Nghiên cứu nhân giống in vitro cây sâm cau (curculigo orchioides gaertn) tại trường đại học nông lâm thái nguyên

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ NGÂN Tên đề tài: NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY SÂM CAU (Curculigo orchioides Gaertn) TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÁI NGUN KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Cơng nghệ sinh học Khoa : CNSH & CNTP Khóa học : 2018 - 2022 Thái nguyên - năm 2023 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ NGÂN Tên đề tài: NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY SÂM CAU (Curculigo orchioides Gaertn) TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÁI NGUN KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Lớp : 50 CNSH Khoa : CNSH & CNTP Khóa học : 2018 - 2022 Người hướng dẫn : TS Nguyễn Xuân Vũ : KS Đỗ Thị Ngọc Thái nguyên - năm 2023 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan báo cáo khố luận tốt nghiệp thực Tất số liệu, kết nghiên cứu thu thập chưa công bố cơng trình khác độ xác cao Các trích dẫn có nguồn gốc rõ ràng Sinh viên thực Nguyễn Thị Ngân ii LỜI CẢM ƠN Được phân công quý thầy cô Khoa Công nghệ Sinh học & Công nghệ Thực phẩm, Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, sau gần tháng thực tập tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Trong q trình thực đề tài tơi xin cảm ơn chân thành Ban Giám hiệu Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, quý thầy cô khoa CNSH & CNTP truyền đạt cho kiến thức chuyên ngành, tạo tảng vững cho Đặc biệt, xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Xuân Vũ KS Đỗ Thị Ngọc trực tiếp hướng dẫn giúp đỡ suốt thời gian hồn thành luận văn tốt nghiệp Tơi xin bày tỏ lời cảm ơn đến anh, chị Trung tâm Nghiên cứu trồng thích ứng với Biến đổi khí hậu giúp đỡ tạo điều kiện để em học tập nghiên cứu Cuối xin bày tỏ lịng cảm ơn tới gia đình, bạn bè động viên, khích lệ, chia sẻ, giúp đỡ, đồng hành tơi q trình học tập, tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành khóa luận Tuy nhiên thời gian thực tập kiến thức chuyên mơn cịn hạn chế thân cịn thiếu nhiều kinh nghiệm thực tiễn nên nội dung khó tránh khỏi thiếu sót, mong nhận đóng góp, ý kiến thầy cô giáo bạn bè Tôi xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày tháng năm 2023 Sinh viên thực Nguyễn Thị Ngân iii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Phân loại Sâm sau Bảng 2.2: Ưu điểm nhược điểm phương pháp truyền thống nhân giống Sâm cau 10 Bảng 2.3: Ưu điểm nhược điểm phương pháp nhân giống in vitro .11 Bảng 3.1: Bảng tên hóa chất .21 Bảng 3.2: Thiết bị dụng thí nghiệm 22 Bảng 3.3: Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian chất khử trùng NaOCl 2% đến khả tạo vật liệu Sâm cau 25 Bảng 3.4: Nghiên cứu ảnh hưởng số môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh chồi Sâm cau 26 Bảng 4.1: Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian chất khử trùng NaOCl 2% đến khả tạo vật liệu Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) 30 Bảng 4.2: Kết ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh chồi Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) 32 Bảng 4.3: Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) 33 Bảng 4.4: Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP kết hợp với Kinetin nhân nhanh Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) 35 Bảng 4.5: Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) 38 iv DANH MỤC HÌNH Hình 2.1: Thân rễ Sâm cau Hình 2.2: Lá Sâm cau Hình 2.3: Hoa Sâm cau .6 Hình 2.4: Quả hạt Sâm cau .6 Hình 3.1: Lá Sâm cau dùng thí nghiệm 21 Hình 3.2: Phương pháp nghiên cứu nhân giống in vitro Sâm cau 24 Hình 4.1: Biểu đồ nghiên cứu ảnh hưởng thời gian chất khử trùng NaOCl 2% đến khả tạo vật liệu Sâm cau (sau 30 ngày ni cấy) 30 Hình 4.2: Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian chất khử trùng NaOCl 2% đến khả tạo vật liệu Sâm cau 31 Hình 4.3: Kết ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh chồi Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) 32 Hình 4.4: Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) 35 Hình 4.5: Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP kết hợp với Kinetin nhân nhanh Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) 37 Hình 4.6: Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) 39 v DANH MỤC TỪ VÀ THUẬT NGỮ VIẾT TẮT Từ, thuật ngữ viết tắt B5 BAP Cs CT CV ĐC IBA HSBĐ Kinetin LSD MS MT NAA IUCN TDZ THT WHO Nghĩa đầy đủ từ, thuật ngữ Gamborg cs, 1976 6-Benzyl amino purine Cộng Công thức Coeficient of Variation (Hệ số biến thiên) Đối chứng Indole-3-butyric acid Hệ số biến động - Furfurylaminopurine Least Singnificant Difference Test (Sai khác trung bình có ý nghĩa công thức mức độ tin cậy 95%) Murashige & Skoog’s, 1962 Môi trường α - Naphthalene acetic acid International Union for Conservation of Nature and Natural Resources - (Liên minh Bảo tồn Thiên nhiên Quốc tế) Thidiazuron Than hoạt tính World Health Organization i MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC BẢNG iii DANH MỤC HÌNH iv DANH MỤC TỪ VÀ THUẬT NGỮ VIẾT TẮT v MỤC LỤC i Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Mục tiêu tổng quát 1.2.2 Mục tiêu cụ thể 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 1.3.1 Ý nghĩa khoa học đề tài 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn đề tài Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu Sâm cau 2.1.1 Vị trí phân bố Sâm cau 2.1.2 Phân loại Sâm cau 2.2 Đặc điểm Sâm cau 2.3 Giá trị Sâm cau 2.3.1 Thành phần hóa học Sâm cau 2.3.2 Tác dụng dược lý Sâm cau 2.3.3 Giá trị Sâm cau 2.3.4 Giá trị kinh tế Sâm cau 2.3.5 Thị trường Sâm cau 2.4 Phương pháp nhân giống Sâm cau 10 2.4.1 Phương pháp nhân giống truyền thống 10 2.4.2 Phương pháp nhân giống in vitro 11 2.5 Tình hình nghiên cứu nuôi cấy mô Sâm cau 11 ii 2.5.1 Tình hình nghiên cứu Sâm cau giới 11 2.5.2 Tình hình nghiên cứu Sâm cau nước 12 2.6 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 13 2.6.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật 13 2.6.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 13 2.6.3 Sự phản phân hóa tế bào 14 2.7 Các nhân tố ảnh hưởng đến q trình ni cấy mơ tế bào thực vật 14 2.7.1 Môi trường nuôi cấy 15 2.7.2 Các chất điều hòa sinh trưởng 16 2.7.3 Môi trường vật lý 16 2.7.4 Vật liệu nuôi cấy 17 2.7.5 Các chất hữu tự nhiên 17 2.7.6 Các thành phần khác 17 2.7.8 pH môi trường 18 2.7.9 Điều kiện nuôi cấy 18 2.8 Cơ sở khoa học việc nghiên cứu chất điều tiết sinh trưởng nhân giống phương pháp nuôi cấy mô tế bào 19 Phần ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.1 Vật liệu, hóa chất thiết bị nghiên cứu 21 3.1.1 Đối tượng, vật liệu nghiên cứu 21 3.1.2 Hóa chất dụng cụ thí nghiệm 21 3.2 Phạm vi, địa điểm thời gian nghiên cứu 22 3.2.1 Phạm vi nghiên cứu 22 3.2.2 Địa điểm nghiên cứu 22 3.2.3 Thời gian nghiên cứu 22 3.3 Nội dung nghiên cứu 22 3.3.1 Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian chất khử trùng NaOCl 2% đến khả tạo vật liệu Sâm cau 22 3.3.2 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh chồi Sâm cau 22 iii 3.3.3 Nội dung 3: Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng nhóm chất Cytokinin đến khả nhân nhanh Sâm cau 23 3.3.4 Nội dung 4: Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng nhóm chất Auxin đến khả tạo rễ Sâm cau 23 3.4 Phương pháp nghiên cứu 23 3.4.1 Chuẩn bị môi trường nuôi cấy in vitro 23 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu 23 3.4.3 Phương pháp bố trí thí nghiệm 24 3.5 Phương pháp thu thập số liệu xử lý số liệu 27 3.5.1 Thu thập số liệu 27 3.5.2 Các tiêu theo dõi mẫu 28 Phần KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 29 4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian chất khử trùng NaOCl 2% đến khả tạo vật liệu Sâm cau 29 4.2 Kết ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh chồi Sâm cau 31 4.3 Kết ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng nhóm chất Cytokinin đến khả nhân nhanh Sâm cau 33 4.3.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh Sâm cau 33 4.3.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP kết hợp với Kinetin nhân nhanh chồi Sâm cau 35 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng nhóm chất Auxin đến khả tạo rễ Sâm cau 37 Phần KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 5.1 Kết luận 40 5.2 Kiến nghị 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 PHẦN PHỤ LỤC 37 Hình 4.5: Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP kết hợp với Kinetin nhân nhanh Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) (CT1: 2,0 mg/l BAP +0,0 mg Kinetin/l, CT2:2,0 mg/l BAP + 0,5 mg Kinetin/l, CT3: 2,0mg/l BAP +1,0 mg Kinetin/l, CT4:2,0 mg/l BAP + 1,5 mg Kinetin/l, CT5: 2,0 mg/l BAP + 2,0 mg Kinetin/l) 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng nhóm chất Auxin đến khả tạo rễ Sâm cau Từ kết thu thí nghiệm thí nghiệm 4, tiến hành tạo rễ Sâm cau hồn chỉnh trước đưa trồng mơi trường bên Bộ rễ quan quan trọng tất lồi thực vật Trong ni cấy mô, sau nhân chồi với số lượng lớn, giai đoạn tạo hoàn chỉnh để đưa vườn ươm Khi đưa môi trường tự nhiên cần có rễ khỏe nguyên vẹn để hút nước chất dinh dưỡng khoáng làm tiền đề cho trình phát triển sau cây, giai đoạn kích thích rễ giai đoạn quan trọng cần thiết Sau thời gian sinh trưởng nhanh tạo số lượng chồi lớn mặt đồng khỏe mạnh, chồi tách đưa vào mơi trường kích thích rễ Chất kích thích sinh trưởng sử dụng chủ yếu giai đoạn thuộc nhóm Auxin Auxin có tác dụng thúc kích thích phát sinh rễ Để khảo sát mơi trường tạo hồn chỉnh sử dụng mơi trường có bổ sung than hoạt tính, NAA nồng độ khác cơng thức thí nghiệm để tiến hành nghiên cứu Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng nhóm chất Auxin đến khả tạo rễ Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) thể bảng 4.5 sau: 38 Bảng 4.5: Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ Cơng thức thí nghiệm CT1 (ĐC) CT2 CT3 CT4 CT5 Nồng độ NAA (mg/l) Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) Chỉ tiêu theo dõi Tổng số chồi HSBĐ HSBĐ HSBĐ vào HSBĐ Chiều Chiều Số chồi mẫu/ Số cao dài rễ rễ CT (cm) (cm) Hình thái rễ 0,0 15 1,0e 1,7e 0,6d 1,6e Ngắn, nhỏ 0,5 1,0 1,5 2,0 CV(%) LSD0,05 15 15 15 15 1,4d 1,6c 1,9b 2,2a 12,0 0,3 1,8cd 1,9c 2,2b 2,7a 5,2 0,2 0,6d 0,7c 0,8b 1a 13,1 0,1 2,5cd 2,6c 3,0b 3,4a 3,1 0,1 Ngắn, nhỏ Ngắn, nhỏ Dài, nhỏ Dài, mập Chú thích: Chữ a, b, c,… thể sự sai khác có ý nghĩa với mức độ tin cậy α=0,05 Kết bảng 4.5 cho thấy: Đối với hệ số biến động số chồi rễ CT thí nghiệm có sai khác với mức độ tin cậy 95% Khi tăng nồng độ NAA từ 0,5 mg/l - 2,0 mg/l cho thấy hệ số biến động số chồi rễ tăng từ 0,6 đến Trong CT5 (2,0 mg/l) cho hệ số biến động cao đạt CT4 0,8, CT3 0,7, CT2 0,6 so với CT đối chứng Đối với hệ số biến động chiều dài rễ CT thí nghiệm có sai khác với mức độ tin cậy 95% Khi tăng nồng độ NAA từ 0,5 mg/l - 2,0 mg/l cho thấy hệ số biến động chiều dài rễ tăng biến động từ 1,6 cm đến 3,4 cm Trong CT5 có bổ sung nồng độ 2,0 mg/l cho hệ số biến động cao 3,4 cm CT4 3,0 cm CT3 2,6 cm, CT4 2,5 cm so với CT đối chứng Về chất lượng rễ cho thấy: CT có bổ sung NAA hàm lượng 0,5 - 2,0 mg/l cho chất lượng rễ tốt Tuy nhiên hàm lượng 2,0 mg/l NAA cho hàm lượng sinh trưởng phát triển rễ tốt, rễ dài, mập thuận lợi để đưa vườm ươm Ở CT đối chứng không bổ sung NAA nên số mẫu rễ ít, cho chất lượng rễ ngắn, nhỏ 39 Vì vậy: CT5 có bổ sung NAA vào môi trường (MS + 30 g/1 saccharose + 7,0 g/1 agar + 100 ml/l nước dừa + g/l THT, pH 5,7) thích hợp tạo rễ Sâm Cau Hình 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) (CT1: 0,0 mg NAA/l; CT2: 0,5 mg NAA/l; CT3:1,0 mg NAA/l; CT4: 1,5 mg NAA/l; CT5: 2,0 mg NAA/l) 40 Phần KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết thí nghiệm đạt đưa nhận xét sau: - Dung dịch NaOCl 2% thời gian ngâm mẫu 15 phút thích hợp cho tỷ lệ mẫu sống khơng nhiễm cao đạt 71,33% tỷ lệ mẫu chết thấp đạt 17,00 % - Mơi trường MS thích hợp cho tỷ lệ tái sinh chồi cao đạt 78,33% cho chất lượng chồi xanh đậm, mập - Môi trường MS bổ sung 0,2 mg/l BAP thích hợp cho nhân nhanh Sâm cau cho tỷ lệ hệ số nhân đạt 1,0 lần, hệ số biến động 1,4 lá/chồi, hệ số biến động chiều cao đạt 2,2 cm - Môi trường MS bổ sung 0,2 mg/l BAP + 1,0 mg/l Kinetin thích hợp cho nhân nhanh Sâm cau cho tỷ lệ hệ số nhân đạt 1,3 lần, hệ số biến động số 1,4 lá/chồi, hệ số biến động chiều cao đạt 2,5 cm - Môi trường MS bổ sung 0,2 mg/l NAA + g/l THT thích hợp cho tạo rễ Sâm cau cho hệ số biến động số chồi rễ cho hệ số biến động chiều dài rễ đạt 3,4 cm 5.2 Kiến nghị - Nghiên cứu điều kiện ngoại cảnh (ẩm độ, nhiệt độ, hàm lượng dinh dưỡng) đến sinh trưởng phát triển Sâm cau giai đoạn vườn ươm để hồn thiện cơng nghệ nhân giống in vitro Sâm cau (Curculigo oichioides Gaertn) - Nghiên cứu thêm ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng khác đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau - Nghiên cứu thêm ảnh hưởng số môi trường khác đến khả tái sinh chồi Sâm cau 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng việt Đỗ Huy Bích cs (2003), Cây thuốc và động vật làm thuốc Việt Nam, tập II, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tr 693 – 696 Đỗ Năng Vịnh (2007), Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng, NXB Nơng Nghiệp Hà Nội Phạm Hồng Hộ (2000), Cây cỏ Việt Nam, II, tập 2, Nhà xuất trẻ, tr 488 – 525 Nguyễn Bích Ngọc (2015), Nghiên cứu thành phần hóa học thử độc tính cấp, tác dụng tăng lực của sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn., Hypoxidaceae), Luận văn thạc sĩ Dược học, Đại học Dược Hà Nội Nguyễn Duy Thuần, Nguyễn Thị Phương Lan (2001), “ Bước đầu nghiên cứu sâm cứu”, Tạp chí dược liệu, 6(6), tr 163 – 166 Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật - nghiên cứu ứng dụng, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Tập (2006), “ Danh mục đỏ thuốc Việt Nam ”, Tạp chí Dược liệu 11(3), tr 97 – 105 Nguyễn Tập (2001), “Áp dụng khung phân hạng của IUCN – 1994 để đánh giá tình trạng bị đe dọa loài cần bảo tồn Việt Nam nay”, Tạp chí Dược liệu 6(2+3), tr 42 – 45 Nguyễn Thị Lài, Phạm Hương Sơn, Bùi Thị Thanh Phương, Phạm Minh Duy, Đỗ Thị Thơm, Nguyễn Thị Bình, Nguyễn Ích Tân (2018) “ Nghiên cứu nhân giống in vitro Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn) từ nuôi cấy đỉnh sinh trưởng” 10 Nguyễn Tiến Bân (1997), Cẩm nang tra cứu nhận biết họ Thực vật hạt kín Việt Nam, Nhà xuất Nơng Nghiệp, tr 68 – 69 11 Nguyễn Thị Út, Nguyễn Thị Xuân Tâm, Từ Thị Tú (2010), “Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi in vitro Sâm cau (Curculigo orchioides gaertn)”, Tuyển tập Báo cáo Hội nghị Sinh viên Nghiên cứu Khoa học lần thứ Đại học Đà Nẵng, trang 523 - 527 42 12 Trần Mai Hương (2016), Nghiên cứu tách chiết, xác định thành phần hóa học số dịch chiết thân rễ Sâm cau tỉnh Quảng Ngãi, Luận văn Thạc sĩ Khoa học, Đại học Đà Nẵng 13 Trần Thị Lệ, Trương Thị Bích Phượng, Trần Thị Triêu Hà (2008), Giáo trình Cơng nghệ sinh học thực vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 14 Võ Châu Tuấn, Nguyễn Thị Út, Trần Quang Dân (2011), “ Nhân giống in vitro Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn) – Một lồi thuốc q”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Đại học Đà Nẵng, 6(47), tr 163 -169 15 Vũ Văn Vụ cộng (2008), Công nghệ sinh học tập CNSH tế bào, Nhà xuất Giáo Dục II Tài liệu tiếng anh 16 Francis SV, Senapati SK and Rout GR (2007), “Rapid clonal propagation of Curculigo orchioides Gaertn An endangered medicinal plant”, In Vitro Cellular and Development Biology Plant, 43(2), p.140-143 17 Jaiswal S, Batra A, Mehta BK (1984), “The antimicrobial efficiency of root oil against human pathogenic bacteria and phytopathogenic fungi”, J Phytopathol 109(1), p.90-93 18 Nema RK, Dass SS, Mathur M and Ramawat KG (2008), “Morphactin and Cytokinin promotes high frequency bulbil formation from leaf explant of Curculigo orchioides grown in shake flask culture”, Indian journal of Biotechnology, 7, p.520-525 19 Nagesh KS (2008), “High Frequency Multiple Shoot Induction of Curculigo orchioides Gaertn, “Shoot Tip V/S Rhizome Disc Taiwania”, 53(3), p.242-247 20 Rao KS, Mishra SH (1996), “Effect oF rhizomes of Curculigo orchioides Gaerntn on drug induce hepatoxicity”, Indian Drugs, 33(9), p.458-461 21 Singh R, Gupta AK (2008), “Antimicrobial and antitumor activity of the fractionated extracts of Kalimusli (Curculigo orchioides)” Int J Green Pharm, 2, p.34-36 22 Wala BB and Jasrai YT (2003), “Micropropagation of an endangered medicinal plant: Curculigo orchioides Gaertn”, Plant Tissue Culture 13(1), p.13-19 PHẦN PHỤ LỤC Phụ lục 1: Một số hình ảnh thực tập Hình 1: Mẫu rửa sạch, khử trùng NaOCl 2% cấy mơi trường Hình 2: Một số hình ảnh tái sinh chồi Sâm cau Hình 3: Một số hình ảnh rễ Sâm cau Hình 4: Cây Sâm cau hồn chỉnh Phụ lục 2: Mơi trường ni cấy Bảng 1: Thành phần môi trường MS (Muashige & Skoog) Bottle I II III IV V Vitamin Sucrose Agar pH Component NH4NO3 KNO3 MgSO4.7H2O MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O CuSO4.5H2O CaCl2.2H2O KI CoCl2.6H2O KH2PO4 H3BO4 Na2MoO4.2H2O FeSO4.7H2O Na2EDTA.2H2O Nicotinic acid Glycine Thiamine acid Pyridocine HCl Stock Solution (g/l) 82,5 95 37 2,3 1,058 0,005 44 0,083 0,0025 17 0,62 0,025 2,784 3,724 mg/100ml 100 100 100 100 Amount to take preparation (ml) 20 10 10 10 10 0,5 2,0 0,1 0,5 Final concentratic (mg/l) 1.650,0 1.900,0 370,0 22,3 10,6 0,025 440,0 0,83 0,025 170,0 6,2 0,25 27,85 37,25 0,5 2,0 0,1 0,5 30.0000,0 5.500,0 5,6 - 5,8 Phụ lục 3: Kết xử lý số liệu Thí nghiệm 1: Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAOCL 2% đến khả tạo vật liệu Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE MAU SONG FILE SONG123 16/ 4/23 21:59 :PAGE Thi nghiem 3: Nghien cuu anh huong cua NaOCl 2% den kha nang tao vat lieu sach cay Sam cau VARIATE V003 MAU SONG SONG SONG LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 8474.92 2824.97 ****** 0.000 NL 12.6667 6.33333 2.48 0.164 * RESIDUAL 15.3335 2.55558 * TOTAL (CORRECTED) 11 8502.92 772.992 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NHIEM FILE SONG123 16/ 4/23 21:59 :PAGE Thi nghiem 3: Nghien cuu anh huong cua NaOCl 2% den kha nang tao vat lieu sach cay Sam cau VARIATE V004 NHIEM LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1441.58 480.528 127.20 0.000 NL 2.66667 1.33333 0.35 0.719 * RESIDUAL 22.6668 3.77780 * TOTAL (CORRECTED) 11 1466.92 133.356 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHET FILE SONG123 16/ 4/23 21:59 :PAGE Thi nghiem 3: Nghien cuu anh huong cua NaOCl 2% den kha nang tao vat lieu sach cay Sam cau VARIATE V005 CHET LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 14082.0 4694.00 ****** 0.000 NL 28.5000 14.2500 6.33 0.034 * RESIDUAL 13.5025 2.25041 * TOTAL (CORRECTED) 11 14124.0 1284.00 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE SONG123 16/ 4/23 21:59 :PAGE Thi nghiem 3: Nghien cuu anh huong cua NaOCl 2% den kha nang tao vat lieu sach cay Sam cau MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS MAU SONG NHIEM CHET 0.000000 0.000000 100.000 24.6667 23.3333 53.6667 3 48.3333 29.3333 22.6667 71.3333 17.0000 11.6667 SE(N= 3) 0.922963 1.12217 0.866105 5%LSD 6DF 3.19268 3.88177 2.99600 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS MAU SONG NHIEM CHET 37.2500 17.7500 45.0000 34.7500 17.7500 48.7500 36.2500 16.7500 47.2500 SE(N= 4) 0.799309 0.971829 0.750069 5%LSD 6DF 2.76494 3.36171 2.59461 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SONG123 16/ 4/23 21:59 :PAGE Thi nghiem 3: Nghien cuu anh huong cua NaOCl 2% den kha nang tao vat lieu sach cay Sam cau F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE MAU SONG NHIEM CHET GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 36.083 12 17.417 12 47.000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 27.803 1.5986 4.4 0.0000 11.548 1.9437 11.2 0.0000 35.833 1.5001 3.2 0.0000 |NL | | | 0.1637 0.7188 0.0336 | | | | Thí nghiệm 2: Kết ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh chồi Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLTS FILE TN2 16/ 4/23 21:31 :PAGE Thi nghiem 2: Nghien cuu anh huong cua moi truong dinh duong den kha nang tai sinh choi cay Sam cau VARIATE V003 TLTS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 704.167 704.167 169.00 0.004 NL 175.000 87.5000 21.00 0.044 * RESIDUAL 8.33324 4.16662 * TOTAL (CORRECTED) 887.500 177.500 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN2 16/ 4/23 21:31 :PAGE Thi nghiem 2: Nghien cuu anh huong cua moi truong dinh duong den kha nang tai sinh choi cay Sam cau MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TLTS 78.3333 56.6667 SE(N= 3) 1.17850 5%LSD 2DF 7.07189 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS TLTS 60.0000 2 70.0000 72.5000 SE(N= 2) 1.44337 5%LSD 2DF 8.66126 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN2 16/ 4/23 21:31 :PAGE Thi nghiem 2: Nghien cuu anh huong cua moi truong dinh duong den kha nang tai sinh choi cay Sam cau F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ |NL | (N= 6) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | TLTS 67.500 13.323 2.0412 3.0 0.0039 0.0443 Thí nghiệm 3: Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE SAMCAU2 19/ 4/23 11:23 :PAGE Thi nghiem 2: Nghien cuu anh huong cua BAP den kha nang nhan nhanh cay Sam cau VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 464000 116000 29.00 0.000 NL 213333E-01 106667E-01 2.67 0.129 * RESIDUAL 320000E-01 400000E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 517333 369524E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE SAMCAU2 19/ 4/23 11:23 :PAGE Thi nghiem 2: Nghien cuu anh huong cua BAP den kha nang nhan nhanh cay Sam cau VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.38667 346667 40.00 0.000 NL 373333E-01 186667E-01 2.15 0.178 * RESIDUAL 693334E-01 866668E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.49333 106667 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCAO FILE SAMCAU2 19/ 4/23 11:23 :PAGE Thi nghiem 2: Nghien cuu anh huong cua BAP den kha nang nhan nhanh cay Sam cau VARIATE V005 CCAO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.62933 657333 22.41 0.000 NL 533334E-02 266667E-02 0.09 0.913 * RESIDUAL 234667 293333E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 2.86933 204952 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE SAMCAU2 19/ 4/23 11:23 :PAGE Thi nghiem 2: Nghien cuu anh huong cua BAP den kha nang nhan nhanh cay Sam cau MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSN SL CCAO 0.600000 0.600000 1.00000 0.600000 0.866667 1.33333 3 0.666667 1.13333 1.46667 0.800000 1.26667 1.86667 1.06667 1.46667 2.20000 SE(N= 3) 0.365149E-01 0.537484E-01 0.988827E-01 5%LSD 8DF 0.119071 0.175268 0.322446 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS HSN SL CCAO 0.720000 1.00000 1.56000 0.800000 1.08000 1.56000 0.720000 1.12000 1.60000 SE(N= 5) 0.282843E-01 0.416333E-01 0.765942E-01 5%LSD 8DF 0.922322E-01 0.135762 0.249766 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SAMCAU2 19/ 4/23 11:23 :PAGE Thi nghiem 2: Nghien cuu anh huong cua BAP den kha nang nhan nhanh cay Sam cau F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN SL CCAO GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 0.74667 15 1.0667 15 1.5733 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.19223 0.63246E-01 8.5 0.0001 0.32660 0.93095E-01 8.7 0.0001 0.45272 0.17127 10.9 0.0003 |NL | | | 0.1287 0.1777 0.9135 | | | | Thí nghiệm 4: Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP kết hợp với Kinetin nhân nhanh Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE SL4CC 11/ 4/23 16:30 :PAGE VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.02933 257333 27.57 0.000 NL 533333E-02 266667E-02 0.29 0.761 * RESIDUAL 746666E-01 933333E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.10933 792381E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE SL4CC 11/ 4/23 16:30 :PAGE VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.21600 304000 76.00 0.000 NL 213333E-01 106667E-01 2.67 0.129 * RESIDUAL 320000E-01 400000E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.26933 906667E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCAO FILE SL4CC 11/ 4/23 16:30 :PAGE VARIATE V005 CCAO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 445000 111250 25.99 0.000 NL 255999E-02 128000E-02 0.30 0.752 * RESIDUAL 342400E-01 428000E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 481800 344143E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE SL4CC 11/ 4/23 16:30 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSN SL CCAO 0.600000 0.600000 2.00000 0.700000 0.866667 2.23333 3 1.33333 1.40000 2.48333 0.800000 1.26667 2.43333 0.733333 1.00000 2.35000 SE(N= 3) 0.557773E-01 0.365148E-01 0.377712E-01 5%LSD 8DF 0.181884 0.119071 0.123168 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS HSN SL CCAO 0.800000 1.00000 2.28400 0.840000 1.00000 2.31600 0.840000 1.08000 2.30000 SE(N= 5) 0.432049E-01 0.282843E-01 0.292575E-01 5%LSD 8DF 0.140887 0.922321E-01 0.954057E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SL4CC 11/ 4/23 16:30 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ |NL | (N= 15) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | HSN 15 0.82667 0.28149 0.96609E-01 11.7 0.0002 0.7612 SL 15 1.0267 0.30111 0.63246E-01 6.2 0.0000 0.1287 CCAO 15 2.3000 0.18551 0.65422E-01 2.8 0.0002 0.7520 Thí nghiệm 5: Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBD SL FILE CDRTN5 11/ 4/23 17:21 :PAGE VARIATE V003 HSBD SL SL SL SL SL SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.84267 710667 18.38 0.001 NL 640000E-01 320000E-01 0.83 0.474 * RESIDUAL 309333 386667E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.21600 229714 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBD CC FILE CDRTN5 11/ 4/23 17:21 :PAGE VARIATE V004 HSBD CC CC CC CC CC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.86224 465560 38.04 0.000 NL 362133E-01 181067E-01 1.48 0.284 * RESIDUAL 979201E-01 122400E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.99637 142598 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBD CRR FILE CDRTN5 11/ 4/23 17:21 :PAGE VARIATE V005 HSBD CRR CRR CRR CRR CRR CRR CRR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 410667 102667 9.62 0.004 NL 213333E-01 106667E-01 1.00 0.412 * RESIDUAL 853334E-01 106667E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 517333 369524E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBD CDR FILE CDRTN5 11/ 4/23 17:21 :PAGE VARIATE V006 HSBD CDR CDR CDR CDR CDR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 5.26677 1.31669 185.62 0.000 NL 405333E-02 202667E-02 0.29 0.761 * RESIDUAL 567467E-01 709333E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 5.32757 380541 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CDRTN5 11/ 4/23 17:21 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ - CT$ NOS 3 3 HSBD SL 1.00000 1.40000 1.60000 1.93333 2.26667 HSBD CC 1.89333 1.84667 1.93333 2.20667 2.79333 HSBD CRR 0.600000 0.666667 0.733333 0.866667 1.06667 HSBD CDR 1.66667 2.59333 2.68000 3.00000 3.46667 SE(N= 3) 0.113529 0.638749E-01 0.596285E-01 0.486255E-01 5%LSD 8DF 0.370207 0.208290 0.194442 0.158563 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS HSBD SL HSBD CC HSBD CRR HSBD CDR 1.56000 2.10400 0.760000 2.70000 1.64000 2.20400 0.840000 2.68400 1.72000 2.09600 0.760000 2.66000 SE(N= 5) 0.879394E-01 0.494773E-01 0.461880E-01 0.376652E-01 5%LSD 8DF 0.286761 0.161340 0.150614 0.122822 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CDRTN5 11/ 4/23 17:21 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ |NL | (N= 15) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | HSBD SL 15 1.6400 0.47929 0.19664 12.0 0.0006 0.4741 HSBD CC 15 2.1347 0.37762 0.11063 5.2 0.0001 0.2841 HSBD CRR 15 0.78667 0.19223 0.10328 13.1 0.0042 0.4115 HSBD CDR 15 2.6813 0.61688 0.84222E-01 3.1 0.0000 0.7612 XÁC NHẬN ĐÃ SỬA CHỮA THEO GÓP Ý CỦA HỘI ĐỒNG Thái Nguyên, ngày tháng Người nhận xét phản biện (Ký ghi rõ họ tên) Người hướng dẫn (Ký ghi rõ họ tên) năm 2023 Người hướng dẫn (Ký ghi rõ họ tên)