5 xét nghiệm vi sinh chẩn đoán lao

13-Sep-18 XÉT NGHIỆM VI SINH CHẨN ĐOÁN LAO VÀ LAO KHÁNG THUỐC LOẠI BỆNH PHẨM – THỂ TÍCH BẢO QUẢN VÀ VẬN CHUYỂN MẪU 13-Sep-18  Bệnh phẩm phải đảm bảo chất lượng số lượng; thu thập, vận chuyển xử lý cách  Tùy theo thể loại bệnh lao mà loại bệnh phẩm thu thập khác nhau: Loại bệnh phẩm Đàm Thể tích 5-10ml (VN: 3-5ml) Dịch não tủy Dịch abces Dịch màng phổi, dịch màng tim, dịch màng bụng Dịch dày Hạch lympho Dịch rửa phế quản 10ml, nhiều tốt 10ml, nhiều tốt 10ml, nhiều tốt Nước tiểu Sinh thiết mô Phân Máu Xương, tủy xương 50ml, nhiều tốt 1g ≥1g 10ml 100mg, nhiều tốt 1-3ml bệnh phẩm chọc hút 5-10ml phần hay toàn hạch ≥ 5ml Infectious diseases- Donald Armstrong, Jonathan Cohen, 1999 13-Sep-18 % BỆNH PHẨM PHÂN LẬP ĐƯỢC M.tb THỂ TÍCH DỊCH NÃO TỦY - TỈ LỆ CẤY DƯƠNG 118 BN LMN/HIV âm 90 80 70 60 50 40 30 20 10 57 80 78 6.0-7.9 >8 62 40 0-1.9 2.0-3.9 4.0-5.9 THỂ TÍCH DỊCH NÃO TỦY (ml) Thwaites, G E., T T Chau, and J J Farrar 2004 Improving the bacteriological diagnosis of tuberculous meningitis J Clin Microbiol 42:378-9  Các bệnh phẩm phải chuyển đến phịng xét nghiệm  Nếu khơng có điều kiện chuyển mẫu (đàm), giữ mẫu 40C vòng 3-4 ngày 13-Sep-18 SỰ PHÁT TRIỂN CÁC TEST CHẨN ĐOÁN Advances in Diagnostic Assays for Tuberculosis Cold Spring Harb Perspect Med 2015;5:a017806 13-Sep-18 CÁC PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN MỚI …  Cần:  Cho kết nhanh  Cho kết xác: độ nhạy, đặc hiệu cao  Test lưu trữ thực nhiệt độ phịng  Dễ thực hiện, đơn giản  Khơng cần trang thiết bị đại, phức tạp  Rẽ tiền  Có thể áp dụng rộng rãi nước có mật lao cao 10 13-Sep-18 11 XÉT NGHIỆM VI SINH CHẨN ĐỐN LAO PHƯƠNG PHÁP SOI TÌM AFB  Được áp dụng để chẩn đoán phát lao nước có gánh nặng lao với nguồn lực hạn chế  Dễ thực hiện, chi phí thấp  Cho kết xác nhanh, vịng vài  Khơng phân biệt vi khuẩn sống hay chết, vi khuẩn nhạy hay kháng thuốc, MTB hay NTM  Các phương pháp soi:  Soi trực tiếp (áp dụng rộng rãi)  Soi (áp dụng hạn chế) 12 13-Sep-18 PHƯƠNG PHÁP SOI TRỰC TIẾP (1)    10.000 vi khuẩn/ml đàm Độ nhạy: 50 – 80%, Độ đặc hiệu: 98 – 99% Thu thập mẫu đàm ngày, cách 13 Fuchsin 0.3% - 05 phút Rửa nhẹ vòi nước NHUỘM Rửa nhẹ vòi nước Acid cồn 3% - 03 phút ZIEHL NEELSEN Methylen 0.3% - phút Rửa nhẹ vịi nước – Để khơ tự nhiên 14 13-Sep-18 PHƯƠNG PHÁP SOI TRỰC TIẾP NHUỘM ZN (2) Cách đọc ghi kết AFB/100 qt Âm tính – AFB/100pt Ghi số cụ thể 10 – 99 AFB/100qt 1+ – 10 AFB/qt 2+ >10 AFB/qt 3+  Tỉ lệ phát hiện:  Đàm 1: 80 – 83%  Đàm 2: Thêm khoảng 10%  Đàm 3: Thêm khoảng 5% Auramine 0.1% - 20 phút 2011 15 Rửa nhẹ vòi nước NHUỘM Rửa nhẹ vòi nước HUỲNH KMnO4 0.5% - phút QUANG Acid cồn 0.3% - phút Rửa nhẹ vịi nước – Để khơ tự nhiên 16 13-Sep-18 SOI TÌM AFB BẰNG KHV HUỲNH QUANG (3) NC phân tích tổng hợp Bệnh phẩm khơng xử lý Bệnh phẩm xử lý Độ đặc hiệu (%) KHV thường Độ nhạy (%) 32 - 94 KHV HQ 52 - 97 94 - 100 KHV thường 52 - 94 94 - 100 KHV HQ 63 - 97 94 - 100 94 - 100 17 Lancet Infect Dis, 2006.6(9):p.570-81 SOI TÌM AFB BẰNG KHV HUỲNH QUANG (4) KHV HUỲNH QUANG LED         Sử dụng đèn LED cực sáng nguồn sáng phản chiếu, chuyển ánh sáng thường thành ánh sáng huỳnh quang Khơng thay bóng đèn Khơng tạo nhiệt q trình sử dụng Giảm lượng tiêu thu Có thể sử dụng pin Giảm giá thành 10.000 Có thể sử dụng nhiều loại thuốc nhuộm (Au/KMnO4; AuRhod/KMnO4; Au/MethBlue) 18 13-Sep-18 KHV HQ LED TCYTTG khuyến cáo sử dụng vào năm 2009 để phát lao nước có dịch tể lao cao Chuẩn vàng Độ nhạy LED-FM Độ đặc hiệu LED-FM Cấy 93% (85% - 97%) 99% (98% - 99%) Soi trực tiếp (ZN) Tăng 6% (0.1% - 13%) Không thay đổi Soi huỳnh quang cổ điển Tăng 5% (0 – 11%) Tăng 1% (-0.7% - 3%) Giảm thời gian đọc tiêu 50% so với ZN 19 PHƯƠNG PHÁP CẤY     >100 - 1000 vi khuẩn/ml đàm Vi khuẩn lao tăng sinh tốt môi trường trứng chứa glycerol asparagine mơi trường lỏng chứa serum albumin bị Tăng tỉ lệ phát khoảng 30 – 50% so với phương pháp soi Cho kết chậm thời gian nhân đôi dài (18-24 giờ):    Phương pháp cấy đặc: tuần – tháng Phương pháp cấy lỏng: – tuần Các chủng cấy dương dùng để thực :    Các xét nghiệm định danh Kháng sinh đồ Xét nghiệm sinh học phân tử… 20 10 13-Sep-18 29 XÉT NGHIỆM VI SINH CHẨN ĐOÁN LAO KHÁNG THUỐC PHƯƠNG PHÁP KHÁNG SINH ĐỒ TRÊN MÔI TRƯỜNG ĐẶC (1)  Phương pháp kháng sinh đồ cổ điển: phương pháp tỉ lệ kháng (proportional DST method)  Là phương pháp kháng sinh đồ gián tiếp  Được công nhận chuẩn vàng chẩn đốn lao kháng thuốc  Tính chất kháng thuốc xác định dựa tỉ lệ % số khóm trùng đếm ống mơi trường có thuốc ống môi trường không thuốc  Được khuyến cáo thực bệnh nhân lao/nghi lao kháng thuốc: BN bỏ trị, thất bại điều trị, tái trị, HIV…  Rẽ tiền 30  Thời gian có kết từ 28 – 42 ngày kể từ có kết cấy dương tính 15 13-Sep-18 PHƯƠNG PHÁP KHÁNG SINH ĐỒ TRÊN MÔI TRƯỜNG ĐẶC (1) Thuốc kháng lao hàng Thuốc kháng lao hàng INH Streptomycin Rifampicin Ethambutol Ofloxacin Amikacin Ethionamide Kanamycin PAS Capreomycin PZA: Phương pháp Wayne: positive: nhạy (có pyrazinamidase) pyrazinamidase/MTB (pncA gene) PZA (prodrug) Pyrazinoic acid (POA) dạng hoạt động PZA, diệt MTB 31 Jonmalung et al BMC Microbiology 2010, 10:223 PHƯƠNG PHÁP KHÁNG SINH ĐỒ TRÊN MƠI TRƯỜNG ĐẶC (3)  Giải thích kết quả: vd: với tỉ lệ kháng 1%  Nếu tỉ lệ