Nghiên cứu nhân nhanh in vitro cây hồng (paulownla fortunel) nhập nội

Vietnam J Agri Sci 2023, Vol 21, No 2: 215-225 Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam 2023, 21(2): 215-225 www.vnua.edu.vn NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH IN VITRO CÂY HÔNG (Paulownia fortunei) NHẬP NỘI Nguyễn Thị Lâm Hải*, Trần Đông Anh, Phạm Thị Thu Hằng, Đinh Trường Sơn, Đặng Thị Thanh Tâm, Nguyễn Thanh Hải, Nông Thị Huệ, Ninh Thị Thảo, Lưu Thị Hoa Học viện nông nghiệp Việt Nam * Tác giả liên hệ: ntlhai@vnua.edu.vn Ngày nhận bài: 14.12.2022 Ngày chấp nhận đăng: 02.03.2023 TĨM TẮT Cây hơng (Paulownia fortunei) nhập nội từ Canada loại lấy gỗ có giá trị kinh tế cao có tốc độ sinh trưởng vượt trội, chất lượng gỗ tốt, chống chịu sâu bệnh Do nhập nội nên việc chủ động nguồn giống cần thiết để phát triển giống Việt Nam Trong nghiên cứu này, nhân nhanh hông nhập nội nuôi cấy mô tiến hành Vật liệu để vào mẫu chồi hông 03 tháng tuổi Chồi xử lý với KMnO4 0,1% 30 phút, sau khử trùng dung dịch Natri Troclosene 0,5% 20 phút HgCl2 0,2% 10 phút, cuối mẫu cấy ngâm dung dịch Cefotaxim 100 mg/l 10 phút Tỷ lệ tạo mẫu sống vô trùng đạt 35,7% Môi trường nhân nhanh tốt cho chồi hông in vitro mơi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l BAP với hệ số nhân chồi thu 5,43 chồi/mẫu, chiều cao chồi đạt 4,32 cm/chồi Mơi trường thích hợp để tạo rễ hông in vitro môi trường ½ MS thời gian tuần Giá thể cho tỷ lệ sống cao Peatmoss cho tỷ lệ sống đạt 97,2% thời gian tuần Từ khóa: Cây hơng, Paulownia fortunei, nhân nhanh in vitro, BAP, Peatmoss Rapid In-vitro Propagation of Exotic Dragontree (Paulownia fortunei) ABSTRACT Dragon tree (Paulownia fortunei) introduced from Canada is a wooden plant with high economic value due to its outstanding growth rate, high timber quality, and tolerance to insect pests and diseases Because of exoctic origin, rapid propagation by tissue culture to produce large quantity of planting materials is necessary and suitable for the development of this species in Vietnam Explants were collected from three-month-old plants They were treated with 0.1% KMnO4 for 30 minutes, then sterilized in 0.5% troclosene sodium solution for 20 minutes, followed by 0.2% HgCl2 for 10 minutes Finally, the explants were soaked in 100 mg/l cefotaxim solution in 10 minutes for innitial culture with survival rate of 35.7% The best medium for in vitro shoot regeneration was MS medium supplemented with 0.5 mg/l BAP with the shoot multiplication rate of 5.43 shoots/explant and average shoot height of 4.32cm The best medium for in vitro rooting was ½ MS medium for weeks Growth substrate for high survival rate was peatmoss (97.2%) after weeks of acclimatization Keywords: Dragontree, Paulownia fortunei, in vitro propagation ĐẶT VẤN ĐỀ Chi Paulownia chi trồng bân địa cûa Trung Quốc, să phát triển nhanh chúng v giỏ tr cỷa chỳng trờn th trỵng g, nhiu loi hụng ỵc trng mt s vựng ụn đĆi cên nhiệt đĆi toàn giĆi (Freeman & cs., 2012) Trong điều kiện tă nhiên, hông 10 nởm tui cú ỵng kớnh ngang ngc t 30-40cm, thể tích gỗ 0,3-0,5m3 (Zhu & cs., 1986) Gỗ hơng nh nhỵng chớc, khụ khỏ nhanh v cú th g sáng màu, đẹp mít, khơng dễ bị cong vênh, nĀt n hoc bin dọng Ngoi ra, g hụng rỗt d gia cơng, thích hợp để chäm khíc có đặc tính cách nhiệt tốt (Zhu & cs., 1986) Do tốc tởng trỵng nhanh v hm lỵng cellulose cao (440gÃcellulose/kg), chỗt n t g hụng ỵc s dýng thnh cụng để täo hỗn hợp sinh học có 215 Nghiên cứu nhân nhanh in vitro hông (Paulownia fortunei) nhập nội thể phân hûy axit polylactic, täo vêt liệu tổng hợp có độ uốn độ bền va ờp tỵng ỵng hoc vỵt tri so vi vờt liu tng hp cỷa chỗt n bt g thụng (Lopez & cs., 2012) Bt g hụng cú th ỵc s dýng sõn xuỗt vờt liu tng hp polypropylen (Tisserat & cs., 2013) Hoa hông nguồn cung cỗp chỗt bộo, ỵng v protein tt, ỵc s dýng lm thc ởn cho ln, cu v th Hm lỵng nit lỏ cồy hụng ỵc so sỏnh tỵng ỵng vi mt s cõy h ờu Lỏ cồy hụng ỵc nông dân ć Quâng Tây Trung Quốc sā dýng làm cõy phõn xanh, cõi tọo ỗt, x lý chỗt thõi chën nuôi (Zhu & cs., 1986; Song, 1988) Cây hông ỵc nhõn ging t họt, giõm cnh hoc nhõn nuụi cỗy mụ ng nghim Họt cỷa cõy hụng cú tợ l nõy mổm thỗp v cổn cú ch xā lý đặc biệt, tỵ lệ nây mỉm chỵ đät 29% đối vĆi P fortunei, 13% vĆi loài P kawakami, 23% vĆi loài P taiwaniana (Venkateswarlu & cs., 2001) Cây trng t họt cỹng cú tc sinh trỵng chờm hn so vi cõy ỵc nhõn ging bỡng phỵng thc giõm cnh hoc cõy nuụi cỗy mụ (Bergman & Moon, 1997) Cây giống täo tÿ cách giâm cành có giỏ thnh thỗp nhỵng s lỵng khụng ỷ nhiu đáp Āng nhu cỉu trồng rÿng quy mơ lĆn Vi nhõn ging cõy hụng ang tr thnh phỵng phỏp nhồn ging ph bin thay th cỏc phỵng phỏp nhồn ging truyền thống ć Trung Quốc, Úc, Canada Mỹ vĆi þu điểm täo giống đồng số lỵng ln Nhiu loi thuc chi Paulownia ó ỵc nhõn ging thnh cụng nh k thuờt nuụi cỗy mụ vi ngun mộu t cõy non hoc t cõy trỵng thnh (Burger & Wu, 1985; Song & cs., 1989; Rao & cs., 1996) Các độn thân mang chồi nách, đỵnh chồi non hoc t lỏ cỹng ỵc s dýng thnh cụng làm vêt liệu nhân giống (Ho & cs., 1997; Chauhan & Emmannuel, 1998; Song & cs., 1989) Cây hơng có ngun gc t c, Canada, Trung Quc ó ỵc nhờp ni v Vit Nam t nhng nởm 2000 v ỵc trồng ć số tỵnh phía Bíc Tây Ngun, Tây Nam Bộ Việc nhân giống vơ tính hơng ó ỵc nghiờn cu Vit Nam vi mýc ớch cung cỗp cõy ging s 216 lỵng ln ỏp ng nhu cổu trng rng cỷa ngỵi dõn v tọo ging kháng bệnh (Đoàn Thị Ái Thuyền & cs., 2001; Thái Xuồn Du, 2001; Lỵu Vit Dỹng, 2002; Lờ Tỗn c, 2003; Bựi Duy Ngc & cs., 2007;) Cõy hụng ỵc nhõn ging bỡng cụng ngh nuụi cỗy mụ cho nhiu þu điểm nhþ cåy giống sinh trþćng đồng đều, säch bnh, chỷ ng ỵc ngun ging v khớc phýc ỵc nhỵc im tợ l nõy mổm thỗp v tợ l sng thỗp, phý thuc vo iu kin ngoọi cõnh cỷa cỏc phỵng phỏp gieo họt v giõm cnh (on Th Ái Thuyền & cs., 2001) Cây hông nhêp nội tÿ Canada cú ỵu im sinh trỵng nhanh, ng u, thớch nghi tốt vĆi điều kiện sinh thái lêp địa cûa Việt Nam, nhiên nhêp nội nên có giá thành cao việc nghiên cĀu nhân ging quy mụ ln chỵa ỵc thit lờp Trong nghiờn cĀu này, tiến hành nhân giống in vitro hông nhêp nội tÿ Canada Công ty Cổ phổn Tờp on G Ton Cổu cung cỗp nhỡm chỷ ng ngun ging cõy hụng cung cỗp cho din tớch trồng hàng ngàn hecta täi tỵnh phía Bíc Việt Nam cûa công ty đĄn vị đối tác PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu Vêt liệu nhõn ging: Cõy hụng ging nhờp ni t Canada ỵc cung cỗp bi Cụng ty C phổn Tờp on G Ton Cổu (H Ni) Vờt liu khỏc: Cỏc hoỏ chỗt c bõn dựng nuụi cỗy mụ t bo thc vêt Giá thể Peatmoss (rêu, than bùn) cûa công ty Nord Agri, Latvia 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Tạo nguồn vật liệu khởi đầu in vitro Chồi bánh tẻ cỷa cồy hụng kớch thỵc trung bỡnh 4cm cú t n mớt ngỷ ỵc thu thờp v x lý vĆi KMnO4 0,1% 30 phút khā trùng bung cỗy vụ trựng vi cỏc ch kh trùng kép khác (Bâng 1) Chồi sau ỵc sọch bỡng nỵc vụ trựng v cỗy vo mụi trỵng ng 1/2 MS + 1,0 mg/l BAP (Murashige & Skoog, 1962; Venkateswarlu & cs., 2001) tn để theo dõi tỵ lệ täo chồi säch tỡm cụng thc kh trựng mộu ti ỵu Nguyn Thị Lâm Hải, Trần Đông Anh, Phạm Thị Thu Hằng, Đinh Trường Sơn, Đặng Thị Thanh Tâm, Nguyễn Thanh Hải, Nông Thị Huệ, Ninh Thị Thảo, Lưu Thị Hoa 2.2.2 Nghiên cứu mơi trường nhân nhanh chồi thích hợp Chồi hơng tái sinh tÿ mít ngû có chiều cao 2,0-2,5cm, sinh trỵng kho mọnh, ỵc s dýng tin hnh nhõn nhanh Chi ỵc nuụi cỗy trờn mụi trỵng MS có bổ sung riêng rẽ Benzylaminopiurin (BAP: 0,1; 0,5; 1,0; 1,5 2,0 mg/l), Kinetin (0,1; 0,5; 1,0; 1,5 2,0 mg/l), Thidiazuron (TDZ: 0,1; 0,2; 0,5; 0,7; 1,0 mg/l) ć nồng độ khác để lăa chọn nng chỗt iu tit sinh trỵng ti ỵu nhõn nhanh chi Sau ú mụi trỵng nhõn nhanh chi thớch hp nhỗt ỵc b sung kt hp vi -Naphthaleneacetic (-NAA: 0,2; 0,5; 0,7, 1,0 mg/l) axit Indole-3-acetic (IAA: 0,1; 0,2; 0,5 v 0,7 mg/l) hoc chỗt hu cĄ tă nhiên (khoai lang 30 g/l; khoai tây 30 g/l; chui chớn 30 g/l; nỵc da 10% v/v) nuụi cỗy chi cõy hụng nhỡm tỡm mụi trỵng ti ỵu nhỗt nhõn nhanh cõy hụng in vitro 2.2.3 Nghiên cứu mơi trường tạo rễ thích hợp Các chồi có chiều cao 2,5-3,0cm, có tÿ đến cp lỏ ỵc cỗy vo mụi trỵng r tọo cõy hon chợnh Mụi trỵng r l mụi trỵng 1/2 MS cú b sung chỗt iu tit sinh trỵng -NAA (0,2; 0,5; 1,0 mg/l) hoc axit Indole-3-butyric (IBA: 0,2; 0,5; 1,0 mg/l) để lăa chọn nồng độ tối þu để kích thích rễ 2.2.4 Ra ngơi in vitro Cây có chiều cao 3-4cm, 4-5 rễ v cú t lỏ tr lờn ỵc s dýng ngụi Cõy ỵc ỵa nh lỵi có mái che ngày, sau rāa säch mụi trỵng bỏm r v trng vo giỏ th có chĀa Peatmoss vĆi tỵ lệ phối trộn khác tn 2.2.5 Điều kiện thí nghiệm Các thí nghim ỵc tin hnh iu kin nhõn tọo: cỵng độ ánh sáng: 2.0002.500 Lux; thąi gian chiếu sáng: 16h sáng/8h tối; độ èm: 70-80%; nhiệt độ: 25 ± 2C Tỗt cõ cỏc mụi trỵng nuụi cỗy ỵc b sung 6,0 g/l agar 30 g/l sucrose, pH = 5,8 Mụi trỵng ỵc hỗp kh trựng 121C 20 phỳt, ỏp suỗt 1atm Th tớch mi bỡnh cỗy l 50ml mụi trỵng Mi bỡnh cỗy 10 mộu 2.2.6 B trí thí nghiệm xử lý số liệu Các thí nghim ỵc b trớ ngộu nhiờn hon ton (CRD) vi læn lặp läi, læn lặp läi 50 méu S liu ỵc phồn tớch phỵng sai (ANOVA) mt nhõn tố phân tích hêu kiểm Fisher’s PLSD vĆi mĀc P 0,05 bìng phỉn mềm SPSS (ver 16) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tạo vật liệu khởi đầu 3.1.1 Ảnh hưởng chế độ khử trùng đến việc tạo vật liệu khởi đầu cho nuôi cấy in vitro chi cõy hụng Chi cồy Hụng sau ỵc kh trựng theo cỏc ch khỏc (Bõng 1) ỵc cỗy trờn mụi trỵng tỏi sinh chi 1/2 MS + 1,0 mg/l BAP (Venkateswarlu & cs., 2001) tuæn để theo dõi tỷ lệ méu vô trùng phát chồi v tỡm ch kh trựng ti ỵu nhỗt Kt quõ trỡnh by bõng cho thỗy, ch độ khā trùng ć công thĀc (CT4) vĆi việc ngõm x lý mộu cỗy lổn lỵt cỏc dung dịch Natri Troclosene 0,5% (20 phút), HgCl2 0,2% (10 phút) Ceofotaxim 100 mg/l (10 phút) cho tỵ lệ méu sng bờt chi cao nhỗt ọt 35,7% sau tuổn nuụi cỗy tỏi sinh chi Bõng nh hng ca chế độ khử trùng đến việc tạo vật liệu khởi đầu cho q trình ni cấy in vitro chồi hông (sau tuần) Công thức Chế độ khử trùng Tỷ lệ mẫu Tỷ lệ mẫu nhiễm chết vô trùng phát chồi (%) (%) CT1 Natri Troclosene 0,5% (15 phút); HgCl2 0,1% (5 phút) 14,3  2,1 85,7  3,5 CT2 Natri Troclosene 0,5% (15 phút), HgCl2 0,2% (10 phút) 0,0 100,0 CT3 HgCl2 0,1% (5 phút); HgCl2 0,1% (10 phút); Ceofotaxim 100 mg/l (10 phút) 0,0 100,0 CT4 Natri Troclosene 0,5% (20 phút); HgCl2 0,2% (10 phút); Ceofotaxim 100 mg/l (10 phút) 35,7  2,8 64,3  2,6 217 Nghiên cứu nhân nhanh in vitro hông (Paulownia fortunei) nhp ni Tợ l mộu nhim 100% cỹng ỵc mô tâ nghiên cĀu cûa Corredoira & cs (2008) tiến hành khā trùng méu độn thân chồi hơng P tomentosa cớt trc tip t cõy hụng sinh trỵng ngoi mụi trỵng Coredoira & cs (2008) chợ thu ỵc chi hụng vụ trựng giai oọn nuụi cỗy ng kh trựng oọn chi th cỗp di đến 10cm - mọc trình giåm cành độn thân hơng nhà có mái che Khā trùng độn thân mang mít ngû cûa chồi hơng bỡng dung dch Chlorine 5% hoc HgCl2 0,1% cỹng ỵc nhiều tác giâ thăc nghiên cĀu cơng bố cûa (Rout & cs., 2001; Clapa & cs., 2014), nhiờn cỏc tỏc giõ ny thỵng khụng cơng bố tỵ lệ méu nhiễm tỵ lệ méu sống sau khā trùng nên khơng có nhiều thơng tin để so sánh Trong nghiên cĀu cûa chúng tôi, lý cûa việc phâi sā dýng chế độ kh trựng vi nhiu loọi chỗt kh trựng khỏc chồi hơng P fortunei có lĆp lơng t mm rỗt khú kh trựng b mt, ngoi chi cồy trỵc nuụi cỗy cú kớch thỵc nh v thỵng dớnh ỗt nờn cổn kh trựng nhiu bỵc hĄn 3.2 Nhân nhanh chồi 3.2.1 Ảnh hưởng BAP, Kinetin, TDZ đến nhân nhanh chồi hơng Trong thí nghiệm ny, chi cõy hụng in vitro thu ỵc t quỏ trỡnh cỗy ng ỵc cỗy vo mụi trỵng nhõn nhanh có bổ sung BAP, Kinetin, TDZ vĆi nồng độ khác (Bâng 2) để theo dõi să hình thành chồi să nhân nhanh hông in vitro Kt quõ theo dừi sau tuổn nuụi cỗy ỵc trình bày ć bâng hình Kết quâ ỵc trỡnh by bõng cho thỗy vic b sung BAP cú õnh hỵng tớch cc n quỏ trỡnh phỏt sinh chi Mụi trỵng cú b sung BAP cho chỗt lỵng chi tt, chi xanh, mờp, cỏc chi bờn phỏt trin tt Mụi trỵng b sung BAP nng 0,5 mg/l cho s chi trung bỡnh cao nhỗt đät 5,43 chồi/méu vĆi chiều cao trung bình 4,32cm số trung bình 5,15 lá/chồi (Hình 2A) Kinetin TDZ u õnh 218 hỵng n s hỡnh thnh chi hơng in vitro ć nhĂng khía cänh khác Hệ s nhõn chi cao nhỗt l 2,0 chi/mộu ỵc quan sỏt cỏc cụng thc mụi trỵng cú b sung 1,0 mg/l Kinetin v 4,0 chi/mộu trờn mụi trỵng b sung 0,5 mg/l TDZ Tuy nhiờn chỗt lỵng chi cỏc mụi trỵng cú b sung cỏc chỗt ny cú s khỏc bit rừ rt cỏc mụi trỵng cú b sung Kinetin thỡ chi thỵng nh, mu xanh nhọt, chiu cao thỗp, khú quan sỏt (Hỡnh 2B), nu tip týc nuụi cỗy thờm tuổn iu kin in vitro thỡ cỏc chi ny thỵng b thỷy tinh húa hoc hộo lỏ, lýi chi Ngỵc lọi mụi trỵng cú b sung TDZ chi thỵng cú mu xanh ờm, chi mờp, cao, sinh trỵng phỏt trin tt v d o m (Hỡnh 2C) Nhỵ vờy, ngoọi tr Kinetin, vic sā dýng BAP TDZ cách đĄn lẻ có tác dýng tốt việc nhân nhanh chồi hơng iu kin in vitro Tuy nhiờn BAP nờn ỵc la chn ỵa vo mụi trỵng nhõn nhanh chi ồy l mt chỗt iu tit sinh trỵng thc vêt phổ biến có giá thành rẻ hĄn so vĆi TDZ Các nhóm nghiên cĀu cûa Song & cs (1989), Đoàn Thị Ái Thuyền & cs (2001), Shtereva & cs (2014) sā dýng BAP ć nồng độ 1,0 mg/l 1,5 mg/l để nhân nhanh chồi hông in vitro u thu ỵc tợ l bờt chi v tọo cým chồi cao hĄn hỵn so vĆi cơng thĀc b sung BAP nng thỗp hn hoc cao hn Tuy nhiờn, h s nhõn ti ỵu nhỗt nghiờn cu cỷa chỳng tụi thu ỵc tọi cụng thc mụi trỵng chợ b sung 0,5 mg/l BAP, tỵng t nhỵ kt quõ nghiờn cu Pozoga & cs (2019) thăc giống lai P tomentosa × P fortunei Kết q khỵng định bổ sung BAP nồng 0,5 mg/l vo mụi trỵng nhõn nhanh in vitro chồi hông nhêp nội cho hiệu quâ rõ rệt việc nhân nhanh chồi täo cým chồi 3.2.2 Ảnh hưởng kết hợp BAP với -NAA IAA tới nhân nhanh chồi hông Trong nghiên cĀu này, chồi cõy hụng in vitro ỵc cỗy vo mụi trỵng BAP kết hợp vĆi -NAA IAA (Bâng 3) để tìm cụng thc mụi trỵng cho h s nhõn chi cao v chỗt lỵng chi tt Nguyn Th Lõm Hi, Trần Đông Anh, Phạm Thị Thu Hằng, Đinh Trường Sơn, Đặng Thị Thanh Tâm, Nguyễn Thanh Hải, Nông Thị Huệ, Ninh Thị Thảo, Lưu Thị Hoa Hình Chồi hông sau tuần nuôi cấy khởi động môi trường 1/2 MS + 1mg/l BAP Bâng Ảnh hưởng BAP, Kinetin, TDZ lên nhân nhanh chồi hông sau tuần nuôi cấy Công thức BAP (mg/l) Kinetin (mg/l) TDZ (mg/l) Số chồi/mẫu (chồi) Chiều cao chồi (cm) Số lá/chồi (lá) CT1 0,0 - - 1,60 ± 0,35 3,60 ± 0,07 5,64 ± 0,11 ++ CT2 0,1 - - 2,17 ± 0,94 4,15 ± 0,05 5,35 ± 0,07 +++ CT3 0,5 - - 5,43 ± 0,68 4,32 ± 0,03 5,15 ± 0,09 +++ CT4 1,0 - - 4,77 ± 0,54 3,51 ± 0,07 5,11 ± 0,09 ++ CT5 1,5 - - 2,87 ± 0,69 3,54 ± 0,05 5,28 ± 0,14 +++ CT6 2,0 - - 2,93 ± 0,59 3,93 ± 0,07 5,47 ± 0,12 +++ CT7 - 0,1 - 1,63 ± 0,33 2,98 ± 0,05 5,54 ± 0,16 ++ CT8 - 0,5 - 1,23 ± 0,73 3,83 ± 0,10 5,27 ± 0,08 + CT9 - 1,0 - 2,00 ± 0,51 3,40 ± 0,03 5,35 ± 0,12 + CT10 - 1,5 - 1,30 ± 0,40 2,40 ± 0,07 5,46 ± 0,11 + CT11 - 2,0 - 1,67 ± 0,40 3,06 ± 0,05 5,28 ± 0,09 + CT12 - - 0,1 1,87 ± 0,19 1,06 ± 0,07 5,61 ± 0,07 +++ CT13 - - 0,2 2,79 ± 0,32 2,15 ± 0,19 5,63 ± 0,09 +++ CT14 - - 0,5 4,00 ± 0,41 2,24 ± 0,27 5,50 ± 0,10 +++ CT15 - - 0,7 3,32 ± 0,24 3,32 ± 0,29 5,25 ± 0,18 + CT16 - - 1,0 3,50 ± 0,12 3,75 ± 0.23 5,02 ± 0,20 + Chất lượng chồi Ghi chú: (+): Chồi nhỏ, màu xanh; (++): Chồi to trung bình, màu xanh đậm (+++): Chồi to, xanh đậm; Số liệu thể dạng Giá trị trung bình cộng/trừ độ lệch chuẩn (A) (B) (C) Hình Chồi in vitro hơng mơi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l BAP (Hình A); 1,0 mg/l Kinetin (Hình B); 0,5 mg/l TDZ (Hình C) 219 Nghiên cứu nhân nhanh in vitro hông (Paulownia fortunei) nhập nội Bâng Ảnh hưởng BAP với -NAA IAA đến nhân nhanh in vitro chồi hông sau tuần nuôi cấy Công thức BAP (mg/l) -NAA (mg/l) IAA (mg/l) Số chồi/mẫu (chồi) Chiều cao (cm) Chất lượng chồi CT1 0,5 0,0 - 5,70 ± 0,26 5,55 ± 0,06 +++ CT2 0,5 0,2 - 4,20 ± 0,46 4,43 ± 0,06 ++ CT3 0,5 0,5 - 4,05 ± 0,38 4,41 ± 0,13 ++ CT4 0,5 0,7 - 4,57 ± 0,36 4,69 ± 0,11 ++ CT5 0,5 1,0 - 3,50 ± 0,24 3,47 ± 0,21 ++ CT6 0,5 - 0,1 3,43 ± 0,12 3,35 ± 0,13 + CT7 0,5 - 0,2 3,70 ± 0,14 3,72 ± 0,16 ++ CT8 0,5 - 0,5 3,43 ± 0,22 3,71 ± 0,18 ++ CT9 0,5 - 0,7 3,47 ± 0,16 3,49 ± 0,21 ++ Ghi chú: (+): Chồi nhỏ, màu xanh; (++): Chồi to trung bình, màu xanh đậm (+++): Chồi to, xanh đậm; Số liệu thể dạng Giá trị trung bình cộng/trừ độ lệch chuẩn Kết quâ trình bày ć bâng cho thỗy, vic b sung -NAA hoc IAA kt hp vi BAP vo mụi trỵng nuụi cỗy khụng lm tởng đáng kể hệ số nhân chồi so vĆi việc bổ sung BAP n l H s nhõn chi thu ỵc ć cơng thĀc thí nghiệm có bổ sung thêm -NAA hoc IAA u thỗp hn so vi mụi trỵng chỵ có BAP ć nồng độ 0,5 mg/l Hệ số nhõn chi cao nhỗt chợ ọt ỵc l 4,57 chi/mộu vi mụi trỵng MS b sung 0,5 mg/l BAP v 0,7 mg/l -NAA hoc chợ ọt ỵc trung bỡnh 3,70 chi/mộu vi mụi trỵng MS b sung 0,5 mg/l BAP 0,2 mg/l IAA Tuy nhiên việc bổ sung -NAA IAA ć nồng độ cao khiến việc täo rễ phát triển cûa chồi hơng có xu hỵng tởng lờn rừ rt (Hỡnh 3B, 3C) Hai mụi trỵng b sung 0,7 mg/l -NAA v 0,2 mg/l IAA trć lên có tỵ lệ rễ cao, cơng thĀc bổ sung 0,7 mg/l -NAA täo rễ mờp, di (Hỡnh 3B) Vic chi in vitro xuỗt hin r quỏ trỡnh nhõn nhanh cỹng ỵc Lỵu Vit Dỹng (2002) quan sỏt ỵc nhõn nhanh ging hơng bân địa, hơng in vitro có r chỗt lỵng tt, mc kho trờn mụi trỵng MS có bổ sung 1,0 mg/l -NAA 0,5 mg/l BAP Việc täo rễ sĆm trình nhân nhanh chồi khiến cho cým chồi khơng phát triển mà chỵ phát triển chồi đĄn, điều khơng có lợi cho giai độn nhân nhanh täo cým chồi ć hơng 220 Nhiều nhóm tác giâ nghiên cĀu să kết hợp b sung gia cỏc nhúm chỗt hormone thc vờt nâng cao hiệu quâ nhân nhanh in vitro cåy hông u cho thỗy vic kt hp gia cỏc nhúm chỗt ny nng khỏc õnh hỵng nhiu n h s nhõn chi v chỗt lỵng cým chi cồy hơng điều kiện in vitro Đồn Thị Ái Thuyền & cs (2001) kt luờn rỡng mụi trỵng thớch hp cho vic nhõn chi hụng l mụi trỵng MS b sung t hp chỗt kớch thớch sinh trỵng, t hợp 0,1 mg/l -NAA 1,0-1,5 mg/l BAP; tổ hợp 0,1 mg/l -NAA 2,0 mg/l Kinetin, câ hai công thĀc cho hệ số nhân chồi cao chỗt lỵng chi tt Pozoga & cs (2019) cỹng khợng nh mụi trỵng MS b sung 1,0 mg/l Kinetin v 1,0 mg/l -NAA thích hợp cho việc nhân nhanh chồi hụng in vitro Lờ Tỗn c (2003) cho rỡng t hp mụi trỵng MS b sung BAP 10 mg/l + IBA 0,6 mg/l thích hợp cho việc nhân nhanh chồi hụng in vitro Lỵu Vit Dỹng (2002) kt luờn h s nhồn ọt 4,5 lổn sau tuổn nuụi cỗy vĆi bốn giống hông thu thêp tÿ Tuyên Quang, Yên Bỏi, Thỏi Nguyờn v Sn La mụi trỵng MS bổ sung 0,1 mg/l -NAA tÿ 2,5-3,0 mg/l BAP Trong nghiên cĀu cûa chúng tôi, việc kết hợp 0,5 mg/l BAP + 0,7 mg/l -NAA mụi trỵng MS nhõn nhanh chi hụng cỹng cho hiu quõ tỵng tă vĆi nghiên cĀu công bố cûa tác giâ này, Nguyễn Thị Lâm Hải, Trần Đông Anh, Phạm Thị Thu Hằng, Đinh Trường Sơn, Đặng Thị Thanh Tâm, Nguyễn Thanh Hải, Nông Thị Huệ, Ninh Thị Thảo, Lu Th Hoa 0,5 mg/l BAP Thớ nghim ỵc theo dừi tuổn v thu ỵc kt quõ ỵc trình bày bâng nhiên hệ số nhån vỵt tri nhỗt vộn chợ ọt ỵc s dýng BAP đĄn lẻ ć nồng độ 0,5 mg/l Điều cho thỗy nhõn nhanh cõy hụng nhờp ni, vic sā dýng đĄn lẻ BAP cho hiệu quâ nhân chồi cao hĄn việc kết hợp BAP vĆi hocmone thăc vêt khác Kết quâ trình bày ć bâng cho thỗy cỏc chỗt hu c t nhiờn nhỵ nỵc da, chuối chín, khoai tåy, khoai lang khơng làm tëng khâ nëng täo chồi cûa hông điều kiện nuôi cỗy in vitro so vi cụng thc i chng khụng b sung chỗt hu c Chi cõy hụng nhõn nhanh trờn cỏc mụi trỵng cú b sung cỏc chỗt hu cĄ tă nhiên khác cho kết quâ khỏ tỵng ng vi kt quõ nhõn nhanh chi cụng thc i chng khụng b sung chỗt hu c tă nhiên hệ số nhân hình thái in vitro Nhỵ vờy tit kim chi phớ v thao tác q trình nhân giống hơng in vitro, vic b sung cỏc chỗt hu c t nhiờn vo mụi trỵng l khụng cổn thit 3.2.3 nh hng chất hữu tự nhiên đến nhân nhanh chi cõy hụng Chỗt hu c t nhiờn cỹng cú nhĂng tác động không nhỏ đến khâ nëng nhån nhanh chi Mt s chỗt hu c ó ỵc s dýng hiu quõ nuụi cỗy mụ cõy hụng bao gm nỵc da, chui tiờu chớn, khoai tõy (Burger & cs., 1985; Song & cs., 1989; Rao & cs., 1996) Thí nghim ny ỵc thc hin nhỡm so sỏnh tỏc dýng cỷa cỏc chỗt hu c t nhiờn ti nhõn nhanh chi hụng trờn mụi trỵng nn l MS cú b sung (A) (B) (C) Hình Chồi hơng sau tuần nuôi cấy môi trường MS + 0,5mg/l BAP khơng bổ sung -NAA (Hình A); bổ sung 0,7 mg/l -NAA (Hình B); bổ sung 0,2 mg/l IAA (Hình C) Bâng Ảnh hưởng chất hữu tự nhiên đến nhân nhanh chồi hông sau tuần nuôi cấy Công thức Chất hữu Nồng độ Hệ số nhân (chồi/mẫu) Chiều cao chồi cm/mẫu) Hình thái chồi CT1 Đối chứng 5,80 6,72 ++ CT2 Khoai lang 30 g/l 5,03 5,05 + CT3 Khoai tây 30 g/l 5,77 6,70 + CT4 Chuối chín 30 g/l 5,23 5,38 + CT5 Nước dừa 10% 5,90 6,41 + LSD0,05 0,67 0,22 CV% 6,5 4,4 Ghi chú: Môi trường nền: MS + 0,5 mg/l BAP + 30 g/l sucrose + g/l agar; ++: Chồi to, cao, màu xanh đậm, to; + : Chồi trung bình, thấp, màu xanh nhạt, nhỏ 221 Nghiên cứu nhân nhanh in vitro hông (Paulownia fortunei) nhập nội Bâng Ảnh hưởng -NAA đến rễ hông in vitro sau tuần nuôi cấy Nồng độ -NAA (mg/l) Thời gian bắt đầu xuất rễ Số rễ trung bình (rễ/ chồi) Chiều dài rễ (cm/ rễ) Tỉ lệ chồi tạo rễ (%) CT1 0,0 ngày 4,30 7,65 100 CT2 0,2 ngày 6,60 4,82 100 CT3 0,5 ngày 11,20 5,81 100 CT4 1,0 ngày 16,00 4,65 100 LSD0,05 0,39 0,26 CV% 2,1 2,3 Công thức (A) (B) Hình Chồi hơng sau tuần ni cấy mơi trường 1/2MS (Hình A) mơi trường 1/2MS + 0,2 mg/l -NAA (Hình B) Bâng Ảnh hưởng IBA đến tạo rễ chồi hông in vitro sau tuần nuôi cấy Công thức Nồng độ IBA (mg/l) Thời gian bắt đầu hình thành rễ Số rễ (rễ/ mẫu) Chiều dài rễ (cm/rễ) Tỉ lệ hình thành rễ (%) CT1 ngày 4,23 5,46 100 CT2 0,2 ngày 5,60 5,42 100 CT3 0,5 ngày 5,80 5,30 100 CT4 1,0 ngày 6,07 6,77 100 LSD0,05 0,34 0,26 CV% 3,30 2,20 (A) (B) Hình Chồi hông sau tuần nuôi cấy môi trường 1/2MS (Hình A) mơi trường 1/2 MS + 0,2 mg/l IBA (Hình B) 222 Nguyễn Thị Lâm Hải, Trần Đông Anh, Phạm Thị Thu Hằng, Đinh Trường Sơn, Đặng Thị Thanh Tâm, Nguyễn Thanh Hải, Nông Thị Huệ, Ninh Thị Thảo, Lưu Thị Hoa 3.3 Tạo hoàn chỉnh Giai độn täo hồn chỵnh giai oọn tọo r cho cỏc chi in vitro thu ỵc sau q trình nhån nhanh, giai độn cỉn đâm bâo vÿa giúp rễ vÿa tëng sinh v kớch thỵc tọo cõy cú th t hỗp thý nỵc v quang hp mụi trỵng t nhiờn IBA v -NAA l hai chỗt iu tit sinh trỵng thc vờt thỵng hay ỵc b sung vo mụi trỵng nuụi cỗy mụ t bo cồy hụng giai đoän rễ (Rout & cs., 2001, Corredoira & cs., 2008) Một số nghiên cĀu cûa nhóm tác giâ khỏc trờn i tỵng cõy hụng cỹng chợ rỡng vic cỗy chuyn chi cõy hụng in vitro sang mụi trỵng khụng cú chỗt iu tit sinh trỵng cỹng lm kích thích să lĆn lên cûa chồi hình thành rễ cho chồi (Ipekci & Gozukirmizi, 2004; Rao & cs., 1996) Trong nghiên cĀu này, IBA -NAA cüng ỵc s dýng kớch thớch s r in vitro tÿ chồi hông, vĆi đối chĀng môi trỵng khụng b sung chỗt iu tit sinh trỵng nhúm 3.3.1 Ảnh hưởng -NAA đến rễ chi cõy hụng in vitro khõo sỏt õnh hỵng cỷa -NAA n s r v chỗt lỵng r chồi hông in vitro, NAA ć nồng độ 0,2 mg/l, 0,5 mg/l v 1,0 mg/l ỵc b sung vo mụi trỵng nn 1/2MS v tin hnh nuụi cỗy chi tuổn Kt quõ thớ nghim ỵc trỡnh bày ć bâng Kết quâ trình bày ć bâng cho thỗy vic b sung -NAA vo mụi trỵng nuụi cỗy kớch thớch s hỡnh thnh r in vitro v lm tởng s lỵng r trung bỡnh mi cõy so vi mụi trỵng khụng b sung -NAA Tuy nhiờn r cõy cỏc mụi trỵng cú b sung -NAA cú xu hỵng mc ngớn v mờp hn so vi mụi trỵng khụng b sung auxin ny (Hỡnh 4) Tọi mụi trỵng khụng b sung -NAA chi cõy hụng bớt ổu hỡnh thnh r ngy sau cỗy, nhanh hĄn không ngày so vĆi cơng thĀc mụi trỵng cú b sung -NAA Rao & cs (1996), Ipekci & Gozukirmizi (2004) cüng thành công việc täo rễ cho chồi in vitro giống P tomentosa, P fortunei ì P tomentosa v P kawakamii bỡng vic cỗy chuyn sang mụi trỵng khụng b sung chỗt iu tit sinh trỵng thc vờt Nhỵ vờy, vic b sung -NAA vo mụi trỵng nuụi cỗy khụng thc s cổn thit để kích thích täo rễ cho chồi hơng in vitro, chồi hơng dễ dàng rễ v ọt s r vi chỗt lỵng tt trờn mụi trỵng nn 1/2 MS khụng b sung chỗt iu tit sinh trỵng 3.3.2 nh hng ca IBA n s to r cõy hụng in vitro khõo sỏt õnh hỵng cỷa IBA n s r v chỗt lỵng r chồi hông in vitro, IBA ć nồng độ 0,2 mg/l; 0,5 mg/l v 1,0 mg/l ỵc b sung vo mụi trỵng nn 1/2 MS v tin hnh nuụi cỗy chi tuổn Kt quõ trỡnh by bõng cho thỗy vic b sung IBA vo mụi trỵng nuụi cỗy khụng kớch thớch s hỡnh thnh r in vitro v lm tởng s lỵng r trung bỡnh mi cõy so vi mụi trỵng khụng b sung IBA Tọi mụi trỵng khụng b sung IBA chi cõy hơng bít đỉu hình thành rễ ngày sau cỗy, nhanh hn khoõng ngy so vi cỏc cụng thc mụi trỵng cú b sung IBA tỗt cõ cỏc cụng thc thớ nghim u quan sỏt ỵc r cõy cú chỗt lỵng tt, r cú nhiu lụng hỳt v khụng b t góy nhỗc cõy mụi trỵng (Hỡnh 5) Kt quõ nghiờn cu cỷa chỳng tụi cỹng tỵng t nhỵ kt quõ cỷa Shtereva & cs cụng b nởm 2014 tin hnh nuụi cỗy chồi P elongata × P fortunei P tomentosa trờn mụi trỵng 1/2 MS b sung 1,0 mg/l IBA sau tuổn nuụi cỗy r di trung bỡnh 4,9cm v 4,7cm hỡnh thnh 2-3 r/chi Nhỵ vờy, vic b sung IBA vo mụi trỵng nuụi cỗy l khụng thc să cỉn thiết để kích thích täo rễ cho chồi hơng in vitro, chồi hơng dễ dng r v ọt s r vi chỗt lỵng tt trờn mụi trỵng nn 1/2MS khụng b sung chỗt iu tit sinh trỵng 3.4 Ra ngụi cõy hụng in vitro Cây hơng có chiều cao 3-4cm, có tÿ 3-4 r v 2-3 lỏ ỵc tọo t quỏ trỡnh nhõn nhanh ỵc trng ngụi theo cỏch thc ngơi in vitro thơng dýng Bình chĀa cåy hơng ỵc t nh lỵi dỵi ỏnh sỏng tỏn xọ thąi gian ngày để luyện Cây hông in vitro ỵc sọch mụi trỵng bỏm quanh r trỵc em trng vo giỏ th Cỏc giỏ th ỵc th nghim bao gm Peatmoss; Peatmoss: x da (tợ l 1:1); Peatmoss: x da: ỗt (tợ l 1:1:1) 223 Nghiên cứu nhân nhanh in vitro hông (Paulownia fortunei) nhập nội Bâng Ảnh hưởng loại giá thể đến chất lượng hông vườn ươm (sau tuæn theo dõi) Tỉ lệ sống (%) Chiều cao chồi (cm) Số trung bình Tốc độ (lá/tuần) Đường kính thân (cm) Peatmoss 97,2 5,24 3,93 1,82 0,45 Peatmoss: xơ dừa tỉ lệ 1:1 96,2 6,78 3,53 1,92 0,53 Peatmoss: xơ dừa: đất tỉ lệ 1:1:1 80,3 5,05 3,73 1,95 0,52 LSD0,05 0,39 0,21 0,25 0,26 0,25 CV% 3,2 2,2 2,3 4,8 3,7 Giá thể Hình Cây hơng ngơi sau tuần giá thể Peatmoss Kết quâ nghiên cĀu trình bày bõng v hỡnh cho thỗy, cõy hụng nuụi cỗy mụ thớch nghi rỗt tt vi cỏc loọi giỏ th khỏc ngoi vỵn ỵm Khi ỵc trng lội giá thể khác tỵ lệ sống cỷa cõy vộn rỗt cao ú giỏ th Peatmoss Peatmoss trộn vĆi xĄ dÿa tỵ lệ 1:1 cho tỵ lệ sống đät tĆi 90%, tỵ lệ ỵc chỗp nhờn ngụi cõy in vitro Do hin vic s dýng x da tỵng i phc tọp phõi x lý kh chỏt mỗt thỏng trỵc dựng, ú sõn xuỗt cõy ngụi vi s lỵng ln, chỳng tụi xuỗt chỵ sā dýng giá thể Peatmoss khơng pha trộn để KẾT LUẬN Chế độ khā trùng vĆi Natri Troclosene 0,5% (20 phút); HgCl2 0,2% (10 phút); Ceofotaxim 100 mg/l (10 phút) cho tỵ lệ méu vơ trùng ọt 35,7% giai oọn nuụi cỗy tỏi sinh chi Mụi trỵng MS + 0,5 mg/l BAP + 6,0 g/l agar + 30 g/l sucrose, pH = 5,8 môi trỵng thớch hp nhõn nhanh in vitro chi hụng Mụi trỵng 1/2 MS + 6,0 g/l agar + 30 g/l sucrose, pH = 5,8 thích hợp để rễ täo hồn chỵnh đối vĆi chồi hơng täo điều kiện in vitro tuæn 224 Cây hụng hon chợnh ỵc ngụi trờn giỏ th Peatmoss thąi gian tn đû điều kiện để đóng sang bæu lĆn trồng đồng ruộng LỜI CẢM ƠN Chúng xin gāi ląi câm Ąn dến Công ty Cổ phỉn Têp đồn gỗ Tồn Cỉu cung cỗp ging cõy hụng nhờp ni thc hin nghiờn cĀu TÀI LIỆU THAM KHẢO Bergman B.A & Moon H.K (1997) In vitro adventitious shoot production in Paulownia fortunei, Plant Cell Reports 16: 315-319 Bùi Duy Ngọc, Nguyễn Đình Hợi & Nguyễn Thị Minh Xuân (2007) Bước đầu nghiên cứu nâng cao khối lượng thể tích gỗ hơng (Paulownia fortunei) Tạp chí Khoa học Lâm nghiệp 1: 291-296 Burger D.W., Liu L & Wu L (1985) Rapid Micropropagation of Paulownia tomentosa HortScience 20(4): 760-761 Chauhan L.M.S & Emmanuel C.J.S.K (1998) In vitro clonal propagation of Paulownia fortuneii Indian Journal of Forestry 21(4): 327-334 Clapa D., Fira A., Simu M., Vasu L.B & Buduroi D (2014) Improved In Vitro Propagation of Paulownia elongata, P fortunei and its Nguyễn Thị Lâm Hải, Trần Đông Anh, Phạm Thị Thu Hằng, Đinh Trường Sơn, Đặng Thị Thanh Tâm, Nguyễn Thanh Hải, Nông Thị Huệ, Ninh Thị Thảo, Lưu Thị Hoa Interspecific Hybrid P elongata x P fortunei Bulletin UASVM Horticulture 71(1): 6-14 Corredoira E., Balleste A & Vieitez A.M (2008) Thidiazuron-induced high-frequency plant regeneration from leaf explants of Paulownia tomentosa mature trees Plant Cell Tissue and Organ Culture 95: 197-208 Đoàn Thị Ái Thuyền, Vũ Ngọc Phương, Thái Xuân Du & Nguyễn Văn Uyên (2001) Nghiên cứu nhân giống hông (Paulownia fortunei) phương pháp ni cấy mơ Tạp chí Sinh học 23(3): 46-50 Freeman C.C., Rabeler R.K & Elisens W.J (2012) Flora of North America Provisional Publication 17 Ho C.K., Chen Z.Z., Tsai J.Y & Yang J.C (1997) Nodule Culture of Paulownia x taiwaniana Taiwan Journal of Forestry Science 12(1): 39-45 Ipekci Z & Gozukirmizi N (2004) Indirect somatic embryogenesis and plant regeneration from leaf and internode explants of Paulownia elongata Plant Cell, Tissue and Organ Culture 79: 341-345 Lê Tấn Đức (2003) Nghiên cứu hệ thống tái sinh in vitro hông (Paulownia fortunei) ảnh hưởng tác nhân chọn lọc để tạo chuyển gen Hội nghị CNSH Toàn quốc 2: 1023-1028 Lopez F., Perez A., Zamudio M.A.M., De Alva H.E & Garcia J.C (2012) Paulownia as Raw Material for Solid Biofuel and Cellulose Pulp Biomass and Bioenergy 45: 77-86 Lưu Việt Dũng (2002) Nhân giống vơ tính hông (Paulownia fortunei) phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật Tạp chí Sinh học 24(2): 79-86 Murashige T & Skoog F.A (1962) A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture Physiology Plant 15 473-495 Rao C.D., Goh C.J & Kumar P.P (1996) High Frequency Adventitious Shoot Regeneration from Excised Leaves of Paulownia spp Cultured in vitro Plant Cell Reports 16(3-4): 204-209 Rao C.D., Goh C.J & Kumar P.P (1996) High frequency adventitious shoot regenation from excised leaves of Paulownia spp cultured in vitro Plant Cell Reports 16: 204-223 Rout G.R., Reddy G.M & Das P (2001) Studies on in vitro Clonal Propagation of Paulownia tomentosa STEUD and Evaluation of Genetic Fidelity through RAPD Marker Silvae Genetica 50(5-6): 208-212 Shtereva L., Vasilevska I.R., Karceva T & Kraptchev B (2014) Micropropagation of six Paulownia genotypes through tissue culture Central European Agriculture 15(4): 147-156 Song S.L., Sato T., Saito A & Kihachiro O (1989) Meristematic culture of seven Paulownia species Journal of the Japanese Forest Society 71(11): 456-462 Song Y (1988) Nutritive Components of Paulownia Leaves as Fodder Chemical Industry and Forest Products 8: 44-49 Thái Xn Du (2001) Quy trình trồng chăm sóc hơng sau giai đoạn ống nghiệm Tạp chí Cơng nghệ sinh học Nông nghiệp sinh thái bền vững Nhà xuất Nông nghiệp 3: 79-85 Tisserat B., Joshee N., Mahapatra A.K., Selling G.W & Finkenstadt V.L (2013) Physical and Mechanical Properties of Extruded Poly(lactic acid)-Based Paulownia elongata Bio-Composites Industrial Crops and Products 44: 88-96 Venkateswarlu B., Mukhopadhyay J., Sreenisavan E & Moses Kumar V (2001) Micropropagtion of Paulownia fortunei through in vitro axillary shoot proliferation Indian Journal of Experimental Biology 39: 594-599 Zhu Z.H., Chao C.J., Lu X.Y & Xiong Y.G (1986) Paulownia in China: Cultivation and Utilization Asian Network for Biological Sciences and International Development Research Centre, Singapore pp 1-65 225 ... Hình Chồi in vitro hơng mơi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l BAP (Hình A); 1,0 mg/l Kinetin (Hình B); 0,5 mg/l TDZ (Hình C) 219 Nghiên cứu nhân nhanh in vitro hông (Paulownia fortunei) nhập nội Bâng... Nhõn nhanh chi 3.2.1 nh hng ca BAP, Kinetin, TDZ đến nhân nhanh chồi hơng Trong thí nghim ny, chi cõy hụng in vitro thu ỵc t quỏ trỡnh cỗy ng ỵc cỗy vo mụi trỵng nhân nhanh có bổ sung BAP, Kinetin,... nhanh in vitro chồi hông nhêp nội cho hiệu quâ rõ rệt việc nhân nhanh chồi täo cým chồi 3.2.2 Ảnh hưởng kết hợp BAP với -NAA IAA tới nhân nhanh chồi hông Trong nghiên cĀu này, chi cõy hụng in