Đề tài : Nghiên cứu về listeria monocytogenes trong các sản phẩm thuỷ sản

Các bệnh không phải thương hàn do Salmonella gây ra thường là một nhiễmtrùng giới hạn ở ống tiêu hóa trong các trường hợp nhiễm trùng nhiễm độc thức ăn mà Salmonella typhimurium.... Tầm

CHƯƠNG IGIỚI THIỆU

1.1 Đặt vấn đề

Các bệnh lý nhiễm trùng là nguyên nhân gây tử vong hàng đầu trên thế giới.Không chỉ có những bệnh nhiễm trùng mới phát sinh mà những bệnh nhiễm trùng cũgây chết người đã biết từ lâu cũng tái xuất hiện Hơn nữa tỉ lệ vi khuẩn gây bệnh đềkháng kháng sinh ngày càng tăng cao là nguy cơ lớn cho sức khỏe cộng đồng Nhữngbằng chứng gần đây cho thấy các tác nhân gây bệnh mặc dù rất khác nhau đều sử dụngnhững phương thức chung để phát động quá trình nhiễm trùng và gây bệnh Những cơ

chế này tạo nên độc lực (virulence) của vi khuẩn Tìm hiểu các cơ chế mà vi khuẩn sử

dụng để xâm nhập và gây bệnh có ý nghĩa quan trọng trong cuộc chiến chống lại các tácnhân bé nhỏ này

Listeria monocytogenes là tác nhân gây bệnh listeriosis Vi khuẩn này được xếp

là tác nhân gây bệnh đứng thứ ba thuộc nhóm B sau Streptococcus và E coli Đồng thời

là nguồn chính lây nhiễm bệnh cho người trong các sản phẩm bảo quan lạnh, vi sinh vậtnày có khả năng tồn tại tăng trưởng trong sản phẩm suốt quá trình bảo quản lạnh Đốivới vi sinh vật ngộ độc thực phẩm khác, chúng sẻ phát bệnh khi con người hấp thu đủ

liều lượng, sau thời gian ủ bệnh các triệu chứng lâm sàn biểu hiện Trong đó Listeria monocytogenes hiện diện với số lượng nhỏ trong thực phẩm, khi vào cơ thể chúng không bị đào thải mà tích lũy chờ cơ hội Mặc dù bệnh do Listeria monocytogenes gây

ra là ở tầng số thấp, 2 - 5 trường hợp trên một triệu người một năm, nhưng tỉ lệ chết do

vi khuẩn này là rất cao, 25 - 30% trường hợp tử vong trong các ca nhiễm bệnh

Đối tượng bị nhiễm bệnh do Listeria monocytogenes gây ra thường gặp ở trẻ em, trẻ sơ sinh, người già, thai phụ và người có hệ miễn dịch kém Listeria monocytogenes

gây ra bệnh nhiễm trùng máu, viêm màng não hoặc sốt viêm dạ dày ruột, đồng thời cũng

là nguyên nhân gây ra trẻ chết sau khi sinh, đẻ non và sẩy thai ở phụ nữ

Do đó, với tính phân bố rộng và khả năng gây ra những tác hại nghiêm đối vớingười bị nhiễm L Monocytogenes và được sự chấp thuận của khoa Môi trường và Công

nghệ sinh học, tôi tiến hành thực hiện đề tài “Nghiên cứu về Listeria monocytogenes

trong các sản phẩm thủy sản”

1.2 Mục đích

Cấu trúc và cơ chế gây bệnh của Listeria monocytogenes.

1.3 Nội dung nghiên cứu

 Khảo sát về cấu trúc của Listeria monocytogenes.

 Khảo sát về sự phân bố của Listeria monocytogenes.

 Tình hình nhiễm Listeria monocytogenes trong sản phẩm thủy sản trên thế

giới và Việt Nam hiện nay

 Một số phương pháp xác định Listeria monocytogenes.

CHƯƠNG IITỔNG QUAN

2.1 Tổng quan về một số vi sinh vật nhiễm trong thực phẩm

di động, không sinh bào tử Có kích thước tế bào vào khoảng 0,5 – 3 m

Salmonella là vi khuẩn hiếu khí hay hiếu khí tùy nghi, thích hợp ở 370C, pH tối

ưu 7,2 - 7,6 Để mọc trên các môi trường thông thường

 Đặc điểm sinh hóa:

Salmonella lên men glucose có sinh hơi (trừ Salmonella typhi lên men glucose

không sinh hơi) không lên men lactose, Indol âm tính, Methyl Red dương tính, VP âmtính, Citrat thay đổi, Urease âm tính, H2S dương tính (trừ Salmonella paratyphi A: H2S

âm tính)

Lên men sinh hơi các đường glucose, manit, sorbitol, lên men không đềusacharose, không lên men đường lactose, salicin, raffinose … (Tô Minh Châu và TrầnBích Liên, 1999)

2.1.1.3 Cấu trúc kháng nguyên

 Kháng nguyên O

Mỗi Salmonella có thể có một hoặc nhiều yếu tố kháng nguyên Hiện nay người

ta biết có 67 yếu tố kháng nguyên O Việc xác định các yếu tố kháng nguyên O là hếtsức quan trọng để định nhóm và định type

 Kháng nguyên H

Chỉ có ở những Salmonella có lông Kháng nguyên H của Salmonella có thể tồn

tại dưới 2 pha

 Pha đặc hiệu (phase 1): là những yếu tố có tính chất đặc hiệu cho

từng loài vi khuẩn Salmonella, gồm 28 kháng nguyên lông được kí hiệu bằng chữ cái a,

b, c, g,…

 Pha không đặc hiệu (phase 2): được kí hiệu số 1, 2, 3,…

(Tô Minh Châu và Trần Thị Bích Liên, 2001)

 Kháng nguyên Vi

Là kháng nguyên bề mặt bao bên ngoài vách tế bào vi khuẩn, dưới dạng mộtmàng mỏng không nhìn thấy được ở kính hiển vi thường Kháng nguyên Vi chỉ có ở 2

type huyết thanh Salmonella typhi và S paratyphi C.

Người ta dựa vào sự khác nhau về cấu trúc kháng nguyên để xếp loại Salmonella.

Bảng 2.1: Phân biệt các kháng nguyên O, H, Vi:

Kháng nguyên Tính chịu nhiệt Tác động của

alcohol 50% Formol 50%

O Ổn nhiệt 2h30 ở 1000C Kháng Bị ngăng trở ngưng kết

Hình 2.2: Các kháng nguyên bề mặt của Salmonella.

2.1.1.4 Yếu tố độc lực

Có hai loại độc tố là nội độc tố và ngoại độc tố

Ngoại độc tố đường ruột (entero toxin) có hai loại là LT và ST

 Độc tố LT không bền với nhiệt, LT hoạt hóa enzyme adenylcuclase trong

tế bào niêm mạc ruột, làm gia tăng c-AMP (cyclo adenosine 5-monophosphate), c-AMP

sẽ kích thích tiết Cl- và HCO3- ra khỏi tế bào, đồng thời ức chế Na+ vào bên trong tế bào.Hậu quả tích nước trong ống ruột dẫn đến tiêu chảy.

 Độc tố ST bền với nhiệt, cơ chế tác động tương tự như LT ST hoạt hóaenzyme guanosylcyclase làm tăng c-GMP (cycle guanosine 5-monophosphate) ở trong

tế bào dẫn tới hiện tượng tiêu chảy

2.1.1.5 Khả năng gây bệnh

Salmonella xâm nhập vào cơ thể qua đường miệng và hầu hết là do ăn phải thức

ăn bị nhiễm như thực phẩm, sữa, nước uống… Sau khi xuyên qua hàng rào acid dạ dày,

vi khuẩn di động về phía ruột non và sinh sản ở đó, tiếp tục chui qua 1 màng nhày vàvào thành ruột Các tế bào Paneth của niêm mạc ruột tiết ra một loại peptide có tínhchống lại sự xâm nhập của tác nhân gây bệnh

Salmonella nhiễm vào cơ thể từ hai nguồn: từ phân người hoặc

động vật, từ người bệnh Trong đó phải kể đến tác động của động vậtlông vũ, trứng và phân của chúng đã làm cho việc lan truyền

Salmonella dễ dàng hơn Ngoài ra chuột, mèo, ruồi cũng là tác nhân gián tiếp dẫn đến việc Salmonella lan rộng rãi hơn khi phân của chúng

nhiễm vào các thực phẩm không được bảo quản kỹ trong quá trình

giết mổ củng cần đề phòng sự nhiễm Salmonella nếu không thực hiện

đúng quy trình an toàn thực phẩm

 Bệnh thương hàn

Hình 2.3: Viêm dạ dày – ruột

Ở nước ta, bệnh thương hàn chủ yếu do S typhi, sau đó đến S paratyphi A, còn

S paratyphi B và S paratyphi C thì ít gặp Bệnh lây từ người này sang người khác, qua

thức ăn, nước uống bị nhiễm khuẩn Sau khi khỏi bệnh về mặt lâm sàng, khoảng 5%

bệnh nhân trở thành người lành mang vi khuẩn kéo dài hàng tháng hoặc hàng năm Ở

họ, ổ chứa Salmonella là đường mật và vi khuẩn vẫn được tiếp tục đào thải theo phân ra ngoại cảnh Người lành mang vi khuẩn là nguồn lan truyền bệnh quan trọng.

Sinh bệnh học: Trực khuẩn thương hàn vào cơ thể qua đường tiêu hóa đến ruộtnon thì chui qua niêm mạc ruột rồi vào các hạch mạc treo ruột Ở đó chúng nhân lên vàmột phần vi khuẩn bị dung giải, giải phóng ra nội độc tố Nội độc tố kích thích thần kinhgiao cảm ở bụng, gây thương tổn mảng Peyer, xuất huyết tiêu hóa, có thể gây thủngruột Ngoài ra, nội độc tố theo máu lên kích thích trung tâm thần kinh thực vật ở nãothất ba, gây ra trạng thái sốt kéo dài, li bì, và gây ra biến chứng trụy tim mạch Từ cáchạch mạc treo ruột vi khuẩn lan tràn vào máu gây nên nhiễm khuẩn huyết và lan đi khắp

cơ thể, rồi vi khuẩn vào mật và từ đó quay trở lại ruột Vi khuẩn theo phân ra ngoạicảnh

 Các bệnh khác

Các bệnh không phải thương hàn do Salmonella gây ra thường là một nhiễm

trùng giới hạn ở ống tiêu hóa trong các trường hợp nhiễm trùng nhiễm độc thức ăn mà

Salmonella typhimurium là tác nhân hay gặp nhất, sau đó là Salmonella enteritidis Nhiễm trùng nhiễm độc do Salmonella có thời gian nung bệnh từ 10 đến 48 giờ Bệnh

biểu hiện có sốt, nôn, tiêu chảy Bệnh khỏi sau 2 - 5 ngày, không có biến chứng

Ngoài ra, Salmonella có thể gây nên các tổn thương ở ngoài đường tiêu hóa như

viêm màng não, thể nhiễm trùng huyết đơn thuần, nhiễm trùng phổi

 Khả năng gây bệnh của một số loài:

 Salmonella typhi : Chỉ gây bệnh cho người Ở nước ta bệnh thương hàn chủ yếu do S.typhi gây ra.

 Salmonella paratyphi A : Chỉ gây bệnh thương hàn cho người và cũng hay gặp ở nước ta sau S typhi.

 Salmonella paratyphi B : Gây bệnh thương hàn chủ yếu cho người, đôi khi

ở cả súc vật Bệnh thường gặp ở các nước châu Âu

 Salmonella paratyphi C : Gây bệnh thương hàn, viêm dạ dày ruột và

nhiễm khuẩn huyết Bệnh thường gặp ở các nước Đông Nam Á

 Salmonella typhimurium và Salmonella enteritidis : Gây bệnh cho người

và gia súc, gặp trên toàn thế giới Chúng là nguyên nhân gây nhiễm trùng, nhiễm độc

thức ăn do ăn phải thức ăn nhiễm Salmonella.

 Salmonella cholerae suis : Loại này hay gây nhiễm khuẩn huyết.

2.1.2 Campylobacter sp

Hình 2.4: Phẩy khuẩn Campylobacter

Campylobactes là những vi khuẩn bé, mảnh, Gram âm, hình dấu phẩy nhọn hai

đầu, có kích thước 0,2-0,8m x 0,5-5m, rất di động nhờ có 1 lông ở 1 đầu, không

sinh bào tử Nuôi cấy Campylobacters trên môi trường nhân tạo thường khó khăn vì vi

khuẩn đòi hỏi điều kiện vi hiếu khí (micro-aerophile) Mọc được ở 370C nhưng mọc tốthơn ở 420C, không mọc ở 250C Thường dùng các môi trường chọn lọc như thạch máu

Columbia, thạch máu tryptose để phân lập vi khuẩn Campylobacters mọc chậm sau 2

đến 3 ngày

Bảng 2.2: Đặc điểm sinh hóa – phân biệt loài và dưới loài của vi khuẩn

Campylobacter

Loài – dưới loài

H = Hippurate hydrolysis sinh H2S trên môi trường TSI (< 3 ngày)

C fetus ss vene = C fetus subsp venerealis

C fetus ss fetus = C fetus subsp fetus

C Spu ss Spu = C Sputorum subsp Sputorum

C Spu ss bu = Sputorum subsp bubulus

Vi khuẩn dương tính Oxydase và Catalase, phân hủy nitrat, H2S dương tính,không oxy hóa hoặc không lên men các loại đường

2.1.2.3 Cấu trúc kháng nguyên

Các nghiên cứu về kháng nguyên của Campylobacter phần lớn dựa vào cấu trúc của loài C jejuni Đến nay đã xác định được 3 loại kháng nguyên đó là:

 Kháng nguyên bề mặt LPS: có bản chất là lipopolysaccharide, gồm ít nhất

50 serotype bền với nhiệt

 Kháng nguyên lông H: có bản chất là protein với hơn 36 serotype

 Kháng nguyên màng ngoài OMP (Outer membrane protein): là loạiprotein bề mặt chuyên biệt và duy nhất để sản xuất vacin (Phan Hồng Diển, 2005)

2.1.2.4 Yếu tố độc lực

Độc tố của Campylobacter gồm hai loại độc tố: nội độc tố (endotoxin) và ngoại

độc tố (exotoxin) Trong ngoại độc tố có chứa độc tố đường ruột (enterotoxin) và độc tốthần kinh (cytotoxin) Vai trò tác động của các loại độc tố này vẫn chưa được biết rõ

Liều gây độc ở người là 500 – 1000 vi khuẩn Khả năng của vi khuẩn

Campylobacter ở người có lẽ do số lượng lẫn độc tố (Hà Huy Khôi, 2004).

2.1.2.5 Khả năng gây bệnh

Campylobacters là một tác nhân gây viêm ruột cấp tính thường gặp ở người.

Chúng xâm nhập vào người do ăn uống các thức ăn và nước bị nhiễm khuẩn, do tiếp xúcvới động vật, chủ yếu là với gia cầm, gia súc

Thời gian ủ bệnh 2 - 11 ngày Thể lâm sàng thường gặp là bệnh cảnh của mộtviêm ruột cấp tính với dấu hiệu đau bụng, tiêu chảy dữ dội, phân nước có khi có máu và

mủ Có trường hợp xảy ra nhiễm khuẩn huyết Tiêu chảy do C jejuni kéo dài 5 - 10

ngày Đa số trường hợp khỏi không cần điều trị bằng kháng sinh

Cơ chế gây bệnh chưa rõ Campylobacters có độc tố ruột, nhưng có ý kiến cho rằng vi khuẩn này có khả năng xâm nhập giống như Shigella Campylobacters nhân lên

chủ yếu ở hồi tràng và hổng tràng

Bệnh viêm ruột do C jejuni xảy ra ở nhiều nơi trên thế giới, gây tiêu chảy cấp ở

người, đặc biệt ở trẻ em và ở khách du lịch từ các nước phát triển đến các nước nhiệtđới

Bảng 2.3: Khả năng gây bệnh của Campylobacter.

Loài Nguồn nhiễm Bệnh trên người Bệnh trên động vật

C fetus subsp fetus Trâu, bò, cừu

Nhiễm trùng máu, sẩy thai, viêm màng não và bệnh

dạ day ruột

Sẩy thai trên trâu,

bò, cừu và rối loạn tiêu hóa

C fetus subsp

Sẩy thai, chết phôi

Chưa xác định Trong phân gia súc

khỏe, đôi khi gây

chết phôi

C jejuni subbp deylei

Gia cầm, heo, trâu, bò, cừu, chó, chim, côn trùng, mèo và trong môi trường

Bệnh dạ dày ruột, sẩy thai, viêm màng não,viêm khớp, hội chứng cuillian-barre

Bệnh dạ dầy ruột, viêm vú, sẩy thai vào cuối giai đoạn của mang thai hoặc

đẻ con yếu hoặc chết vài ngày sau khi sinh, gà thường

là vật mang trùng

C jejuni subsp jejuni

C Helvetius Chó, mèo Không gây bệnh Bệnh dạ dày ruột

C laridis

Gia cầm, heo, trâu, bò, cừu, chó, chim, khỉ

Bệnh dạ dày ruột, viêm nhiễm trùng máu

Bệnh dạ dày ruột

C upsaliensis Chó, mèo, người Apse, nhiễm trùng

 Hình thái và đặc điểm nuôi cấy

E.coli là trực khuẩn Gram âm, di động do có lông quanh thân, một số chủng E.coli có vỏ polysaccharide, không sinh bào tử.

E.coli là vi khuẩn hiếu khí hoặc kỵ khí không bắt buộc, phát triển dễ dàng trên

các môi trường nuôi cấy thông thường, một số có thể phát triển được ở môi trường tổnghợp đơn giản Thường sống trong ruột già của người và động vật, theo phân đi ra ngoài

Đây là những vi sinh vật có khả năng phát triển ở nhiệt độ từ 7 – 500C Nhiệt độthích hợp 370C, pH tối ưu là 4,4

Phát triển mạnh trong môi trường Mac Conkey, EMB Trên môi trường EMB, E coli cho khuẩn lạc có màu ánh kim, tròn, bờ đều, đường kính khoảng lớn hơn 0,5m.

Trong môi trường lỏng, E coli làm đổi màu môi trường, sinh hơi hoặc làm đục

môi trường

 Đặc tính sinh hóa

E.coli lên men nhiều loại đường sinh axit và sinh hơi như: Glucose, lactose,

ramnose; khử nitrat thành nitric, gây nhầy nhớt hư hỏng thực phẩm, indol dương tính,

đỏ methyl dương tính, VP âm tính, citrat âm tính, urease âm tính, H2S âm tính

 Không bị hủy với cồn 50%.

 Bị hủy bởi focmol 5%

 Rất độc (1/20mg gây chết chuột sau 24 giờ)

Kháng nguyên O gặp kháng huyết thanh tương ứng sẽ gây ra phản ứng ngưng kết

O Kháng nguyên O giữ vai trò quan trọng đối với khả năng gây bệnh của dòng vi khuẩn

có tính chất chuyên biệt cho từng loài vật chủ

 Kháng nguyên H (Flagellar antigen): được cấu tạo bởi protein, khi khángnguyên H gặp kháng thể tương ứng sẻ xảy ra hiện tượng ngưng kết H kháng nguyên H

có các đặc tính sau

 Không chịu nhiệt

 Bị hủy bởi cồn 50%

 Bị hủy bởi protease

 Không bị hủy bởi focmol 5%

Kháng nguyên K (Capsular antigen): loại này chỉ có ở một số ít vi khuẩn đườngruột, được cấu tạo bởi polysaccharide hoặc protein Nếu kháng nguyên K che phủ hoàntoàn thân vi khuẩn sẽ ngăn cảng phản ứng ngưng kết O

 Kháng nguyên tiêm mao F (Fimbrial antigen): có dạng hình roi, dàikhoảng 4m, thẳng hay xoắn, đường kính 0,7 – 2,1m, giúp vi khuẩnbám vào tế bào niêm mạc ruột nên rất quan trọng trong khả năng gâybệnh của vi khuẩn

Hiện nay có khoảng 700 tuype huyết thanh của E coli từ sự tổ hợp của các nhóm

kháng nguyên O, H, K, F Dựa vào đó người ta có thể định danh vi khuẩn

2.1.3.4 Yếu tố độc lực

Người ta chia E.coli thành nhiều nhóm, mỗi nhóm sinh ra các loại độc tố khác

nhau, hiện có 5 nhóm chính : STEC (Shiga toxin-producing E.Coli) hoặc VTEC(Verotoxigenic E.Coli) và EHEC (Enterohaemorrhagic E.Coli), EPEC (Enteropathogenic E.Coli), ETEC (Enterotoxigenic E.Coli), EAEC (Enteroaggregative E.Coli) và EIEC (Enteroinvasive E.Coli)

 Nhóm STEC

STEC sản xuất độc tố Shiga-like toxin (Slt), còn gọi là Shiga toxin (Stx) hayVerotoxin (VT) Họ độc tố Stx gồm hai nhóm chính không phản ứng chéo với nhau làStx1 và Stx2 Trong khi Stx1 có tính bảo tồn cao thì Stx2 rất thay đổi về trình tự, tạo ranhiều subtype như Stx2c, Stx2hb, Stx2e, Stx2g Một dòng STEC có thể sản sinh Stx1,Stx2 hoặc cả Stx1 và Stx2, và thậm chí nhiều dạng của Stx2

Yếu tố khác có liên quan đến độc lực của STEC là việc tạo ra enterohaemolysin (EHEC-Hly) và có thể cả độc tố ruột chịu nhiệt EAST1 EHEC-Hly được mã hóa bởi gen trên plasmid 60 MDa (pO157) mà plasmid này được tìm thấy ở gần như tất cả các dòng O157:H7 và cũng khá phổ biến cả những dòng STEC non-O157 nữa (Nataro và Kaper, 1998) Trên plasmid này có sự hiện diện của một operon gồm 4 khung đọc mở (open reading frame ORF) là hlyCABD Trong đó hlyA là gen cấu trúc khởi đầu cho haemolysin Độc tố ruột chịu nhiệt EAST1 (đầu tiên được mô tả ở nhóm EAEC là EAEC heat-stable enterotoxin 1), cũng được tìm thấy ở nhiều dòng STEC Tầm quan trọng của EAST1 đối với khả năng gây bệnh của STEC vẫn chưa được biết, nhưng có ở một vài trường hợp tiêu chảy không có máu mà thường thấy ở những người nhiễm

STEC

Các yếu tố độc lực chính bao gồm gen eae mã hóa protein itimin cần thiết cho

việc tạo ra tổn thương dạng A/E, plasmid 50 – 70 Mda ( EAF ) : mã hóa BFP ( bundle –forming pilus ), PER ( plasmid – encoded regulator ) và Ler ( LEE – encordedregulator) Các protein tiết : Tir, EspA, EspB, EspD, EspF, EspG và MAP (mitochondria– associated protein), EAST – 1 có khả năng phá hủy tế bào biểu mô và CDT( Cytolethan distending toxin )

Nhóm ETEC có hai nhóm quyết định độc lực chính là độc tố ruột (enterotoxin)

và yếu tố định vị (colonization factor – CF)

 Độc tố ruột enterotoxin

Nhóm ETEC gồm những E Coli tạo ra ít nhất một trong hai loại độc tố đường

ruột là ST và LT ETEC gây bệnh bằng cách vi khuẩn bám vào bề mặt màng nhầy ruộtnon và tiết ra độc tố ruột, làm gia tăng tình trạng tiết dịch Nhóm ETEC gây tiêu chảy

thông qua sự tiết độc tố đường ruột LT và ST E.Coli nhóm này có thể chỉ tiết độc tố

LT, hoặc chỉ tiết ST, hoặc có thể tiết cả LT và ST

 Độc tố không chịu nhiệt (Heat-labile toxin - LT): Độc tố LT của E.Coli là oligopeptide có liên hệ gần gũi về mặt cấu trúc và chức năng với độc tố tả (cholera toxin

- CT) do Vibrio cholerae tiết ra LT và CT giống nhau nhiều đặc tính như cấu trúc, trình

tự acid amin (giống nhau khoảng 80%), tương đồng về receptor, hoạt tính enzym, và tác

động của nó trên thú hay nuôi cấy tế bào

Sau khi độc tố đi vào nội bào, chúng di chuyển trong tế bào nhờ hệ thống vận chuyển của Golgi Đích đến của LT trong tế bào là enzym adenylate cyclase nằm ở lớp màng ngoài của tế bào biểu mô ruột Peptide A1 có hoạt tính ADP-ribosyltransferase chuyển phần ADP-ribosyl từ NAD đến của protein liên kết GTP (GTP-binding protein)

là GS, gây hoạt hóa enzyme adenylate cyclase, làm gia tăng AMP vòng (cAMP) trong tế bào Vì vậy enzyme cAMP-dependent protein kinase (A kinase) được họat hóa dẫn đến

sự phosphoryl hóa kênh chloride (Cl-) ở màng tế bào biểu mô vượt quá mức bình

thường Kết quả dây chuyền là kích thích tế bào bên dưới tiết Cl- và ngăn cản sự hấp thụ NaCl bởi những tế bào có lông nhung Hàm lượng ion trong lòng ruột gia tăng kéo theo

sự di chuyển thụ động của nước từ tế bào vào lòng ruột, gây tiêu chảy (Nataro và Kaper, 1998) Mặc dù sự kích thích của Cl- do sự gia tăng lượng cAMP trong tế bào là cách giải thích cổ điển về cơ chế gây tiêu chảy của LT và CT, ngày càng có nhiều bằng chứng cho thấy rằng đáp ứng tăng tiết đối với những độc tố này có cơ chế phức tạp hơn Một cơ chế tác động khác của độc tố có liên quan đến những prostaglandin E (PGE1 và PGE2)

và yếu tố hoạt hóa tiểu cầu Sự tổng hợp và phóng thích những chất chuyển hóa của acidarachidonic như prostaglandin và leukotriene có thể kích thích sự vận chuyển các chấtđiện giải và kích thích nhu động ruột Cơ chế tác động khác thứ hai có liên quan đến hệ

thần kinh ruột (enteric nervous system – ENS) điều hòa nhu động và sự tiết ion ở ruột.

Cơ chế thứ ba là CT và LT gây đáp ứng viêm ruột dạng nhẹ

 Độc tố chịu nhiệt (Heat-stable toxin - ST): Ngược với LT, ST có trọnglượng phân tử nhỏ và những cầu nối disulfur của nó giải thích cho khả năng chịu nhiệtcủa độc tố này ST được chia thành 2 nhóm là STa và STb, khác nhau về cấu trúc và cơchế hoạt động Gen mã hóa cho cả 2 nhóm được tìm thấy chủ yếu trên plasmid và vàigen mã hóa ST cũng được tìm thấy trên transposon Sta (hay còn gọi là ST-I) được tạo

bởi ETEC và một vài vi khuẩn Gram âm khác như Yersinia enterocolitica và V cholerae non – O1 ST giống 50% trình tự acid amin với độc tố chịu nhiệt EAST1 của

EAEC Gần đây, còn có báo cáo cho rằng một vài dòng của ETEC cũng có thể sản sinhđộc tố EAST1 ngoài độc tố STa Còn STb chỉ được tìm thấy ở ETEC

 Yếu tố định vị (colonization factor – CF): Cơ chế mà ETEC kết

dính và cư trú trên lớp màng nhầy ruột đã được nghiên cứu kỹ Để gây tiêu chảy, ETECđầu tiên phải kết dính vào tế bào ruột non nhờ vào lông trên bề mặt của vi khuẩn, gọi làyếu tố định vị (CF) CFA có thể được phân loại dựa trên đặc tính hình thái Có 3 loạichính gồm loại lông hình que cứng, lông hình que mềm có dạng bó, lông có cấu trúcmảnh mềm Gen của CFA thường được mã hóa trên plasmid, cũng là nơi mã hóa chođộc tố ST và/hoặc LT

Những yếu tố độc lực chính của EAEC bao gồm các diềm bám dính kết tập AAF(aggregative adhesion fimbriae), yếu tố điều hòa bám dính kết tập aggR, protein Pet vàđộc tố EAST – 1 (enteroaggregative heat – stabe toxin – 1) AFF được xem là yếu tốquyết định độc lực Ba loại AAF đã được biết đến gồm AAF/I, AAF/II và AAF/III,trong đó loại I và loại II có cấu trúc bó, loại III có cấu trúc dạng sợi riêng biệt Các AAFtạo nên kiểu bám dính hình chồng gạch lên tế bào Hep – 2 Yếu tố aggR có vai trò điềuhòa sự biểu hiện của các AAF Protein Pet được tiết ra màng ngoài vi khuẩn gây ra sự tụdịch và gây độc cho biểu mô tiêu hóa EAST – 1 có khả năng phá hủy tế bào biểu mô.Ngoài các yếu tố độc lực nêu trên, EAEC còn tiết ra một protein làm tan máu và làm

mất thăng bằng vận chuyển protein qua màng Các yếu tố độc lực nêu trên của EAECchủ yếu được mã hóa bởi các gen nằm trên plasmid có phân tử lượng 60 MDa Một sốyếu tố độc lực được mã hóa trên các gen trên nhiễm sắc thể đang được nghiên cứu

EIEC gây bệnh chủ yếu do khả năng xâm nhập vào niêm mạc đại tràng Khả năngxâm nhập được mã hóa bởi gen trên plasmid 140 MDa Các gen trên plasmid này mãhóa cho các kháng nguyên xâm nhập (IpaA đến IpaD, Ipa : Invasion plasmid antigen)

EIEC còn có khả năng sản xuất độc ruột giống một số Shigella Gen mã hóa cho độc tố này có tên là sen (Shigella enterotoxin), cơ chế gây bệnh giống vi khuẩn lỵ EIEC xâm

nhập vào trong tế bào biểu mô đại tràng, làm tiêu các túi thực bào và nhân lên trong bàotương, phá hủy tế bào và xâm lấn sang các tế bào khác

2.1.3.5 Khả năng gây bệnh

Khả năng gây bệnh rất đa dạng: gây nhiễm khuẩn đường tiểu, với cơ thể yếu thìgây nhiễm khuẩn máu, gây viêm màng não ở trẻ sơ sinh, gây tiêu chảy

 Bệnh tiêu chảy do E.coli

Các E.coli gây bệnh tiêu chảy ở người gồm có:

 Enterotoxigenic E.coli (ETEC)

Là loại E.coli sinh độc tố ruột ETEC là một nguyên nhân quan trọng gây tiêu chảy nặng giống triệu chứng do Vibrio cholerae 01 gây ra ở người Bệnh tiêu chảy do

ETEC xảy ra chủ yếu ở các xứ nhiệt đới và có thể gặp ở các lứa tuổi khác nhau, nhưngđặc biệt ở trẻ nhỏ thường thấy bệnh cảnh lâm sàng nặng dễ dẫn tới tình trạng kiệt nước

và rối loạn điện giải

ETEC còn là một nguyên nhân thường gây tiêu chảy cho khách du lịch từ cácnước phát triển sang các nước đang phát triển

Cơ chế gây bệnh: ETEC vào ruột sẽ gắn vào niêm mạc ruột nhờ các yếu tố bámdính, đồng thời sản sinh ra độc tố ruột tác động lên tế bào niêm mạc ruột gây xuất tiết ramột số lượng lớn một chất dịch đẳng trương với huyết tương Bệnh nhân nôn, tiêu chảyliên tục, phần lớn có đau nhức bắp cơ, đau bụng và sốt nhẹ

Có hai loại độc tố ruột đã được nghiên cứu kỹ về tính chất sinh lý, sinh hóa vàtính truyền bằng plasmid đó là :

Độc tố ruột LT (Heat - labile)Độc tố ruột ST (Heat - stable)Những chủng ETEC có thể sinh ra một hoặc hai loại độc tố ruột tùy thuộc vàoplasmid mà chúng mang

LT loại độc tố ruột bị hủy bởi nhiệt, là một protein gồm 2 tiểu phần A (Active) và

B (Binding) có chức năng riêng biệt Tiểu phần A có hai tiểu đơn vị A1 và A2, tiểu phần

B có 5 tiểu đơn vị B1, B2, B3, B4 và B5 Các tiểu đơn vị B có chức năng gắn với thụthể ganglioside GM1 ở bề mặt tế bào biểu mô ruột và chuẩn bị mở đường cho tiểu phần

A mà chủ yếu là A1 xâm nhập vào bên trong tế bào Tiểu đơn vị A tác động tới vị tríđích ở mặt trong màng bào tương nơi điều h.a enzymee adenylate cyclase Adenylatecyclase bị hoạt hóa và làm tăng hàm lượng adenosine monophosphate vòng (AMPvòng) Hiện tượng này dẫn tới sự tăng thấm của các điện giải và nước qua màng ruột,gây tiêu chảy cấp và kiệt nước, rối loạn điện giải

ST loại độc tố ruột kháng nhiệt, là một phân tử có trọng lượng thấp nhất và không

có tính kháng nguyên Thụ thể dánh cho ST khác với thụ thể LT Sau khi được gắn vớithụ thể, ST sẽ hoạt hóa guanylate cyclase trong tế bào niêm mạc ruột Hiện tượng nàydẫn tới sự tăng guanosine monophosphate vòng (GMP vòng) và do đó xảy ra tình trạngtăng tiết dịch ở ruột

 Enteropathogenic E.coli (EPEC)

EPEC hiện nay được biết gồm một số type huyết thanh thường gây bệnh tiêuchảy cấp (bệnh viêm dạ dày - ruột) ở trẻ em lứa tuổi nhỏ (trẻ dưới một tuổi), có thể gâythành dịch Các vụ dịch do EPEC thường hay gặp trong bệnh viện, cơ chế gây bệnh củaEPEC chưa được biết rõ Các EPEC phân lập từ các vụ dịch thường là thuộc các typeehuyết thanh:

O26 : B6 O111 : B4 O126 : B16O55 : B5 O119 : B4 O127 : B18

O86 : B7 O125 : B15 O128 : B12

 Enteroinvasive E.coli (EIEC)

Là loại E.coli gây bệnh bằng cơ chế xâm nhập tế bào biểu mô niêm mạc ruột, gây tiêu chảy ở người lớn và trẻ em với những triệu chứng bệnh l giống Shigella: nghĩa là

đau bụng quặn, mót rặn, đi tiêu nhiều lần, phân có nhiều mũi nhầy và máu

Người ta đã chứng minh được rằng khả năng xâm nhập tổ chức ruột của EIECđược chi phối bởi plasmid EIEC có thể không lên men lactose, không di động và giống

Shigella về nhiều mặt kể cả cấu trúc kháng nguyên Do vậy những vụ dịch tiêu chảy do EIEC gây nên dễ bị lẫn lộn với tiêu chảy do Shigella.

 Enteroadherent E.coli (EAEC)

Là loại E.coli bám dính đường ruột gây bệnh do bám vào niêm mạc và làm tổn

thương chức năng ruột

 Enterohemorrhagic E.coli (EHEC)

EHEC là một trong những tác nhân gây tiêu chảy có thể dẫn tới viêm đại tràng

xuất huyết và hội chứng tan máu - ure huyết EHEC là những chủng E coli có khả năng

sản xuất một độc tố gây độc tế bào Vero (Verocytotoxin), gọi là VT

 Các nhiễm khuẩn khác do E.coli

E coli có thể gây nên nhiễm khuẩn đường tiết niệu: sự ứ động nước tiểu do sỏi,

thai nghén tạo điều kiện thuận lợi cho bệnh nhiễm khuẩn đường tiết niệu dễ xảy ra Mặt khác, khi thông niệu đạo, người ta có thể gây ra nhiễm khuẩn ngược dòng

E coli có thể gây ra nhiễm khuẩn đường sinh dục, nhiễm khuẩn gan mật, viêm

màng não ở trẻ còn bú, nhiễm khuẩn huyết

2.2 Giới thiệu về Listeria monocytogenes

2.2.1 Lịch sử phát hiện

L monocytogenes lần đầu tiên được mô tả bởi E.G.D Murray vào năm 1926 dựa trên sáu trường hợp đột tử ở trẻ Murray giới thiệu Vi khuẩn monocytogenes trước khi

JH Harvey Pirie thay đổi tên chi là Listeria năm 1940 Mặc dù L monocyotogenes

nhiễm ở cả động vật và con người đã được nói đến vào những năm 1920, nhưng cho đến

năm 1952 tại Đông Đức đã công nhận L monocyotogenes là một nguyên nhân quan

trọng gây ra nhiễm trùng và viêm màng não của trẻ sơ sinh Ở người lớn mắc bệnh do vikhuẩn này nguyên nhân là do tổn thương hệ thống miễn dịch, chẳng hạn như người lạmdụng thuốc ức chế miển dịch và Corticosteroid cho khối u ác tính hoặc cấy ghép nộitạng, và những người nhiễm HIV

Mãi cho đến năm 1981 L monocytogenes được xác định là một nguyên nhân

gây bệnh từ thực phẩm, liên quan đến 41 trường hợp mắc bệnh và 18 ca tử vong, chủ

yếu ở phụ nữ mang thai và trẻ sơ sinh Từ đó một số trường hợp nhiễm Listeria từ thực phẩm đã được báo cáo, và L monocytogenes đã được công nhận rộng rãi như là một

mối nguy hiểm quan trọng trong ngành công nghiệp thực phẩm

Listeria được xem là vấn đề nghiêm trọng nhiễm vào các sản phẩm thịt và thịt giacầm vào những năm 1980 Những năm 1990, Bộ Nông nghiệp Mĩ cho biết có một trậndịch bệnh này từ bánh mì kẹp xúc xích nóng và có thể là các cửa hàng bán thịt ngon dẫnđến ít nhất 101 người bị bệnh khiến 15 người lớn tử vong và 6 thai nhi bị sinh non

Năm 1999, loài L monocytogenes đặc biệt cực độc đã tiến triển báo động các

viên chức y tế và họ buộc những nhà sản xuất thực phẩm phải giải quyết vấn đề Mặc dù

“quy định tạm thời” đối với các sản phẩm thịt và thịt gia cầm chế biến sẵn phát hànhnăm 2003 giúp kiểm soát sự bùng phát vi khuẩn, nhưng rõ ràng đã không thể loại bỏđược bệnh hoàn toàn Theo Trung tâm y tế dự phòng CDC, ước tính 2.500 người bịbệnh listeriosis nặng mỗi năm, trong số đó có 500 người tử vong Người có nguy cơ cao

có thể mắc bệnh này sau khi ăn thực phẩm thậm chí chỉ nhiễm vài con vi khuẩn

Năm 2006, trong một nỗ lực bảo vệ cộng đồng, Cơ quan lương thực và dượcphẩm FDA phê chuẩn tán thành việc sử dụng thuốc xịt khử trùng giúp giảm nhiễmkhuẩn các sản phẩm thịt và thịt gia cầm chế biến sẵn Thuốc phun bao gồm 1 hỗn hợp

gồm 6 loại virus vô hại diệt khuẩn L monocytogenes

2.2.2 Phân loại

Theo George M Garrity, Julia A.Bell và Timothy G.Lilburn, phân loại học củaListeria spp Trong giới vi sinh vật như sau:

Listeria seeligeri Listeria ivanovii Listeria grayi Listeria welshimeri

Các loài có tính tương đồng về di truyền nên giúp giải thích được kiểu hình tương

tự nhau giữ các loài Khả năng tan huyết là đặc tính nhằm phân biệt giữ các loài

Đến nay chỉ có loài L monocytogenes cho thấy là tác nhân chính gây bệnh cho người và động vật, khi đó L invanovii chi gây bệnh cho động vật đặc biệt là thú.

2.2.3 Đặc điểm

Hình 2.6: L monocytogenes.

2.2.3.1 Đặc điểm chung

L monocytogenes là trực khuẩn Gram dương, kỵ khí tùy nghi phát triển ở nhiệt

độ từ 1 - 45oC, không tạo bào tử nhưng có chuyển động điển hình khi được cấy ở nhiệt

độ 20 - 25oC và có thể phát triển trong tế bào

Là vi khuẩn hình que mảnh, chiều ngang khoảng 0,5m, chiều dài khoảng1-2m Phản ứng catalase dương tính Sau khi nhuộm Gram ta thấynhững tế bào hình que riêng lẻ hoặc những tế bào nối với nhau thànhmột chuỗi tế bào

Vi khuẩn này có thể tồn tại ở pH rộng từ 4,3 - 9,6

Hình 2.7: Tế bào vi khuẩn L monocytogenes Gram(+)

Hình 2.8: Lông roi của L monocytogenes

Vi khuẩn L monocytogenes sống rất dai và khác với đa số vi khuẩn khác L monocytogenes có thể tăng trưởng chậm trong tủ lạnh ở nhiệt độ 4°C Hiện nay các nhà khoa học cho rằng con đường nhiễm L monocytogenes phổ biến nhất

là qua thực phẩm

Trong số bảy loại Listeria được biết đến, chỉ có L monocytogenes mới là tác 11

chủng huyết thanh (sérotypes) trong đó 90% trường hợp bệnh Listeriosis ở người đều docác serotype 1a, 1b và 4b gây nên Trong ba nhóm vừa kể trên, thì 4b là serotype độc hạinhất

2.2.3.2 Đặc điểm sinh hóa

Tùy từng loài hay từng kiểu huyết thanh mà Listeria spp có các biểu hiện sinh hóa khác nhau Đặc điểm sinh hóa chung của Listeria spp được thể hiện như sau.

Bảng 2.4: Đặc điểmsinh hóa của một số loài Listeria

-1 Thử nghiệm trên môi trường thạch máu cừu

2 Thử nghiệm trên chuột

3 Những chủng lên men ribose được phân thành L ivanovii subsp Invanovii và không lên men như L ivanovii Lomdiniesis.

V4: biotypes thay đổi

5 Bao gồm hai loài phụ L grayi Murrayi biến đổi nitrate và L gayi subsp Grayi không

biến đổi nitrate

trên bộ nhiễm sắc thể của chủng Listeria sản xuất protein cho phép tạo yếu tố điều hòa

giúp chúng thích nghi với điều kiện môi trường khác nhau và điều kiện đặc tính gâyđộc

Bảng 2.5: Bộ gen của loài L monocytogenes

L monocytogenes

Tiên mao

Ribosomes

Màng tế bào

Vỏ tế bào

Bao vỏ

Mặt khác, các loài như L.innocua thiếu gen qui định cho một protein tạo độc tố

nên không thể mã hóa cho protein đóng vai trò quan trọng cho việc xâm nhập vào tế bàochủ Điều này có thể giải thích được khả năng gây bệnh giữa các loài khác nhau thuộc

cùng giống Listeria Cả L monocytogenes và L ivanovii đều có một tổ hợp gen qui định

độc tính với chiều dài 8,2 Kb trên bộ gen, được điều hòa bởi yếu tố PrfA (Positiveregulatory factor A).Tổ hợp gen này nằm giữ gen prs và gen ldh trên nhiễm sắc thể

2.2.5 Yếu tố độc lực

PrfA

Hình 2.10: Vị trí tổ hợp gen qui định độc tính trong L monocytogenes.

Phần lớn tổ hợp gen này tham gia trong việc xâm nhập vào tế bào chủ và tiếnhành chu kỳ xâm nhiễm bên trong các tế bào của tác nhân gây bệnh Tổ hợp này mã hóa

bao gồm 6 gen plcB, hly, mpl, actA, plcB, prfA và có 3 khung đọc mở X, Y, Z.

Trong đó gen prfA rất cần thiết cho tính độc của loài L monocytogenes, có vai trò

như yếu tố điều hòa chính nhằm ổn định hoạt động của tổ hợp gen này Bên cạnh đó,

gen hly mã hóa protein tạo sản phẩm listeriolysin O (LLO), plcA mã hóa tạo phosphatidylinositol-specific phospholipase C (PI-PLC), plcB mã hóa tạo

phosphatidulcholine-spefic phospholipase C (PC-PLC)

Tương tự như LLO, các phospholipase C này dung giải tế bào chủ bằng cách tạo

một lổ nhỏ trên tế bào và phá vở lipid màng tế bào Vi khuẩn sinh ra một protease mpl

phụ thuộc Zn+ có hoạt tính như một vài ngoại độc tố

Ngoài ra có một vài gen c qui định tính gây độc nhưng tổ hợp gen nói trên bao

gồm inlA, inlB, inlC mã hóa lần lượt cho internalin A, B và C Các gen này đóng vai trò

quan trọng nhằm nội bộ hóa tế bào chủ do tác nhân gây bệnh Tuy nhiên tất cả các gentrong tổ hợp gen gây độc và tất cả các gen nằm ngoài tổ hợp gen này vẫn hoàn toàn phụ

thuộc vào hoạt động của yếu tố prfA.

Bảng 2.6: Chức năng của các gen trong hoạt động tạo độc tố của L monocytogenes.

phospholipase C Dung giải màng không bào của thể thực bào.

hlyA Listeriolysin O Giải phóng vi khuẩn ra khỏi không bào

Mpl Zinc-dependent metalloprotease Tham gia trong quá trình hoạt động của

plcB

actA Actin-polymerizing protein Giúp lây nhiễm từ tế bào này sang tế bào

khác

2.2.5.1 Listeriolysin O

LLO là một yếu tố độc lực chính được sinh ra bởi L monocytogenes giúp cho L.

monocytogenes thoát khỏi các không bào thực bào đầu tiên Nó là một protein có trọnglượng phân tử 58,5 kDa được tạo thành bởi một chuỗi đơn polypeptide gồm 529 aa.Trình tự đầu N có đặc điểm của trình tự dấu hiệu điển hình ở vi khuẩn Gram dương:phần đầu có tính ái nước và mang điện tích dương được theo sau bởi 20 đầu kỵ nước.Trình tự này mã hóa trực tiếp cho protein và được phân cắt sau vị trí lysine 25 Kết quả

là LLO được bắt đầu từ amino acid 26, là một phân tử protein dài 504 aa và có trọnglượng phân tử 55,8 kDa

LLO thuộc về họ độc tố gắn cholesterol được hoạt bởi nhóm thiol được tạo ra bởihầu hết các vi khuẩn Gram dương Một số độc tố thuộc họ này như Streptolysin O từ

Streptococcus pyogenes, pneumolysin O từ Streptococcus pneumoniae, perfringolysin O

từ Clostridium perfringens, cereolysin O từ Bacillus cereus, alveolysin O từ Bacillus alvei … Hoạt tính ly giải của các độc tố này được tăng cường bởi các tác nhân ức chế và

bị kìm hãm bởi sự oxy hóa và biểu hiện khi có cholesterol hoặc kháng thể khángstreptolysin O Cytolysin được hoạt hóa bởi thiol có một cystein đơn ở vùng đầu C làmcho chúng dễ bị bất hoạt bởi sự oxy hóa mặc dù cystein này có thể được thay thế bằngalanine mà không làm mất chức năng ly giải Chúng tạo nên những lỗ không liên tục vớiđường kính bên trong lên đến 30 nm trên những màng chứa cholesterol Cơ chế hoạtđộng của chúng dựa vào sự tương tác với cholesterol với chức năng không chỉ là vị trígắn kết mà còn như một tác nhân làm thay đổi hoạt động của enzyme dẫn đến quá trìnholigomer hóa của khoảng 20 – 80 toxin monomer thành cấu trúc vòng hoặc giống vòngcung

LLO cho thấy sự tương tác kỳ lạ với cholesterol trong dung dịch như sau: protein

bị bất hoạt bởi cholesterol nhưng, thay vì giống các độc tố khác, duy trì khả năng gắntrên màng 1 HU (hemolytic unit) LLO có thể bất hoạt 0,2 ng cholesterol trong khi cácsterol khác như epicholesterol và dehydroepiandrosterone là những chất ức chế yếu.Chất oxy hóa HgCl2 và p – chloromercuribenzoate bất hoạt độc tố ở nồng độ 1 mM Sự

ức chế bởi các hợp chất thủy ngân bị đảo ngược bởi dithiothreitol 2 mM hoặc cystein,iodacetic acid 2 mM, iodacetamide 2 mM, 1 mM tosyllysine chloromethyl ketone và 1

mM tosylphenylalanine chloromethyl ketone không ức chế

Hoạt tính dung huyết của LLO có liên quan đến pH của môi trường: nó hoạt độngcao nhất ở pH 5,5 và gần như bị bất hoạt ở pH 7,0 Trái lại, các độc tố được hoạt hóabằng thiol có phổ pH hoạt động rộng hơn như pH 6.0 đối với pneumolysin, pH 6.5 đốivới perfringolysin O và alveolysin, pH 7.0 đối với streptolysin O Sự phát hiện này có

thể giải thích vai trò của LLO trong quá trình xâm nhiễm của L monocytogenes Sau

quá trình thực bào, môi trường acid của không bào chứa tế bào vi khuẩn sẽ hoạt hóa

LLO Chính độc tố này sẽ xúc tiến quá trình ly giải không bào và tế bào vi khuẩn xâmnhập vào tế bào chất trong khi đó, môi trường pH cao hơn sẽ làm giảm hoạt tính củaLLO Sự hư hại của màng tế bào chủ cũng bị ngăn cản bởi sự phân hủy nhanh của LLOtrong tế bào chất do sự nhận biết của một trình tự giống PEST Một trình tự amino acidgiàu Proline (P), glutamic acid (E), serine (S) và threonine (T) được gọi là PEST vàprotein đích để phân hủy Và đầu N của LLO nằm ở vùng 19 aa (từ 32 – 50) chứng minhđặc điểm này Một điều thú vị khi loại bỏ motif giống PEST này không chỉ nâng cao độclực của LLO mà còn sửa đổi các yếu tố độc lực của vi khuẩn L monocytogenes bị đột

biến, thiếu trình tự PEST LLO, được chứng minh là việc thoát ra khỏi không bào thựcbào theo một con đường rất khó khăn Điều này chứng tỏ rằng vùng này cũng rất quantrọng cho quá trình phá hủy màng

2.2.5.2 Vai trò của các yếu tố độc lực trong quá trình xâm nhiễm của

inlA tương tác với E – Carherin tạo điều kiện cho L monocytogenes đi vào tế bào biểu

mô, InlB là protein 65 kDa được mã hóa bởi gen inlB, nhận diện Clq – R (hoặc Met) cho phép L monocytogenes xâm nhập vào trong nhiều loại tế bào của vật chủ như tế bào

gan, nguyên sợi bào và các tế bào biểu mô

Tốc độ xâm nhiễm của tế bào vật chủ nhanh cho phép L monocytogenes tránh

khỏi sự kiểm soát của chức năng miễn dịch Sau khi xâm nhiễm được vào tế bào vật

chủ, L monocytogenes chủ yếu nằm ở màng đơn của không bào, phân giải màng đơn sơ

cấp của không bào, nhờ vào sự kết hợp của hai phân tử gây độc: listeriolysin O (LLO) là

protein 58 kDa được mả hóa bởi hly, tạo ra các lỗ trên màng tế bào, hoạt giải độc tính

lưu huỳnh là yếu tố cần thiết cho tính độc của Lm Phosphatidylinositol-phpspholipase

C (PI-PLC) là protein 33 kDa được mã hóa bởi gen plcA, kết hợp với