THU NHẬN ENZYME AMYLASE TỪ VI SINH VẬT

THU NHẬN ENZYME AMYLASE TỪ VI SINH VẬT tài liệu, giáo án, bài giảng , luận văn, luận án, đồ án, bài tập lớn về tất cả cá...

THU NHẬN ENZYME AMYLASE 1) Nguồn enzyme amylase từ vi sinh vật:

Trong thiên nhiên enzyme có ở hầu hết mọi thực vật, động vật và vi sinh vật Song chỉ có một số hạt thực vật và một số loài vi sinh vật mới là những đối tựợng

có thể dùng làm nguồn thu các chế phẩm enzyme amylase, do chúng có khả năng tích lũy một lượng lớn các enzyme này trong những điều kiện xác định

Những chủng VSV tạo nhiều amylase thường đựơc phn lập từ cc nguồn tự nhin, bởi vì cc lồi khc nhau v thậm chí cc chủng VSV khc nhau cũng thường sản sinh ra nhiều hệ enzyme khc nhau

Để thu nhận amylase người ta thường dùng các giống nấm sợi Aspergillus (Asp Oryzae, Asp Niger, Asp Usamii, Asp Awamo-ri, Asp Batatae) v Rhizopus (Rh.Delemar, Rh Lonnesis, Rh Neveus, Rh Japonicum, Rh Fokinesis, Rh

Lopninen-sis) v một số lồi của Neurospora v Mucor sinh tổng hợp rất mạnh mẽ khơng những chỉ – amylase m cả glucoamylase

Nấm men v giả nấm men thuộc cc giống Candida, Saccharomyces,

Endomycopsis, Endomyces cũng tạo amylas Đặc biệt người ta đ tuyển chọn được chủng Endomycopsis specise 20-9 có khả năng tổng hợp mạnh mẽ glucoamylase, – amylase, glucoziltrans-ferase v invertase

Nhiều vi khuẩn cũng có khả năng tạo lượng lớn enzyme amylase như: Bac Polymyxa, Phytomonas destructans, Bact.cassavanum, Clostridium

acetobutylicum, Pseudomonas saccharophila… Các vi khuẩn ưa nhiệt (ưa ấm) có khả năng tăng trửơng nhanh (4-6lần vi khuẩn ưa ẩm) như: Bac Diastaticus, Bac Stearothermo-philus, Bac Coagulans, Bac Circulans, đặt biệt là Bac Circulans được phân lập từ đất sinh trưởng tốt ở 65-70oc v tạo amylase mạnh nhất ở 50oC và phát triển tốt ở nhiệt độ tương đối cao, nên khi nuôi chúng ở nhiệt độ cao ít bị nhiễm VSV khác.Trong số vi khuẩn ưa ẩm tạo amylase mạnh, thì Bac Subtilis đựơc nghiên cứu chu đáo hơn cả và được sử dụng rộng ri nhất Nhiệt độ sinh

trửơng tối thích của Bac Subtilis là ở 37 oC

Trong nhóm xạ khuẩn rất hiếm gặp loài tạo amylase mạnh mẽ, tuy nhiên, cũng có một số, chẳng hạn như xạ khuẩn ưa nhiệt Micromonospora vulgaris 42 có khả năng tạo một lượng nhỏ – amylase hoạt động ở 65oC cng với proteinase v cc enzyme khc

Trong công nghiệp, các biến chủng tạo đựơc bằng cách gây đột biến nhờ tác động của tác nhân lý hĩa hay hĩa học hoặc tc nhn phối hợp của hai loại tc nhân trên

là những chủng hoạt động rất có khả năng sinh tổng hợp nhiều amylase Đáng chú

ý l những biến chủng của nấm mốc: Asp Niger S, Asp.niger S-4,Asp.niger S-4-10;

Asp Usamii 3758-45 , Asp Batatae 217-61; Asp Awamori 78-2 ; Asp Oryzase 3-9-15 , Asp Oryze N-475, Asp Niger URRL-333 v Asp Niger NRRR-337

Phức hệ amylase từ các nguồn khác nhau đều có đặc điểm riêng Đối với nấm sợi Aspergillus, trong canh trường của chúng thường có các enzyme sau: – amylase, glucoamylase, glucoziltransferase Đa số các chủng của loài Asp Oryzae tạo nhiều – amylasesong tạo rất ít glucoziltransferase, ngoài amylase canh trường

bề mặt của Asp Orzyae cịn protease acid v trung tính

Trong canh trường các loài nấm sợi đen (Asp Awamori, Asp Niger) hàm lượng glucoamylase kh cao, hoạt lực transglucozilase kh mạnh, song lại cĩ ít – amylase Ngồi cc enzyme trn Asp Awamori cịn tạo protease acid v

hemicellulose Rhizopus v Endomyces khơng tạo transglucozilase, – amylase cĩ trong mọi chế phẩm trừ cc chế phẩm từ Endomyces

Trong các canh trường vi khuẩn thường không tạo thành một phức hệ

enzyme amylase như là ở nấm sợi mà chỉ có một – amylase Hoạt lực protease của canh trường vi khuẩn cũng rất cao

2) Đặt tính và cơ chế tác dụng của amylase:

Amylase l hệ enzyme rất phổ biến trong thế giới sinh vật Cc enzyme ny thuộc nhĩm enzym thủy phn, xúc tác sự phân giải các liên kết nội phân tử trong polysaccharide với sự tham gia của nước

a) – amylase : ( – 1,4 glucan – 4 glucanhidrolase, 3.2.1.1)

Về cơ chế tác dụng, người ta thấy rằng – amylase của nấm mốc cắt đứt

được tất cả các liên kết – 1,4-glucoside trong mạch polysaccharide, trừ điểm phân nhánh trong amylopectin, để tạo thành maltose và dextrin giới hạn Như vậy chúng

có khả năng chuyển 80-82% tinh bột thành maltose – amylase khơng chỉ thủy phn

hồ tinh bột m cịn thủy phn cả hạt tinh bột nguyn lnh, song tốc độ rất chậm

Khi thủy phn tinh bột – amylase thường xảy ra 2 giai đoạn:

 giai đoạn đầu: chỉ một số liên kết trong phân tử bị đứt và độ nhớt của

hồ tinh bột giảm nhanh

 Giai đoạn hai: thủy phân các dextrin phân tử lớn vừa tạo thành

Tính chất đực trưng của nó là khả năng dextrin hóa cao do đó làm cho phản ứng màu của tinh bột với iod bị biến đổi nhanh chóng Vì vậy người ta dựa vào tính chất này để xác định hoạt độ của enzyme pH tối ưu của –amylase của nấm mốc l 4,7-4,9

b) – amylase ( - 1,4 glucan – mantohidrolase 3.2.1.2)

- amylase xc tc sự thủy phn cc lin kết – 1,4glucan trong tinh bột, glucogen

và polysaccaric đồng loại,phân cắt tuần tự gốc maltose một từ đầu không khử của mạch Maltose tạo thành có cấu hình , vì thế amylase ny được gọi là – amylase Tc dụng của – amylase lên tinh bột có thể biểu diễn lên sơ đồ sau:

Tinh bột 54 – 58% maltose + 42 – 46% – dextrin

(Glucogen)

Nếu cho cả – amylase v – amylase cùng đồng thời tác dụng lên tinh bột thì tinh bột bị thủy phn tới 95%

c) Glucoamylase ( - 1,4 glucan – mantohidrolase 3.2.1.3) hay –

amylase

Glucoamylase thủy phn lin kết - 1,4 glucan trong polysaccharide, tách tuần

tự từng gốc glucose một khỏi đầu không khử của mạch Glucoamylase có khả năng xúc tác thủy phân đ lin kết - 1,4 lẫn - 1,6 glucan Glucoamylase l enzym ngoại phân (exoenzym) nó thủy phân polysaccharide từ đầu không khử để tạo ra glucose Khi thủy phân tinh bột cùng với glucose cịn cĩ thể tạo thnh cc - oligosaccharide Ngồi cc lin kết – 1,4 v – 1,6 glucoside, glucoamylase cịn cĩ khả năng thủy phân các lin kết – 1,2 v – 1,3 glucoside nửa

Glucoamylase có khả năng thủy phân hoàn toàn tinh bột, glucogen,

amylopectin dextrin cuối, panose, isomatose v maltose tới glucose Các cơ chất cấu tạo phân nhánh ( amylopectin, glucogen, - dextrin) bị glucoamylase tấn công với vận tốc khá lớn So với tốc độ thủy phân các cơ chất khác nhau bằng glucoamylase tinh thể cho thấy rằng các polysaccharide phân tử lớn hơn thì bị thủy phn nhanh hơn là các phân tử thấp

Sơ đồ thủy phân glucid bởi enzym glucoamylase như sau:

Glucoamlase kiểu Tinh bột hay oligosacarit 100% glucose

Glucoamylase kiểu Tinh bột hay oligosacarit 80-85% glucose + oligosacarit

d Oligo-1,6-glucosilase hay dextrinnase tới hạn

(dextrin-6-glucanhydrolase, 3.2.1.10)

Enzyme ny thủy phn cc loại lin kết -1,6- glucoside trong izomaltose, panose

và các dextrin tới hạn và có thể chuyển hóa các cơ chất này đến các đường lên men được Các loài nấm sợi Asp Awamori, Asp Oryzae, Asp Usamii sinh tổng hợp enzyme này mạnh hơn cả

Ngoài các enzyme được kể trên, trong họ hàng cuả amylase cịn cĩ cc enzyme đồng loại nư Dưới đây sẽ điểm qua một vài enzyme đó

e Pullulanase

Ở vi khuẩn Aerobacter aerogenes người ta tìm thấy cc enzyme cĩ khả năng thủy phân lin kết -1,6 glucoside trong các polyose và oligosaccharide kiểu tinh bột

và glucogen Cơ chất đặc thù enzyme này là pullulan – một polysaccharide được tách ra từ giả nấm men Aureobasidium punllana sym Pullulasia pullulans Vì vậy

m enzyme ny được gọi là pullulanase Phân tử lượng của nó là 145.000

f -glucosidase hay maltase (-D,glucoside-glucohydrolase, 3.2.1.20)

Nhiều loại nấm sợi sản sinh enzyme này Giống như glucoamylase, nó tác dụng được trên maltose thành glucose nhưng không thủy phân tinh bột Nĩ cịn cĩ hoạt tính glucosyltransferase, tức l cĩ khả năng chuyển các gốc glucosyl sang đường và rượu Khi nghiên cứu cặn kẽ về tính chất của maltose tách từ canh trường bề mặt của Asp Oryzae cho biết rằng maltose và glucozyltransferase là một enzyme đồng nhất vừa có khả năng thủy phân liên kết -1,4, trong các glucopiranoside vừa có khả năng chuyển các gốc glucoside sang đường và rượu

g Transglucosyldase

Ở nhiều loại nấm sợi Aspergillus, transglucosyldase luôn luôn tương tác với glucoamylase Nó có cả hoạt tính transferase lẫn hoạt tính thủy phn Vì thế sự cĩ mặt của nĩ trong dung dịch thường gây nên những nhầm lẫn về sự tồn tại của glucoamylase Transglucosyldase thực hiện việc chuyển các gốc glucosyl sang các nhóm mono, di- và oligosaccharide, xúc tc tạo thnh cc lin kết -1,4 v -1,6 glucoside Pazur (1961) đ tch được enzyme này từ Asp niger bằng phương pháp sắc ký hấp thụ trn DEAE-cellulose v cho biết cơ chế tác dụng của nó

3 Hoạt lực của cc enzyme amylase

Khi sử dụng bất kì 1 chế phẩm enzyme no cũng cần biết r hoạt lực xua1c tc của nĩ Cc chế phẩm cĩ hoạt tính phn giải tinh bột thường chứa 1 loại enzyme amylase Vì vậy hoạt lực tổng hợp của chng phản nh tc dụng tất cả cc amylase cĩ trong chế phẩm

-amylase dễ dng thủy phn tinh bột thnh dextrin khơng cho mu với iodine, cịn glucoamylase lại phn giải tinh bột tới glucose v lm thay đổi màu với iodine chậm,

vì lẽ trong dung dịch luơn cĩ một lượng nhỏ dextrin phân tử lớn Do vậy mà người

ta đánh giá sự có mặt của -amylase trong chế phẩm (hoặc canh trường vsv) bằng sự thay đổi màu với iodine, cịn đánh giá sự có mặt của glucoamylase bằng sự tích tụ

glucose, mặc dù r rng l hiện diện đồng thời của cả 2 enzyme này đ lm tăng hiệu quả phân giải

Hoạt độ thật của từng enzyme một thấp hơn so với số liệu thu được Cho nên, nếu như ta làm việc với chế phẩm phức hợp thì phải luơn luơn xc định hiệu lực tác dụng tổng hợp của mọi amylase lên cơ chất Để xác định hoạt độ của các enzyme amylase có thể dùng một trong các phương pháp sau:

 Đo sự biến thiên độ nhớt của dung dịch bằng nhớt kế khi cho amylase tác dụng lên hồ tinh bột, khi đó các mạch phân tử cơ chất bị cắt ngắn, độ nhớt dung dịch giảm dần

 Đo mật độ quang của dung dịch sau khi thực hiện phản ứng màu với iodine Khi có amylase tc dụng thì cc sản phẩm phn giải của tinh bột sẽ cho mu khc nhau đối với iodine

 Đo lượng đường maltose hoặc glucose tạo thành sau khi cho enzyme tác dụng lên cơ chất Đáng chú ý hệ enzyme amylase có các hoạt độ đặc trưng sau:

 Hoạt độ amylase (HĐA) đặc trưng cho khả năng thủy phân tinh bột bởi các enzyme amylase (chủ yếu là của -amylase) tới dextrin cho màu với iodine khác với màu của tinh bột ban đầu Hiện nay phương pháp so màu quang điện của Rukliadeva và Goriatreva (1985) được xem là phương pháp xác định hoạt độ amylase tiêu chuẩn

 Hoạt độ glucoamylase (HĐGI) đặc trưng cho khả năng của chết phẩm thủy phân tinh bột đến glucose Muốn xác định HĐGI cần đo được lượng glucose tạo thành

 Hoạt độ đường hóa (HĐĐH) phản ánh khả năng của các enzyme amylase đường hóa tinh bột đến các đường khử

 Hoạt độ maltose (HĐM) đặc trưng cho khả năng thủy phân maltose tới glucose của chế phẩm enzyme

 Hoạt độ dextrinase (HĐDEX) đặc trưng cho khả năng thủy phân “ các dextrin tới hạn “ tới đường khử của chế phẩm enzyme

4 Thu nhận enzyme amylase từ VSV

a Sinh trưởng và sinh tổng hợp amylase ở VSV

Khi nuơi VSV tạo amylase cĩ hai qu trình lin quan mật thiết với nhau Qa trình tổng hợp sinh khối VSV v qu trình tích tụ enzyme trong tế bo hay ngồi mơi trường

Ở một số VSV, qu trình sinh tổng hợp amylase tiến hnh song song với qu trình sinh trưởng, nghĩa là sự tích tụ enzyme phụ thuộc tuyến tính vào sự tăng khối

Sự tạo thành amylase cực đại thường xảy ra sau khi quần thể tế bào VSV đạt điểm sinh trưởng Sinh trưởng của VSV hầu như không kèm theo sự tích lũy

enzyme amylase trong canh trường, chỉ sau khi kết thúc pha sinh trưởng mới xảy

ra sự tổng hợp enzyme cực lớn

Amylase ngoại bào được tổng hợp liên tục và độc lập với amylase nội bào

Sự tổng hợp cc enzyme amylase bắt đầu khi việc tạo protein của tế bào đ kết

thc hoặc gần kết thc v cạnh tranh với qu trình ny

Nồng độ tinh bột và các nguồn cacbon khác cũng có ảnh hưởng lớn đến sự

tạo thành các enzyme riêng biệt của hệ amylase khi nuôi chủng Asp oryzea 3-0-15

đột biến thể hiện ở bảng sau:

Nguồn

cacbon

Hoạt độ của enzyme, đv/100ml Nguồn

Cacbon

Hoạt độ của enzyme, đv/100ml -amylase Oligo-1,6

glucozidase

-amylase Oligo-1,6

glucozidase

b) Các yếu tố ảnh hưởng của môi trường đến tổng hợp enzyme amylase

 Ảnh hưởng của nguồn nitơ dinh dưỡng:

Khi chuẩn bị môi trường dinh dưỡng để nuôi VSV tạo amylase người ta

dùng muối vô cơ NaNO3 l nguồn nitơ dinh dưỡng để nuôi nhiều loại nấm sợi tạo

amylase

Cho nguồn nitơ nhất định vào môi trường có thể kích thích tổng hợp

amylase này và ức chế tổng hợp amylase khác

Ảnh hưởng của nguồn nitơ tới sinh tổng hợp các enzyme amylase:

Nguồn nitơ Liều lượng muối, %

theo N

Hoạt độ enzyme sau 6 ngày nuôi đv/100ml

NaNO3

NaNO3

(NH4)2SO4

NH4NO3

NH4NO3

NH4H2PO4

0,30 0,15 0,15 0,15 0,30 0,30

145 26

98 45 5,5

8000 3300

4100 4900 8000

Ngồi ra cịn dng nhiều nguồn nitơ hữu cơ (gelatin, casein, nước chiết ngô)

nhưng cho hiệu quả kém hơn nhiều so với nguồn nitơ vô cơ

 Ảnh hưởng của amino acid:

Amino acid là những cấu tử hợp thành cấu tử enzyme Mặt khác các amino acid lại không đồng nhất về giá trị dinh dưỡng nên sử dụng hỗn hợp amino acid sẽ

có giá trị dinh dưỡng lớn hơn và cho những chất lượng mới Amino acid có ảnh hưởng tốt tới sinh lý của VSV cũng như sinh tổng hợp enzyme amylase

 Ảnh hưởng của nguồn khoáng dinh dưỡng

Các nguyên tố đa lượng và vi lượng (Mg, P, Ca, S, Co, Zn, Mn,…) có ảnh hưởng lớn tới sinh trưởng và tổng hợp các enzyme amylase của VSV

 Ảnh hưởng của pH nguyn liệu

Ảnh hưởng của PH cm ẩm tới sinh tổng hợp amylase

Cc chất lm

ẩm cm mì tới

độ ẩm 60%

phẩm đv/g

thnh phẩm

α-amylase

Oligo-1,6 glucosidas e

Maltas e Trước

thanh trng

Sau thanh trng Nước my

HCl (0,1 N)

HCl (0,2N)

HCl (0,25N)

HCl (0,3N)

6,0 5,0 4,5 4,0 3,6

6,1 6,7 6,8 6,1 6,0

6,4 6,7 6,8 6,1 6,0

25,0 27,3 24,7 10,4 8,7

1008 1230 1172 1100 1130

130 134 127 134 133

c Các phương pháp thu nhận enzyme amylase:

Trong số những yếu tố có ảnh hưởng lớn đến sinh tổng hơp các enzym amylase trong quá trình nuơi VSV, thì thnh phần mơi trường, tính chất cơ lý của môi trường , độ tiệt trùng, độ ẩm ban đầu, độ thoáng khí ,nhiệt độ nuôi và pH môi trường…là những yếu tố cơ bản tối quan trọng

Sơ đồ quy trình thu nhận enzyme amylase từ VSV:

Chuẩn bị mơi trường

Có 2 phương pháp VSV là phương pháp bề mặt (pp nổi) và phương php bề

su (pp chìm) Phương pháp nuôi quyết định sơ đồ công nghệ nuôi:

Nuơi cấy VSV giống

Ph vỡ tế bo

enzyme thơ Lọc hoặc ly tm

Cơ dặc

Tinh chế

Sấy

Enzym ngoại bo Enzym nội bo

Enzym tinh khiết

Nuôi VSV tạo amylase bằng phương pháp bề mặt

Hầu hết VSV tạo amylase đều hấp thụ carbon chủ yếu ở dạng các hợp chất hữu cơ (tinh bột, dextrin…) hydro ở dạng H2O và của các hợp chất hữu cơ, oxy ở trong thành phần cấu tạo cơ bản của môi trường và ở dạng oxy phân tử

Cấu tử chính của môi trường VSV tạo amylase bằng pp bề mặt l cm mì, cm gạo Cm mì, cm gạo l nguyên liêụ hoàn hảo và có thể là 1 cấu tử duy nhất của môi trường để nuôi VSV không cần bổ sung thm cc chất khc nữa Cm mì 16-22% tinh bột, 10-12% protein, trong đó các amino acid quan trọng như methionine (0,19%), cystine (0,3%), arginine(1%), lysine (6%), tryptophan(0,3%), 3-4% chất béo, 10,3% cellulose, các nguyên tố tro (Na-0,09%, K-1%,Ca-0,16%,P-0,94% ) và nguyên tố vi lượng cùng các chất khác Cám gạo có khoảng 20% tinh bột 10-15% chất béo ,10-14% protein ,8-16% cellulose, các chất hoà tan không chứa nitơ (37-59%)

Chất lượng của cám gạo, cm mì cĩ ảnh hưởng lớn tới hoạt lực của các enzym amylase cám gạo không được chứa tinh bột dưới 20-30%, cám không có

dư vị chua hay đắng, không hôi mùi mốc, độ ẩm không quá 15%, tạp chất độc không quá 0.05% Cấu tử bổ sung được đưa vào có thể là chất làm xốp môi trường hoặc làm giàu thêm các chất dinh dưỡng và chất sinh trưởng mà cám không

có đủ Các cấu tử này thường là mầm mạch (15-20%) , trấu(2-25%), mùn cưa (5-10%)… Có thể dùng cặn b canh trường rắn (sau khi trích ly enzym ) làm cấu tử chính của môi, đảm bảo chế độ tiệt trùng Cám và chất phụ gia chứa nhiều bào tử VSV khác nên cần phải thanh trùng để bảo đảm chúng nuôi phát triển bình thường

và canh trường sản xuất không chứa VSV ngoại lai.Cần thanh trùng dưới áp suất hơi 1-1,5 atm trong vịng 6-8 giờ, cĩ thể thanh trng bằng hơi nóng ở nhiệt độ 120oC trong 90 phút Khi thanh trùng cho vào 0,2% formalin (40%0 và 0,8% HCl kỹ thuật theo khối lượng môi trường

-Độ ẩm tối thích của môi trường: Trong điều kiện sản xuất, độ ẩm ban đầu tối thích (đối với Asp Niger, Asp Awamort, Asp Flavus, Asp Oryzae )của môi trường là 58-60% và phải giữ cho môi trường có độ ẩm đó trong suốt quá trình nuơi Độ ẩm mà tăng quá 55-70% sẽ làm giảm độ thoáng khí , cịn thấp hơn 50-55% thì kìm hm sinh trưởng và phát triển của VSV cũng như sự tạo enzym

amylase Trong điều kiện tiệt trùng tốt (môi trường hình tam gic, trong tủ ấm phịng thí nghiệm hoạt lực amylase cao nhất thu được ở độ ẩm 65-68%)

Ảnh hưởng của độ ẩm môi trường đến sinh tổng hợp enzym amylase được trình by trong bảng sau:

Phương

án thí

nghiệm

Độ ẩm (%)

Hoạt động amylase đv/g canh trường khô

Độ ẩm (%)

Hoạt động amylase đv/g canh trường khô

Độ ẩm (%)

Hoạt động amylase đv/g canh trường khô Khay để

hở

Khay

đậy nắp

Cần thơng khí lin tục suốt thời kì sinh trưởng của VSV Trong quá trình sinh trưởng của mình VSV tiu thụ 25-35% chất dinh dưỡng của môi trường và thải ra 1 lượng lớn nhiệt sinh lý v CO2 Vì vậy cần phải thải nhiệt ny bằng thơng giĩ với khơng khí vơ trng cĩ độ ẩm tương đối khoảng 100% Chế độ thông khí có thể liên tục , gián đoạn (hoặc không khí tự nhiên )tuỳ thuộc vào chiều dày của lớp môi trường nuôi , vào khoảng cách giữa các tầng khay và dy khay Thường là ở giai đoạn sinh trưởng thứ nhất phải thong khí vào phịng nuơi koảng 4-5 lần thể tích khơng khí trn 1 thể tích phịng nuơi/1 giờ, cịn ở giai đoạn thứ 3 giảm đi chỉ cịn

10-12 thể tích khơng khí

Nhiệt độ nuôi:tồn bộ chu kì sinh trưởng của nấm mốc trên cám có thể chia

làm 3 thời kỳ:

-Thời kì trương và nảy mầm của đính bào tử (đối với nấm mốc 10-11 giờ đầu tiên, đối với vi khuẩn 3-4 giờ).Trong thời kì ny phải đốt nóng không khí phịng nuơi v giữ cho nhiệt độ phịng nuơi khơng thấp hơn 23-30oC đối với nấm mốc và duy trì nhiệt độ 32-38oC cho vi khuẩn Độ ẩm tuơng đối của không khí là 96-100%

-Thời kì sinh trưởng nhanh của hệ sợi (kéo dài trong vịng 4-18 giờ) Ở giai đoạn này nấm mốc hô hấp rất mạnh và tạo ra 1 lượng nhiệt sinh lý rất lớn.Kết quả l trong lớp sợi nấm đang mọc nhiệt độ tăng lên đến 37-40oC , đôi khi cao hơn tới

47oC.Vì vậy cần ohải hạ nhiệt độ phịng nuơi gip cho sợi nấm mọc đều và đẹp Ở nhà máy người ta thổi không khí vô trùng có nhiệt độ 28-29oC và độ ẩm cao vào phịng nuơi

-Thời kì tạo enzym amylase mạnh mẽ (ko di từ 10-20 giờ) Trang thời kì ny cc

qu trình trao đổi chất dần dần yếu đi, sự toả nhiệt giảm mạnh Các enzym amylase được tổng hợp mạnh mẽ Đối với đa số VSV ở giai đoạn này nên hạ nhiệt độ

xuống 3-4oC so với giai đoạn đầu Nhiệt độ tối thích cho sinh trưởng của đa số nấm mốc trên môi trường rắn là 28-30oC , cho Bac Subtilis l 35-37oC