Nghiên cứu bào chế tiểu phân nano chứa epigallocatechin gallate (egcg) từ chiết xuất trà xanh bằng phương pháp tự kết tạo

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÙI THỊ ÁNH MAI NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ TIỂU PHÂN NANO CHỨA EPIGALLOCATECHIN GALLATE (EGCG) TỪ CHIẾT XUẤT TRÀ XANH BẰNG PHƯƠNG PHÁP TỰ KẾT TẠO LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÙI THỊ ÁNH MAI NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ TIỂU PHÂN NANO CHỨA EPIGALLOCATECHIN GALLATE (EGCG) TỪ CHIẾT XUẤT TRÀ XANH BẰNG PHƯƠNG PHÁP TỰ KẾT TẠO NGÀNH: CÔNG NGHỆ DƯỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ THUỐC MÃ SỐ: 8720202 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS PHẠM ĐÌNH DUY THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan công trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác TP Hồ Chí Minh, ngày 04 tháng12 năm 2021 Bùi Thị Ánh Mai Luận văn Thạc sĩ dược học – Năm 2019 – 2021 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ TIỂU PHÂN NANO CHỨA EPIGALLOCATECHIN GALLATE (EGCG) TỪ CHIẾT XUẤT TRÀ XANH BẰNG PHƯƠNG PHÁP TỰ KẾT TẠO Bùi Thị Ánh Mai Giảng viên hướng dẫn: PGS TS Phạm Đình Duy TĨM TẮT Đặt vấn đề Đề tài thực nhằm xây dựng công thức điều chế tiểu phân nano chứa Epigallocatechin gallate (EGCG) phương pháp tự kết tạo đánh giá số đặc tính tiểu phân nano tạo thành Phương pháp nghiên cứu Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng EGCG phương pháp quang phổ UV – vis HPLC Khảo sát yếu tố ảnh hưởng lên hình thành đặc tính tiểu phân nano tự kết tạo tải EGCG bao gồm: tỉ lệ lecithin:chitosan (kl:kl), nồng độ poloxamer 407 (%), tốc độ khuấy (vòng/phút), nhiệt độ (ºC) thời gian đun hồi lưu (giờ) Tiến hành đánh giá thơng số bao gồm kích thước tiểu phân nano (nm), số đa phân tán PDI, zeta (mV), hiệu suất bắt giữ (%), hiệu suất tải (%) Từ kết khảo sát, chọn thông số quy trình thành phần cơng thức có khả tạo tiểu phân nano có đặc tính lý hóa mong muốn Tiến hành điều chế công thức với nồng độ EGCG pha cồn 10 mg/mL, mg/mL So sánh thơng số hóa lý độ ổn định ngày để chọn công thức cho đặc tính lý hóa mong muốn ổn định thời gian khảo sát Điều chế lô công thức chọn với cỡ lô 100 mL Đánh giá số tính chất hệ tiểu phân nano tự kết tạo tải EGCG cảm quan, kích thước tiểu phân, số đa phân tán, zeta, hiệu suất bắt giữ, hiệu suất tải, phổ quét nhiệt vi sai i Kết nghiên cứu Công thức chọn để điều chế tiểu phân nano tự kết tạo tải EGCG chứa 40 mg EGCG, 100 mg Lipoid S100, mg chitosan, 300 mg poloxamer 407, 10 µL acid acetic 100 mL hỗn dịch Hệ nano tự kết tạo tải EGCG điều chế theo công thức chọn cho kích thước tiểu phân 80,98 ± 10,06 nm; PDI 0,260 ± 0,019; zeta +17,17 ± 3,31 mV; hiệu suất bắt giữ 89,90 ± 2,09 %; hiệu suất tải hoạt chất 26,07 ± 0,89 % Kết luận Đề tài xây dựng công thức để điều chế tiểu phân nano tự kết tạo tải EGCG đánh giá yếu tố ảnh hưởng đến hình thành đặc tính tiểu phân nano tự kết tạo tải EGCG i Final thesis for the Master degree of Pharmacy – Academic year: 2019 – 2021 PREPARATION OF EPIGALLOCATECHIN GALLATE (EGCG) FROM GREEN TEA EXTRACT LOADED SELF–ASSEMBLED NANOPARTICLES Bui Thi Anh Mai Supervisor: Assoc Prof PhD Pham Dinh Duy ABSTRACT Introduction This essay was carried out to establish the formula of EGCG loaded self – assembled nanoparticles and to evaluate some characteristics of EGCG loaded self – assembled nanoparticles Methods Developing and validating EGCG quantitative method by UV – Vis spectroscopy and HPLC method Evaluate the affection of some factor in the formation and characteristics of the nanoparticles, including: lecithin:chitosan ratio (w:w), poloxamer 407 concentration (%), stirring speed (rpm), the temperature of reflux (°C) and time of reflux (hour) Evaluate parameters including nanoparticle size (nm), polydispersity index PDI, zeta potential (mV), entrapment efficiency (%) and drug loading (%) As result, select the procedure parameters and formula ingredients to have desired physicochemical characteristics Conduct to prepare formula with concentration of EGCG in ethanol phase are 10 mg/mL, mg/mL Compare physicochemical characteristics and the stability in days to select the formula that has desired physicochemical characteristics and stable in evaluate period Prepare chosen formula samples with batch size 100 mL Evaluate some characteristics of EGCG loaded self-assembled nanoparticles about appearance, nanoparticle size, polydispersity index, zeta potential, entrapment efficiency, drug loading and differential scanning calorimetry v Results and discussion Chosen formula of EGCG loaded self-assembled nanoparticles has 40 mg EGCG, 100 mg Lipoid S100, mg chitosan, 300 mg poloxamer 407, 10 µL acetic acid in 100 mL suspension EGCG loaded self-assembled nanoparticles prepared following chosen formula has particle size of 80,98 ± 10,06 nm; PDI 0,260 ± 0,019; zeta potential +17,17 ± 3,31 mV; entrapment efficiency 89,90 ± 2,09 %; drug loading 26,07 ± 0,89 % Conclusion This essay has developed the formula of the EGCG loaded self – assembly nanoparticles and evaluated the factors affecting the formation and characteristics of nanoparticles MỤC LỤC MỤC LỤC v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH MỤC CÁC BẢNG ix DANH MỤC CÁC HÌNH xi MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 TỔNG QUAN HỆ TIỂU PHÂN NANO TẢI HỢP CHẤT DƯỢC LIỆU 1.1.1 Công nghệ nano nghiên cứu phát triển hợp chất dược liệu 1.1.2 Các hệ tiểu phân nano tải hoạt chất dược liệu 1.2 CÔNG NGHỆ NANO TỰ KẾT TẠO VỚI PHOSPHATIDYLCHOLINE VÀ CHITOSAN .7 1.2.1 Phosphatidylcholin .8 1.2.2 Đặc tính chitosan 1.2.3 Cơ chế tự kết tạo .10 1.2.4 Ưu nhược điểm phương pháp tự kết tạo với chitosan phosphatidylcholine 12 1.3 TỔNG QUAN VỀ EPIGALLOCATHECHIN GALLATE (EGCG) 13 1.3.1 Tính chất lý hóa liên quan tới bào chế .13 1.3.2 Tác dụng dược lý 14 1.3.3 Dược động học độc tính 16 1.4 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ EGCG DƯỚI DẠNG NANO 17 1.4.1 Tiểu phân nano chitosan chứa EGCG 17 1.4.2 Tiểu phân nano EGCG bao folate liên hợp chitosan 18 1.4.3 Phức bao nano (nanocomplexes) beta lactoglobulin chứa EGCG 19 i 1.4.4 Tiểu phân nano tự kết tạo từ gelatin EGCG 19 1.4.5 Hệ vi hạt Maltodextrin-gôm arabic tải phytosome nhằm phân phối chiết xuất trà xanh .19 1.4.6 Phytosome chứa polyphenol chiết xuất từ trà xanh .20 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 21 2.1.1 Nguyên liệu hóa chất 21 2.1.2 Dụng cụ, trang thiết bị 21 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.2.1 Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng EGCG UV-vis HPLC 22 2.2.2 Xây dựng công thức hỗn dịch nano tải EGCG đề xuất quy trình bào chế .27 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 33 3.1 KẾT QUẢ XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG EGCG BẰNG UV-VIS VÀ HPLC 33 3.1.1 Kết xây dựng thẩm định quy trình định lượng EGCG UVVis .33 3.1.2 Kết xây dựng thẩm định quy trình định lượng EGCG HPLC 37 3.2 KẾT QUẢ XÂY DỰNG CÔNG THỨC HỖN DỊCH NANO TẢI EGCG VÀ ĐỀ XUẤT QUY TRÌNH BÀO CHẾ 44 3.2.1 Kết khảo sát ảnh hưởng yếu tố công thức, quy trình đến tính chất tiểu phân nano tải EGCG lựa chọn thông số 44 3.2.2 Kết đo thơng số hóa lý, phổ quét nhiệt vi sai công thức chọn đề xuất quy trình bào chế 55 ii CHƯƠNG BÀN LUẬN 62 4.1 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG EGCG BẰNG UV-VIS VÀ HPLC 62 4.2 XÂY DỰNG CÔNG THỨC HỖN DỊCH NANO TẢI EGCG VÀ ĐỀ XUẤT QUY TRÌNH BÀO CHẾ .62 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 67 5.1 KẾT LUẬN 67 5.2 KIẾN NGHỊ 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC PHỤ LỤC – COA EGCG NGUYÊN LIỆU PHỤ LỤC – COA EGCG CHUẨN PHỤ LỤC – THÔNG SỐ THẨM ĐỊNH EGCG BẰNG HPLC PHỤ LỤC – KẾT QUẢ ĐO KÍCH THƯỚC HẠT, CHỈ SỐ ĐA PHÂN TÁN VÀ THẾ ZETA CỦA MẪU NANO EGCG PHỤ LỤC – KẾT QUẢ QUÉT NHIỆT VI SAI Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC – COA EGCG CHUẨN Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC - THƠNG SỐ THẨM ĐỊNH EGCG BẰNG HPLC TÍNH ĐẶC HIỆU Phổ sắc ký độ tinh khiết pic EGCG mẫu chuẩn Phổ UV-vis pic EGCG mẫu chuẩn Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phổ sắc ký độ tinh khiết pic EGCG mẫu thử Phổ UV-vis pic EGCG mẫu thử Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh TÍNH TƯƠNG THÍCH HỆ THỐNG Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh TÍNH TUYẾN TÍNH Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh ĐỘ CHÍNH XÁC Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh ĐỘ ĐÚNG Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC – KẾT QUẢ ĐO KÍCH THƯỚC HẠT, CHỈ SỐ ĐA PHÂN TÁN VÀ THẾ ZETA CỦA MẪU NANO EGCG Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC – KẾT QUẢ QUÉT NHIỆT VI SAI EGCG LECITHIN Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh CHITOSAN POLOXAMER 407 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh HỖN HỢP CỦA EGCG – LECITHIN – CHITOSAN PHỨC HỢP EGCG – LECITHIN Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh MẪU NANO EGCG RẮN Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn