Nghiên cứu bào chế vi nhũ tương chứa clotrimazol

Kích thước tiểu phân giọt vi nhũ tương trong ảnh hưởng loại chất diện hoạt và tốc độ giải phóng CTM.... Ảnh hưởng loại chất diện hoạt trên mối quan hệ của tốc độ giải phóng của vi nhũ tư

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGUYỄN HÀ AN

MÃ SINH VIÊN: 1101003

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ

VI NHŨ TƯƠNG CHỨA CLOTRIMAZOL

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI – 2016

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGUYỄN HÀ AN

MÃ SINH VIÊN: 1101003

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ

VI NHŨ TƯƠNG CHỨA CLOTRIMAZOL

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

Giáo viên hướng dẫn:

TS Nguyễn Thạch Tùng

Nơi thực hiện:

Bộ môn Bào chế

HÀ NỘI – 2016

E thầy giáo TS Nguyễn Thạch

Tùng ầ

khóa

Em xin chân t ầ

uý

E

Cu i cùng em xin gửi l i c c t b n bè, nh ng ng viên trong su t m ă

i h

Sinh viên

Nguyễn Hà An

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ Trang

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 2

1.1 Tổng quan về nấm và thuốc điều trị nấm 2

1.1.1 Bệnh nấm 2

1.1.2 Tổng quan về nhóm azol 3

1.2 Tổng quan về clotrimazol 6

1.2.1 Công thức hóa học 6

1.2.2 Tính chất lí hóa 6

1.2.3 Dược lý, chỉ định và chống chỉ định 6

1.2.4 Một số chế phẩm trên thị trường 8

1.3 Tổng quan vi nhũ tương 8

1.3.1 Vi nhũ tương 8

1.3.2 Các nghiên cứu về vi nhũ tương chứa clotrimazol 9

CHƯƠNG 2: NGUYÊN IỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 12

2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 12

2.1.1 Nguyên vật liệu 12

2.1.1 Thiết bị nghiên cứu 12

2.2 Nội dung nghiên cứu 13

2.3 Phương pháp nghiên cứu 13

2.3.1 Phương pháp bào chế vi nhũ tương chứa clotrimazol 13

2.3.2 Phương pháp đánh giá 15

3.2.1 Đánh giá độ tan bão hòa 19

3.2.2 Xây dựng giản đồ pha với loại chất diện hoạt khác nhau 20

3.2.3 Xác định môi trường giải phóng 21

3.2.4 Sàng lọc màng giải phóng 21

3.3 Đánh giá ảnh hưởng chất diện hoạt, chất đồng diện hoạt 23

3.3.1 Ảnh hưởng loại chất diện hoạt 23

3.3.2 Ảnh hưởng tỉ lệ chất diện hoạt 26

3.3.3 Ảnh hưởng tỉ lệ chất đồng diện hoạt 28

3.4 Đánh giá ảnh hưởng của lượng dầu 31

3.5 Ảnh hưởng của lượng dược chất 34

3.6 Đánh giá ảnh hưởng của pha nước 36

3.6.1 Ảnh hưởng của loại đệm 36

3.6.2 Ảnh hưởng của các khoảng pH khác nhau 38

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT

TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

CTM Clotrimazol

Bảng 1.3 Tính chất lý hóa của Clotrimazol 6 Bảng 1.4 Các nghiên cứu về hệ bào chế chứa clotrimazol 10 Bảng 2.1 Nguyên vật liệu trong quá trình thực nghiệm 12 Bảng 3.1 Độ tan bão hòa của clotrimazol trong dầu, diện hoạt, đồng diện hoạt (n=3,

TB ± ĐLC) 19 Bảng 3.2 Độ tan bão hòa của clotrimazol trong các môi trường giải phóng (n=3, TB

± ĐLC) 21 Bảng 3.3 Kết quả khảo sát tính thấm và tốc độ giải phóng của CTM qua các loại màng 22 Bảng 3.4 Bảng thiết kế thí nghiệm đánh giá ảnh hưởng của chất diện hoạt, đồng diện hoạt 23 Bảng 3.5 Kích thước tiểu phân giọt vi nhũ tương trong ảnh hưởng loại chất diện hoạt và tốc độ giải phóng CTM 24 Bảng 3.6 Ảnh hưởng tỉ lệ diện hoạt đến kích thước giọt vi nhũ tương và tốc độ giải phóng CTM 26 Bảng 3.7 Ảnh hưởng tỉ lệ đồng diện hoạt đến kích thước giọt vi nhũ tương và tốc

độ giải phóng CTM 29 Bảng 3.8 Công thức đánh giá ảnh hưởng của pha dầu 31 Bảng 3.9 Ảnh hưởng của lượng dầu đến kích thước giọt vi nhũ tươngvà tốc độ giải phóng CTM 31 Bảng 3.10 Các công thức đánh giá ảnh hưởng của lượng dược chất 34 Bảng 3.11 Các công thức đánh giá ảnh hưởng của các loại đệm khác nhau 36 Bảng 3.12 Ảnh hưởng của loại đệm đến kích thước giọt vi nhũ tương và tốc độ giải phóng CTM 37 Bảng 3.13 Các công thức đánh giá ảnh hưởng của khoảng pH khác nhau 39

Hình 2.1 Phương pháp bào chế Vi nhũ tương 14 Hình 3.1 Đường chuẩn biểu thị tương quan giữa nồng độ và mật độ quang của CTM 18 Hình 3.2 Giản đồ pha của vi nhũ tương với chất diện hoạt là Tween 80 20 Hình 3.3 Giản đồ pha của vi nhũ tương chứa chất diện hoạt Cremophor RH40 20 Hình 3.4 Ảnh hưởng loại chất diện hoạt đối với tốc độ giải phóng 24 Hình 3.5 Ảnh hưởng loại chất diện hoạt trên mối quan hệ của tốc độ giải phóng của vi nhũ tương 25 Hình 3.6 Ảnh hưởng tỉ lệ chất diện hoạt đến tốc đô giải phóng dược chất 27 Hình 3.7 Ảnh hưởng tỉ lệ chất diện hoạt trong mối quan hệ tốc độ giải phóng và kích thước giọt vi nhũ tương 28 Hình 3.8 Ảnh hưởng tỉ lệ chất đồng diện hoạt đến tốc độ giải phóng theo thời gian 29 Hình 3.9 Ảnh hưởng của tỉ lệ chất đồng diện hoạt đến quan hệ giữa tốc độ giải phóng và kích thước giọt vi nhũ tương 30 Hình 3.10 Ảnh hường của lượng dầu đến tốc độ giải phóng CTM theo thời gian 32 Hình 3.11 Ảnh hưởng của lượng dầu trong quan hệ giữa tốc độ giải phóng CTM

và kích thước giọt vi nhũ tương 33 Hình 3.12 Ảnh hưởng của lượng dược chất đối với quá trình giải phóng CTM theo thời gian 34 Hình 3.13 Ảnh hưởng của lượng CTM đến mối tương quan giữa tốc độ giải phóng CTM và kích thước giọt vi nhũ tương 35 Hình 3.14 Ảnh hưởng của loại đệm đến tốc độ giải phóng CTM 37 Hình 3.15 Ảnh hưởng của loại đệm đến mối quan hệ giữa tốc độ giải phóng CTM

và kích thước giọt nhũ tương 38

CTM trong ảnh hưởng của các khoảng pH khác nhau 40

ĐẶT VẤN ĐỀ

Nấm ngoài da là một bệnh phổ biến, đặc biệt trong các quốc gia thuộc vùng nhiệt đới ẩm như Việt Nam, tỉ lệ nhiễm nấm cao và gặp trên nhiều đối tượng Để giải quyết vấn đề này đã có nhiều hoạt chất điều trị nấm như amphotericin B, griseofulvin, 5-fluorocytosin,… được tìm ra[24] Một nhóm thuốc hiệu quả được dùng phổ biến để điều trị nấm là nhóm azol, do phổ điều trị rộng và hoạt tính kháng nấm mạnh Vấn đề của nhóm thuốc này là tính thấm và độ tan kém do đó làm giảm tác dụng chống nấm

Clotrimazol là một dược chất trong nhóm imidazol có tác dụng chống nấm tốt và ít tác dụng phụ khi dùng ngoài da, tuy nhiên khả năng thấm qua da kém Nhiều hệ bào chế hiện đại được nghiên cứu như liposome, hệ nano lipd rắn (SLN), hệ chất mang lipid có cấu trúc nano (NLC), vi nhũ tương… nhằm cải thiện tính thấm của clotrimazol Trong đó vi nhũ nhũ tương là dạng bào chế hiện đại, có kích thước nano, thích hợp với các dược chất tan kém và làm tăng khả năng thấm dược chất qua da Vi nhũ tương có thành phần tá dược chính là dầu, chất diện hoạt và đồng diện hoạt Các thành phần này có ưu điểm làm tăng tốc độ giải phóng, khả năng lưu giữ dược chất trên da, giảm cản trở của hàng rào khuếch tán biểu bì, khả năng bảo

vệ dược chất cao, ngoài ra hình thức vi nhũ tương đẹp và kỹ thuật bào chế đơn giản

Do đó, nhóm nghiên cứu tiến hành thực hiện đề tài “Nghiên cứu bào chế vi nhũ tương chứa clotrimazol ” với mục tiêu:

Nghiên cứu xây dựng công thức bào chế vi hũ tươ chứa clotrimazol

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan về nấm và thuốc điều trị nấm

Do các tổ chức nấm phát triển chậm và thường tồn tại ở các mô khó thấm thuốc nên điều trị các bệnh do nấm gây ra thường lâu dài và khó hơn so với bệnh nhiễm khuẩn [7]

Có rất nhiều bệnh nấm, ví dụ như: bệnh nấm ngoài da do Trichophyton, bệnh nấm dưới da do Fusarium và khuẩn lạc phân lập trên thạch Sabouraud – glucose, bệnh nấm nội tạng: Aspergillus Ngày nay, có rất nhiều loại thuốc để điều trị nấm

Dựa theo cơ chế tác dụng, ta phân các loại thuốc kháng nấm như hình 1.1

Hình 1.1 Phân lo i các thu c kháng n tác dụng [16]

Theo phân nhóm trên, có 4 nhóm thuốc kháng nấm :

 Tác dụng trên màng tế bào: amphotericin B

 Ức chế quá trình tổng hợp Ergosterol : fluconazol, itraconazol, terbinafin,

 Tác dụng trên vách tế bào: caspofungin

 Ức chế tổng hợp acid nucleic: 5-fluorocytosin

Ngoài ra, dựa vào phổ tác dụng kháng nấm, các thuốc kháng nấm được chia ra thành 6 loại (Bảng 1.1)

B ng 1.1 Phân lo i các thu c kháng n m theo ho t phổ tác dụng

Qua bảng ta thấy, nhóm azol kháng nấm với hoạt phổ rộng nhất, tác dụng trên

tất cả loại nấm như Crytococcus neoformans,

1.1.2 Tổng quan về nhóm azol

1.1.2.1 Phân lo i

Các azol chống nấm chia 2 nhóm:

 Nhóm imidazol, ví dụ như: ketaconazol, clotrimazol, flutrimazol, miconazol…

 Nhóm triazol, ví dụ như fluconazol, itraconazol, saperconazol,

Hai nhóm kháng nấm đều có tác dụng ức chế tổng hợp thành phần màng tế bào ergosterol và lipid màng làm thủng màng nấm gây thoát chất dinh dưỡng, gây kìm nấm

Hai nhóm đều có phổ chống nấm và cơ chế tác dụng tương tự nhau Tuy nhiên, nhóm imidazol thường sử dụng điều trị ngoài da do có độc tính cao hơn, còn nhóm triazol thường dùng điều trị toàn thân [5]

1.1.2.2 M t s ch phẩm trên th ng của imidazol:

Ketoconazol 2% Cream, Clotrimazol 1%, Miconazol KSK,…

1.1.2.3 Nghiên cứu v nhóm imidazol:

Imidazol có độ tan và tính thấm kém, có nhiều dạng bào chế hiện đại như VNT, SLN, NLC… nhằm cải thiện tính thấm qua da để tăng hiệu quả điều trị nấm Sau đây là một số nghiên cứu về nhóm imidazol được thể hiện trong bảng 1.2

B ng 1.2 M t s nghiên cứu v nhóm imidazol

so với NLC-ketoconazol Trái lại, NLC-ketoconazol sau thời gian 90 ngày có sự thay đổi KTTP và PDI lớn hơn so với SLN-ketoconazol

Tuy nhiên, khi kết hợp vào dạng chế phẩm có độ nhớt cao, độ ổn định của cả hai hệ đều được cải thiện rõ rệt Kết quả phân tích nhiệt (DSC) cho thấy chỉ số kết tinh trong hệ SLN cao hơn so với NLC, phù hợp với

lý thuyết đặc tính của hệ NLC có ít cấu trúc kết tinh hơn, kém trật tự hơn so với hệ SLN do các thành phần đặc biệt của hệ

2005 [25]

Itraconazol

Ketoconazol

pháp nghiền ướt và đánh giá các ảnh hưởng đến thuộc tính của hạt nano

So sánh hình thái học và phổ IR của dược chất trong công thức và dược chất tinh khiết

2010 [20]

1.2 Tổng quan về clotrimazol

1.2.1 Công thức hóa học

Clotrimazol thuộc nhóm imidazol, có nitơ dị vòng Cấu trúc clotrimazol được thể hiện trong hình 1.2

Hình 1.2 Công thức hóa h c của clotrimazol

Tên khoa học: (1-2-chlorphenyl-diphenylmethyl) -1-4-imidazol

dicloromethan, khó tan trong ether, tan trong các acid vô cơ loãng

Cơ chế tác dụng của clotrimazol là liên kết với các phospholipid trong màng tế bào nấm, làm thay đổi tính thấm của màng, gây mất các chất thiết yếu nội bào dẫn đến tiêu hủy tế bào nấm

Kết quả invitro, clotrimazol có tác dụng kìm hãm và diệt nấm, tùy theo nồng

độ, với các chủng Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes, Epidermophyton floccosum, Microsporum canis và các loài Candida

Kháng tự nhiên với clotrimazol hiếm gặp Chỉ phân lập được một chủng

Candida guilliermondi kháng clotrimazol Trường hợp kháng chéo giữa các azol là

phổ biến [2]

1.2.3.2 D ợ ng h c

Chế phẩm dùng bôi trên da clotrimazol thấm qua da rất ít

Sau sáu giờ, khi bôi kem và dung dịch 1% clotrimazol, tốc độ giải phóng dược chất trên da nguyên vẹn và trên da bị viêm cấp, nồng độ clotrimazol thay đổi từ 100

dưới da.[2]

1.2.3.3 Chỉ nh

Clotrimazol được chỉ định để điều trị tại chỗ các bệnh nấm như: Bệnh nấm

Candida ở miệng, họng; bệnh nấm da, bệnh nấm Candida ngoài da, nấm kẽ ngón tay, kẽ chân, cũng như bệnh nấm Candida ở âm hộ, âm đạo, lang ben do Malassezia furfur, viêm móng và quanh móng [2]

1.2.3.4 Ch ng chỉ nh

Chống chỉ định nếu người bệnh có mẫn cảm với bất kỳ thành phần nào của thuốc [2]

1.2.3.5 Tác dụng không mong mu n

Dùng tại chỗ: Các phản ứng tại chỗ (> 1%) bao gồm bỏng nhẹ, kích ứng, viêm

da dị ứng do tiếp xúc, đau rát vùng bôi thuốc ở da hoặc âm đạo

Dùng ngoài da: Bôi nhẹ một lượng thuốc vừa đủ lên vùng da bị bệnh, 2 lần/ngày Nếu bệnh không đỡ sau 4 tuần điều trị, cần phải xem lại chẩn đoán Bệnh thường đỡ trong vòng 1 tuần Có khi phải điều trị đến 8 tuần.[2]

1.3.1.2 Ư ợ ểm củ ũ

Ư ểm:

 Hệ VNT làm tăng khả năng hòa tan của dược chất trong hệ, đặc biệt với các dược chất ít tan trong nước, do đó có thể làm tăng sinh khả dụng của thuốc [13] VNT có thể áp dụng cho một số dạng bào chế như viên nang mềm, thuốc dùng ngoài da và niêm mạc

 Chất diện hoạt và đồng diện hoạt trong vi nhũ tương có thể làm giảm sự cản trở của hàng rào khuếch tán của biểu bì nên dược chất có thể thấm qua da dễ dàng hơn [13]

 Làm tăng độ ổn định của dược chất, đặc biệt đối với các dược chất dễ bị thủy phân trong nước [29]

 Là dạng thuốc có độ ổn định cao về nhiệt động học, bền vững, không bị phân lớp sau thời gian bảo quản dài [13]

 Hình thức VNT trong, đẹp hơn so với nhũ tương thông thường

 Có thể dùng VNT để bào chế các thuốc có tác dụng kéo dài

 Kỹ thuật bào chế tương đối đơn giản [13]

N ợ ểm:

 Việc xác định tỷ lệ các thành phần trong công thức bào chế để tạo thành vi nhũ tương rất khó khăn [29]

 Sử dụng lượng chất diện hoạt khá cao so với bình thường [13]

 Pha nước: Gồm những chất lỏng phân cực như nước, ethanol, PEG và các chất

dễ hòa tan hay đồng tan vào nước

 Chất diện hoạt: là các chất có khả năng làm giảm sức căng bề mặt phân cách pha, qua đó giúp hình thành VNT

Các chất diện hoạt hay được sử dụng [4]:

+ Chất diện hoạt anion: Natri laurylsulfat, natri amoni stearat,…

+ Chất diện hoạt cation: Cetrimid,…

+ Chất diện hoạt không ion hóa: Tween, Span, cremophor,…

+ Chất diện hoạt lưỡng tính: Acid amin, lecithin,…

 Đồng diện hoạt

Những chất đồng diện hoạt thường là các alcol có độ dài mạch trung bình Một

số chất đồng dung môi hay dùng như isopropanol, n-propanol, alcol benzylic, tetraglycol, trancutol P,…

1.3.2 Các nghiên cứu về vi hũ tươ chứa clotrimazol

Các nghiên cứu về vi nhũ tương chứaclotrimazol được thể hiện trong bảng 1.4

B ng 1.4 Các nghiên cứu v h bào ch chứa clotrimazol

Cremophor EL

Capryol 90

Kích thước giọt VNT chứa CTM của công thức tối ưu nhất là 48,4 nm

Cacbopol ETD tạo gel tốt nhất đối với VNT chứa CTM mà không làm ảnh hưởng cấu trúc

Gel chứa vi nhũ tương chứa cho thấy hoạt tính kháng nấm cao hơn đáng kể (P

<0,05) so với gel Candid trên thị trường

Hiệu quả kháng nấm của CTM khoảng 72,58-98,10%, phụ thuộc vào thành phần các chất trong công thức VNT Độ giải phóng CTM từ hạt nano lúc 4 giờ khoảng 64,81-74,15%

Hạt nano cho thấy tác dụng diệt nấm nhanh hơn, bám dính trên da tốt hơn và an toàn hơn

2014[27]

CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị

2.1.1 Nguyên v t li u

B ng 2.1 Nguyên v t li u trong quá trình th c nghi m

2.1.1 Thiết bị nghiên cứu

- Cân kỹ thuật Sartorius TE3102S (Đức)

- Cân phân tích Sartorius BP121S (Đức)

- Máy siêu âm Ultrasonic LC 60H (Đức)

- Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao Aligent HP 1260 (Mỹ)

- Hệ thống đánh giá giải phóng thuốc qua màng Hanson Research (Hoa Kỳ)

- Máy phân tích kích thước hạt ZETASIZER NANO ZS90 (Anh)

- Máy khuấy từ IKA RH (Đức)

- Máy đo pH Eutech (Hoa Kỳ)

- Micropipet và các dụng cụ thủy tinh

- Màng Parafin

- Túi thẩm tích 14000 Dalton

- Tủ lạnh, bếp điện và các thiết bị bào chế khác

2.2 Nội dung nghiên cứu

- Đánh giá ảnh hưởng của các thành phần vi nhũ tương đến tốc độ giải phóng CTM của vi nhũ tương

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Phươ ph p b o chế vi hũ tươ chứa clotrimazol

a Đánh giá độ tan bão hòa

Thí nghiệm tiến hành sàng lọc pha dầu, chất diện hoạt, đồng diện hoạt cho vi nhũ tương chứa CTM

Cho vào mỗi ống nghiệm có nắp kín 5 ml dung dịch thử, cho thừa lượng CTM

C , tốc độ 250 vòng/phút, trong 48 giờ Sau thời gian lẫy mấu ra, ly tâm 5000 vòng/phút trong 10 phút, rồi hút lớp dịch phía trên, lọc qua màng 0,45 µm, pha loãng thích hợp bằng methanol, đo

độ hấp thụ quang tại bước sóng 254 nm Từ đó tính độ tan bão hòa của CTM trong mỗi dung dịch thử

b Xây dựng giản đồ pha

Tham khảo tài liệu [22] tiến hành xây dựng giản đồ pha của VNT như sau: Xây dựng giản đồ pha bằng phương pháp chuẩn độ, nước được thêm từ từ vào hỗn hợp gồm dầu, chất diện hoạt và đồng diện hoạt tới khi thu dược vi nhũ tương

• Từ độ tan bão hòa của CTM trong các tá dược, lựa chọn được dầu, chất diện hoạt, đồng diện hoạt

1:2, 1:3, 1:4, 1:5

4:6, 5:5, 6:4, 7:3, 8:2, 9:1

• Nhỏ từ từ nước cất vào từng hỗn hợp O/Smix và quan sát bằng mắt thường, ban đầu hỗn hợp chuyển sang đục (vùng nhũ tương thô), sau đó chuyển thành trong (điểm bắt đầu vùng vi nhũ tương), sau đó lại chuyển sang đục (kết thúc vùng vi nhũ tương), ghi lại lượng nước ở các điểm trên (nếu có) Lặp lại thí nghiệm với các tỉ lệ

c Bào chế và lựa chọn công thức phù hợp cho vi nhũ tương

VNT là hệ sử dụng khá nhiều chất diện hoạt và đồng diện hoạt nên có khả năng nhũ hóa tốt Kỹ thuật bào chế vi nhũ tương được tiến hành theo sơ đồ sau:

- Thêm từ từ nước cất vào cốc dung dịch trên, đồng thời khuấy từ nhẹ nhàng đến

đủ khối lượng yêu cầu

Trong quá trình bào chế hệ vi nhũ tương CTM, tỷ lệ các thành phần trong công thức có ảnh hưởng quan trọng tới các đặc tính của hệ Vì vậy, để lựa chọn được công thức phù hợp nhất cần tiến hành bào chế các công thức khác nhau và xem xét ảnh hưởng của các tỷ lệ tới kích thước vi nhũ tương, tốc độ giải phóng dược chất

2.3.2 Phươ ph p đ h i

2.3.2.1 P ợng

a Đ ợng bằ g

Phát triển phương pháp định lượng CTM trong methanol

M u chuẩn: Cân chính xác khoảng 0,1g CTM hòa tan vừa đủ trong 100 ml

dung môi được dung dịch A (dd A) Hút 5 ml, 2ml và 1ml dd A cho vào bình định

Hút chính xác 10ml dd A cho vào bình định mức 25ml, thêm vừa đủ dung môi

M u tr ng: dung môi hòa tan lựa chọn Đo độ hấp thụ quang của dãy dung dịch

chuẩn tại bước sóng 254 nm

M u thử: Pha loãng mẫu thử bằng dung môi ở tỉ lệ nhất định để được nồng độ

dung dịch thử trong khoảng 10-1000 μg/ml Đo độ hấp thụ quang của mẫu thử và mẫu chuẩn tại bước sóng 254 nm Từ độ hấp thụ quang của dãy dung dịch chuẩn xây dựng phương trình và đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của độ hấp thụ vào nồng

b) Đ ợng bằ c ký l ng hi u nâng cao

Theo dược điển Mỹ, điều kiện chạy sắc kí như sau:

µm

‐ Pha động là hỗn hợp acetonitril : nước cất (70:30), siêu âm 20 phút

Trong mỗi ống nhựa có nắp đậy chứa 5 ml môi trường giải phóng, cho lượng

vòng/phút, trong 48 giờ Sau thời gian lẫy mấu ra, ly tâm 5000 vòng/phút trong 10 phút, rồi hút lớp dịch phía trên, lọc qua màng 0,45 µm, pha loãng thích hợp bằng methanol, đo độ hấp thụ quang tại bước sóng 254 nm Từ đó tính độ tan bão hòa của CTM trong mỗi dung dịch thử

b Đ t c gi i phóng

Thực hiện các thí nghiệm khảo sát sơ bộ và xét các điều kiện cơ sở vật chất hiện có, lượng CTM giải phóng được đánh giá qua da chuột cống, da chuột nhắt và màng thẩm tích với các điều kiện cụ thể như sau:

- Khối lượng mẫu thử 1,0 g

- Cân chính xác khoảng 1,0 g công thức vào ngăn cho của bình khuếch tán Franz Lấy mẫu ở các thời điểm t = 2; 4; 6 và 8 giờ Thể tích mỗi lần lấy mẫu là 0,25 ml (đối với da chuột) và 1 ml ( đối với màng thẩm tích) Quá trình lấy mẫu đồng thời cũng bổ sung một thể tích dung dịch môi trường mới bằng đúng thể tích môi trường

đã lấy ra Xác định lượng CTM bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu nâng cao (đối với da chuột) phương pháp đo quang ( đối với màng thẩm tích) rồi so sánh với mẫu chuẩn CTM

Xử lý số liệu và tính toán kết quả bằng phần mềm Microsoft Excel2010

2.3.2.3 P c gi ũ

Sử dụng máy phân tích kích thước hạt Zetasizer Nano ZS90 đo ở điều kiện hệ

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ NHẬN XÉT 3.1 Xây dựng phương pháp định lượng bằng phương pháp đo quang

Tiến hành đo độ hấp thụ quang của dãy dung dịch chuẩn clotirmazol trong dung môi methanol có nồng độ từ 10 – 1000 µg/ml, sau đó xây dựng đường chuẩn biểu diễn sự phụ thuộc của độ hấp thụ quang với nồng độ clotrimazol Kết quả được thể hiện trong hình 3.1

Hình 3.1 Đ ng chuẩn biểu th a nồ và m quang của CTM

hấp thụ quang của dung dịch có mối tương quan tuyến tính Xây dựng đường chuẩn trong methanol nhằm mục đích định lượng độ tan bão hòa dược chất trong các tá dược do dung môi methanol có thể hòa tan tốt được tá dược thân dầu

y = 0.0017x + 0.0438 R² = 0.9996

3.2 Nghiên cứu sàng lọc

3.2.1 Đ h i đ tan bão hòa

Trong quá trình bào chế vi nhũ tương, thành phần lựa chọn cho công thức rất quan trọng vì ảnh hưởng tới đặc tính cũng như khả năng hình thành vi nhũ tương

Vì vậy để lựa chọn được thành phần cho công thức, tiến hành đánh giá độ tan bão hòa của CTM trong nhóm tá dược dầu, diện hoạt và đồng diện hoạt Kết quả thể hiện ở bàng 3.1

B ng 3.1 Đ tan bão hòa của clotrimazol trong dầu, di n ho t ồng di n ho t (n=3, TB ± ĐLC)

Tá dƣợc Độ tan bão hòa ( μg/ml)

Dựa vào bảng kết quả trên, nhận thấy độ tan bão hòa của CTM trong acid oleic

là cao nhất trong các tá dược dầu, do đó chúng tôi lựa chọn acid oleic làm pha dầu cho công thức vi nhũ tương

Trong nhóm chất diện hoạt, Cremophor RH40 có độ tan bão hòa của CTM lớn hơn Tween 80 Tuy nhiên chất diện hoạt có ảnh hưởng rất lớn đến tính thấm của hệ

vi nhũ tương Nên để lựa chọn ra công thức tối ưu, lựa chọn cả hai loại chất diện hoạt là Cremophor RH40 và Tween 80 để tiến hành các thí nghiệm tiếp theo

Trong nhóm chất đồng diện hoạt, độ tan bão hòa của CTM trong Transcutol P

có độ tan bão hòa của CTM lớn nhất, hơn nữa Transcutol P có khả năng trộn lẫn tốt với các tá dược dầu và diện hoạt còn lại

Như vậy, lựa chọn các tá dược sau cho hệ vi nhũ tương :

 Dầu: acid oleic

 Chất diện hoạt : Cremophor RH40 hoặc Tween 80

 Chất đồng diện hoạt : Transcutol P

Sau khi lựa chọn được các thành phần cho hệ vi nhũ tương như trên, tiến hành xây dựng giản đồ pha để khảo sát vùng hình thành vi nhũ tương

3.2.2 Xây dựng giả đồ pha với loại chất diện hoạt khác nhau

(hỗn hợp chất diện hoạt và đồng diện hoạt), nước với các tỷ lệ chất diện hoạt và đồng diện hoạt tương ứng là 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5 được thể hiện trong hình 3.2 và hình 3.3

Hình 3.2 Gi ồ pha củ ũ i ch t di n ho t là Tween 80

Hình 3.3 Gi ồ pha củ ũ chứa ch t di n ho t cremophor RH40

Từ hình 3.2 và 3.3 và phụ lục 1, phụ lục 2 thấy rằng khi lượng chất diện hoạt tăng dần, Cremophor RH40 cho diện tích hình thành vi nhũ tương tăng, Tween 80 cho diện tích vùng hình thành vi nhũ tương giảm

Cremophor RH40

Như vậy, loại và lượng chất diện hoạt sử dụng trong các công thức ảnh hưởng đến khả năng hình thành vi nhũ tương Từ đó có thể ảnh hưởng tới một số đặc tính của hệ vi nhũ tương

3.2.3 X c đị h ôi trường giải phóng

Tham khảo tài liệu [17] và [26], tiến hành đánh giá độ tan bão hòa của CTM trong các môi trường giải phóng khác nhau, kết quả thu được thể hiện ở bảng 3.2:

B ng 3.2 Đ tan bão hòa của c z ng gi i phóng

Dựa vào bảng kết quả trên, nhận thấy độ tan bão hòa của CTM trong dung dịch

2 (EtOH: dung dịch Tween 80 1% tỉ lệ 1:1) là cao nhất (2153.33 ± 6.79 μg/ml), do

đó chúng tôi lựa chọn dung dịch chứa Ethanol: Dung dịch Tween 80 1% tỉ lệ 1:1 làm môi trường giải phóng cho các thí nghiệm sau

3.2.4 Sàng lọc màng giải phóng

Việc lựa chọn loại màng giải phóng phù hợp là rất quan trọng trong việc đánh giá một số đặc tính của vi nhũ tương như tính thấm, tốc độ giải phóng của dược