3.4.2 Các tiêu chí đánh giá quy trình 176 3.4.3 Xác định độ nhạy độ đặc hiệu 177 3.4.4 Đánh giá dựa kết nghiên cứu 178 3.4.4.1 Về kết tách chiết định tính DNA tổng số 178 3.4.4.2 Về kết định lượng DNA tổng số 179 3.4.4.3 Thiết lập thư viện, làm giàu đánh giá thư viện, giải tình tự toàn exome 184 3.4.4.4 Kết đánh giá liệu thô (Raw data) 186 3.4.4.5 Xác định thay đổi/đột biến điểm (SNV) 189 3.4.4.6 Xác định indel 201 3.4.4.7 Xác định biến thể với MLPA 203 3.4.5 Đánh giá quy trình nhóm mẫu mở rộng iv 205 3.4.5.1 Tách chiết DNA tổng số 207 3.4.5.2 Kết tách chiết định tính DNA tổng số 207 3.4.5.3 Kết định lượng DNA tổng số 208 3.4.5.4 Thiết lập thư viện, làm giàu đánh giá thư viện, giải tình tự tồn exome 209 3.4.5.5 Kết đánh giá liệu thô (Raw data) 211 3.4.5.6 Xác định thay đổi/đột biến điểm (SNV) 214 3.4.5.7 Kiểm chứng biến thể phương pháp đọc trình tự Sanger 221 3.4.5.8 Xác định biến thể CNV phương pháp MLPA 223 PHẦN THẢO LUẬN CHUNG 225 4.1 Thu thập mẫu bệnh nhân 226 4.2 Sàng lọc biến thể liên quan đến bệnh Parkinson 227 4.3 Xây dựng đánh giá quy trình 233 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 236 KẾT LUẬN 236 KIẾN NGHỊ 236 TÀI LIỆU THAM KHẢO 238 PHỤ LỤC 252 v DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Con đường sinh tổng hợp dopamine 27 Hình Sơ đồ chi tiết thực nghiên cứu sử dụng WES 39 Hình Các triệu chứng khơng vận động bệnh nhân EOPD 54 Hình Ảnh điện di đại diện mẫu kiểm tra DNA gel agarose 0.8% 58 Hình Ảnh điện di đồ thư viện đại diện số mẫu bệnh mẫu đối chứng 65 Hình Phân bố loại SNV phát 66 bệnh nhân Parkinson 74 Hình Phân bố loại SNV phát 90 mẫu đối chứng 78 Hình Kết thống kê indel 66 mẫu EOPD 81 Hình Kết thống kê indel 90 mẫu đối chứng 84 Hình 10 Kết phân tích MLPA mẫu bệnh nhân Parkinson 85 Hình 11 Kết Real-time PCR kiểm tra số PRKN 86 Hình 12 Các bước sàng lọc biến thể liên quan đến bệnh Parkinson 89 Hình 13 Biểu đồ thể biến thể nhóm bệnh nhân 93 Hình 14 Biểu đồ thể biến thể nhóm bệnh nhân nhóm chứng 94 Hình 15 Sự phân bố tần số biến thể gen PRKN PINK1 109 Hình 16 Ảnh hưởng đột biến PRKN 110 Hình 17 Ảnh hưởng đột biến PINK1 111 Hình 18 Sơ đồ quy trình ứng dụng kỹ thuật NGS sàng lọc bệnh Parkinson 126 Hình 19 Lấy hộp nhựa đựng Flow cell khỏi túi giấy bạc 146 Hình 20 Lấy Flow cell khỏi khay nhựa 146 Hình 21 Hướng dẫn tra mẫu thư viện biến tính vào reagent cartridge 150 Hình 22 Quy trình phân tích liệu WES 158 Hình 23 Các bước thực phản ứng MLPA 167 Hình 24 Ảnh điện di đại diện mẫu kiểm tra DNA gel agarose 0.8% 178 Hình 25 Ảnh điện di đồ thư viện đại diện số mẫu 186 Hình 26 Tỉ lệ biến thể SNV xác định 66 bệnh nhân EOPD 192 Hình 27 Tỉ lệ biến thể dạng SNV xác định 66 bệnh nhân EOPD 203 Hình 28 Kết phân tích MLPA mẫu bệnh nhân Parkinson 204 Hình 29 Ảnh điện di đại diện mẫu kiểm tra DNA gel agarose 0.8% 208 vi Hình 30 Ảnh điện di đồ thư viện đại diện số mẫu bệnh mẫu chứng 211 Hình 31 Kết xác định số biến thể kỹ thuật đọc trình tự Sanger 223 Hình 32 Kết phân tích MLPA mẫu bệnh mẫu đối chứng 224 vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Các đặc điểm vận động không vận động PD Bảng Các gen locus gen liên quan đến PD rải rác 22 Bảng Trình tự mồi khuếch đại số SNV liên quan đến Parkinson khởi phát sớm 45 Bảng Thành phần phản ứng PCR giải trình tự 47 Bảng Thông số điện di mao quản máy 3500 50 Bảng Mối liên hệ giá trị DQ số mẫu nghiên cứu 51 Bảng Trình tự mồi cho phản ứng real-time PCR 52 Bảng Các thông tin liên quan đến 156 mẫu nghiên cứu 53 Bảng Danh sách 66 mẫu bệnh nhân Parkinson khởi phát sớm 54 Bảng 10 Danh sách mẫu đối chứng nghiên cứu 56 Bảng 11 Bảng đánh giá chất lượng DNA mẫu bệnh nhân EOPD 59 Bảng 12 Bảng đánh giá chất lượng DNA mẫu đối chứng 61 Bảng 13 Chất lượng 20 thư viện đại diện 64 Bảng 14 Kết đánh giá liệu thô mẫu bệnh nhân Parkinson 66 Bảng 15 Kết đánh giá liệu thô mẫu đối chứng 69 Bảng 16 Số lượng SNV xác định nhóm mẫu bệnh nhân EOPD 72 Bảng 17 Số lượng SNV xác định 90 mẫu đối chứng 75 Bảng 18 Thống kê số lượng Indel 66 mẫu EOPD 79 Bảng 19 Thống kê số lượng Indel 90 mẫu đối chứng 81 Bảng 20 Các gen locus có liên quan đến bệnh Parkinson di truyền 87 Bảng 21 Tổng hợp loại biến thể 24 gen có liên quan đến Parkinson 28 bệnh nhân có yếu tố gia đình (tiền sử gia đình có người mắc Parkinson) 90 Bảng 22 Tổng hợp loại biến thể 24 gen có liên quan đến Parkinson 38 bệnh nhân khơng có yếu tố gia đình 91 Bảng 23 Tổng hợp loại biến thể 24 gen có liên quan đến Parkinson 90 mẫu đối chứng 92 Bảng 24 Một số SNV liên quan đến bệnh Parkinson 95 viii Phụ lục THANG ĐIỂM TÂM THẦN TỐI THIỂU (MMSE) Đánh giá định hướng: Orientation (nói câu đạt điểm) Điểm đạt: … a Hãy nói cho biết hôm thứ ? b Hãy nói cho biết hơm ngày ? c Hãy nói cho biết tháng tháng ? d Hãy cho biết mùa mùa ? e Hãy cho biết năm năm nào? g Hãy cho biết buồng (hoặc tầng nào, hay khoa nào)? h Hãy cho biết đâu? i Hãy cho biết thuộc quận (huyện) nào? k Hãy cho biết thuộc tỉnh (thành phố) nào? l Hãy cho biết nước nào? Đánh giá khả ghi nhận: Registation (trí nhớ tức thì) Điểm đạt: … - Đọc tên đồ vật (quả táo, bàn, đồng xu ) cách chậm rãi, rõ ràng; sau yêu cầu bệnh nhân nhắc lại (ghi điểm cho câu trả lời Xin nhắc tên đồ vật bệnh nhân thuộc để sử dụng cho phần D) Đánh giá ý tính tốn: Attention and Calculation - Điểm đạt: … - Yêu cầu bệnh nhân làm phép tính 100 - liên tiếp lần (ghi điểm cho lần trả lời đúng) - Nếu bệnh nhân không làm lần nghiệm pháp 100 - 7, yêu cầu bệnh nhân làm liệu pháp khác: Đánh vần ngược từ: HƯƠNG -> GNƠƯH (Số điểm ghi theo thứ tự xếp xác từ) Đánh giá khả hồi ức nhớ lại: Recall - Điểm đạt: … - Yêu cầu bệnh nhân nhắc lại tên đồ vật nêu phần B (cho điểm cho câu trả lời đúng) 28 Đánh giá ngôn ngữ: Language and copy - Điểm đạt: … a Gọi tên2 đồ vật: (cho điểm cho lần gọi tên đồ vật) - Đưa bệnh nhân xem đồng hồ hỏi gì? - Đưa bệnh nhân xem bút chì hỏi gì? b Nhắc lại câu (đánh giá tính lưu lốt ngơn ngữ): u cầu bệnh nhân nhắc lại câu "không thể, nếu, nhưng, nhiên" (nếu nhắc lại hoàn toàn cho điểm) c Mệnh lệnh theo giai đoạn: Đưa mảnh giấy trắng yêu cầu bệnh nhân câu "Cầm lấy tờ giấy tay phải, gấp đôi tờ giấy lại đặt xuống bàn" (Ghi điểm cho hành động đúng) d Đọc làm theo dẫn: Đưa bệnh nhân tờ giấy to có ghi rõ mệnh lệnh "Hãy nhắm mắt lại" Yêu cầu bệnh nhân đọc làm theo: (cho điểm làm đúng) e Viết câu: Đưa bệnh nhân tờ giấy trắng yêu cầu bệnh nhân viết câu (câu phải có chủ từ động từ phải có nghĩa, sai ngữ pháp, tả được) (Cho điểm viết được) Đánh giá khả tưởng tượng, trừu tượng: Điểm đạt: … Yêu cầu bệnh nhân vẽ lại hình vẽ sẵn, hình vẽ phải gồm 10 góc phải có góc lồng vào (Cho điểm vẽ đúng) Tổng số điểm: …………… Kết test: ……… ………………… 29 CÁCH ĐỌC KẾT QUẢ TEST MMSE Khơng có suy giảm nhận thức: ≥ 24 điểm Suy giẩm nhận thức nhẹ : 20 – 23 điểm Suy giảm nhận thức vừa : 14- 19 điểm Suy giảm nhận thức nặng : 00 – 13 điểm … , ngày tháng năm 2019 Bệnh nhân làm nghiên cứu Nghiên cứu viên Ths Bs Hoàng Thị Dung Xác nhận bác sỹ Khoa Thần kinh 30 31 Phụ lục II.1 DANH SÁCH BỆNH NHÂN PARKINSON STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 Tuổi khởi phát ID Họ tên Giới tính Năm sinh Nhóm mẫu có gia đình (tiền sử gia đình có người mắc Parkinson) Lê T.T PKS1 Nữ 1959 Vũ T.T.H PKS2 Nữ 1972 Đặng T.M PKS11 Nữ 1965 Đặng T.C PKS11.C2 Nữ 1959 Vũ T.H PKS13 Nữ 1970 Đặng V.N PKS15 Nam 1964 Lê T.T PKS16 Nam 1971 Đàm T.H PKS28 Nữ 1975 Trần V.D PKS29 Nam 1972 Ros P PKS33 Nữ 1976 Trương M.H PKS40 Nam 1968 Giang T.B PKS43 Nam 1975 Huỳnh T.T.T PKS50 Nữ 1968 Âu N.T PKS53 Nữ 1982 Âu N.L PKS54 Nữ 1988 Âu N.P PKS55 Nữ 1985 Trần T.T.X PKS58 Nữ 1977 Nguyễn T.A.N PKS63 Nữ 1979 Thái T.T PKS64 Nữ 1973 Võ H.S PKS69 Nam 1978 Hoàng V.D PKS73 Nam 1967 Đào T.T.V PKS75 Nữ 1965 Đặng V.G PKS83 Nam 1992 Nguyễn V.M PKS86 Nam 1962 Nguyễn M.Q PKS86.A Nam 1961 Dương T.N PKS88 Nữ 1985 Võ T.T PKS93 Nam 1981 Ngô T.B.N PKS111 Nữ 1986 Nhóm mẫu khơng gia đình (tiền sử gia đình khơng có người bị Parkinson) Nguyễn T.V PKS3 Nữ 1964 Lê V.C PKS4 Nam 1967 Phạm V.T PKS5 Nam 1965 Vũ T.L PKS7 Nữ 1959 Phạm T.T PKS8 Nữ 1968 Đỗ T.Đ PKS9 Nữ 1968 Nguyễn T.H PKS10 Nữ 1967 Nguyễn T.U PKS12 Nữ 1964 49 35 44 46 41 48 38 33 36 39 46 39 48 28 25 30 39 35 39 29 40 45 24 37 52 30 32 24 37 48 37 48 44 45 45 48 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 PKS14 PKS18 PKS19 PKS20 PKS21 PKS22 PKS23 PKS24 PKS26 PKS27 PKS30 PKS31 PKS32 PKS34 PKS37 PKS38 PKS39 PKS41 PKS42 PKS45 PKS46 PKS47 PKS48 PKS49 PKS51 PKS52 PKS56 PKS57 PKS60 PKS61 PKS62 PKS65 PKS66 PKS67 PKS68 PKS70 PKS71 PKS72 PKS76 PKS77 PKS78 PKS81 PKS82 Lê T.A Y D.N Trần T.T.H Nguyễn T.M.T Trần T.P.T Lê B.Đ Vương P.H Lê N.H Đỗ T.P.T Châu H.Q Nguyễn V.U Bùi H.T Nguyễn H.D Phạm T.H Bùi T.H Nguyễn B.D Trương H.T Nguyễn T.H Dương H.Q Nguyễn T.H Lê M.T Phan K.T Vày Q.P Đậu T.N Lê T.U.N Nguyễn T.H.L Nguyễn T.T.H Ngô V.Q Trần K.D Ngô N.M Đỗ T.M.O Trần T.T.K Trần Đ.M Nguyễn A.T Lương T.N.L Phạm H.Q Huỳnh B.H Phạm T.N Nguyễn T.H Nguyễn Đ.T Lê V.H Phạm V.Đ Nguyễn T.V Nam Nam Nữ Nữ Nữ Nam Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nữ Nữ Nam Nam Nữ Nam Nữ Nam Nữ Nam Nữ Nữ Nữ Nữ Nam Nam Nam Nữ Nữ Nam Nam Nữ Nam Nam Nữ Nữ Nam Nam Nam Nữ 1986 1972 1980 1985 1975 1979 1970 1982 1971 1983 1971 1974 1976 1978 1970 1964 1964 1974 1974 1976 1984 1959 1974 1978 1983 1978 1977 1976 1977 1982 1980 1978 1977 1983 1978 1979 1976 1986 1971 1965 1972 1982 1972 25 37 36 30 40 38 36 31 40 32 39 39 39 34 38 33 46 37 40 40 28 32 40 29 35 38 32 31 36 31 33 32 37 34 36 35 38 32 48 38 47 25 37 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 Nguyễn T.H Nam 1983 Trịnh T.P Nữ 1970 Võ P Nữ 1982 Cao T.D Nam 1986 Lê V.C Nam 1983 Phạm V.D Nam 1971 Hoàng T.L Nữ 1982 Trịnh V.H Nam 1981 Cao T.T Nữ 1976 Đồng M.Đ Nam 1980 Mạch T.M.H Nữ 1981 Bùi L.T Nữ 1962 Nguyễn V.K Nam 1974 Phạm T.C Nam 1976 Phạm Đ.M Nam 1977 Nguyễn T.T.T Nữ 1975 Trần T.N Nữ 1973 Nguyễn T.G Nữ 1979 Lê C.H Nam 1980 Trần V.C Nam 1975 Phan T.K.T Nữ 1961 Các mẫu bệnh nhân Parkinson khác (không làm WES) PKS6 Nguyễn V.S Nam 1964 PKS11.C1 Đặng T.M Nữ 1946 PKS17 Vũ T.L Nữ 1960 PKS25 Nguyễn T.H Nữ 1976 PKS35 Phí Đ.T Nam 1952 PKS36 Nguyễn N.T Nữ 1971 PKS44 Võ V.T Nam 1972 PKS59 Đỗ T L Nữ 1975 PKS62 Đỗ T.M.O Nữ 1980 PKS74 Trần N.C Nam 1975 PKS76.CG Nguyễn T.H Nữ 1993 PKS79 Nguyễn T.T Nữ 1967 PKS80 Phạm T.V Nữ 1964 PKS87 Huỳnh T.Q.A Nữ 1974 PKS91 Lê V.L Nam 1979 PKS94 Đặng K.H Nam 1970 PKS97 Phạm T.Q Nữ 1976 PKS101 Ngô X.N Nữ 1980 PKS107 Nguyễn M.H Nam 1972 PKS112 Nguyễn T.Y.L Nữ 1967 PKS114 Bùi T.X Nữ 1972 PKS84 PKS85 PKS89 PKS90 PKS92 PKS95 PKS96 PKS98 PKS99 PKS100 PKS102 PKS103 PKS104 PKS105 PKS106 PKS108 PKS109 PKS110 PKS113 PKS115 PKS116 32 48 36 28 34 32 35 34 35 37 37 36 37 40 40 40 38 35 33 45 45 48 63 40 47 40 40 39 33 42 48 49 39 38 39 39 38 39 40 - 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 PKS117 PKS118 PKS119 PKS120 PKS121 PKS122 PKS123 PKS124 PKS125 PKS126 PKS127 PKS128 PKS129 PKS130 PKS131 PKS132 PKS133 PKS134 PKS135 PKS136 PKS137 PKS138 PKS139 PKS140 PKS141 PKS142 PKS143 PKS144 PKS145 PKS146 PKS147 PKS148 PKS149 PKS150 PKS151 PKS152 PKS153 PKS154 PKS155 PKS156 PKS157 PKS158 PKS159 Đỗ T.D Nguyễn T.N Lê V H Nguyễn T.M Nguyễn T.C Nguyễn X.D Nguyễn B.H Phan V.T Phan V.L Lê C.T Phù T.K.L Võ T.M Hoàng T.D.T Nguyễn T.N Vũ V.N Nguyễn V.Q Hoàng T.H Trần T.B Đặng T.N Phan T.C Lê V.D Nguyễn T.T Đinh T.C Ngô Đ Q Hoàng T.L Nguyễn T.N Cao X.N Nguyễn D.T Dương V.D Nguyễn H.D Phạm Đ.T Vũ T.T Đoàn T.M Vũ V.T Lê T.L Lê X.T Phan T.P Nguyễn T.X Nguyễn T.T Kiều V.L Nguyễn T.V Phùng N.A Trần Đ.D Nữ Nữ Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nữ Nam Nam Nam Nữ Nữ Nữ Nam Nam Nữ Nữ Nam Nữ Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nữ Nam Nữ Nữ Nam Nam Nữ Nữ Nam 1956 1949 1940 1953 1955 1946 1977 1981 1971 1982 1973 1982 1980 1974 1984 1966 1974 1965 1965 1951 1948 1936 1942 1947 1955 1946 1973 1976 1946 1971 1950 1956 1955 1954 1955 1957 1952 1959 1950 1981 1971 61 40 38 37 35 40 37 36 40 31 - 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 PKS160 PKS161 PKS162 PKS163 PKS164 PKS165 PKS166 PKS167 PKS168 PKS169 PKS170 PKS171 PKS172 PKS173 PKS174 PKS175 PKS176 PKS177 PKS178 PKS179 PKS180 PKS181 PKS182 PKS183 PKS184 PKS185 PKS186 PKS187 PKS188 PKS189 PKS190 PKS191 PKS192 PKS193 PKS194 PKS195 PKS196 PKS197 PKS198 PKS199 PKS200 PKS201 PKS202 Vi T.T Nguyễn T.C Lê T.N Trần T.N Tống T.T Bùi T.N Đinh T.N Nguyễn T.H Nguyễn T.N Nguyễn H.V Trịnh Đ.Q Lê T.S Hồng T.T Đặng T.N Đặng V.L Nguyễn V.Đ Ngơ T.D Lê T.S Hồng N.T Nguyễn V.H Đỗ H.M Nguyễn V.B Ngơ Đ.Q Đồn V.B Tạ Q.P Ngô N.T Trần N.L Khổng T.T.T Nguyễn N.K Nguyễn V.T Đinh T.C Đỗ T.T Trương T.A Nguyễn T.H Nguyễn T.D Phạm T.T.H Nguyễn T.H Nguyễn V.X Nguyễn H.T Hoàng N.H Phạm T.Q Nguyễn M.D Bùi T.H Nữ Nam Nữ Nữ Nữ Nữ Nữ Nữ Nữ Nam Nam Nữ Nữ Nữ Nam Nam Nữ Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nam Nữ Nam Nam Nữ Nữ Nữ Nữ Nữ Nữ Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nữ 1977 1950 1978 1952 1952 1960 1960 1948 1939 1945 1981 1952 1958 1956 1952 1966 1971 1950 1937 1949 1953 1936 1953 1952 1946 1958 1958 1972 1948 1946 1960 1953 1959 1958 1955 1958 1958 1962 1959 1959 1957 - 208 209 210 211 PKS203 PKS204 PKS205 PKS206 Bùi V.B Lê B.Q Nguyễn T.M Nguyễn V.H Nam Nam Nữ Nam 1958 1955 1957 1959 - Phụ lục II.2 DANH SÁCH NHĨM ĐỐI CHỨNG STT Kí hiệu mẫu Họ tên Tuổi Giới ĐỊA CHỈ LIÊN HỆ Hữu Bằng – Thạch Thất- Hà Nội Khoa A4- Bệnh viện 103 Khoa A4- Bệnh viện 103 Khoa A4 – Bệnh viện 103 Vạn Phúc – Hà ĐôngHà Nội Khoa a4- BV103 Khoa a4- BV103 Khoa A4- Bv 103 Bệnh viện 17- Đà Nẵng Tản Lĩnh – Bà Vì- Hà Nội 117B- Khu A- TT khí Hà Nội Khoa A4- Bệnh viện 103 Khoa A7- Bệnh viện 108 Hải Long- Như Thanh- Thanh Hóa Kho K826- Xuân Phúc- Như ThanhThanh Hóa Nhà máy Z49- Bộ tư lệch c13 Khoa A4 – BV 103 Sư đồn 390- QĐ1Bỉm Sơn – Thanh Hóa Lê Lợi – Hà ĐơngHN Liên Minh – Thanh Trì- HN Phú Lương – Hà Đông – HN NCG1 Phan V.T 33 Nam NCG2 Chu T.T.H 38 Nữ NCG3 Hoàng T.D 34 Nữ NCG4 Nguyễn T.B.T 38 Nữ NCG Phạm T.T 38 Nam NCG6 NCG7 NCG8 NCG9 Nguyễn T.N Nguyễn Đ.T Lại V.T Nguyễn V.Q 40 37 37 39 Nữ Nam Nam Nam 10 NCG10 Phạm T.H 33 Nam 11 NCG11 Đào T.T 38 Nữ 12 NCG12 Dương T.H.N 30 Nam 13 NCG13 Nguyễn N.T.L 39 Nữ 14 NCG14 Lục Đ.C 39 Nam 15 NCG15 Trịnh V.C 31 Nam 16 NCG16 Cao X.D 41 Nam 17 18 NCG17 NCG18 Trần T.N.T Nguyễn T.T 35 35 Nữ Nam 19 NCG19 Nguyễn V.S 40 Nam 20 NCG20 Đặng T.N 42 Nữ 21 NCG21 Bùi T.T 44 Nam Điện thoại 0977.118.697 0987.439.480 0988.365.055 0987.222.715 0964.850.868 0904.584.884 0979.363.097 0972.835.748 0905.555.443 0975.011.798 0345.331.981 0382.396.889 0975.272.789 0376.866.380 0942.394.456 0913.011.370 0983.480.208 0986.865.483 0989.065.549 0383.730.989 0983.203.275 Tuổi Giới ĐỊA CHỈ LIÊN HỆ Cao T.T 34 Nam 0985.065.122 NCG23 Lê V.V 40 Nam 24 NCG24 Đồng V.N 39 Nam 25 NCG25 Hoàng V.T 30 Nam 26 NCG26 Nguyễn T.L 38 Nữ 27 NCG27 Trần Đ.T 37 Nam 28 NCG28 Trần T.Q 34 Nữ 29 NCG29 Hoàng T.Ư 37 Nam 30 NCG30 Ngô T.L 37 Nam 31 NCG31 Vũ T.D 43 Nam Khoa VLTL- PHCNBV103 Khoa VLTL- PHCNBV103 Khoa VLTL- PHCNBV103 Khoa VLTL- PHCNBV103 Khoa VLTL- PHCNBV103 Khoa VLTL- PHCNBV103 Khoa VLTL- PHCNBV103 Khoa VLTL- PHCNBV103 Khoa VLTL- PHCNBV103 Khoa VLTL- PHCNBV103 32 33 NCG32 NCG33 Nguyễn T.A 48 Nữ 0376.014.668 34 NCG34 Nguyễn H.Q 44 Nam 35 NCG35 Đinh T.H 43 Nữ 36 NCG36 Vũ T.H.M 33 Nữ 37 NCG37 Vũ D.C 37 Nam 38 NCG38 Nguyễn T.L 48 Nữ 39 NCG39 Tưởng T.V 48 Nữ 40 NCG40 Lê V.C 48 Nam 41 NCG41 Nguyễn T.K 36 Nam 42 NCG42 Nguyễn T.H 48 Nữ 43 NCG43 Bùi T.T 46 Nữ Tân Yên- Hồng KỳSóc Sơn- Hà Nội Liên Lộc – Hậu Lộc Thanh hóa Khoa A4 – Bệnh viện 103 Khoa A4 – Bệnh viện 103 Khoa A4 – Bệnh viện 103 Khoa A4 – Bệnh viện 103 Khoa A4 – Bệnh viện 103 Phương Trung- Thanh Oai- Hà Nội Phú Lãm – Hà ĐôngHà Nội Cổ Đông – Sơn TâyHà Nội Phú Sơn- Tp Thanh Hóa- Thanh Hóa STT Kí hiệu mẫu 22 NCG22 23 Họ tên Điện thoại 0989.151.097 0974.521.858 0981.716.689 0986.983.881 0905.261.082 0986.264.524 0982.346.982 0915.513.555 0983.169.005 0973.115.500 0977.207.997 0948.558.234 0977.962.149 0366.573.721 0368.928.995 0327.475.106 0936.290.983 0973.814.266 0917.091.466 STT Kí hiệu mẫu 44 NCG44 45 Họ tên Tuổi Giới Đàm T.D 46 Nữ NCG45 Bùi T.N 49 Nam 46 NCG46 Nguyễn N.L 43 Nam 47 NCG47 Nguyễn T.N 42 Nữ 48 NCG48 Trần T.T.H 36 Nữ 49 NCG49 Phạm T.B 50 51 NCG50 NCG51 Nguyễn C.S Nguyễn T.V.A 42 31 Nam Nữ 52 NCG52 Nguyễn Đ.T 41 Nam 53 54 55 56 NCG53 NCG54 NCG55 NCG56 Mai T.T Lê Đ.H Ngô T.T Lưu T.M.N 38 31 31 38 Nữ Nam Nữ Nữ 57 58 59 NCG57 NCG58 NCG59 Nguyễn T.T.H Nguyễn T.P.L Nguyễn T.H 45 48 35 Nữ Nữ Nữ 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 NCG60 NCG61 NCG62 NCG63 NCG64 NCG65 NCG66 NCG67 NCG68 NCG69 NCG70 NCG71 NCG72 Vũ T.T Khuất T.N.A Lương T.M.P Lê T.T Nguyễn T.H.T Đinh T.T Bạch V.C Đinh V.C Nguyễn V.T Lê T.D Trịnh Q.V Lê Thị Bình Nguyễn T.L 33 46 36 31 27 46 34 41 39 38 32 41 49 Nữ Nữ Nữ Nữ Nữ Nữ Nam Nam Nam Nữ Nam Nữ Nam 73 NCG73 Lê Đ.V 44 Nam 74 NCG74 Nguyễn V.T 47 Nam 44 Nam ĐỊA CHỈ LIÊN HỆ Văn Phú- Sơn DươngTun Quang Chu Đình Hóa- Thái Nguyên Văn Quán – Yên Phúc- Hà Đông Thụy Hương – Chương Mỹ- HN Thanh Xuân BắcThanh Xuân- HN Mỹ Thuận- Mỹ LộcNam Định BCHQS Nghệ An Duy Hiệu, Đông Hương, Thanh Hóa Liên Minh- Thanh Trì- Hà Nội Bỉm Sơn- Thanh Hóa Kim Động- Hưng Yên Chương Mỹ - Hà Nội Phú Lãm- Hà ĐôngHà Nội Mỹ Đức – Hà Nội Quân chủng PKKQ Dương Nội – Hà Đông- Hà Nội Khoa A20- BV103 HV Khoa A9- BV103 HV khoa A9- Bv103 HV khoa A9- Bv103 Hv khoa A9 – BV103 Ý Yên – Nam Định Lào Cai Thanh Trì- Hà Nội Lương Sơn- Hịa Bình TânTiến – Hà Tĩnh Vĩnh Bảo- Hải Phịng Chí Linh – Hải Dương Ngơ Quyền- Hải Phịng Nguyễn Trãi- Hà Đơng Thuận Châu- Sơn La Điện thoại 0363.560.390 0972.993.242 0904.682.121 0392.581.661 0965.233.813 0964.645.866 0975.148.405 0966.876581 0988.468.590 0934.669.363 0838.942.332 0972.072.976 0982.821.389 0387.669.926 0398.222.906 0986.921.268 0978.457.614 0978.721.973 0982.786.692 0374.547.815 0385.004.864 0967.352.582 0345.843.851 0987.255.856 0965.224.635 0914.854.171 0905.936.266 0366.950.789 0977.219.797 0983.358.222 0978.816.458 Tuổi Giới ĐỊA CHỈ LIÊN HỆ Vũ Đ.L Lê V.D 36 41 Nam Nam NCG77 Lê T.Ô.M 42 Nữ 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 NCG78 NCG79 NCG80 NCG81 NCG82 NCG83 NCG84 NCG85 NCG86 NCG87 NCG88 NCG89 NCG90 NCG91 NCG92 NCG93 NCG94 NCG95 NCG96 Đặng T.T Vũ T.T Trần T.H Trần Q.T Dư T.H Trịnh T.T Đào T.H Đỗ T.N Bùi T.L Lưu T.K.T Nguyễn K.L Đỗ T.T.H Cao V.Q Vũ V.H Nguyễn T.T Nguyễn H.Á.T Bùi T.P.T Vũ V.N Nguyễn X.M 41 37 44 42 40 30 30 49 41 42 33 50 43 37 46 41 38 32 49 Nữ Nữ Nữ Nam Nữ Nữ Nữ Nữ Nữ Nữ Nữ Nữ Nam Nam Nữ Nữ Nữ Nam Nam 97 98 NCG97 NCG98 Nguyễn T.H Nguyễn T.M 40 37 Nữ Nữ 99 NCG99 Nguyễn T.T 48 Nữ 100 101 NCG100 NCG101 Nguyễn V.C Nguyễn K.N 33 43 Nam Nữ 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 NCG102 NCG103 NCG104 NCG105 NCG106 NCG107 NCG108 NCG109 NCG110 NCG111 Nguyễn T.H Nguyễn H.T Hà T.H Chu Q.H Phạm K.H Phạm N.Đ Phạm Đ.P Phạm T.M Hồ V.H Nguyễn N.S 41 33 36 34 38 38 25 34 35 36 Nữ Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nam Từ Liêm – Hà Nội Bình Xuyên- Vĩnh Phúc Bình Xuyên- Vĩnh Phúc Tiên Lữ - Hưng Yên Chương Mỹ - Hà Nội Vụ Bản- Nam Định Kim Bơi – Hịa Bình Lê Chân _ Hải Phịng Nga Sơn – Thanh Hóa Hậu Lộc- Thanh Hóa Tiền Hải- Thái Bình Kim Bối- Hịa Bình Hưng Hà- Thái Bình Hs A9- Bv103 Khoa HH- Bv103 Đan Phượng- HN Thanh Xuân _ Hà Nội Mỹ Đức- Hà Nội Hà Đông - HN Chương Mỹ- HN Từ Liêm – Hà Nội Hoàng Hoa Thám HN Yên Phúc – Hà Đông Trần Duy Hưng- Hà Nội Đơng Hưng- Thái Bình Quốc Oai – Hà Nội Hồng Hoa ThámHN Hạ Long- Quảng Ninh TTUB- BV103 TTUB- BV103 TTUB- BV103 TTUB- BV103 TTUB- BV103 TTUB- BV103 TTUB- BV103 TTUB- BV103 TTUB- BV103 STT Kí hiệu mẫu S75 76 NCG75 NCG76 77 Họ tên Điện thoại 0978.444.112 0987.840.960 0368.689.009 0977.865.089 0902.138.982 0339.306.139 0974.256.898 0936.466.898 0981.129.004 0982.517.626 0985.978.184 0962.347.008 0986.729.001 0933.666.928 0915.110.837 0975.944.558 0978.306.888 0983.951.068 0974.848.856 0972.770.168 0962.352.208 0913.088.588 0904.260.880 0936.015.198 0396.214.909 0987.235.095 0913.570.064 0702.257.666 0967.593.866 0916.489.736 0905.608.046 0978.432.545 0988.180.151 0962.194.448 0988.474.405 0988.174.998 0982.356.616 STT Kí hiệu mẫu 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 NCG112 NCG113 NCG114 NCG115 NCG116 NCG117 NCG118 NCG119 NCG120 NCG121 NCG122 NCG123 NCG124 Họ tên Hà V.T Khúc T.V.A Phạm T.H Nguyễn T.H Nguyễn Đ.T Nguyễn H.H Vũ P.N Ma T.H.T Nguyễn T.T H Nguyễn H.N Trần S.H Nguyễn X.N Lã M.N Tuổi Giới ĐỊA CHỈ LIÊN HỆ 25 30 35 26 43 41 32 29 25 24 25 37 29 Nam Nữ Nữ Nữ Nam Nữ Nữ Nữ Nữ Nam Nam Nam Nam TTUB- BV103 Hải Phòng Hải Phòng Hải Phòng Hà Nội Hà Nội Hà Nội Hà Nội Vĩnh Phúc Ninh Bình Hà Nội Hà Nội Hà Nội Điện thoại 0338.282.537 0983.384.288 0385.368.368 0987.044.088 0972.336.399 0382.086.938 0984.363.763 0986.062.000