Nghiên cứu bào chế vi nang Lactobacillus acidophilus bằng phương pháp đông tụ từ nhũ tương

B Y T TRNG I HC DC H NI TRNH TH HOA M SINH VIấN: 1101196 NGHIấN CU BO CH VI NANG Lactobacillus acidophilus BNG PHNG PHP ễNG T T NH TNG KHểA LUN TT NGHIP DC S H NI - 2016 B Y T TRNG I HC DC H NI TRNH TH HOA M SINH VIấN: 1101196 NGHIấN CU BO CH VI NANG Lactobacillus acidophilus BNG PHNG PHP ễNG T T NH TNG KHểA LUN TT NGHIP DC S Ngi hng dn: PGS.TS Nguyn Ngc Chin DS Nguyn Th Phng Thỳy Ni thc hin: B mụn Cụng nghip Dc Vin Cụng ngh Dc phm Quc gia H NI - 2016 LI CM N Vi tt c s kớnh trng v lũng bit n sõu sc, tụi xin by t lũng cm n chõn thnh ti: PGS TS Nguyn Ngc Chin - Vin Cụng ngh Dc phm Quc gia, ging viờn b mụn Cụng nghip Dc - Trng i hc Dc H Ni - ngi thy ó luụn tn tỡnh giỳp , hng dn v ch bo tụi trờn ng hc tp, rốn luyn v nghiờn cu khoa hc Tụi cng xin chõn thnh cm n TS m Thanh Xuõn - Ging viờn b mụn Cụng nghip Dc - Trng i hc Dc H Ni - ngi cụ ó luụn tn tỡnh giỳp v to iu kin thun li cho tụi quỏ trỡnh hc v nghiờn cu hon thnh khúa lun ny Tụi cng xin chõn thnh cm n DS Nguyn Th Phng Thỳy cng ton th cỏc thy giỏo, cụ giỏo v cỏc anh ch k thut viờn b mụn Cụng nghip Dc, cỏc anh ch lm vic ti Vin Cụng Ngh Dc Phm Quc gia - nhng ngi ó luụn giỳp , hng dn v to iu kin thun li cho tụi sut quỏ trỡnh hc v nghiờn cu hon thnh khúa lun ny Cui cựng, tụi xin by t lũng bit n sõu sc ti gia ỡnh, ngi thõn v bn bố ó luụn ng viờn, giỳp tụi sut quỏ trỡnh hc v rốn luyn ti trng i hc Dc H Ni H Ni, ngy 11 thỏng nm 2016 Sinh viờn Trnh Th Hoa MC LC DANH MC CC Kí HIU, CC CH VIT TT DANH MC CC BNG DANH MC CC HèNH V, TH T VN Chng TNG QUAN 1.1 i cng v probiotics 1.2 Loi Lactobacilus acidophilus 1.2.1 c im hỡnh thỏi v iu kin nuụi cy 1.2.2 Tỏc dng ca Lactobacillus acidophilus i vi sc khe 1.3 Tng quan v dng bo ch vi nang 1.3.1 Khỏi nim 1.3.2 Cu to, thnh phn, c im 1.3.3 u nhc im ca vi nang húa probiotics 1.4 Phng phỏp bo ch vi nang probiotics 1.5 Tng quan mt s thnh phn s dng vi nang probiotics 1.5.1 Alginat 1.5.2 Chitosan 11 1.6 Mt s nghiờn cu v dng bo ch vi nang probiotics 12 Chng I TNG V PHNG PHP NGHIấN CU 15 2.1 Nguyờn vt liu, thit b 15 2.1.1 Nguyờn vt liu 15 2.1.2 Thit b 16 2.2 Ni dung nghiờn cu 16 2.2.1 Nghiờn cu nh hng ca cỏc yu t cụng thc v quy trỡnh n mt s ch tiờu cht lng ca vi nang probiotics bo ch c 16 2.2.2 ỏnh giỏ kh nng bo v VSV ca vi nang mụi trng acid pH 1,2 v kh nng gii phúng VSV ca vi nang mụi trng pH 7,4 17 2.2.3 Theo dừi n nh ca vi nang quỏ trỡnh bo qun 17 2.3 Phng phỏp nghiờn cu 17 2.3.1 Phng phỏp bo ch vi nang 17 2.3.2 Cỏc phng phỏp ỏnh giỏ vi nang bo ch c 20 Chng THC NGHIM, KT QU V BN LUN 23 3.1 Kho sỏt nh hng ca cỏc yu t n c tớnh vi nang placebo bo ch23 3.1.1 nh hng ca cụng thc bo ch n vi nang placebo 23 3.1.2 nh hng ca mt s thụng s quy trỡnh n vi nang placebo bo ch30 3.2 Kho sỏt nh hng ca mt s yu t n vi nang probiotics bo ch 31 3.2.1 nh hng ca nng alginat 31 3.2.2 nh hng ca nng tinh bt 33 3.2.3 nh hng ca nng glycerin 36 3.2.4 nh hng ca nng chitosan 37 3.3 ỏnh giỏ kh nng gii phúng VSV mụi trng kim 39 3.4 ỏnh giỏ nh hng ca iu kin bo qun n lng VSV sng sút 41 KT LUN V KIN NGH 43 TI LIU THAM KHO PH LC DANH MC CC Kí HIU, CC CH VIT TT ATCC Trung tõm gi ging quc gia M (American Type Culture Collection) B bifidum Bifidobacterium bifidum Cfu S n v khun lc (Colony - Forming Units) DDVN IV Dc in Vit Nam IV D/N Du/nc K ụng khụ kl/tt Khi lng/th tớch L acidophilus Lactobacillus acidophilus L casei Lactobacillus casei MRS Mụi trng nuụi cy vi khun (de Man, Rogosa, Sharpe) MT Mụi trng N/D Nc/du TCNSX Tiờu chun nh sn sut TKHH Tinh khit húa hc USP Dc in M VK Vi khun VSV Vi sinh vt DANH MC CC BNG Bng Tờn bng Bng 1.1 Cụng thc bo ch vi nang probiotics bng phng phỏp ụng t Trang 14 Bng 2.1 Nguyờn liu v húa cht nghiờn cu 15 Bng 2.2 Mụi trng MRS lng (MT1) 17 Bng 3.1 Bng thit k cụng thc kho sỏt nh hng ca loi v lng cht din hot n vi nang placebo Bng 3.2 c tớnh vi nang placebo bo ch c thay i loi v nng cht din hot Bng 3.3 Bng thit k cụng thc kho sỏt nh hng ca t l pha ni/pha ngoi n vi nang placebo Bng 3.4 c tớnh ca vi nang placebo bo ch c thay i t l pha ni/pha ngoi Bng 3.5 Bng thit k cụng thc kho sỏt nh hng ca nng calci clorid n vi nang placebo Bng 3.6 c tớnh vi nang placebo bo ch c thay i nng calci clorid Bng 3.7 Bng thit k cụng thc kho sỏt nh hng ca nng alginat n vi nang placebo Bng 3.8 c tớnh ca vi nang placebo bo ch c thay i nng alginat Bng 3.9 c tớnh ca vi nang placebo thu c thay i tc khuy Bng 3.10 c tớnh vi nang placebo thu c thay i thi gian nh húa 23 24 26 26 27 28 29 29 30 31 Bng 3.11 Bng thit k cụng thc kho sỏt nh hng ca nng tinh bt n vi nang probiotics Bng 3.12 Bng thit k cụng thc kho sỏt nh hng ca nng glycerin n vi nang probiotics Bng 3.13 Bng thit k cụng thc kho sỏt nh hng ca nng chitosan n vi nang probiotics Bng 3.14 Kh nng gii phúng VSV mụi trng m phosphat pH 7,4 thay i nng chitosan Bng 3.15 33 36 38 40 Biu din nh hng ca iu kin bo qun n lng VSV sng sút thi gian bo qun 41 DANH MC CC HèNH V, TH STT Hỡnh 1.1 Tờn hỡnh Trang Mụ hỡnh "v trng" mụ t cỏc ion calci phi hp vi cỏc 10 chui guluronat hydrogel calci alginat Hỡnh 3.1 th biu din nh hng ca loi v lng cht din 24 hot n hiu sut v kớch thc vi nang placebo Hỡnh 3.2 th biu din nh hng ca nng alginat n hiu 32 sut to vi nang, hiu sut bao VSV (Hỡnh A) v s lng VSV sau ụng khụ (Hỡnh B) Hỡnh 3.3 th biu din nh hng ca nng alginat n s 33 lng VSV vi nang sau thỏng bo qun iu kin thc (15 - 35oC) Hỡnh 3.4 th biu din nh hng ca nng tinh bt n hiu 34 sut to vi nang, hiu sut bao VSV (Hỡnh A) v s lng VSV sau ụng khụ (Hỡnh B) Hỡnh 3.5 th biu din nh hng ca nng tinh bt n s 35 lng VSV vi nang sau thỏng bo qun iu kin thc (15 - 35oC) Hỡnh 3.6 th biu din nh hng ca nng glycerin n hiu 36 sut to vi nang, hiu sut bao VSV (Hỡnh A) v s lng VSV sau ụng khụ (Hỡnh B) Hỡnh 3.7 th biu din nh hng ca nng chitosan n s 38 lng VSV sau ụng khụ Hỡnh 3.8 th biu din kh nng bo v VSV vi nang bao 39 chitosan sau 2h mụi trng acid pH 1,2 Hỡnh 3.9 th biu din nh hng ca chiotosan n lng VSV 40 c gii phúng mụi trng m phosphat pH 7,4 Hỡnh 3.10 th biu din nh hng ca iu kin bo qun n lng VSV sng sút thi gian bo qun 41 T VN Probiotics c bit n l mt nhúm vi sinh vt (VSV) mang li nhiu li ớch cho ngi nh ngn nga nhim khun ng rut, ci thin kh nng dung np lactose, tng cng dch, hp th ure, h tr iu tr cho ngi b suy thn, gim cholesterol mỏu,[28], [32], [47], [49] Tuy nhiờn, cỏc vi sinh vt ny d b nh hng bi cỏc yu t nh pH, nhit , ỏnh sỏng, hm m,Nhng yu t ny lm gim s lng vi sinh vt sng sút, ngn cn vic thit lp cõn bng h vi sinh vt ng rut [38] Do ú, m bo s lng vi sinh vt ch phm v em li tỏc dng mong mun, cn to nhng ch phm cú kh nng cung cp lng vi sinh vt phự hp v cú th cht thớch hp Hin nay, cỏc dng bo ch probiotics thụng dng trờn th trng l dng bt v cm Tuy nhiờn, vic m bo s lng vi sinh vt sng sút v bo v chỳng s dng ng ung l ln, s dng cỏc vi sinh vt phi chu tỏc ng ca cỏc yu t bt li nh: pH acid ca d dy, enzym tiờu húa, mui mt,[36], [38] Nhiu phng phỏp bo ch ó c nghiờn cu gim thiu nh hng cỏc yu t nờu trờn n VSV, ú cú phng phỏp vi nang húa [38] Vi nang húa giỳp tng n nh v hot tớnh trao i cht ca t bo cú s thay i nhit , pH hay s cú mt ca cỏc cht c ch mụi trng, kt qu lm t bo kộo di kh nng tn ti v tng n nh Vỡ vy, tin hnh thc hin ti Nghiờn cu bo ch vi nang Lactobacillus acidophilus bng phng phỏp ụng t t nh tng vi cỏc mc tiờu sau: Xõy dng c cụng thc bo ch vi nang probiotics cha Lactobacillus acidophilus bng phng phỏp ụng t t nh tng cha hn 108 cfu/g ỏnh giỏ cỏc c tớnh vt lý vi nang bo ch v xỏc nh lng vi khun Lactobacillus acidophilus sng sút quỏ trỡnh bo qun vi nang 38 Bng 3.13 Bng thit k cụng thc kho sỏt nh hng ca nng chitosan n vi nang probiotics CT Tween T l pha Nng Nng Nng Nng Nng 80 ni/pha calci alginat tinh bt glycerin chitosan ngoi clorid 0,4% So 29 vi pha 30 ni 0% 20/50 2% 3% 2% 15% 0,4% 1% log ( cfu/1g) 28 12 10 0% 0,4% Trc k 1,0% Sau K Hỡnh 3.7 th biu din nh hng ca nng chitosan n s lng VSV sau ụng khụ Nhn xột: Kt qu hỡnh 3.7 cho thy nng chitosan thay i 0%; 0,4% v 1% nhng lng VSV sng sút sau quỏ trỡnh K gn nh khụng thay i, nh vy chitosan khụng cú kh nng bo v VSV quỏ trỡnh ụng khụ Tin hnh ỏnh giỏ kh nng bo v VSV mụi trng acid bao vi nang bng chitosan kt qu thu c hỡnh 3.8 39 log (cfu/1g) chitosan 0% chitosan 1,0% 10 Ban u chitosan 0,4% VSV t Sau gi Hỡnh 3.8 th biu din kh nng bo v VSV vi nang bao chitosan sau gi mụi trng acid pH 1,2 Nhn xột: Kt qu hỡnh 3.8 cho thy bao chitosan thỡ kh nng bo v VSV mụi trng acid pH 1,2 cao hn so vi khụng bao Theo Zanjania, pH d dy, ion Ca2+ cú th trao i in tớch vi ion H+ mụi trng acid, lm mt ion Ca2+ khp vo khong trng theo mụ hỡnh v trng, lm VSV thoỏt vi nang v b nh hng trc tip ca acid d dy Vi nang cú s dng chitosan, s c b sung lp ỏo polycation bờn ngoi to mt ro cn i vi ion H+ mụi trng acid Do ú lm gim tỏc ng ti phc hp calci alginat, bo v c VSV mụi trng acid [66] Kt lun: Mu chitosan 0,4% (CT29) v 1% (CT30) cú kh nng bo v VSV mụi trng acid pH 1,2 tt nht, nhiờn s khỏc bit khụng quỏ ln m quỏ trỡnh pha chitosan 1% lõu hn, khú khn quỏ trỡnh thu vi nang sau bao chitosan nht chitosan 1% cao khú lc v tn kộm v mt kinh t nờn chn nng chitosan 0,4% (CT29) kho sỏt cỏc thớ nghim tip theo 3.3 ỏnh giỏ kh nng gii phúng VSV mụi trng kim Chitosan cú kh nng bo v VSV mụi trng acid pH 1,2 nhng VSV phỏt huy c tỏc dng vi c th vt ch thỡ VSV phi c gii phúng v phỏt trin ti v trớ ớch Do vy tin hnh ỏnh giỏ kh nng gii phúng VSV mụi trng kim (CT28, CT29, CT30), kt qu thu c bng 3.14 v hỡnh 3.9 40 Bng 3.14 Kh nng gii phúng VSV mụi trng m phosphat pH 7,4 thay i nng chitosan Tng CT s VSV log (cfu/1g) Sau 60 phỳt Sau 90 phỳt Sau 135 phỳt log (cfu/g) log (cfu/g) log (cfu/g) S VSV % gii S VSV % gii S VSV % gii log phúng log phúng log phúng (cfu/1g) (cfu/1g) (cfu/1g) Khụng bao 10 8,66 86,6% 8,91 89,1% 9,02 90,2% 0,4% 10 8,28 82,8% 8,53 85,3% 8,46 84,6% 1,0% 10 7,88 78,8% 7,78 77,8% 8,64 86,4% Khụng bao 0,4% 1,0% log (cfu/1g) 10 Tng VSV cú nang Sau 60 phỳt Sau 90 phỳt Sau 135 phỳt Hỡnh 3.9 th biu din nh hng ca chiotosan n lng VSV c gii phúng mụi trng m phosphat pH 7,4 Nhn xột: Kt qu hỡnh 3.9 cho thy sau 60 phỳt cú 8,28 log cfu/1g (82,8%) VSV c gii phúng t mu vi nang CT29 v khụng cú s khỏc bit ln gia mu bao chitosan 1,0% (CT30); 0,4% (CT29) v khụng bao (CT28) ti cỏc thi im khỏc 60, 90 v 135 phỳt, vy cú th kt lun chitosan khụng nh hng ln n kh nng gii phúng VSV mụi trng kim Lng VSV gii phúng ti a t 41 9,02 log cfu/1g (90,2%) i vi mu khụng bao; 8,53 log cfu/1g (85,3%) vi mu bao chitosan 0,4% v 8,64 log cfu/g (86,4%) vi mu bao chitosan 1%, sau ú lng VSV c gii phúng bt u gim dn, nguyờn nhõn cú th sau gii phúng ngoi mụi trng, VSV tip tc phỏt trin, b thiu dinh dng v cht dn i Kt lun: CT29 l cụng thc tt nht bo ch vi nang probiotics bng phng phỏp ụng t t nh tng 3.4 ỏnh giỏ nh hng ca iu kin bo qun n lng VSV sng sút Tin hnh bo ch vi nang theo CT29, sn phm sau K c bo qun cỏc iu kin khỏc nhau, kt qu lng VSV sng sút quỏ trỡnh bo qun c th hin bng 3.15 Bng 3.15 Biu din nh hng ca iu kin bo qun n lng VSV sng sút Sau K Sau thỏng log (cfu/1g) log (cfu/1g) iu kin thc (15 - 35oC) 10,49 8,83 Trong t lnh (2 - oC) 10,49 8,73 iu kin 12 iu kin thc Trong t lnh log (cfu/1g) 10 Sau K thỏng Hỡnh 3.10 th biu din nh hng ca iu kin bo qun n lng VSV sng sút thi gian bo qun Nhn xột: Kt qu bng 3.15 v hỡnh 3.10 cho thy, lng VSV sng sút vi nang bo qun hai iu kin khỏc thỏng cú s khỏc bit khụng ỏng k 42 v t mc > 108 cfu/1g Tuy nhiờn thi gian nghiờn cu hn ch nờn so sỏnh lng VSV sng sút thay i iu kin bo qun thỡ cn theo dừi thi gian di hn Lng VSV sng sút quỏ trỡnh bo qun gim dn theo thi gian, nguyờn nhõn cú th mu vi nang sau K cú hm m tng i thp (2,50 0,36 %) so vi mụi trng bờn ngoi nờn quỏ trỡnh bo qun hm m s tng lờn Khi hm m tng lờn VSV s tr li trng thỏi hot ng, sinh trng, phỏt trin, gi húa v cht i nờn s lng VSV sng sút s gim dn 43 KT LUN V KIN NGH KT LUN Do thi gian thc hin ti cú hn, ti ó thu c mt s kt qu sau: ó xõy dng c cụng thc bo ch vi nang probiotics bng phng phỏp ụng t t nh tng Cụng thc tt nht nh sau: CT 29 Nng T l pha Nng Nng Nng Nng Nng ni/ pha calci alginat tinh bt glycerin chitosan Tween ngoi clorid 0,4% 20/50 2% 3% 2% 15% 0,4% - Tc nh húa 400 - 500 vũng/ phỳt, thi gian nh húa 20 phỳt - Vi nang bo ch sau ụng khụ cú 4,65 1010 cfu/g > 108 cfu/g ỏnh giỏ c cỏc c tớnh vt lý vi nang bo ch v xỏc nh lng vi khun Lactobacillus acidophilus sng sút quỏ trỡnh bo qun vi nang - Vi nang thu c cu, cú kớch thc trc K nm khong 200 400 àm - 1,0g vi nang bo ch c cú s lng VSV sng sút >107 (cfu/g) sau mụi trng acid pH 1,2 gi - Hn 80% VSV vi nang c gii phúng (> 108 cfu/g) mụi trng kim pH 7,4 sau gi - Vi nang bo qun iu kin thc 15 - 35oC v t lnh - 8oC sau thỏng cú lng VSV >108 cfu/1g KIN NGH - Tip tc nghiờn cu nh hng ca cỏc yu t quy trỡnh nh: thi gian ụng khụ, thi gian tin ụng, nhit to vi nangn vi nang probiotics - Tin hnh kho sỏt nh hng ca iu kin bo qun n kh nng sng sút ca VSV thi gian di hn - Tin hnh nghiờn cu cỏc dng bo ch phự hp cha vi nang bo ch c TI LIU THAM KHO TING VIT B Y T (2008), K thut bo ch v sinh dc hc cỏc dng thuc, tr 218222, Nh xut bn y hc, H Ni Nguyn Trng Hip (2009), "Bn v kh nng sng sút ca vi sinh vt cỏc sn phm probiotics", Tp dc hc, (4-7) Nguyn Mai Hng (2014), Nghiờn cu s dng tinh bt lm cht bo v quỏ trỡnh to nguyờn liu probiotic cha Lactobacillus acidophilus, Khúa lun tt nghip dc s, Trng i hc Dc H Ni, H Ni Nguyn Vn Long (2005), Mt s chuyờn v bo ch hin i, tr 114 130, Nh xut bn y hc, H Ni Phm Th Phng (2015), Nghiờn cu bo ch vi nang probiotics bng phng phỏp ụng t, Khúa lun tt nghip dc s, Trng i hc Dc H Ni, H Ni Lờ Xuõn Phng (2008), Thớ nghim vi sinh vt hc, tr 5-10, i hc Nng, Nng TING ANH Abadias M., Benabarre A., et al (2001), "Effect of freeze drying and protectants on viability of the biocontrol yeast Candida sake", International Journal of Food Microbiology, 65(3), pp 173-182 Agnihotri N et al (2012), "Microencapsulation - a novel approach in drug delivery: a review", Indo Global Journal of Pharmaceutical Sciences, 2(1), pp 1-20 Ana M P G (1999), "Bifidobacterium spp and Lactobacillus acidophilus: biological, biochemical, technological and therapeutical properties relevant for use as probiotics", Trends in Food Science & Technology, 10 10 Anal Anil Kumar., Singh Harjinder (2007), "Recent advances in microencapsulation of probiotics for industrial applications and targeted delivery", Trends in Food Science & Technology, 18(5), pp 240-251 11 Arnaud J-P., Lacroix C., et al (1992), "Effect of agitation rate on cell release rate and metabolism during continuous fermentation with entrapped growing", Biotechnology Techniques, 6(3), pp 265-270 12 B Vivek K (2013), "Use of encapsulated probiotics in dairy based foods", International Journal of Food, Agriculture and Veterinary Sciences, 3(1), pp 188-199 13 Banyuaji Andhini., Rahayu Endang S., et al (2012), "Viability of Encapsulated Lactobacillus acidophilus SNP in Ice Cream", Jurnal Agritech Fakultas Teknologi Pertanian UGM, 29(4) 14 Chan Eng-Seng., Wong Sze-Ling., et al (2011), "Effects of starch filler on the physical properties of lyophilized calcium - alginate beads and the viability of encapsulated cells", Carbohydrate Polymers, 83(1), pp 225-232 15 Crittenden R., Laitila A., et al (2001), "Adhesion of bifidobacteria to granular starch and its implications in probiotic technologies", Applied and Environmental Microbiology, 67(8), pp 3469-3475 16 Donthidi A R., Tester R F., et al (2010), "Effect of lecithin and starch on alginate - encapsulated probiotic bacteria", Journal of Microencapsulation, 27(1), pp 67-77 17 Doumeche B., Kỹppers M., et al (2008), "New approaches to the visualization, quantification and explanation of acid - induced water loss from Ca - alginate hydrogel beads", Journal of microencapsulation 18 Dubey R et al (2009), "Microencapsulation technology and applications", Defence Science Journal, 59(1), pp 82-95 19 FAO /WHO (2006), "Guidelines for the Evaluation of Probiotics in Food Joint FAO/WHO Working Group Report on Drafting Guidelines for the evaluation of probiotics in food", Retrieved, from http://www.who.int/foodsafety/publications/fs_management/probiotics2/en/i ndex 20 Favaro - Trindade C.S., Heinemann R J B., et al (2011), "Developments in probiotic encapsulation", Perspectives in Agriculture, Veterinary Science, Nutrition and Natural Resources, 6(4) 21 Fritzen-Freire Carlise B., Prudờncio Elane S., et al (2013), "Effect of microencapsulation on survival of Bifidobacterium BB-12 exposed to simulated gastrointestinal conditions and heat treatments", LWT-Food Science and Technology, 50(1), pp 39-44 22 George Meera., Abraham T Emilia (2006), "Polyionic hydrocolloids for the intestinal delivery of protein drugs: alginate and chitosan - a review", Journal of controlled release, 114(1), pp 1-14 23 Gong Ying., Han Guangting., et al (2012), "Antifungal activity and cytotoxicity of zinc, calcium, or copper alginate fibers", Biological trace element research, 148(3), pp 415-419 24 Gouin Sebastien (2004), "Microencapsulation: industrial appraisal of existing technologies and trends", Trends in food science & technology, 15(7), pp 330-347 25 Grant Gregor T., Morris Edwin R., et al (1973), "Biological interactions between polysaccharides and divalent cations: the egg-box model", FEBS letters, 32(1), pp 195-198 26 Homayouni A., Azizi A., et al (2008), "Effect of microencapsulation and resistant starch on the probiotic survival and sensory properties of synbiotic ice cream", Food chemistry, 111(1), pp 50-55 27 Homayouni Aziz, Mohammad Reza Ehsani, et al (2007), "Effect of Lecithin and Calcium Chloride Solution on the Microencapsulation Process Yield of Calcium Alginate Beads", Iranian Polymer Journal, 16(9), pp 597606 28 Jonkers D., Stockbrỹgger R (2007), "Review article: Probiotics in gastrointestinal and liver diseases", therapeutics, 26(s2), pp 133-148 Alimentary pharmacology & 29 K Singla A., M Chawla (2001), "Chitosan: some pharmaceutical and biological aspects an update", Journal of Pharmacy and Pharmacology, 53(8), pp 1047-1067 30 Kailasapathy K., Sultana K (2003), "Survival and [beta]-D-galactosidase activity of encapsulated and free Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium lactis in ice-cream", Australian Journal of Dairy Technology 58(3), pp 223-227 31 Kailasapathy K et al (2002), "Microencapsulation of probiotic bacteria: technology and potential applications", Curr Issues Intest Microbiol, 3(2), pp 39-48 32 Kailasapathy K., Rybka S (1997), "L acidophilus and Bifidobacterium spp their therapeutic potential and survival in yogurt", Australian Journal of Dairy Technology, 52(1), pp 28 33 Kailasapathy Kaila., Chin James (2000), "Survival and therapeutic potential of probiotic organisms with reference to Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium spp", Immunology and Cell Biology, 78(1), pp 80-88 34 Kim Hyung Soo., Gilliland Stanley E (1983), "Lactobacillus acidophilus as a dietary adjunct for milk to aid lactose digestion in humans", Journal of dairy science, 66(5), pp 959-966 35 Krasaekoopt Wunwisa., Bhandari Bhesh., et al (2004), "The influence of coating materials on some properties of alginate beads and survivability of microencapsulated probiotic bacteria", International dairy journal, 14(8), pp 737-743 36 Krasaekoopt Wunwisa., Bhandari Bhesh., et al (2003), "Evaluation of encapsulation techniques of probiotics for yoghurt", International Dairy Journal, 13(1), pp 3-13 37 Lee Yuan-Kun., Salminen Seppo (1995), "The coming of age of probiotics", Trends in Food Science & Technology, 6(7), pp 241-245 38 Li Xiao Yan, Chen Xi Guang, et al (2011), "Preparation of alginate/chitosan/carboxymethyl chitosan complex microcapsules and application in Lactobacillus casei ATCC 393", Carbohydrate Polymers, 83, pp 14791485 39 Mohammad Ali Khosravi Zanjania , Tarzi Babak Ghiassi, et al (2014), "Microencapsulation of Probiotics by Calcium Alginate - gelatinized Starch with Chitosan Coating and Evaluation of Survival in Simulated Human Gastro - intestinal Condition", Iranian Journal of Pharmaceutical Research, 13(3), pp 843-852 40 Mứrch írr A., Donati Ivan., et al (2006), "Effect of Ca2+, Ba2+, and Sr2+ on alginate microbeads", Biomacromolecules, 7(5), pp 1471-1480 41 Mortazavian et al (2007), "Bacteriocins from lactic acid bacteria: Purification, properties and use as biopreservatives", Brazilian Archives of Biology and Technology, 5(1), pp 1-17 42 Murtaza G et al (2011), "Alginat microparticles for biodelivery: a review", African Journal of Pharmacy and Pharmacology, 5(25), pp 49-55e 43 Muthukumarasamy Parthiban., Holley Richard A (2006), "Microbiological and sensory quality of dry fermented sausages containing alginate microencapsulated Lactobacillus reuteri", International Journal of Food Microbiology, 111(2), pp 164-169 44 Nazzaro Filomena., Fratianni Florinda., et al (2009), "Fermentative ability of alginate - prebiotic encapsulated Lactobacillus acidophilus and survival under simulated gastrointestinal conditions", Journal of Functional Foods, 1(3), pp 319-323 45 Nussinovitch A., Zvitov-Marabi R (2008), "Unique shape, surface and porosity of dried electrified alginate gels", Food hydrocolloids, 22(3), pp 364-372 46 Ouwehand Arthur C., Salminen Seppo J (1998), "The health effects of cultured milk products with viable and non - viable bacteria", International Dairy Journal, 8(9), pp 749-758 47 Ouwehand Arthur C., Salminen Seppo., et al (2002), "Probiotics: an overview of beneficial effects", Antonie Van Leeuwenhoek, 82(1-4), pp 279289 48 P Jose L (2007), "Bacteriocins from lactic acid bacteria: Purification, properties and use as biopreservatives", Brazilian Archives of Biology and Technology, 50(3), pp 521-542 49 Parvez S., Malik KA., et al (2006), "Probiotics and their fermented food products are beneficial for health", Journal of applied microbiology, 100(6), pp 1171-1185 50 Patil P et al (2012), "A review on ionotropic gelation method: novel approach for controlled gastroretentive gelispheres", International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 4(4), pp 26-32 51 Poncelet D, Babak V, et al (1999), "A physico - chemical approach to production of alginate beads by emulsification - internal ionotropic gelation", Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects, 155(2), pp 171-176 52 R Postgate J., J Hunter (1961), "On the Survival of Frozen Bacteria", Microbiological Research Establishment, 6(1), pp 49-55 53 R Sinha V (2004), "Chitosan microspheres as a potential carrier for drugs", International Journal of Pharmaceutics, 274, pp 1-33 54 Re Maria-Ines (2006), "Formulating drug delivery systems by spray drying", Drying Technology, 24(4), pp 433-446 55 Rokka Susanna, Rantamọki Pirjo (2010), "Protecting probiotic bacteria by microencapsulation: challenges for industrial applications", 231, pp 1-12 56 Ross RP., Desmond C., et al (2005), "Overcoming the technological hurdles in the development of probiotic foods", Journal of Applied Microbiology, 98(6), pp 1410-1417 57 Saad N., Delattre C., et al (2013), "An overview of the last advances in probiotic and prebiotic field", LWT-Food Science and Technology, 50(1), pp 1-16 58 Sabikhi Latha., Babu R., et al (2010), "Resistance of microencapsulated Lactobacillus acidophilus LA1 to processing treatments and simulated gut conditions", Food and Bioprocess Technology, 3(4), pp 586-593 59 Sheu TY., Marshall RT (1993), "Microentrapment of lactobacilli in calcium alginate gels", Journal of Food Science, 58(3), pp 557-561 60 Shoji A S., Oliveira A C., et al (2013), "Viability of L acidophilus microcapsules and their application to buffalo milk yoghurt", Food and Bioproducts Processing, 91(2), pp 83-88 61 Smidsrứd Olav., Glover RM., et al (1973), "The relative extension of alginates having different chemical composition", Carbohydrate research, 27(1), pp 107-118 62 Song SH., Cho YH., et al (2003), "Microencapsulation of Lactobacillus casei YIT 9018 using a microporous glass membrane emulsification system", Journal of food science, 68(1), pp 195-200 63 Sultana Khalida., Godward Georgia., et al (2000), "Encapsulation of probiotic bacteria with alginate - starch and evaluation of survival in simulated gastrointestinal conditions and in yoghurt", International journal of food microbiology, 62(1), pp 47-55 64 Sun Jinchen., Tan Huaping (2013), "Alginate - based biomaterials for regenerative medicine applications", Materials, 6(4), pp 1285-1309 65 Umer H et al (2011), "Microcapsulation: Process, Techniques and Applications", International Journal of Research in Pharmaceutical and biomedical sciences, 2(2), pp 474-480 66 Zanjania M et al (2014), "Microencapsulation of Probiotics by Calcium Alginat - gelatinized Starch with Chitosan Coating and Evaluation of Survival in Simulated Human Gastro - intestinal Condition", Iranian Journal of Pharmaceutical Research, 13(3), pp 843-852 PH LC: Hỡnh nh vi nang v khun lc Lactobacillus acidophilus Vi nang trc ụng khụ Vi nang sau ụng khụ Ph lc 1.1 Hỡnh nh vi nang soi trờn kớnh hin vi vt kớnh Ph lc 1.2 Hỡnh nh vi nang sau ụng khụ iu kin thc 15 - 35oC Trong t lnh - 8oC Ph lc 1.3 Hỡnh nh khun lc sau thi gian bo qun thỏng (cy 0,2 ml nng pha loóng 10-6 ) [...]... một chất diện hoạt trong quá trình tạo vi nang probiotics [55], [59] Kỹ thuật đông tụ từ nhũ tương có hiệu quả trong vi c giữ số lượng của L acidophilus LA - 5 và B bifidum BB - 12 cao hơn mức tối thiểu điều trị (> 107 cfu/g) 9 Kỹ thuật đông tụ từ nhũ tương tránh sử dụng nhiệt độ cao trong quá trình tạo nang Phương pháp này cho tỷ lệ VSV sống cao, kích thước vi nang nhỏ hơn và có tiềm năng để phát triển... của L reuteri trong vi nang được bào chế bằng phương pháp đông tụ từ nhũ tương Đầu tiên một phần dung dịch natri alginat 3% (w/v) có chứa 9 log (cfu/ml) VSV và glycerol được cho vào 5 phần dầu ngô có chứa 0,2% Tween 80 Hỗn hợp được khuấy 800 vòng/phút trong 5 phút để tạo thành nhũ tương đồng nhất, thêm dung dịch CaCl2 0,1M vô trùng để phá vỡ nhũ tương, các vi nang hình thành được thu bằng cách lọc qua... Theo nghiên cứu của Phạm Thị Phương, tác giả khảo sát các yếu tố thuộc về công thức và quy trình ảnh hưởng đến vi nang, công thức tốt nhất như sau: 14 Bảng 1.1 Công thức bào chế vi nang probiotics bằng phương pháp đông tụ Thể tích Nồng độ Tỷ lệ tinh Nồng độ Nồng độ Nồng độ dịch lên alginat bột glycerol chitosan calci men 200ml clorid 2% 2% 15% 0,4% 1% Kết quả vi nang bào chế được có > 109 (cfu/g) L acidophilus. .. với ion Ca2+, đông tụ lại và tạo thành vi nang [51]  Đông tụ từ bên ngoài: Ion Ca2+ không cho vào cùng với dung dịch alginat mà được thêm vào sau khi nhũ tương N/D hình thành, ion Ca2+ đi qua pha ngoại vào tiếp xúc với alginat trong pha nội, quá trình đông tụ xảy ra và vi nang được hình thành Vi nang thu được có kích thước nhỏ hơn kích thước giọt pha nội của nhũ tương và nằm trong khoảng từ 25 µm đến... lượng chất diện hoạt sẽ ảnh hưởng đến hình thức, kích thước và hiệu suất tạo vi nang được bào chế bằng phương pháp đông tụ từ nhũ tương nên tiến hành bào chế vi nang placebo theo công thức ở bảng 3.1, kết quả thu được ở bảng 3.2 và hình 3.1 Bảng 3.1 Bảng thiết kế công thức khảo sát ảnh hưởng của loại và lượng chất diện hoạt đến vi nang placebo Chất diện hoạt CT Tỷ lệ pha Nồng độ Nồng độ Nồng Nồng độ alginat... nước)/pha ngoại (pha dầu) ảnh hưởng nhiều đến hình thức, kích thước và hiệu suất tạo vi nang được bào chế bằng phương pháp đông tụ từ nhũ 26 tương Tiến hành bào chế vi nang placebo theo công thức ở bảng 3.3, kết quả thu được ở bảng 3.4 Bảng 3.3 Bảng thiết kế công thức khảo sát ảnh hưởng của tỷ lệ pha nội/pha ngoại đến vi nang placebo CT Tween Tỷ lệ Nồng độ Nồng độ Nồng độ Nồng độ Nồng độ 80 pha calci alginat... dạng của vi nang khác nhau tùy thuộc vào các thiết bị sử dụng [36] Phƣơng pháp hóa rắn nhũ tƣơng Vi nang có thể được tạo ra từ nhũ tương gồm hai hay nhiều chất lỏng không đồng tan với nhau Nhũ tương tạo thành có thể là loại dầu/nước (D/N) hoặc 8 nước/dầu (N/D) Dựa vào kỹ thuật hóa rắn nhũ tương mà có thể chia thành 3 phương pháp: bốc hơi dung môi, thay đổi dung môi và tạo liên kết chéo Tạo vi nang probiotics... probiotics từ nhũ tương thường sử dụng phương pháp tạo liên kết chéo (đông tụ) Quá trình bào chế tiến hành cơ bản như sau: Hỗn dịch polyme chứa tế bào VSV được thêm vào một lượng lớn dầu thực vật như dầu đậu nành, dầu hướng dương, dầu hạt cải, dầu ngô Các hỗn hợp được đồng nhất để tạo thành một nhũ tương N/D Khi nhũ tương N/D được hình thành, các polyme hòa tan trong nước phải được đông tụ từ các hạt... calci clorid để đông tụ làm cho kích thước vi nang tăng lên hoặc tạo thành các sợi alginat đông tụ, làm giảm hiệu suất tạo vi nang Khi lượng pha nội tiếp tục tăng thì quá trình nhũ hóa xảy ra không hoàn toàn nên tạo ra các mảnh alginat lớn đông tụ lẫn vào trong sản phẩm làm giảm hiệu suất tạo vi nang Khi tỷ lệ pha nội/pha ngoại giảm thì quá trình nhũ hóa xảy ra tốt hơn nên kích thước vi nang tạo thành... giải phóng L acidophilus trong môi trường đệm phosphat pH 7,4 2.2.3 Theo dõi độ ổn định của vi nang trong quá trình bảo quản Theo số lượng VK L acidophilus trong quá trình bảo quản vi nang ở điều kiện thực 15 - 35oC và trong tủ lạnh 2 - 8oC 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp bào chế vi nang 2.3.1.1 .Phương pháp nhân giống Cân, đong các thành phần trong công thức môi trường MRS lỏng (công thức