CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CÁC CHẤT CHUYỂN HOÁ THUỘC NHÓM NITROFURAN TRONG THỦY SẢN

Bài trình bày về " các PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CÁC CHẤT CHUYỂN HOÁ THUỘC NHÓM NITROFURAN TRONG THỦY SẢN"

MỤC LỤC

I NITROFURAN 3

1 Tác dụng của các chất kháng sinh nhóm nitrofuran 3

2 Dư lượng kháng sinh nhóm nitrofuran trong thực phẩm 3

3 Các phương pháp xác định kháng sinh nhóm nitrofuran 3

II. ĐỊNH LƯỢNG CÁC CHẤT CHUYỂN HOÁ THUỘC NHÓM NITROFURAN TRONG THỦY SẢN BẰNG SẮC KÝ LỎNG GHÉP ĐẦU DÒ KHỐI PHỔ BA TỨ CỰC (LC/MS/MS) 3

1 Phạm vi áp dụng 3

2 Công thức 3

3 Nguyên tắc 3

4 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất, chất chuẩn 3

5 Hóa chất, dung dịch 3

6 Tiến hành phân tích 3

7 Phân tích trên LC /MS/MS 3

8 Trình tự tiêm mẫu 3

9 TÍNH KẾT QUẢ 3

III BÁO CÁO KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ PHƯƠNG PHÁP 3

1 Các thông số cần đánh giá: 3

3 Thực hiện 3

4 Kết quả 3

5 Xác định giới hạn phát hiện của phương pháp: 3

VI ĐỊNH LƯỢNG NITROFURAN (AOZ) BẰNG PHƯƠNG PHÁP ELISA 3

1 THÀNH PHẦN BỘ KIT 3

2 THIẾT BỊ VÀ DỤNG CỤ HÓA CHẤT KHÔNG KÈM THEO 3

3 CHUẨN BỊ DUNG DỊCH THỬ 3

4 CHUẨN BỊ MẪU 3

5 TIẾN HÀNH PHÂN TÍCH BẰNG PHƯƠNG PHÁP ELISA 3

6 DIỄN GIẢI KẾT QUẢ 3

7 BẢO QUẢN 3

8 LƯU Ý AN TOÀN 3

V PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH DÒNG CHẢY DÙNG CHẤT NHẠY QUANG FI-CL 3

1 Dung dịch và thuốc thử 3

2 Thiết bị 3

3 Phương pháp 3

4 Chuẩn bị mẫu 3

5 Kết quả và thảo luận 3

6 Kết luận 3 TÀI LIỆU THAM KHẢO 3

PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CÁC CHẤT CHUYỂN HOÁ THUỘC NHÓM

NITROFURAN TRONG THỦY SẢN

An toàn vệ sinh thực phẩm là vấn đề đang được cả xã hội quan tâm, đặc biệt

là ở đô thị và các khu công nghiệp, khi ngày càng có nhiều tác nhân độc hại bịphát hiện trong thực phẩm khiến dư luận lo ngại Tuy nhiên trong lĩnh vực sảnxuất kinh doanh nói chung và trong chăn nuôi gia súc, gia cầm nói riêng cònnhiều vấn đề đáng lo ngại, như việc quản lý sử dụng thuốc kháng sinh còn lỏnglẻo, tình trạng sử dụng các chất bổ trợ trong chăn nuôi khá tùy tiện Từ đó đã đểlại tồn dư các hóa chất, kháng sinh trong sản phẩm chăn nuôi, gây nguy hạinghiêm trọng đến sức khỏe người tiêu dùng

Nitrofuran là một nhóm kháng sinh tổng hợp thường được sử dụng trongthức ăn gia súc như kích thích tăng trưởng và là phương pháp điều trị dự phòng,điều trị các bệnh nhiễm trùng đường tiêu hóa gây ra bởi Escherichia vàSalmonella trong chăn nuôi gia súc, gia cầm Chúng cũng đã được sử dụng đểđiều trị nhiễm trùng do vi khuẩn và sinh vật đơn bào trong nuôi trồng thủysản Tuy nhiên chúng gây tác hại cho sức khỏe con người, đặc biệt là gây ungthư và đột biến ở người Năm 2002 – 2003 phát hiện dư lượng chất chuyển hóacủa nitrofuran trong số lượng lớn các mẫu từ gia cầm và nuôi trồng thủy sản cácsản phẩm nhập khẩu vào Châu Âu từ một số khu vực Đông Nam Á và các nướcNam Mỹ Từ đó đã dẫn đến lệnh cấm sử dụng trong sản xuất thực phẩm độngvật tại nhiều quốc gia bao gồm Mỹ, Canada và EU Các nước này đã đặt lệnh

cấm trên tất cả các loại thực phẩm nhập khẩu có chứa dư lượng nitrofuran.Tháng 3 năm 2003 EU đã quy định yêu cầu giới hạn nhỏ nhất cần thực hiệnphương pháp (MRPL) đối với các chất chuyển hóa nhóm nitrofuran là 1 μg/kg.g/kg.Năm 2002, ở Việt Nam, Bộ nông nghiệp và phát triển nông thôn đã quyết địnhcấm sản xuất, nhập khẩu, lưu thông và sử dụng một số loại kháng sinh hóa chấttrong sản xuất và kinh doanh TACN trong đó có nitrofuran.

1 Tác dụng của các chất kháng sinh nhóm nitrofuran

Nitrofuran là một nhóm kháng sinh tổng hợp có chứa nhóm 5-nitro, thườngđược sử dụng làm thức ăn gia súc kích thích sự tăng trưởng, chủ yếu đối với giasúc (như gia cầm, lợn), nuôi trồng thủy sản (cá, tôm) và nuôi ong để điều trị các

vi khuẩn và sinh vật đơn bào nhiễm trùng như viêm ruột tiêu hóa gây ra bởiEscherichia coli và Salmonella spp, gia cầm bệnh tả và bênh cầu trùng màu đenđầu

Các chất nhóm nitrofuran bao gồm Furazolidone, furaltadone, furazolidone,nitrofurazone, khi đi vào cơ thể sinh vật nó tạo thành các chất chuyển hóa tươngứng (AOZ, AMOZ, AHD, SEM) liên kết trong các mô tồn tại trong nhiều tuầnsau khi sử dụng

McCracken và các cộng sự 1995, Nouws và Laurensen 1990 chỉ ra rằng cáchợp chất nhóm nitrofuran sau khi vào cơ thể tạo thành các chất chuyển hóatương ứng liên kết trong các mô

Về mặt cơ chế tác dụng, các chất chuyển hóa từ nitrofuran đã kìm hãm hoặcphá hủy các hệ thống men điều hòa trao đổi chất ở vi khuẩn Do đó vi khuẩnkhông phát triển và không sinh sản được nữa Tác dụng tốt với vi khuẩn gram

âm và gram dương Đồng thời còn tác dụng cả với nguyên sinh động vật, một sốchất có tác dụng tốt trong việc giệt trừ giun đũa

Với nồng độ thấp, nitrofuran có tác dụng kháng sinh, nồng độ cao có tácdụng diệt khuẩn

Theo nhiều báo cáo, nitrofuran tác dụng rất tốt trong việc diệt khuẩnsalmonellosis, colisepticeamia Nitrofuran còn có tác dụng kích thích dinhdưỡng Trộn nitrofuran với thức ăn, theo tỉ lệ thích hợp sẽ giúp cho gà và lợncòn tăng trọng nhanh

Nitrofuran ảnh hưởng đến sức khỏe con người như gây ung thư và đột biến,khi thực phẩm có tồn dư nitrofuran và các dẫn xuất của nó

Do đó hầu hết các nước trên thế giới đã cấm sử dụng kháng sinh nhómnitrofuran trong chăn nuôi Ở Việt Nam, bộ Nông nghiệp và phát triển nông thôn

đã quyết định cấm sử dụng nitrofuran cho vào trong thức ăn chăn nuôi EU đãquy định yêu cầu giới hạn nhỏ nhất cần thực hiện phương pháp (MRPL) đối vớicác chất chuyển hóa nhóm nitrofuran là 1 μg/kg.g/kg

2 Dư lượng kháng sinh nhóm nitrofuran trong thực phẩm

Từ năm 2002 – 2003 nitrofuran thường xuyên được phát hiện thấy trong thịtgia cầm và các sản phẩm nuôi trồng thủy sản nhập khẩu vào các nước EU từThái Lan, Trung Quốc, Đài Loan, Ấn Độ, Việt Nam, Ecuador và Brazil

Hơn nữa, dư lượng nitrofuran cũng được tìm thấy trong sản phẩm gia súc vàgia cầm ở Châu Âu như: Bồ Đào Nha, Ý, Hy Lạp, Romania và Bulgari Sau đó

EU đã kiểm tra và cho thấy nitrofuran ô nhiễm trong các sản phẩm có nguồn gốc

từ hơn 9 quốc gia trong năm 2007, tỷ lệ mắc cao nhất là từ Ấn Độ (37%), TrungQuốc (37%), Bangladesh (10%) và Thái Lan (5%) trong một loạt cá sản phẩmbao gồm tôm, mật ong và thịt hộp

Từ tháng 10/2006 đến tháng 5/2007, FDA liên tục phát hiện thủy sản nhậpkhẩu từ Trung Quốc có nhiễm nitrofuran Kết quả lấy trên các sản phẩm tôm, cátrê, cá ba sa cho thấy, 22/89 mẫu (chiếm 22%) bị phát hiện có chất cấmnitrofuran trong tôm

Ở Việt Nam theo kết quả khảo sát của TS Nguyễn Quốc Ân, phó trưởngphòng quản lý thuốc, cục thú y vào năm 2007 đã phát hiện 5 mẫu thủy sản nuôi

lấy tại ao nuôi nhiễm SEM (3 mẫu tôm, 1 mẫu cá và 1 mẫu cua lột) với hàmlượng từ 0 – 3,55 ng/g Năm 2008 phát hiện 1 mẫu tôm thẻ chân trắng tại Phú

Mỹ – Bình Định nhiễm AOZ với hàm lượng 12,6 ng/g; 2/754 mẫu cua lột tạiCần Guộc – Long An nhiễm SEM với hàm lượng từ 2 – 2,2 ng/g

3 Các phương pháp xác định kháng sinh nhóm nitrofuran

Hiện nay có nhiều phương pháp để xác định kháng sinh nhóm nitrofuran, baogồm: phương pháp sắc ký lỏng với detector UV, phương pháp vi sinh (kỹ thuậtElisa), phương pháp sắc ký lỏng với detector MS/MS

NITROFURAN TRONG THỦY SẢN BẰNG SẮC KÝ LỎNG

GHÉP ĐẦU DÒ KHỐI PHỔ BA TỨ CỰC (LC/MS/MS)

1 Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này qui định phương pháp định lượng kháng sinh nhóm nitrofuran

và các chất chuyển hoá (metabolite) tương ứng trong thủy sản bằng sắc kí lỏngghép đầu dò khối phổ ba tứ cực (gọi tắt là LC/MS/MS)

Giới hạn phát hiện của phương pháp cho bốn chất họ Nitrofuran là 1 g/Kg.g/Kg

2 Công thức

3 Nguyên tắc

Dư lượng liên kết với mô của các chất chuyển hoá nhóm nitrofuran trongthức ăn chăn nuôi được thuỷ phân bằng hydrochloric acid loãng để thu đượccác metabolite tương ứng Các metabolite này được dẫn xuất hoá với 2-nitrobenzaldehyde Định tính và định lượng các chất dẫn xuất bằng thiết bị

- Ðầu dò khối phổ dạng bốn cực với giao diện ESI (Triple quadrupoleMicromass Quattro Ultima hoặc tương đương)

- Cột chiết pha rắn SPE (Oasis HLB)

- Máy lắc vortex VELP

- Methanol (Merck hoặc tương đương, độ tinh khiết 99,9%)

- Amoni acetate (Merck hoặc tương đương, độ tinh khiết 98%)

- 2-NBA (Merck hoặc tương đương, độ tinh khiết 99%)

- K2HPO4.3H2O (Merck hoặc tương đương, độ tinh khiết 99%)

- NaOH (Merck hoặc tương đương, độ tinh khiết 99,9%)

- HCl 37% (Merck hoặc tương đương, độ tinh khiết 99,9%)

- HCl 0,2M: Hút 17 ml HCl 37% vào bình định mức 1000 ml, định mức đếnvạch bằng nước cất

- 2-NBA 1000 mg/l: cân 100 mg 2-NBA hòa tan và định mức vào bình 10 mlbằng methanol

Dung dịch chuẩn bị hằng ngày

- K2HPO4 0,2 M: cân 45,7 mg K2HPO4.3H2O hòa tan và định mức vào bình

1000 ml bằng nước cất 2 lần

- Nước cất 2 lần khử ion

- Dimethyl sulfoxide (DMSO)

- NaOH 2 M: cân 8 g NaOH hòa tan và định mức vào bình định mức 1000 mlbằng nước cất 2 lần

- CH3COONH4 10 mM: cân 0,077 g CH3COONH4 hòa tan và định mức vàobình định mức 1000 ml bằng nước cất 2 lần

Sigma-Aldrich Laborchemikalien GmbH D-30918 Seelze

- Nitrofurazone 100 ng/L trong acetonitrile VETRANAL

Sigma-Aldrich Laborchemikalien GmbH D-30918 Seelze

- Nitrofurantoin VETRANAL, 99,9%

Sigma-Aldrich Laborchemikalien GmbH D-30918 Seelze

CAS-No: [67-20-9]

5.2.2 Pha chế chất chuẩn

- Chuẩn AHD 1000 mg/l: cân 13,2 mg ± 0,1 mg chuẩn AHD.HCl hòa tan

và định mức bằng methanol vào bình định mức 10 ml Bảo quản ở - 200C

sử dụng được trong 6 tháng

- Chuẩn AHD 10 mg/l: hút 100 μg/kg.l chuẩn AHD 1000 mg/l định mức bằngmethanol vào bình định mức 10 ml Bảo quản ở - 200C sử dụng đượctrong 6 tháng

- - Chuẩn SEM 1000 mg/l: cân 14,9 mg ± 0,1 mg chuẩn SEM.HCl hòa tan

và định mức bằng methanol vào bình định mức 10 ml

- - Chuẩn SEM 10 mg/l: hút 100 μg/kg.l chuẩn SEM 1000 mg/l định mức bằngmethanol vào bình định mức 10 ml Bảo quản ở - 200C sử dụng đượctrong 6 tháng

- - Hỗn hợp chuẩn 4 chất (AOZ, AMOZ, SEM, AHD) 1 mg/l: hút lần lượt 1

ml chuẩn AOZ 10 mg/l, AMOZ 10 mg/l, AHD 10 mg/l, SEM 10 mg/l

định mức bằng methanol vào bình định mức 10 ml Bảo quản ở - 200C sửdụng được trong 3 tháng

- - Hỗn hợp chuẩn 4 chất (AOZ, AMOZ, SEM, AHD) 20 μg/kg.g/l: hút 200 μg/kg.lhỗn hợp chuẩn 4 chất (AOZ, AMOZ, SEM, AHD) định mức bằngmethanol vào bình định mức 10 ml Bảo quản ở - 200C sử dụng đượctrong 1 tháng

- - d4-AOZ 1000 mg/l: Cân 10 mg ± 0,1 mg d4-AOZ định mức bằngmethanol vào bình định mức 10 ml Bảo quản ở - 200C sử dụng đượctrong 6 tháng

- - d4-AOZ 10 mg/l: hút 100 μg/kg.l d4-AOZ 1000 mg/l định mức bằngmethanol vào bình định mức 10 ml Bảo quản ở - 200C sử dụng đượctrong 6 tháng

- - d5-AMOZ 1000 mg/l : Cân 10 mg ± 0,1 mg d5-AMOZ định mức bằngmethanol vào bình định mức 10 ml Bảo quản ở - 200C sử dụng đượctrong 6 tháng

- - d5-AMOZ 10 mg/l: Hút 100 μg/kg.l d5-AMOZ 1000 mg/l định mức bằngmethanol vào bình định mức 10 ml Bảo quản ở - 200C sử dụng đượctrong 6 tháng

- - Hỗn hợp nội chuẩn (d4-AOZ, d5-AMOZ, SEM.HCl) 1 mg/l: hút lần lượt 1 ml chuẩn d4-AOZ 10 mg/l, d5-AMOZ

d2-AHD.HCl,13C15N2-10 mg/l, d2-AHD.HCl d2-AHD.HCl,13C15N2-10 mg/l và 13C15N2-SEM.HCl d2-AHD.HCl,13C15N2-10 mg/l định mứcbằng methanol vào bình định mức 10 ml Bảo quản ở - 200C sử dụngđược trong 3 tháng

- - Hỗn hợp nội chuẩn (d4-AOZ, d5-AMOZ, SEM.HCl) 20 μg/kg.g/l: hút lần lượt 200 μg/kg.l hỗn hợp nội chuẩn (d4-AOZ, d5-AMOZ, d2-AHD.HCl, 13C15N2-SEM.HCl) 1 mg/l vào bình định mức 10

d2-AHD.HCl,13C15N2-ml Bảo quản ở - 200C sử dụng được trong 1 tháng

6 Tiến hành phân tích

6.1 Mẫu thử nghiệm

Nếu lượng mẫu dưới 500g: Đem tất cả đi xay nhuyễn để đồng nhấtmẫu Sau đó chia lượng mẫu đã xay thành 2 phần bằng nhau Một phần đemphân tích, phần còn lại đem lưu mẫu

Nếu lượng mẫu trên 500g: Trải mẫu đều trên khay hình chữ nhật Chiamẫu theo nguyên tắc đường chéo, lấy 2 phần mẫu đối diện, thực hiện như vậyđến khi phần mẫu mang xay còn khoảng 200g500g mẫu Sau đó, đem xaynhuyễn để đồng nhất mẫu Phần mẫu còn lại đem lưu mẫu

Cân khoảng 2-3g mẫu đã được đồng nhất cho vào ống ly tâm 50 mL

Lưu ý: Mẫu kiểm soát dương tính có thể được bổ sung một hoặc hai hoặc cả bốn chất trong họ Nitrofuran, (chuẩn bổ sung phải nằm trong khoảng tuyến tính của đường chuẩn, để yên 30 phút Sau đó, tiến hành xử lý mẫu như quy trình )

6.2 Xử lý mẫu

Vì các chất dẫn xuất nitrofuran rất nhạy với ánh sáng nên toàn bộ quy trình

xử lý mẫu phải được tiến hành dưới ánh sáng yếu

6.3 Thuỷ phân và dẫn xuất hoá

Thêm 10 mL hydrochloric acid 0,125 M và 400 mL dung dịch 2-NBAtrong DMSO vào các ống nghiệm chứa mẫu Đậy nắp ống và vortex khoảng

1 phút U mẫu qua đêm (từ 14 đến 16 giờ) ở nhiệt độ 37 ± 2 oC

tâm mẫu trong 10 phút ở tốc độ 5000 vòng/phút, lấy phần trong (dung dịchA).

6.5 Chiết

- Chuẩn bị cột SPE : Nối cột vào bộ chiết SPE, thêm lần lượt 3 mL ethyl

acetate, 3 mL methanol và 5 mL nước cất vào cột Loại bỏ dung dịch chảyqua cột

- Làm sạch dịch chiết: Cho dung dịch A vào cột đã được chuẩn bị

- Rửa cột: Khi mẫu vừa qua hết, thêm 5 mL nước vào cột Loại bỏ dịch chảy

ra khỏi cột Sau đó, cột được làm khô bằng hút chân không khoảng 20 phút

- Giải hấp: bằng cách cho 2 x 2 mL ethyl acetate chảy qua cột với tốc độ 1.5mL/phút Dung dịch chảy ra khỏi cột được thu vào ống nghiệm 10 mL vàthổi khô bằng dòng khí nitơ

6.6 Chuẩn bị mẫu phân tích

Hòa tan cặn khô bằng chính xác 1 mL dung dịch pha động, vortex 20 giây.Lọc dịch đục qua màng lọc 13 mm, 0.45µm và thu dịch lọc vào lọ vial choHPLC

7 Phân tích trên LC /MS/MS

7.1 Điều kiện máy LC

Cột sắc ký: cột C18 150-4mm (hoặc tương đương)Nhiệt độ lò cột: 450C

Thể tích tiêm: 25 g/Kg.lPha động: gradient như sau:

Thời gian

lưu, phút

MeOH (0.1%HCOOH)

H2O (0.1%HCOOH)

Tốc độ dòng ( l/phút)l/phút)

Lưu ý: Với các cột sắc ký lỏng C18 khác nhau (chiều dài, đường kính cột, kích

cỡ hạt ), tỉ lệ thành phần pha động hay tốc độ dòng có thể thay đổi.

7.2 Điều kiện MS

- Kiểu ion hoá: APCI (+) sử dụng tuning offset

- Discharge current: 4 Ag/Kg

- Vaporizer temperature: 4000C

- Sheath gas pressure: 30

- Ion sweep gas pressure: 1,0

- Aux gas pressure: 5

- Capillary temperature: 250

- Capillary offset: 35

- Q2 gas pressure: 1,5

7.3 Điều kiện phân ly MS/MS:

Các tiền ion thuộc nhóm Nitrofuran bị phân ly thành các ion con liên quanđến cấu trúc:

b Mẫu kiểm soát âm tính;

c Mẫu kiểm soát dương tính theo thứ tự nồng độ chất chuẩn bổ sung

từ thấp đến cao;

d Dung môi trắng;

e Mẫu cần kiểm nghiệm;

Chú ý: Khi phân tích mẫu hàng loạt, tiêm xen kẽ một mẫu kiểm soát dương tính

sau khi phân tích chuỗi 5 mẫu và kết thúc là mẫu kiểm soát dương tính.

9 TÍNH KẾT QUẢ

Xây dựng đường chuẩn biểu thị mối quan hệ giữa diện tích pic ion địnhlượng với nồng độ chuẩn (đã quy đổi về độ tinh khiết) của các chất nitrofurantương ứng (bảng 1)

Lượng chất cần phân tích có mặt trong mẫu kiểm được tính theo côngthức sau:

Hàm lượng nitrofuran:

Hàm lượng các metabolite tương ứng:

Trong đó: - X: lượng chất cần phân tích có trong mẫu kiểm, g/kg

- Co: nồng độ chất cần phân tích tính từ đường chuẩn, g/L

- 1: Thể tích định mức 1 mL, mL

- m: khối lượng mẫu phân tích, g

- M1: phân tử khối của nitrofuran

- M2: phân tử khối của metabolite tương ứng

Bảng 1 Ion định lương và ion xác nhận của các chất họ nitrofuran

mảnh

Ion định lượng

Ion xác nhận

III BÁO CÁO KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ PHƯƠNG PHÁP

1 Các thông số cần đánh giá:

Mục này được thực hiện nhằm đánh giá độ độ lặp lại của thiết bị, vùng tuyến

tính, hiệu suất thu hồi và giới hạn phát hiện của phương pháp - được thực hiệnlần đầu tiên bởi người phát triển phương pháp Trong quá trình kiểm nghiệm,phân tích, người có nhiệm vụ phân tích không phải thực hiện mục này

1.2 Đánh giá khoảng tuyến tính:

Do đặc tính của đầu dò khối phố 3 tứ cực (cho độ nhạy cao) và hàm lượngnitrofuran trên nền mẫu thực tế (có hàm lượng thấp, mức ppb) nên phần đánhgiá khoảng tuyến tính chỉ khảo sát với khoảng nồng độ  5 g/L Với cácmẫu có nồng độ Co (nồng độ cuối khi tiêm vào máy) vượt quá 5 g/L, cầngiảm lượng mẫu cân hoặc pha loãng mẫu trước khi tiến hành phân tích

Đường chuẩn xây dựng dựa trên mẫu kiểm soát phải có độ tuyến tính tốt, hệ

số tương quan hồi qui tuyến tính (R2) phải lớn hơn hoặc bằng 0.99

1.3 Xác định giới hạn phát hiện của phương pháp:

Giới hạn phát hiện của phương pháp được xác định thông qua:

- Mẫu trắng được bổ sung Furazolidone, Furaltadone, Nitrofurazone và

Nitrofurantoin tại nồng độ nhỏ nhất mà máy có thể phát hiện (tỉ lệ tín hiệu/nhiễu

- S/N phải thỏa điều kiện : 3 ≤ S/N ≤ 10).

- Khối lượng mẫu phân tích là 2 g

2 Yêu cầu về độ tin cậy của phương pháp:

- Độ ổn định của thiết bị: %RSD < 5%

- Khoảng làm việc của phương pháp:

- Độ tuyến tính của đường chuẩn phải có hệ số tương quan hồi quy R2  0.999

- Hiệu suất thu hồi: từ 80% đến 110% (theo quy định 2002/657/EC)

- Độ lặp lại của phương pháp: %RSD < ½*2(1-0.5logC) (theo quy định2002/657/EC)

- Giới hạn phát hiện: LOD = 1 µg/kg

Mẫu đánh giá hiệu suất thu hồi: Các mẫu thức ăn chăn nuôi không pháthiện Furazolidone, Furaltadone, Nitrofurazone, Nitrofurantoin và các metabolitetương ứng sẽ được bổ sung Furazolidone, Furaltadone, Nitrofurazone vàNitrofurantoin với nồng độ  1 ppb (thực hiện 02 lần), để yên 1 giờ Sau đó,tiếp tục thuỷ phân và dẫn xuất hoá theo qui định tại E.3 (KTSK 81)

y = 204513.1327x - 2960.9743

R2 = 0.9999 0

200000 400000 600000 800000 1000000 1200000 1400000

Bảng 1 Đường chuẩn Furazolidone

CoFurazolidone, g/L Diện tích mũi sắc

y = 436593x + 5803.7

R2 = 0.9997

0 200000 400000 600000 800000 1000000 1200000 1400000 1600000

đó, có thể sử dụng đườngchuẩn nitrofuran để địnhlượng cho cả nitrofuran

và metabolite

4.2 Đánh giá độ đúng

và độ lặp lại của phương pháp:

4.2.1 Độ lặp lại của phương pháp

Đường chuẩn, AOZ

y = 417032.909x - 3053.421

R 2 = 0.999 0

200000 400000 600000 800000 1000000 1200000 1400000

0,363 145465

0,727 284936

1,453 632584