TIÊU CHUẨN VIỆT NAM THUỶ SẢN VÀ SẢN PHẨM THUỶ SẢN ( XÁC ĐỊNH THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT NHÓM CLO HỮU CƠ VÀ POLYCLO BIPHENYL ( PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định dư lượng của các loại thuốc bảo vệ thực vật clo hữu cơ và hàm lượng polychlorobiphenyl (PCB) trong thuỷ sản và sản phẩm thuỷ sản bằng sắc ký khí (GC). Giới hạn phát hiện của phương pháp đối với một số hợp chất tương ứng như sau: aHCH (ahexaclocyclohexan): 1,0 mgkg; bHCH (bhexaclocyclohexan) : 4,5 mgkg; gHCH (ghexaclocyclohexan): 0,7 mgkg; heptachlor: 1,0 mgkg; đối với aldrin: 1,5 mgkg; dieldrin: 2,5 mgkg; đối với endrin: 5,0 mgkg; DDT: 1,5 mgkg và chlordane: 1,0 mgkg.

TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 8346:2010 THUỶ SẢN VÀ SẢN PHẨM THUỶ SẢN ( XÁC ĐỊNH THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT NHÓM CLO HỮU CƠ VÀ POLYCLO BIPHENYL ( PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ Fish and fishery products − Determination of organochlorine pesticides and polychlorobiphenyls − Method using gas chromatography Lời nói đầu TCVN 8346 : 2010 Cục Chế biến, Thương mại nông lâm thuỷ sản nghề muối biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định dư lượng loại thuốc bảo vệ thực vật clo hữu hàm lượng polychlorobiphenyl (PCB) thuỷ sản sản phẩm thuỷ sản sắc ký khí (GC) Giới hạn phát phương pháp số hợp chất tương ứng sau: α-HCH (αhexaclocyclohexan): 1,0 µg/kg; β-HCH (β-hexaclocyclohexan) : 4,5 µg/kg; γ -HCH (γ hexaclocyclohexan): 0,7 µg/kg; heptachlor: 1,0 µg/kg; aldrin: 1,5 µg/kg; dieldrin: 2,5 µg/kg; endrin: 5,0 µg/kg; DDT: 1,5 µg/kg chlordane: 1,0 µg/kg Nguyên tắc Trong mẫu thủy sản, hợp chất chiết tách dung môi pentan Dịch chiết làm phương pháp chiết pha rắn (SPE) florisil sau tách làm phân đoạn cột silicagel Phân đoạn A chứa PCB (trừ CB3), HCB, aldrin, isodrine, heptachlor p,p'-DDE Phân đoạn B chứa CB3, p,p'-DDE thuốc bảo vệ thực vật gốc clo lại Hàm lượng thuốc bảo vệ thực vật gốc clo hữu PCB phân đoạn chiết xác định máy sắc ký khí với detector bắt giữ electron (ECD) Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử tinh khiết phân tích sử dụng nước cất nước có độ tinh khiết tương đương, trừ có quy định khác 3.1 Natri sulfat khan, làm diclometan hệ thống Soxhlet (4.3), sau nung nhiệt độ 500 0C h giữ chai thuỷ tinh 3.2 Pentan, loại dùng cho HPLC 3.3 Isooctan, loại dùng cho HPLC 3.4 Dietyl ete, loại dùng cho HPLC 3.5 Bông thuỷ tinh, làm pentan hay diclometan hệ thống Soxhlet (4.3) để khô miếng giấy nhôm đặt tủ hút 3.6 Cát sạch, nung nhiệt độ 500 0C h, nguội giấy nhôm sau giữ chai có nắp vặn 3.7 Florisil, cỡ hạt từ 60 mesh đến 100 mesh, làm hệ thống Soxhlet (4.3) nung nhiệt độ 450 0C 18 h, sau cho vào chai thuỷ tinh phủ giấy nhôm giữ nhiệt độ 120 0C tủ sấy 3.8 Florisil hoạt hoá Lấy lượng florisil (3.7) từ tủ sấy đổ trực tiếp qua phễu vào bình đáy tròn (4.7) có nút nhám Thêm vào bình lượng nước % khối lượng florisil, sau lắc hỗn hợp khoảng 30 máy lắc (4.11) để yên khoảng h trước sử dụng 3.9 Silicagel hoạt hoá Lấy silicagel (cỡ hạt từ 70 mesh đến 140 mesh), rửa diclometan cho vào chén sứ để tủ sấy nhiệt độ 120 0C vòng 12 h Sau đó, dùng giấy thiếc bọc kín miệng chén sứ để lại vào tủ sấy nhiệt độ 120 0C trước sử dụng 3.10 Dung dịch rửa giải Hỗn hợp dung dịch diclometan pentan theo tỷ lệ thể tích 2:8, pha trước sử dụng 3.11 Các dung dịch chuẩn thuốc bảo vệ thực vật gốc clo PCB isooctan Chuẩn bị dung dịch chuẩn thuốc bảo vệ thực vật gốc clo PCB isooctan (3.3) có nồng độ: 0,0; 2,5; 5,0; 10,0 20,0 µg/l từ ống chuẩn Tuỳ theo nồng độ thuốc bảo vệ thực vật có ống chuẩn, dùng bình định mức lượng isooctan thích hợp 3.12 Dung dịch chuẩn thu hồi Pha chuẩn 4-PCB (C 12H9Cl), 2,2’,3,3’,4,5,5’,6-PCB (C12H2Cl8) δ-HCH dung môi isooctan (3.3) để có hàm lượng tương ứng tính theo khối lượng isooctan sau: 2,0 µg/g; 0,2 µg/g và: 0,2 µg/g 3.13 Dung dịch chuẩn kiểm tra Pha xác hỗn hợp dung dịch chuẩn kiểm tra gồm p,p'-DDE p,p'-DDT isooctan (3.3) với hàm lượng chất khoảng từ ng/ml đến 20 ng/ml isooctan Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thông thường cụ thể sau: 4.1 Cân phân tích, cân xác đến 0,1 mg 4.2 Máy nghiền, tốc độ 10 000 r/min 4.3 Hệ thống chiết mẫu Soxhlet 4.4 Hệ ống Soxhlet, trang bị ống Soxhlet làm cách chưng cất với pentan hay diclometan hệ thống Soxhlet (4.3) h 4.5 Cối sứ 4.6 Hệ thống có quay chân không 4.7 Bình đáy tròn 4.8 Cốc thuỷ tinh có mỏ 4.9 Bình nón, dung tích 50 ml 4.10 Bình thuỷ tinh 4.11 Máy lắc 4.12 Tủ sấy 4.13 Bình hút ẩm 4.14 Cột sắc ký thủy tinh, có van khoá, loại dài 500 mm, đường kính 20 mm loại dài 500 mm, đường kính mm 4.15 Cột mao quản không phân cực trung bình SPB-1TM - SUPELCO (cột methylsilicon có khả tách thuốc bảo vệ thực vật theo nhiệt độ sôi), nhiệt độ tối đa 360 0C, dài 30 m, bán kính 0,32 mm, bán kính 0,50 mm, chiều dài lớp phủ 0,25 µm loại tương đương 4.16 Máy sắc ký khí, trang bị detector ECD Cách tiến hành 5.1 Xác định hàm lượng chất béo mẫu thử 5.1.1 Nghiền 250,0 g mẫu thủy sản máy nghiền (4.2) Dùng cân phân tích (4.1) cân xác 10,0 g mẫu nghiền cho vào ống Soxhlet (4.4) phủ thuỷ tinh (3.5) Chiết mẫu với 150,0 ml pentan (3.2) h hệ thống chiết mẫu Soxhlet (4.3) 5.1.2 Cô đặc dịch chiết máy cô quay chân không (4.11) đến khoảng 20 ml Sau đó, cô tiếp chế độ chân không khoảng 1,0 ml 5.1.3 Chuyển dịch cô vào chén cân biết trước khối lượng, dùng giấy nhôm phủ lên chén cân để qua đêm tủ hút Sau đó, chén cân làm khô đến khối lượng không đổi nhiệt độ 70 0C tủ sấy (4.12) (sự thay đổi khối lượng chén cân không vượt 0,5 mg) để nguội tới nhiệt độ phòng bình hút ẩm (4.13) Phần thu đem cân lượng chất béo có mẫu 5.2 Chuẩn bị mẫu thử 5.2.1 Cân xác 10,0 g mẫu nghiền cho vào cối sứ (4.5) (nếu lượng chất béo 10,0 g mẫu lớn 0,8 g giảm mẫu để đảm bảo có tối đa 0,8 g chất béo lượng mẫu đem thử nghiệm) Thêm 10,0 g cát (3.6) 4,0 g natri sulfat khan (3.1) nghiền cối sứ (4.5) Hỗn hợp đưa vào ống Soxhlet (4.4), phủ thuỷ tinh (3.5) Sau đó, hỗn hợp chiết với 150,0 ml pentan (3.2) h hệ thống chiết mẫu Soxhlet (4.3) 5.2.2 Nếu mẫu chứa nước, sản phẩm chiết phải lọc qua natri sulfat khan (3.1) rửa lại 25,0 ml pentan (3.2) Sản phẩm chiết cô đặc máy cô quay chân không (4.11) đến khoảng 20 ml Sau đó, cô tiếp với chế độ chân không nhiệt độ 40 0C khoảng 1,0 ml Thêm vào dịch thu 2,0 ml isooctan (3.3) làm dịch chiết theo quy định 5.5 5.3 Chuẩn bị mẫu trắng Mẫu trắng mẫu thủy sản xác định thuốc bảo vệ thực vật gốc clo hữu PCB Tiến hành chuẩn bị mẫu trắng giống chuẩn bị với mẫu thử theo quy định 5.2 5.4 Chuẩn bị mẫu để xác định độ thu hồi Thêm 2,0 ml dung dịch chuẩn thu hồi (3.12) vào 10,0 g mẫu trắng Đồng mẫu máy nghiền (4.2) Tiến hành chuẩn bị mẫu giống chuẩn bị với mẫu thử theo quy định 5.2 5.5 Làm dịch chiết 5.5.1 Chuẩn bị cột 5.5.1.1 Cân 25,0 g florisil hoạt hoá (3.8) cho vào cốc thuỷ tinh có mỏ (4.8) chứa 50,0 ml dung môi pentan (3.2) Sau rót từ từ dung dịch vào cột sắc ký thuỷ tinh dài 500 mm, đường kính 20 mm (4.21) khoá van nhồi thuỷ tinh (3.5) đáy cột 5.5.1.2 Để yên cột cho lắng, sau tháo van để rút dung môi pentan khỏi cột mức dung môi cột cao mức florisil khoảng 1,0 cm Thêm thủy tinh lên phía lớp florisil để tránh xáo trộn tinh thể có dòng dung dịch đổ vào 5.5.2 Làm dịch chiết 5.5.2.1 Chuyển dung dịch thu 5.2.2, 5.3 5.4 vào cột sắc ký chuẩn bị (xem 5.5.1) 5.5.2.2 Cho tiếp lần, lần 3,0 ml dung dịch rửa giải (3.10) Điều chỉnh khoá để tốc độ rửa giải đạt từ ml/min đến ml/min Chú ý không để khô cột tất bước quy trình 5.5.2.3 Thu toàn dịch chiết qua cột vào bình thuỷ tinh đáy tròn máy cô quay chân không (4.11) Tiến hành cô dung dịch thu khoảng 1,0 ml Bổ sung thêm 1,0 ml isooctan (3.3) vào bình lắc để hoà tan hết cặn bám thành bình Làm bay từ từ dòng khí nitơ dịch khô hoàn toàn 5.5.2.4 Thêm xác 2,0 ml isooctan (3.3) lắc để hoà tan cặn 5.6 Phân tách thuốc bảo vệ thực vật gốc clo PCB 5.6.1 Chuẩn bị cột 5.6.1.1 Cân xác 7,0 g silicagel hoạt hoá (3.9) vào bình nón dung tích 50 ml (4.9) Sau đó, cho thêm khoảng 25,0 ml pentan (3.2), lắc lắng Đổ hỗn hợp vào cột sắc ký thuỷ tinh dài 500 mm, đường kính mm (4.21) nhồi thuỷ tinh (3.5) đáy cột Chú ý trình nhồi cột phải giữ mức pentan cột cao phần silicagel cột 5.6.1.2 Để yên cho silicagel lắng xuống bổ sung lượng tinh thể natri sulfat (3.1) vào cột với chiều cao khoảng cm Mở khoá để tháo bớt pentan cột đến mức pentan ngang với mặt phần tinh thể natri sulfat 5.6.2 Kiểm tra cột tách chiết silicagel dung môi pentan 5.6.2.1 Lấy xác 2,0 ml dung dịch chuẩn kiểm tra (3.13) cho qua cột silicagel chuẩn bị (xem 5.6.1) Điều chỉnh khoá để tốc độ chảy khoảng 40 giọt/s Sau đó, cho từ từ 100,0 ml pentan (3.2) qua cột Thu dung dịch chiết chảy qua cột vào bình thuỷ tinh (4.10) Bình thứ (ký hiệu E1) thu 60,0 ml đầu, bình (ký hiệu từ E2 đến E9) bình thu khoảng 5,0 ml dịch chiết 5.6.2.2 Cô quay dung dịch bình nói máy cô quay chân không (4.11) khoảng 1,0 ml Tiến hành phân tích máy sắc ký khí (GC-ECD) theo quy định 5.6.3.2, 5.6.3.3 5.7 Tính hàm lượng p,p'-DDE p,p'-DDT tương ứng bình theo công thức Điều 5.6.2.3 Thể tích pentan cần thiết để thu dung dịch rửa giải A, ký hiệu X, với lô silicagel pentan Thông thường giá trị X nằm khoảng từ 60 ml đến 90 ml Nếu hai hợp chất mẫu kiểm tra phân tách bổ sung thêm nước khoảng từ % đến % khối lượng vào silicagel cột tiến hành lặp lại bước kiểm tra theo 5.6.2 CHÚ THÍCH Xác định giá trị X, biểu thị mililit (ml) theo công thức sau: X = E1 + E2 + + En-1 đó: E (ml); thể tích dung dịch rửa giải thu vào bình có số thứ tự tương ứng, tính mililit n số thứ tự bình mà không phát p,p'-DDE 5.6.3 Phân tách dẫn xuất PCB thuốc bảo vệ thực vật gốc clo hữu 5.6.3.1 Cho toàn dịch chiết làm (xem 5.5.2) qua cột silicagel chuẩn bị (xem 5.6.1) Điều chỉnh khoá để tốc độ chảy khoảng 40 giọt/s Cho từ từ X ml pentan (xác định theo 5.6.2) qua cột thu dung dịch rửa giải A Sau đó, cho tiếp 100,0 ml hỗn hợp dietyl ete (3.4) pentan theo tỉ lệ 1:9 (thể tích) qua cột thu dung dịch rửa giải B Sử dụng bình chứa khác để hứng riêng dung dịch A B 5.6.3.2 Thêm 1,0 ml isooctan (3.3) vào dung dịch rửa giải A, B Dung dịch thu được cô quay máy cô quay chân không (4.11) khoảng 25,0 ml Sau tiếp tục cô dung dịch khô hoàn toàn 5.6.3.3 Thêm xác ml isooctan (3.3) đem phân tích máy GC Chú ý không để khô cột tất bước quy trình 5.7 Tiến hành phân tích GC 5.7.1 Điều kiện phân tích a) Máy sắc ký khí sử dụng detector ECD, có khả chia dòng, tuỳ chọn chế độ bơm tự động; b) Chế độ nhiệt hệ thống GC: nhiệt độ buồng tiêm 250 0C; nhiệt độ detector 300 0C Chương trình nhiệt độ (mô tả chi tiết Hình 1) sau: - trì nhiệt độ 150 0C min; - tăng nhiệt độ 0C/min lên tới nhiệt độ 220 0C; - tăng nhiệt độ 20 0C/min lên tới nhiệt độ 240 0C; - trì nhiệt độ 240 0C 13 min; - tổng thời gian 51 min; Hình – Chương trình nhiệt độ hệ thống GC c) Cột sắc ký: cột mao quản (4.15); d) Khí - khí mang: heli, áp suất khí 70 kpa; - khí làm sạch: nitơ 99,999 %; - chế độ chia dòng: 1:10 5.7.2 Dựng đường chuẩn Tiêm dung dịch chuẩn (3.11) vào máy GC theo thứ tự nồng độ từ thấp đến cao Mỗi dung dịch tiêm lần, tính diện tích pic trung bình Dựng đường chuẩn biểu thị mối quan hệ diện tích pic thu nồng độ loại thuốc bảo vệ thực vật theo quan hệ tuyến tính Đường chuẩn phải có độ tuyến tính tốt, hệ số tương quan quy hồi tuyến tính ( R2) phải lớn 0,99 5.7.3 Tiến hành phân tích Tiêm dung dịch mẫu thử, dung dịch mẫu trắng, dung dịch mẫu để xác định độ thu vào hệ thống GC Mỗi dung dịch mẫu tiêm lần Tính giá trị trung bình 6 Tính kết Hàm lượng loại thuốc bảo vệ thực vật có mẫu, C, biểu thị microgam kilogam (µg/kg) theo công thức sau: Y hiệu số diện tích pic dịch chiết diện tích pic có mẫu trắng tiêm vào GC, tính theo đơn vị diện tích; a, b hệ số đường chuẩn y = ax + b, xác định theo 5.7.2, x đượctính theo microgam lit; V thể tích phân đoạn dịch chiết thu sau làm (xem 5.6.3.3) tính mililit (ml) m khối lượng mẫu thử ( xem 5.2.1), tính gam (g) Độ lặp lại độ thu hồi 7.1 Độ lặp lại Độ lệch chuẩn lặp lại, CVS, tính theo diện tích píc sắc ký lần tiêm dung dịch chuẩn phải nhỏ 0,5 % 7.2 Độ thu hồi Độ thu hồi, R, xác định cách đo 10 mẫu có lượng dung dịch chuẩn biết hàm lượng xác Độ thu hồi tính phải khoảng từ 85 % đến 115 %, độ thu hồi trung bình phải lớn 90 % Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) thông tin cần thiết việc nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử sử dụng viện dẫn tiêu chuẩn này; d) thao tác không quy định tiêu chuẩn này, điều coi tự chọn, chi tiết có ảnh hưởng tới kết quả; e) kết thử nghiệm thu THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Rapid determination of chlorinated Mitt.Lebendsmittelunters Hyg 65:131-150 (1974) pesticides, polychlorinated biphenyls, [2] Manual of Pesticide Residue Analysis, Deutsche Forschungsgemeinschaft, VCH Verlagsgesell- schaft, Weinheim, FRG (1987), Section Multiple Pesticide Residue Analytical Methods, Method No.S9 ... dịch diclometan pentan theo tỷ lệ thể tích 2:8, pha trước sử dụng 3.11 Các dung dịch chuẩn thuốc bảo vệ thực vật gốc clo PCB isooctan Chuẩn bị dung dịch chuẩn thuốc bảo vệ thực vật gốc clo PCB... 1,0 ml Thêm vào dịch thu 2,0 ml isooctan (3 .3) làm dịch chiết theo quy định 5.5 5.3 Chuẩn bị mẫu trắng Mẫu trắng mẫu thủy sản xác định thuốc bảo vệ thực vật gốc clo hữu PCB Tiến hành chuẩn bị mẫu... bay từ từ dòng khí nitơ dịch khô hoàn toàn 5.5.2.4 Thêm xác 2,0 ml isooctan (3 .3) lắc để hoà tan cặn 5.6 Phân tách thuốc bảo vệ thực vật gốc clo PCB 5.6.1 Chuẩn bị cột 5.6.1.1 Cân xác 7,0 g silicagel