Báo cáo thí nghiệm hóa sinh

lOMoARcPSD|12114775 ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC BÁO CÁO THÍ NGHIỆM HĨA SINH Giảng viên hướng dẫn: Trần Trúc Thanh Sinh viên: Vũ Hồ Yến Nhi-1914528 Lớp: L01 Tp Hồ Chí Minh, 2022 lOMoARcPSD|12114775 BÀI 1: ĐỊNH LƯỢNG ĐƯỜNG KHỬ BẰNG ACID DINITRO SALICYLIC (DNS) I Nguyên tắc thí nghiệm: Phương pháp dựa phản ứng tạo màu đường khử thuốc thử axit dinitrosalicylic (DNS) 3,5 – dinitrosalicylic acid (DNS) có màu vàng dung dịch kiềm khử thành acid 3-amino-5-nitrosalicylic có màu đỏ cam Phương trình phản ứng tạo màu đường khử DNS Cường độ màu hỗn hợp phản ứng tỷ lệ thuận với nồng độ đường khử phạm vi định Dựa theo đường chuẩn glucose với thuốc thử DNS tính hàm lượng đường khử mẫu nghiên cứu II Phương pháp thí nghiệm: - Chuẩn bị hóa chất mẫu cần định lương đường khử:  Thuốc thử DNS:  Hoà tan 10g DNS vào 400ml nước cất  Hoà tan 16g NaOH vào 150 ml nước cất  Thêm dung dịch NaOH vừa pha vào dung dịch DNS  Hồ tan khuấy t0 khơng q 500C  Tiếp tục khuấy cho thêm 300g potassium sodium tartrate tan hoàn toàn, ý bao kín cốc pha hóa chất  Sau hịa tan hồn tồn, định mức dung dịch đến lít, trữ chai tối + Dung dịch glucose10 mg/ml lOMoARcPSD|12114775 + Mẫu cần định lượng đường khử: 7up Mẫu cần định lượng có hàm lượng đường tổng 43g 390 ml Thực pha loãng mẫu 200 lần để nồng độ đường khử rơi vào khoảng xác định phương trình đường chuẩn glucose (0-10 mg/ml) - Tiến hành dựng đồ thị đường chuẩn glucoso (0-10 mg/ml) phân tích đường khử Bảng 1: Thứ tự thí nghiệm phân tích đường khử Ống nghiệm Hố chất Đối Đ1 No.1 No.2 No.3 No.4 No.5 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 10 9.8 9.6 9.4 9.2 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 chứng Nồng độ glucose (mg/ml) Nước cất (ml) Glucose 10mg/ml (ml) Thực phản ứng Đường chuẩn glucose Hút 1ml ống vào ống nghiệm Đ2 Đ3 lOMoARcPSD|12114775 Mẫu nguyên Hút 1ml ống vào chất ống nghiệm pha loãng (n) Dung dịch ml DNS ml ml ml ml ml ml ml Đun sôi cách thủy phút, làm lạnh nhanh đến nhiệt độ phòng Đo OD540nm Sơ đồ khối q trình thực thí nghiệm: Glucose Nước cất 10 mg/ml Pha loãng Theo nồng độ 0.2%, 0.4%,0.6%, 0.8%, 1.0% 1ml 3ml thuốc thử DNS Phản ứng oxy hóa khử - Đun sơi cách thủy phút - Làm lạnh nhanh Đo OD540nm Lập đường chuẩn Hình 1: Sơ đồ trình lập đường chuẩn glcose (0-10 mg/ml) ml lOMoARcPSD|12114775 Nước cẫất Mẫẫu 7up Pha loãng đếấn nồồng độ N 1ml Đun sồi cách thủy phút Làm lạnh nhanh Phản ứng oxy hóa khử 3ml thuồấc thử DNS Đo OD540nm Nằồm ngồi đường chuẩn Tính nồồng độ đường khử Hình 2: Sơ đồ xác định nồng độ đường khử mẫu sau có đường chuẩn glucose (0-10 mg/ml) III Kết thí nghiệm: Kết tính tốn: - Sau thực cho dung dịch DNS vào ống nghiệm ta nhận thấy màu ống nghiệm màu vàng DNS Tuy nhiên sau đun sôi cách thủy, màu ống nghiệm có thay đổi đậm nhạt khác Nhiệt độ tác nhân xúc tác cho phản ứng xảy với tốc độ nhanh lOMoARcPSD|12114775 Bảng 2: Kết đo OD540nm dãy chuẩn glucose Ống nghiệm Nồng độ glucose (mg/ml) OD540nm Đối chứng No.1 No.2 No.3 No.4 No.5 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.301 0.953 1.422 1,080 2.772 Bảng 3: Kết đo OD540nm mẫu Mẫu OD540nm Trung bình Lần 1.681 Lần 1.349 1.480 Lần 1,411 Hình 3: Đồ thị biểu diễn tương quan nồng độ glucose độ hấp thu OD540nm Mối tương quan giữ nồng độ glucose độ hấp thụ OD 540nm Nồng độ glucose (mg/ml) 1.2 f(x) = 0.35 x + 0.06 R² = 0.99 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.5 1.5 2.5 OD 540nm >> Tính tốn: Đường chuẩn glucose ( 0-10 mg/ml): C= 0.3501xOD+ 0.0585 r2 = 0.9873 Mẫu 7up có OD540nm trung bình bẳng 1.480 Thế vào đường chuẩn, ta thu giá trị 0.577 Vậy nồng độ đường khử mẫu là: 0.577 x 200 = 115.4 ( mg/ml) lOMoARcPSD|12114775 Biện luận: Theo thông tin sản phẩm 390ml 7up có 43g đường tổng tương đương 110mg/ml Tuy nhiên, theo thí nghiệm ta thu 52.4 mg/ml Vì lượng đường tổng sản phẩm khơng phải tồn đường khử nên theo phương pháp ta xác định xác lượng đưởng tổng thơng tin sản phẩm IV Các phương pháp khác: Xác định hàm lượng đường khử phương pháp Bertrand: Phương pháp dựa sở môi trường kiểm đường khử (glucose, fructose, maltose, ) khử đồng II thành đồng I theo phản ứng Fehling với có mặt Kalinatri tartrat Kết tủa đồng I oxit (Cu2O) có màu đỏ gạch, có khả khử với muối Fe3+ thành muối Fe2+ môi trường axit Cu2O + Fe2(SO4)3 + H2SO4 > 2CuSO4 + 2FeSO4 + H2O Fe2+ sinh có tính khử lại tác dụng với KMnO4 chất oxy hóa nên dùng KMnO4 để chuẩn độ Fe2+ môi trường axit 10FeSO4 + 2KMnO4 + 8H2SO4 → K2SO4 + 2MnSO4 + 5Fe2(SO4)3 + H2O Dựa vào lượng KMnO4 sử dụng ta tính lượng đường khử dung dịch cách tra tỉ lệ dung dịch KMnO4 đường khử Bertrand Có nhiều phương pháp khác xác định hàm lượng đường phương pháp Somogyi, phương pháp Codextan, phương pháp DNS Tuy nhiên, phương pháp Bertrand phương pháp thường sử dụng độ xác, tính kinh tế phù hợp với tiêu chuẩn đo lường Việt Nam Ở phương pháp Bertrand, để khử tạp chất có mẫu phân tích, người ta thường sử dụng dung dịch kẽm feroxyanua Ưu điểm dung dịch kinh tế, không gây độc, đảm bảo việc khử tạp tốt ảnh hưởng đến q trình định phân đường lOMoARcPSD|12114775 Xác định đường khử phương pháp Graxianop: Đường khử đun nóng với dung dịch kiềm với ferixyanua khử ferixyanua thành feroxyanua đường khử chuyển thành acid đường Dùng metylen xanh làm chất thị màu xanh phản ứng kết thúc Phản ứng sau: * Tài liệu tham khảo: https://chatluongthucpham.com/duong-khu-la-gi/ Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) lOMoARcPSD|12114775 BÀI ĐỊNH LƯỢNG PROTEIN THEO PHƯƠNG PHÁP BIURET Nguyên tắc Trong môi truờng kiềm, hợp chất chứa liên kết peptide phản ứng với thuốc thử chứa ion đồng (Cu) tạo thành phức màu xanh dương có độ hấp thụ quang cực đại bước sóng 550nm Độ hấp thụ quang tỉ lệ thuận với nồng độ liên kết peptide phản ứng dùng để định lượng protein Hóa chất - Dung dịch albumin:10 mg/ml - Dung dịch Biuret: 9g sodium potassium tartrate, 3g CuSO H2O, hoà tan 100ml NaOH 0.2N định mức với nước cất thành lít Tiến hành Dựng đồ thị đường chuẩn albumin phân tích nồng độ protein Bảng 3: Thứ tự thí nghiệm phân tích nồng độ protein Ống nghiệm Đối No.1 No.2 No.3 No.4 No.5 10 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 chứng Hoá chất Nồng P1 P2 P3 độ albumin (mg/ml) Nước cất (ml) Albumin chuẩn 10mg/ml (ml) Thực phản ứng Mẫu nguyên Hút 1ml ống vào chất ống nghiệm Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) lOMoARcPSD|12114775 pha loãng (n) Dung dịch Buiret ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 0,206 0,178 0,166 Ủ nhiệt độ phòng, 20 phút Đo OD550nm 0,051 0,090 0,148 0,205 0,264 Chuẩn bị mẫu: P1, P2 P3 mẫu lặp lại dùng trực tiếp mẫu phân tích Nếu nồng độ protein mẫu phân tích dự đốn cao phải pha lỗng Ghi lại cách pha loãng độ pha loãng (n) để tính nồng độ protein mẫu gốc Thực phản ứng với bước bảng 3 Vẽ đồ thị đường chuẩn nồng độ albumin- trị số OD 550nm Tính giá trị trung bình OD 550nm mẫu P, giá trị nằm ngồi đường chuẩn phải pha lỗng mẫu Sử dụng giá trị trung bình OD 550nm mẫu P đồ thị đường chuẩn albumin, tính a mg/ml protein mẫu pha loãng Nhân với hệ số pha loãng (n) để nồng độ protein dung dịch mẫu gốc (Chú ý pha loãng cho OD 550nm mẫu phân tích nằm giới hạn đường chuẩn) Albumin 10 mg/ml Sơ đồ thí nghiệm: Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) Nước cất lOMoARcPSD|12114775 - Kỹ thuật sắc ký trao đổi ion kết hợp tạo dẫn xuất sau cột với tác nhân ninhydrin phương pháp ứng dụng phổ biến để định lượng axit amin Quá trình tách axit amin cột trao đổi ion thực kết hợp với thay đổi độ pH độ mạnh yếu ion (cation) Để tăng hiệu tách áp dụng thêm chu trình Gradient nhiệt độ - Sắc ký lỏng pha đảo cặp ion kết hợp với đầu dò khối phổ, IPRPLC-MS/MS kỹ thuật cho phép phân tích axit amin mà khơng cần tạo dẫn xuất, giảm lỗi phát sinh tác nhân, nhiễu, dẫn xuất tạo thành không bền, phản ứng phụ, … Sử dụng tác nhân tạo dẫn xuất dễ bay hơi, trình phân tách kỹ thuật cặp ion (ion pair – IP) dựa hai chế khác sau: + Tác nhân IP hấp thụ bề mặt pha tĩnh pha động; + Sự hình thành lớp khuếch tán điện bề mặt tĩnh điện phụ thuộc vào nồng độ bề mặt tác nhân IP 2/ Sắc ký khí (GC): dùng tách phân tích hợp chất dễ bay mà khơng làm phân hủy chúng Quá trình tạo dẫn xuất thường gặp q trình silyl hóa (đưa nhóm vào phân tử), phương pháp mà hydro axit thay nhóm alkylsilyl Nhược điểm phương pháp tác nhân dẫn xuất dễ bị tác động độ ẩm tính khơng ổn định dẫn xuất Có số axit amin không bền (như arginine axit glutamic) Arginine phân hủy thành ornithine, axit glutamic bị xếp lại cấu trúc thành axit pyro-glutamic Một phương pháp tạo dẫn xuất GC phương pháp axyl hóa este hóa, tác nhân sử dụng kết hợp andehit rượu (anđehit pentafluorpropyl trifloroformate isopropanol) alkyl chloroformate rượu Q trình silyl hóa diễn thơng qua q trình thay trực tiếp nhóm carboxyl tạo este nhóm amin thành carbamate, phản ứng xúc tác chất mang tính bazơ (như pyridine picoline) Các este alkyl bền giữ thời gian dài * Sắc ký khí ghép nối khối phổ (GC-MS) phương pháp phân tích với độ lặp lại thời gian lưu tốt, dễ tự động hóa Nhược điểm kỹ thuật tính bền với nhiệt độ số hợp chất và/hoặc dẫn xuất chúng, khó để phân tích hầu hết điều kiện sắc ký khí (GC) Phổ khối số kỹ thuật hiệu để xác định cấu trúc hợp chất Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) lOMoARcPSD|12114775 tự nhiên Kỹ thuật khối phổ hoạt động dựa việc tách ion tạo nguồn ion hóa tỷ lệ khối lượng/điện tích (m/z) chúng Kỹ thuật cho phép đo xác khối lượng phân tử (MW), xác nhận mẫu, chứng minh độ tinh khiết mẫu, kiểm tra thay thế, trình tự xếp axit amin Quá trình hữu hiệu việc xác định cấu trúc hợp chất hữu trình tự xếp oligonucleotit chuỗi polypeptit Ưu điểm MS yêu cầu lượng mẫu nhỏ (từ ng đến pg)  Tài liệu tham khảo: Analytical Chemistry, book edited by Ira S Krull Peptide and Amino Acids Separation and Identification from Natural Products – Tác giả: Ion Neda1, Paulina Vlazan1, RalucaOana Pop1, Paula Sfarloaga1, Ioan Grozescu1 Adina-Elena Segneanu Analysis of amino acids using paper chromatography (Table I), P S RAO AND R M BERI , trang 372 BÀI 5B ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN C Nguyên tắc: Để xác định hàm lượng vitamin C (acid ascorbic) ngun liệu khơng có chất màu sử dụng phương pháp chuẩn độ iod Tất acid ascorbic bị oxy hố iod , phần iod cịn thừa cho màu xanh với dung dịch tinh bột I2 + I - => I3 – C6H8O6 + I3 – + H2O => C6H6O6 + 3I - + 2H + Hóa chất: Dung dịch HCl 5% Dung dịch I2 0,01N Dung dịch tinh bột 1% Tiến hành m(g) mấẫu Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) lOMoARcPSD|12114775 Côấi sứ Chuẩn độ băềng I2 0,01N, lấền Nghiềền nhỏ Hòa tan erlen Lọc Bình định mức 100ml 10ml HCl 5% Thềm nước cấất đềấn 100ml, lăấc đềều 1ml tinh bột 1% Hút 20ml dd mấẫu Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) lOMoARcPSD|12114775 Kết Số mg Vitamin C 100g mẫu Với a : thể tích (ml) dung dịch iode 0,1N tiêu tốn (giá trị trung bình lần chuẩn độ) V : thể tích chung dịch chiết (100ml) v : thể tích dịch mẫu lấy để chuẩn độ (20ml) m: khối lượng mẫu gốc (g) 0,88: hệ số, ml dung dịch iot 0,01 N tương ứng với 0,88 mg acid ascorbic Táo Sơ ri m (g) 4,00 3,20 V1 (ml) V2 (ml) V3 (ml) VTB = a (ml) 0,25 0,30 0,30 0,283 8,15 8,15 8,05 8,117 Bảng Giá trị V(ml) Iode 0,1N tiêu tốn  Táo: mg Vitamin C = = 0.03 g = 31,13 mg  Sơ ri: mg Vitamin C = = 1,11608 g = 1116,08 mg Kết luận Theo kết trên, ta thấy hàm lượng Vitamin C sơ ri nhiều táo nhiều lần Vì thế, bổ sung Vitamin C dễ dàng sơ ri Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) lOMoARcPSD|12114775 Mở rộng Sơ lược vitamin C : Vitamin C, sinh tố C hay acid ascorbic chất dinh dưỡng thiết yếu cho loài linh trưởng bậc cao, cho số nhỏ loài khác Acic ascorbic cần thiết loạt phản ứng trao đổi chất tất động vật cối được tạo thể tất thể sinh vật, loại trừ loài người, khỉ, cá heo thiếu enzyme đặc hiệu xúc tác chuyển hóa Glucose thành Vitamin C Nếu thiếu Vitamin C gây bệnh scorbut cho người Công dụng vitamin C: Tham gia tạo colagen số thành phân tạo nên mô liên kết cơ, xương, mạch máu Tham gia vào trình chuyển hóa thể protid, lipid, glucid Chống stress, tăng sức đề kháng Chống oxy hóa Giúp hấp thu sắt tốt Tăng tỉ lệ hấp thu canxi vào thể Các nguồn thực phẩm chứa Vitamin C: Tự nhiên: loại trái ổi, dâu tây, đu đủ, súp lơ, loại rau xanh lá… Tổng hợp: có viên nang vitamin c, viên sủi, loại kẹo ngậm giảm đau họng… 2/ Xác định vitamin C sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC): Vitamin C có thực phẩm trích hệ lỏng-lỏng với dung môi hữu (methanol, nước pH 2,1 chuẩn H2SO4) Sau đưa vào máy sắc kí lỏng cao áp (HPLC 1100 Hawlett Packard, đầu dị VWD, Cột Hypersil BDS, 3um C18), để định lượng vitamin C có mẫu Điều kiện chạy máy Sắc ký lỏng cao áp:  Cột Hypersil BDS, 3um C18  Inject = 20 µl  Hệ dung mơi A: pH=2,1 (H2SO4) 70% B: ACN 30%  Tốc độ dòng 0,5 ml/phút  Đầu dị VWD, bước sóng 254nm  Thời gian chạy 10 phút Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) lOMoARcPSD|12114775  Hàm lượng Vitamin C mẫu tính theo cơng thức Trong đó: Cm: nồng độ Vitamin C tính theo đường chuẩn, V: thể tích định mức m: khối lượng mẫu ban đầu 3/ Tham khảo vài tài liệu hàm lượng vitamin C trái cây:  Con số phụ thuộc vào loại, giống cây; điều kiện gieo trồng khí hậu, đất đai, địa hình khu vực khác tạo khác biệt lớn  Bảng Lượng Hình loại thực Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) lOMoARcPSD|12114775  Bên cạnh đó, hàm lượng vitamin C cịn thay đổi q trình chín phụ thuộc vào điều kiện bảo quản tác nhân ánh sáng, nhiệt độ, khơng khí chất khơng bền dễ bị oxy hóa 4/ Thiếu thừa C: BảngVitamin Lượng  Thiếu Vitamin C:  Bệnh thiếu máu: Vitamin C giúp hấp thu sắt thiếu vitamin C thể khơng thể hấp thu đủ sắt gây tình trạng thiếu máu  Vết thương chậm lành  Bệnh loãng xương: người thiếu vitamin C có nguy cao bị gãy xương, loãng xương, đặc biệt phụ nữ người cao tuổi  Bệnh thối hóa khớp: vitamin C góp phần tham gia tổng hợp collagen  Bệnh tim mạch: Thiếu vitamin C dẫn tới số bệnh lý tim mạch thoát mạch, thành mạch bền ,  Bệnh Scorbut: Là bệnh điển hình thể bị thiếu vitamin C Các triệu chứng điển hình bệnh Scorbut gồm có: viêm lợi, dễ rụng, sưng khớp, chảy máu chân răng, xuất huyết da,  Ung thư: Khi thiếu vitamin C, thể dễ bị công gốc tự lâu dài dẫn tới số bệnh ung thư  Thừa Vitamin C: Sử dụng nhiều vitamin C ảnh hưởng đến số chức bệnh lý, như: tạo sỏi thận, cân hấp thu vitamin khoáng Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) lOMoARcPSD|12114775 chất khác Một số trường hợp dùng nhiều vitamin C gây tác dụng phụ đường tiêu hóa xót ruột, đau bụng, buồn nơn, co thắt dày, đầy hơi, khó tiêu  Tài liệu tham khảo: TIÊU CHUẨN QUỐC GIA - TCVN 8977:2011 THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH VITAMIN C BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) Chemical Science Transactions, trang 303-310 BÀI ĐỊNH LƯỢNG POLYPHENOLS BẰNG FOLINCIOCALTEU (F-C) Nguyên tắc Phương pháp định lượng tổng polyphenols Folin-Ciocalteu (F-C) dựa vào phản ứng hợp chất phenolic với thuốc thử Folin-Ciocalteu Thuốc thử Folin- Ciocalteu hỗn hợp natri volframat natri molybđat có mặt phenol xảy phản ứng oxi hóa-khử, nhóm –OH phenolic chuyển thành nhóm quinol tạo thành phức hợp có màu xanh định lượng mật độ quang bước sóng 760 nm Hoá chất Dung dịch chuẩn gallic acid chuẩn 0,2mg/ml Dung dịch Folin – Ciocalteu (1:10, v/v) Tiến hành Bảng Quy trình dựng đường chuẩn gallic acid (0-0.1mg/ml) Ống nghiệm Blank No.1 No.2 Hóa chất Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) No.3 No.4 No.5 lOMoARcPSD|12114775 Nồng độ gallic acid (µg/ml) H2O (µl) Dung dịch gallic acid 0.2 mg/ml (µl) Folin – Ciocalteu (1:10) (ml) 20 40 60 80 100 500 450 400 350 30 250 50 100 150 250 250 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2 Lắc đều, để nhiệt độ phòng phút Na2CO3 7.5% (ml) 2 Để nhiệt độ phòng, tối Thực phản ứng mẫu cần phân tích Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) lOMoARcPSD|12114775 Chuẩn bị ồấng nghiệm ồấng để lập đường chuẩn gallic acid ồấng mẫẫu Gallic acid: lẫồn lượt 0μl, 50μl, 100μl, 150μl, 200μl, 250μl 0.5ml mẫẫu polyphenol Nước cẫất: lẫồn lượt 500μl, 450μl, 400μl, 350μl, 300μl, 250μl 2.5ml Folin - Ciocalteu Lắắc đềều, chờ phút 2ml Na2CO3 7.5% Để tốắi 2h Đo OD760nm Hình Sơ đồ khối quy trình thí nghiệm định lượng polyphenols Folin - Ciocalt Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) lOMoARcPSD|12114775 Kết Bảng Kết đo OD760nm dãy chuẩn gallic acid Ống nghiệm Blank Nồng độ gallic acid (µg/ml) 0.0 OD760nm No.1 No.2 No.3 No.4 No.5 20 40 60 80 100 0.350 0.524 1.28 1.395 1.636 Bảng Kết đo OD760nm mẫu polyphenol Mẫu Lần Lần Lần OD760nm 1.168 1.516 1.635 Trung bình 1.01.576 54 Vẽ đồ thị tính tốn Sự tương quan nồng độ gallic acid độ hấp thu OD760nm 120 Nồng độ acid gallic µg/ml 100 f(x) = 55.44 x + 2.09 80 R² = 0.96 60 40 20 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.2 1.4 1.6 1.8 OD 760nm Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) Hình Đồ thị biểu diễn tương quan nồng độ gallic acid độ hấp thu OD760nm lOMoARcPSD|12114775 Tính tốn Sử dụng phương pháp bình phương cực tiểu ta tính phương trình hồi quy tuyến tính nồng độ gallic acid theo OD760nm: C = 2.0902 + 55.44OD R2= 0.956 Vậy ứng với OD760nm trung bình 1.576 ta nồng độ polyphenol mẫu 89.46 µg/ml  Các thao tác dẫn đến sai số: • Q trình hút mẫu có sai số cảm quan người thực cơng cụ hỗ trợ • Hóa chất bị oxy hóa q trình bảo quản • Khi giữ tối cho phản ứng không triệt để • Các thao tác thực đo OD có sai sót: Sai số thiết bị, sai sót người thực hiên, cuvet không sạch, buồng chiếu sáng không đóng kín, Tuy nhiên, kết nhóm có R2 = 98.95%, cho thấy thao tác dẫn đến sai số Mức độ tin cậy đường chuẩn cao  Giải thích chuyển màu dung dịch ống nghiệm: F–C (vàng) Na2C0 Gallic acid không màu –⎯⎯⎯⎯⎯⎯→ Dung dịch xanh lục – ⎯⎯⎯⎯→ (1) (2) Dung dịch xanh dương Ban đầu chưa có Na2CO3, pH dung dịch thấp, phản ứng chưa đạt hiệu cao, phức xanh dương tạo chưa nhiều nên chuyển màu từ vàng sang lục chưa chuyển hẳn sang xanh Mục đích thêm Na2CO3 để tăng pH dung dịch, chuyển hoàn toàn acid gallic thành dạng muối phenolate, dễ dàng khử Mo(VI) F-C thành Mo(V) tạo phức có màu xanh đặc trưng Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) lOMoARcPSD|12114775 Liên hệ thực tế:  Polyphenol gì? Polyphenol nhóm hợp chất tự nhiên có thực vật, có cấu trúc gồm nhóm hydroxyl vịng thơm, bao gồm bốn nhóm chính: axit phenolic, flavonoid, stilbene lignans Có đến 500 polyphenol khác Các hợp chất gọi chung thành phần hóa thực vật  Vai trị polyphenol đời sống • Chống oxy hóa, làm giảm tổn thương tế bào gốc tự do, loại bỏ triệt để gốc tự gây mệt mỏi, lo âu, giúp giảm stress căng thẳng • Bảo vệ sức khỏe tim mạch: Kiểm soát nồng độ Cholesterol LDL xấu, tăng nồng độ Cholesterol tốt, đồng thời làm giảm Cholesterol có máu, giảm triglycerid giúp giảm nguy gây xơ cứng, xơ vữa động mạch, loại bỏ mỡ thừa • Ngăn ngừa bệnh tiểu đường type đồng thời giúp tăng nhạy cảm insulin • Giảm kết tập tiêu cầu ngăn ngừa hình thành cục máu đơng hiệu • Thúc đẩy sức khỏe não bộ: Giảm nguy mắc bệnh sa sút trí tuệ Alzheimer • Cân hệ vi sinh đường ruột • Chống viêm • Ngăn ngừa lỗng xương • Tác động đến gene biểu gene  Tại phải định lượng polyphenol? Bên cạnh lợi ích khơng thể phủ nhận polyphenol, tiêu thụ mức hợp chất có khả gây tác dụng khơng mong muốn Một số thực phẩm chức bổ sung polyphenol với hàm lượng cao nhu cầu cần thiết chế độ ăn uống lành mạnh Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) lOMoARcPSD|12114775 Theo báo viết độ an toàn polyphenol, liều cao polyphenol cụ thể gây tổn thương thận chuột Nhiều nghiên cứu tương tự khác động vật cho thấy polyphenol dẫn đến phát triển khối u thay đổi hormone tuyến giáp Một số thực phẩm giàu polyphenol có khả ảnh hưởng đến q trình hấp thu chất dinh dưỡng khác, polyphenol trà tạo phức với ion sắt làm giảm hấp thu, polyphenol nước ép bưởi chùm tương tác với nhiều loại thuốc Do đó, cần định lượng polyphenol để kiểm soát hàm lượng hợp chất thực loại thực phẩm, tránh tình trạng gây tác dụng không mong muốn, đồng thời tận dụng tối đa lợi ích để bảo vệ sức khỏe người TÀI LIỆU THAM KHẢO https://www.researchgate.net/publication/272133306_The_Folin Ciocalteu_assay_revisited_Improvement_of_its_specificity_for_total_phenolic_content _determi nation https://www.scirp.org/pdf/AJAC20110700012_31845055.pdf Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com) lOMoARcPSD|12114775 Downloaded by Vu Vu (quangchinhlas199@gmail.com)