TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8351:2010 THUỶ SẢN VÀ SẢN PHẨM THUỶ SẢN ( XÁC ĐỊNH CÁC CHẤT CHUYỂN HOÁ CỦA NHÓM NITROFURAN ( PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNGKHỐI PHỔKHỐI PHỔ)

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định dư lượng của các chất chuyển hoá của nhóm nitrofuran trong thủy sản và sản phẩm thủy sản bằng sắc ký lỏngkhối phổkhối phổ (LCMSMS). Giới hạn phát hiện của phương pháp là 1 mgkg. 2. Thuật ngữ và định nghĩa Trong tiêu chuẩn này, sử dụng các thuật ngữ và định nghĩa sau: 2.1 Dư lượng liên kết với mô Các chất tồn dư do có các liên kết đồng hoá trị với các đại phân tử trong cơ thể động vật. 2.2 Ion sơ cấp (precursor ion) Ion được tạo ra và chọn lọc sau giai đoạn MS thứ nhất, thông thường, nhưng không nhất thiết nó là một ion phân tử mang điện dương

TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8351:2010 THUỶ SẢN VÀ SẢN PHẨM THUỶ SẢN ( XÁC ĐỊNH CÁC CHẤT CHUYỂN HOÁ CỦA NHÓM NITROFURAN ( PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG-KHỐI PHỔ-KHỐI PHỔ) Fish and fishery products − Determination of nitrofurans metabolites - Liquid chromatogaphic and tandem mass spectrometric method Lời nói đầu TCVN 8351 : 2010 Cục Chế biến, Thương mại nông lâm thuỷ sản nghề muối biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TCVN 8351:2010 THUỶ SẢN VÀ SẢN PHẨM THUỶ SẢN ( XÁC ĐỊNH CÁC CHẤT CHUYỂN HOÁ CỦA NHÓM NITROFURAN ( PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG-KHỐI PHỔ-KHỐI PHỔ Fish and fishery products − Determination of nitrofurans metabolites - Liquid chromatogaphic and tandem mass spectrometric method Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định dư lượng chất chuyển hoá nhóm nitrofuran thủy sản sản phẩm thủy sản sắc ký lỏng-khối phổ-khối phổ (LC/MS/MS) Giới hạn phát phương pháp µg/kg Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn này, sử dụng thuật ngữ định nghĩa sau: 2.1 Dư lượng liên kết với mô Các chất tồn dư có liên kết đồng hoá trị với đại phân tử thể động vật 2.2 Ion sơ cấp (precursor ion) Ion tạo chọn lọc sau giai đoạn MS thứ nhất, thông thường, không thiết ion phân tử mang điện dương 2.3 Ion thứ cấp (production ion) Ion tạo chọn lọc giai đoạn MS thứ hai, ion sinh từ ion sơ cấp trình phân ly va chạm Nguyên tắc Dư lượng liên kết với mô chất chuyển hoá nhóm nitrofuran sản phẩm thuỷ sản thuỷ phân axit clohydric loãng để thu mạch nhánh chất nhóm nitrofuran Các mạch nhánh dẫn xuất hoá 2-nitrobenzaldehyt Định tính định lượng chất dẫn xuất sắc ký lỏng-khối phổ-khối phổ (LC/MS/MS) cách sử dụng đồng vị đơtơri chất chuẩn nội Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử tinh khiết phân tích sử dụng nước cất nước có độ tinh khiết tương đương, trừ có quy định khác 4.1 Metanol 4.2 Metanol-d, 99,5 % D 4.3 Dung dịch axit clohydric, 0,2 M Hoà tan 20 ml axit clohydric (HCl) 32 % 000 ml nước 4.4 Dung dịch natri hydroxit, M Hoà tan 80 g natri hydroxit (NaOH) khan vào 000 ml nước 4.5 Dung dịch 2-nitrobenzaldehyt (NBA), 100 mM metanol Hoà tan 1,51 g 2-nitrobenzaldehyt (C7H5NO3) vào 100 ml metanol 4.6 Dung dịch natri phosphat, 0,3 M Hoà tan 11,4 g natri phosphat ngậm 12 phân tử nước (Na3PO4.12H2O) vào 100 ml nước 4.7 Etyl axetat (CH3COOC2H5) 4.8 Dung môi hoà tan mẫu Trộn 50 ml axetonitril, 450 ml nước 0,5 ml axit axetic 4.9 Pha động A Trộn ml axit axetic với 000 ml nước, lọc qua màng lọc 0,45 µm (5.14) 4.10 Pha động B Trộn 900 ml axetonitril với 100 ml nước ml axit axetic, lọc qua màng lọc 0,45 µm (5.14) 4.11 Các dung dịch chuẩn gốc 4.11.1 Dung dịch chuẩn gốc, 50 mg/l metanol Cân khoảng mg đến mg chất chuẩn: 3-amino-2-oxazolidinon (AOZ), 3-amino-5morpholimethyl-2-oxazolidinon (AMOZ), 1-aminohydantoin (AHD) hydroclorit semicarbazit (SEM) hydroclorit, 3-amino-2- oxazolidinon-d4 hydroclorit (AOZ-d4), 3-amino-5-morpholimethyl-2oxazolidinon-d5 (AMOZ-d5), 3-(2-nitrobenzylidennamino)-2-oxazolidinon (NPAOZ), 5morpholimethyl-3-(2-nitrobenzylidennamino)-2-oxazolidinone (NPAMOZ), 3-(2nitrobenzylidennamino)-2-4imi-dazolidinedione) (NPAHD), 3[(2-nitrophenyl) metylene]hydrazinecarboxamide (NPSEM), xác đến 0,02 mg Hoà tan chất chuẩn metanol (4.1), lưu ý đến độ tinh khiết chất chuẩn Các dung dịch chuẩn gốc bảo quản tối nhiệt độ 0C sử dụng năm 4.11.2 Dung dịch chuẩn gốc AHD-d2, 50 mg/l metanol-d Cân khoảng mg đến mg chất chuẩn 1-amino-hydantoin hydroclorit-d (AHD-d2) , xác đến 0,02 mg Hoà tan chất chuẩn metanol-d (4.2), lưu ý đến độ tinh khiết chất chuẩn Dung dịch chuẩn gốc AHD-d2 bảo quản tối nhiệt độ 0C sử dụng năm 4.12 Hỗn hợp dung dịch chuẩn 4.12.1 Hỗn hợp MM1, mg/l metanol, gồm AOZ, AMOZ, AHD, SEM Lấy 200 µl từ dung dịch gốc AOZ, AMOZ, AHD, SEM (4.11.1) cho vào bình định mức 10 ml, định mức đến vạch với metanol (4.1) Hỗn hợp MM1 bảo quản tối nhiệt độ 0C sử dụng tháng 4.12.2 Hỗn hợp IS1, mg/l metanol-d, gồm AOZ-d4, AMOZ-d5, AHD-d2 Lấy 200 µl từ dung dịch gốc AOZ-d4, AMOZ-d5 (4.11.1) AHD-d2 (4.11.2) cho vào bình định mức 10ml, định mức đến vạch với metanol-d (4.2) Hỗn hợp IS1 bảo quản tối nhiệt độ 0C sử dụng tháng 4.12.3 Hỗn hợp NP1, mg/l metanol, gồm NPAOZ, NPAMOZ, NPAHD, NPSEM Lấy 460 µl dung dịch gốc NPAOZ (4.11.1), 332 µl dung dịch gốc NPAMOZ (4.11.1), 432 µl dung dịch gốc NPAHD (4.11.1) 554 µl dung dịch gốc NPSEM (4.11.1) cho vào bình định mức 10 ml Định mức đến vạch với metanol (4.1) Hỗn hợp NP1 bảo quản tối nhiệt độ 0C sử dụng tháng 4.13 Hỗn hợp dung dịch chuẩn pha loãng 4.13.1 Hỗn hợp chuẩn MM2, 50 µg/l metanol, gồm AOZ, AMOZ, AHD, SEM Lấy 1,00 ml hỗn hợp chuẩn MM1 (4.12.1) cho vào bình định mức 20 ml, định mức đến vạch với metanol (4.1) Hỗn hợp MM2 bảo quản tối nhiệt độ 0C sử dụng tháng 4.13.2 Hỗn hợp chuẩn nội IS2, 50 µg/l metanol-d, gồm AOZ-d4, AMOZ-d5, AHD-d2 Lấy 1,00 ml hỗn hợp chuẩn IS1 (4.12.2) cho vào bình định mức 20 ml, định mức đến vạch với metanol-d (4.2) Hỗn hợp chuẩn nội IS2 bảo quản tối nhiệt độ 0C sử dụng tháng 4.13.3 Hỗn hợp chuẩn NP2, 100 µg/l metanol, gồm NPAOZ, NPAMOZ, NPAHD, NPSEM Lấy 2,00 ml hỗn hợp chuẩn NP1 (4.12.3) cho vào bình định mức 20 ml, định mức đến vạch với metanol (4.1) Hỗn hợp chuẩn NP2 bảo quản tối nhiệt độ 0C sử dụng tháng 4.14 Dung dịch chuẩn làm việc dẫn xuất nitrophenyl-WS1, µg/l Lấy 1,00 ml hỗn hợp chuẩn NP2 (4.13.3) cho vào bình định mức 000 ml, định mức đến vạch với dung môi hoà tan mẫu (4.8) Dung dịch chuẩn làm việc bảo quản tối nhiệt độ 0C sử dụng tuần Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thông thường cụ thể sau: 5.1 Cân phân tích, cân xác đến 0,01 mg 0,02 mg 5.2 Giấy thử pH 5.3 Pipet, 100 µl 5.4 Bình định mức, dung tích 10 ml, 20 ml, 100 ml 000 ml 5.5 Ống ly tâm, dung tích 14 ml, làm polypropylen thuỷ tinh, có nắp đậy 5.6 Máy lắc ống nghiệm 5.7 Lọ đựng mẫu cho sắc ký 5.8 Máy lắc đảo đầu, Heidolf REAX2 tương đương 5.9 Máy nghiền 5.10 Máy ly tâm 5.11 Tủ ấm, điều chỉnh khoảng nhiệt độ 37 0C ± 0C 5.12 Hệ thống cô khí nitơ 5.13 Máy lắc Vortex 5.14 Màng lọc PTFE, 13 mm, 0,45 µm 5.15 Hệ thống LC/MS/MS, trang bị sau: – hệ thống sắc kí lỏng, Water Alliance 2690 tương đương, gồm bơm hệ thống tiêm mẫu; – cột bảo vệ pha đảo C18, Symmetry Sentry Guard tương đương, kích thước 20 mm x 3,9 mm; – cột C18, Symmetry tương đương, kích thước 150 mm x 3,0 mm, µm, – đầu dò khối phổ dạng bốn cực với giao diện ion hoá phun điện tử (ESI), Triple quadrupole Micromass Quattro Ultima tương đương Cách tiến hành 6.1 Chuẩn bị mẫu 6.1.1 Mẫu thử nghiệm Cân xác 1,0 g ± 0,05 g mẫu cần kiểm nghiệm đồng máy nghiền (5.9) cho vào ống ly tâm 14 ml (5.5) Bổ sung 40 µl hỗn hợp chuẩn nội IS2 (4.13.2), đồng để yên 15 6.1.2 Mẫu kiểm soát chất lượng 6.1.2.1 Mẫu kiểm soát âm tính: mẫu trắng không chứa AOZ, AMOZ, AHD SEM Cân xác 1,0 g ± 0,05 g mẫu trắng (đã chứng nhận), cho vào ống ly tâm 14 ml (5.5) Bổ sung 40 µl hỗn hợp chuẩn nội IS2 (4.13.2) để yên 15 Sau đó, tiến hành thuỷ phân dẫn xuất hoá theo quy định 6.2.1 6.1.2.2 Mẫu kiểm soát dương tính: mẫu trắng bổ sung AOZ, AMOZ, AHD SEM Cân xác phần có khối lượng 1,0 g ± 0,05 g mẫu trắng (đã chứng nhận), cho vào ống ly tâm 14 ml (5.5) Bổ sung dung dịch chuẩn theo Bảng để yên 15 Sau đó, tiếp tục thuỷ phân dẫn xuất hoá theo quy định 6.2.1 Bảng − Chuẩn bị mẫu kiểm soát dương tính Nồng độ mẫu µg/kg Hỗn hợp chuẩn MM2 (4.13.1) µl Hỗn hợp chuẩn nội IS2 (4.13.2) µl 0,5 10 40 20 40 40 40 100 40 6.1.2.3 Mẫu kiểm soát độ thu hồi: mẫu trắng bổ sung chất dẫn xuất nitrophenyl AOZ, AMOZ, AHD SEM chuẩn Cân xác phần có khối lượng 1,0 g ± 0,05 g mẫu trắng (đã chứng nhận), cho vào ống ly tâm 14 ml (5.5) Bổ sung 40µl dung dịch chuẩn nội IS2 (4.13.2) để yên 15 Sau đó, tiếp tục thuỷ phân dẫn xuất hoá theo quy định 6.2.1 Sau làm bay etyl axetat (xem 6.2.3), thêm vào mẫu 20 µl hỗn hợp chuẩn NP2 (4.13.3) 480 µl dung môi hoà tan mẫu (4.8) Thêm vào mẫu khác 50 µl hỗn hợp chuẩn NP2 (4.13.3) 450 µl dung môi hoà tan mẫu (4.8) Sau đó, tiến hành chuẩn bị mẫu phân tích (xem 6.2.4) với công đoạn lọc 6.2 Xử lý mẫu CHÚ THÍCH: Vì chất dẫn xuất nitrophenyl nhạy với ánh sáng nên toàn quy trình xử lý mẫu phải tiến hành ánh sáng yếu (ánh sáng vàng) 6.2.1 Thuỷ phân dẫn xuất hoá Thêm ml axit clohydric 0,2 M (4.3) 50 µl dung dịch 2-NBA metanol (4.5) vào ống nghiệm chứa mẫu (xem 6.1.1; 6.1.2.1; 6.1.2.2; 6.1.2.3) Đậy nắp ống lắc tay để phân tán mẫu Đặt lên máy lắc ống nghiệm (5.6) đặt hệ thống vào tủ ấm (5.11) Ủ mẫu qua đêm nhiệt độ 37 0C ± 0C 6.2.2 Trung hoà Sau làm nguội, thêm 500 µl dung dịch Na3PO4 0,3 M (4.6) vào mẫu Lắc mẫu tay Điều chỉnh pH 7,0 ± 0,5 dung dịch NaOH M (4.4), kiểm tra pH giấy thử pH (5.2) Lắc tay để yên Kiểm tra lại pH điều chỉnh thêm cần thiết 6.2.3 Chiết Thêm ml etyl axetat (4.7) vào mẫu điều chỉnh pH Chiết mẫu cách đặt máy lắc đảo đầu (5.8) 20 Ly tâm mẫu 10 tốc độ 000 r/min Chuyển lớp hữu phía sang ống ly tâm 14 ml (5.5) Lặp lại bước chiết cách thêm 4ml etyl axetat (4.7) vào phần mẫu lại, đóng nắp ống ly tâm đặt máy lắc đảo đầu (5.8) 20 Ly tâm mẫu 10 tốc độ 500 r/min Lấy lớp hữu kết hợp với phần hữu lấy lần đầu làm bay khô nhiệt độ 45 0C với hệ thống cô khí nitơ (5.12) với tốc độ dòng khí chậm Tổng thể tích phần hữu phải lớn ml, chiết thêm lần 6.2.4 Chuẩn bị mẫu phân tích Hoà tan cặn khô 500 µl dung môi hoà tan mẫu (4.8), lắc máy lắc Vortex (5.13) 20 s Lọc dịch đục qua màng lọc 13 mm, 0,45 µm (5.14) thu dịch lọc vào lọ đựng mẫu (5.7) 6.2.5 Phân tích LC/MS/MS 6.2.5.1 Điều kiện máy LC – tốc độ: 0,4 ml/min; – thể tích mẫu tiêm: 50 µl; – nhiệt độ cột: 40 0C; – toàn thời gian phân tích: 22 min; – pha động: chế độ gradient theo Bảng Bảng − Điều kiện gradient dung môi máy LC Thời gian Pha động A (4.9) Pha động B (4.10) % % 90 10 90 10 14 55 45 16 10 90 18 10 90 19 90 10 6.2.5.2 Điều kiện đầu dò MS – tỉ số chia: xấp xỉ : – kiểu ion hoá: ESI, dương – điện mao quản: 2,7 kv – điện khối nón: 30 v – nhiệt độ nguồn: 120 0C – nhiệt độ khử dung môi: 300 0C – tốc độ dòng khí khử dung môi: 500 l/h – tốc độ khí qua khối nón: 200 l/h – khí gây phân ly va chạm: argon, p = 3,2x10-3 bar 6.2.5.3 Điều kiện phân ly MS/MS NPAOZ, NPAMOZ, NPAHD NPSEM bị phân ly thành ion thứ cấp liên quan đến cấu trúc Các chất đồng vị đánh dấu sử dụng làm chất chuẩn nội có cách phân ly tương tự (Bảng 3) Bảng − Các điều kiện phân ly MS/MS Thành phần NPAMOZ Ion sơ cấp m/z Ion thứ cấp m/z Thời gian lưu s Năng lượng va chạm eV 335 ± 0,5 262 ± 0,5 0,3 15 từ 0,0 đến 8,5 0,3 15 từ 0,0 đến 8,5 291 ± 0,5 1) Cửa sổ NPAMOZ-d5 340 ± 0,5 296 ± 0,5 0,3 15 từ 0,0 đến 8,5 NPAHD 249 ± 0,5 134 ± 0,5 1) 0,2 15 từ 8,5 đến 13,0 178 ± 0,5 0,2 15 từ 8,5 đến 13,0 NPAHD-d2 251 ± 0,5 134 ± 0,5 1) 0,2 15 từ 8,5 đến 13,0 NPSEM 209 ± 0,5 166 ± 0,5 1) 0,2 10 từ 8,5 đến 13,0 192 ± 0,5 0,2 10 từ 8,5 đến 13,0 104 ± 0,5 0,3 17 từ 13,0 đến 18,0 134 ± 0,5 1) 0,3 17 từ 13,0 đến 18,0 134 ± 0,5 1) 0,3 17 từ 13,0 đến 18,0 NPAOZ NPAOZ-d4 236 ± 0,5 240 ± 0,5 1) Các ion thứ cấp có cường độ cao 6.2.6 Kiểm tra hiệu hệ thống LC/MS/MS Tiêm dung dịch chuẩn làm việc µg/l (4.14) Xác định tỷ lệ tín hiệu/nhiễu (S/N) bước chuyển có cường độ thấp Tỷ lệ S/N phải lớn Lặp lại bước tiêm để kiểm tra lặp lại thời gian lưu, diện tích pic tỉ lệ ion 6.2.7 Trình tự tiêm mẫu Các mẫu phân tích theo trình tự sau: – dung môi trắng; – mẫu kiểm soát âm tính (6.1.2.1); – mẫu kiểm soát dương tính (6.1.2.2); – mẫu kiểm soát độ thu hồi (6.1.2.3); – dung môi trắng; – mẫu cần kiểm nghiệm (6.2.4); – dung môi trắng; – mẫu kiểm soát âm tính (6.1.2.1); – mẫu kiểm soát dương tính (6.1.2.2) Biểu thị tính kết 7.1 Tính tỉ số ion Tỉ số ion, R, biểu thị phần trăm (%) tính theo công thức sau: (1) đó: A1 diện tích pic ion thứ cấp có cường độ thấp nhất; A2 diện tích pic ion thứ cấp có cường độ cao 7.2 Tính độ lệch tương đối tỉ số ion Độ lệch tương đối tỉ số ion, ∆R, tính theo công thức sau: (2) đó: ∆R độ lệch tương đối tỉ số ion chất cần phân tích mẫu thử với tỉ số ion trung bình chất mẫu kiểm soát dương tính có nồng độ µg/kg cao hơn, tính phần trăm (%); Rs tỉ số ion chất cần phân tích mẫu thử, tính phần trăm (%); Rm tỉ số ion trung bình chất cần phân tích mẫu kiểm soát dương tính có nồng độ µg/kg cao hơn, tính phần trăm (%) 7.3 Tính thời gian lưu tương đối Thời gian lưu tương đối theo theo công thức sau: (3) đó: Rrt thời gian lưu tương đối; Rt thời gian lưu chất cần phân tích; RtIS thời gian lưu chất chuẩn nội (đối với NPSEM NPAHD-d2 chất chuẩn nội) 7.4 Tính độ lệch chuẩn thời gian lưu tương đối Độ lệch chuẩn thời gian lưu tương đối, ∆Rrt, tính theo công thức sau: (4) đó: ∆Rrt độ lệch tương đối thời gian lưu tương đối chất cần phân tích mẫu thử so với thời gian lưu tương đối chất mẫu kiểm soát dương tính, tính phần trăm (%); Rrts thời gian lưu tương đối chất cần phân tích mẫu thử; Rrtm thời gian lưu tương đối trung bình chất cần phân tích mẫu kiểm soát dương tính 7.5 Chất cần phân tích khẳng định có mặt đáp ứng yêu cầu sau: – tỷ lệ tín hiệu/nhiễu cho ion phải không nhỏ 3:1; – mức dung sai tối đa cho phép cường độ ion tương đối, sử dụng nhiều loại kỹ thuật khối phổ theo quy định Bảng Bảng – Mức dung sai tối đa cho phép cường độ ion tương đối Cường độ tương đối LC-MS, LC-MSn % pic sở (tương đối) Lớn 50 % 20 % Từ lớn 20 % đến 50 % 25 % Từ lớn 10 % đến 20 % 30 % Không lớn 10 % 50 % 7.6 Tính hệ số tín hiệu cho chất cần phân tích Hệ số tín hiệu cho chất cần phân tích, RF, tính theo công thức sau: (5) đó: RF hệ số tín hiệu; Sp tổng diện tích pic ion thứ cấp chất cần phân tích; SpIS diện tích pic ion thứ cấp chất chuẩn nội (đối với NPSEM, NPAHD-d sử dụng làm chất chuẩn nội) 7.7 Tính lượng chất cần phân tích có mặt mẫu thử Lượng chất cần phân tích có mặt mẫu thử, X, tính theo khối lượng chất chuyển hoá chưa bị dẫn xuất hoá, biểu thị microgam kilogam (µg/kg), tính theo công thức sau: (6) đó: RF hệ số tín hiệu (công thức 5); b độ dựng đường chuẩn tính theo phương pháp hồi quy tuyến tính; a độ dốc đường chuẩn tính theo phương pháp hồi quy tuyến tính (dựng đồ thị tín hiệu mẫu thử soát dương tính với nồng độ chất chuẩn bổ sung áp dụng hồi quy tuyến tính) 8 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) thông tin cần thiết việc nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử sử dụng viện dẫn tiêu chuẩn này; d) thao tác không quy định tiêu chuẩn này, điều coi tự chọn, chi tiết có ảnh hưởng tới kết quả; e) kết thử nghiệm thu PHỤ LỤC A (Tham khảo) SỰ CHUYỂN HOÁ CỦA CÁC CHẤT THUỘC NHÓM NITROFURAN Dược chất Chất chuyển hoá ... thức sau: (3 ) đó: Rrt thời gian lưu tương đối; Rt thời gian lưu chất cần phân tích; RtIS thời gian lưu chất chuẩn nội ( ối với NPSEM NPAHD-d2 chất chuẩn nội) 7.4 Tính độ lệch chuẩn thời gian lưu... ảnh hưởng tới kết quả; e) kết thử nghiệm thu PHỤ LỤC A (Tham khảo) SỰ CHUYỂN HOÁ CỦA CÁC CHẤT THUỘC NHÓM NITROFURAN Dược chất Chất chuyển hoá ... 3 -(2 nitrobenzylidennamino)-2-4imi-dazolidinedione) (NPAHD), 3 [(2 -nitrophenyl) metylene]hydrazinecarboxamide (NPSEM), xác đến 0,02 mg Hoà tan chất chuẩn metanol (4 .1), lưu ý đến độ tinh khiết chất chuẩn Các dung dịch chuẩn gốc bảo