Nghiên cứu nhân giống in vitro cây Hồng nhung cổ (Rosa sp.)

Bài viết này trình bày về phương pháp nhân giống in vitro giúp tạo ra cây giống sạch bệnh và cung cấp số lượng lớn cây con cho trồng vùng nguyên liệu. Hồng nhung cổ (Rosa sp.) là một trong những giống hoa hồng quí của Việt Nam, có mùi thơm dễ chịu, bên cạnh việc sử dụng làm trang trí trong gia đình, còn được sử dụng để chưng cất tinh dầu dùng rộng rãi trong công nghệ mỹ phẩm và dược phẩm. Mời các bạn cùng tham khảo!

Công nghệ sinh học & Giống trồng NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY HỒNG NHUNG CỔ (Rosa sp.) Khuất Thị Hải Ninh1, Nguyễn Thị Thơ1, Kiều Trí Đức1, Nguyễn Thế Hưởng1, Hồ Thị Xuân Hồng1 Trường Đại học Lâm nghiệp TÓM TẮT Hồng nhung cổ (Rosa sp.) giống hoa hồng quí Việt Nam, có mùi thơm dễ chịu, bên cạnh việc sử dụng làm trang trí gia đình, cịn sử dụng để chưng cất tinh dầu dùng rộng rãi công nghệ mỹ phẩm dược phẩm Nhân giống in vitro giúp tạo giống bệnh cung cấp số lượng lớn cho trồng vùng nguyên liệu Kết nghiên cứu nhân giống Hồng nhung cổ phương pháp nuôi cấy in vitro cho thấy: Công thức khử trùng hiệu để tạo mẫu từ chồi sử dụng HgCl2 0,1%, vòng phút với 38,9% mẫu nảy chồi sau tuần ni cấy Mơi trường thích hợp tái sinh chồi MS + 1,5 mg/l BAP chiều cao chồi lớn (đạt 2,1 cm) 2,4 chồi tái sinh/nách lá, chất lượng chồi tốt (chồi xanh mập) sau tuần nuôi cấy Môi trường MS + mg/l BAP + 0,5 mg/kinetin + 0,3 mg/l NAA cho hiệu nhân nhanh chồi tốt với tỉ lệ mẫu tạo cụm chồi đạt 94,4%, chiều cao chồi đạt 4,1 cm, hệ số nhân chồi đạt 3,9 lần sau tuần ni cấy Tạo hồn chỉnh mơi trường MS + 0,5 mg/l IBA với tỉ lệ chồi rễ đạt 97,8%, 3,8 rễ/chồi rễ dài 3,5 cm, rễ có chất lượng tốt sau tuần ni cấy Qui trình nhân giống thành cơng áp dụng vào thực tiễn phục vụ sản xuất giống Hồng nhung cổ chất lượng cao, đáp ứng tốt nhu cầu giống Từ khoá: BAP, Hồng nhung cổ, IBA, nhân giống, nuôi cấy mô ĐẶT VẤN ĐỀ Cây hoa hồng thuộc họ hoa hồng (Rosaceae) loài cho hoa đẹp, trồng phổ biến nhiều quốc gia giới Cây hoa hồng trồng với nhiều mục đích khác như: trang trí làm đẹp cho khơng gian sống, làm nước hoa, mỹ phẩm thuốc chữa bệnh Tinh dầu hoa hồng nguyên liệu có nguồn gốc từ thiên nhiên, có mặt nhiều sản phẩm chăm sóc da cao cấp với đặc tính an tồn, giá thành phải chăng, chăm sóc da từ sâu bên Vì vậy, tinh dầu hoa hồng không cung cấp dưỡng chất thiết yếu cho da, mà cịn chăm sóc sức khỏe hiệu Hồng nhung cổ giống hoa hồng q Việt Nam, có mùi thơm dễ chịu bên cạnh việc sử dụng làm trang trí gia đình, cịn sử dụng để chưng cất tinh dầu sử dụng rộng rãi công nghệ mỹ phẩm dược phẩm Vì vậy, việc nhân giống để gây trồng Hồng nhung cổ cung cấp nguồn nguyên liệu cho chưng cất tinh dầu cần thiết Hiện nhiều sở sản xuất tinh dầu quan tâm đến trồng Hồng nhung cổ để chiết xuất tinh dầu nhu cầu nguồn giống lớn Mặc dù có nhiều phương pháp nhân giống truyền thống loài chiết, ghép giâm hom Tuy nhiên, phương 28 pháp nhân giống truyền thống cung cấp số lượng giống hạn chế trồng diện tích lớn Vì vậy, nhân giống in vitro giúp khắc phục nhược điểm trên, tạo giống bệnh chủ động cho việc trồng vùng nguyên liệu qui mô lớn Ở Việt Nam có nhiều cơng trình nghiên cứu nhân giống in vitro hoa hồng như: Hồng cổ sapa (Bùi Thị Thu Hương cộng sự, 2017; Nguyễn Văn Việt, 2017), Hồng nhung mê linh (La Việt Hồng cộng sự, 2019), Hồng tỉ muội (Nguyễn Ngọc Quỳnh Thơ, 2018) Tuy nhiên, nghiên cứu nhân giống in vitro Hồng nhung cổ hạn chế PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vâ ̣t liêụ Vật liệu nghiên cứu: Chồi non lấy mẹ chọn lọc (cây mẹ sinh trưởng tốt, không sâu bệnh, đẻ chồi mạnh, chồi mập phát triển tốt) vườn trồng Hồng nhung cổ sở sản xuất tinh dầu Lê Quế (Địa chỉ: thôn Thượng Phúc, xã Đồng Phú, huyện Chương Mỹ, thành phố Hà Nội) 2.2 Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành theo bước tạo mẫu sạch, tái sinh chồi, ta ̣o cu ̣m chồ i tạo hồn chỉnh Mỗi cơng thức thí nghiệm bố trí lầ n lă ̣p, lặp 30 mẫu Cụ thể: TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2021 Công nghệ sinh học & Giống trồng a) Tạo mẫu nuôi cấy khởi động Thí nghiệm Ảnh hưởng thời gian xử lý chồi HgCl2 0,1% đến tỉ lệ mẫu Mẫu sử dụng chồi bên thân mẹ trẻ hóa (trước thời điểm lấy chồi khoảng tháng), nách có chồi ngủ chưa phát triển, cắt bỏ để lại cuống Rửa mẫu cấy vòi nước chảy, đặt mẫu nước xà phịng lỗng, dùng chổi lơng để rửa mẫu, sau rửa mẫu Tráng nhiều lần nước cất, đựng mẫu bình scott Khử trùng box cấy: Đưa bình scott đựng mẫu vào box cấy, mẫu đươ ̣c rửa bằ ng nước cấ t vô trùng - lầ n, mỗi lầ n lắc mẫu khoảng - phút Sau đó, mẫu cấ y lắc cồn 700 thời gian 30 giây rửa nước cất vô trùng Cuối cùng, mẫu khử trùng HgCl2 0,1% với thời gian khác (4; 5; phút) Sau lần khử trùng HgCl2 0,1%, đổ bỏ hết dung dịch diệt khuẩn lắc mạnh nước cất vô trùng nhiều lần (mỗi lần từ - phút) Mẫu dùng panh kéo để cắt bỏ bớt phần mô bị thâm ngấm dung dịch thuỷ ngân phần mẫu già cấy vào môi trường MS + 30 g đường sucrose + g/l Agar, pH môi trường 5,8 (mẫu cấ y có chiề u dài - cm, có ı́t nhấ t mắ t ngủ) Các tiêu xác định gồm: Tỉ lệ mẫu sống (%), tỉ lệ mẫu chết (%), tỉ lệ mẫu nhiễm (%) sau tuần nuôi cấy b) Phương pháp tái sinh chồi Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả tái sinh chồi từ mắt ngủ Các mẫu cấy chuyển sang môi trường MS + 30 g đường sucrose + g/l Agar, pH môi trường 5,8 bổ sung BAP nồng độ 0,5; 1; 1,5 mg/l để tìm hiểu khả tái sinh chồi từ mắt ngủ Sử dụng môi trường tốt để nhân chồi - chu kỳ nhằm tăng số lượng chồi cho nghiên cứu Các tiêu xác định gồm: Tỉ lệ mẫu tái sinh (%), chiều cao chồi (cm), số chồi tái sinh/nách lá, chất lượng chồi (Chồi có phẩm chất tốt: Màu xanh non, khỏe mạnh, mập mạp; chồi có phẩm chất trung bình: Màu xanh - vàng nhỏ; chồi có phẩm chất xấu: Màu vàng nhạt nhỏ) sau tuần nuôi cấy c) Phương pháp tạo cụm chồi - Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP Kinetin đến khả tạo cụm chồi Các chồi hình thành từ thí nghiệm tách cấy chuyển sang môi trường MS + 30 g đường sucrose + g/l Agar, pH mơi trường 5,8 có bổ sung cố định 0,5 mg/l kinetin kết hợp với BAP nồng độ 0,5; 1; 1,5 mg/l để nghiên cứu khả tạo cụm chồi - Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hưởng BAP, Kinetin NAA đến khả tạo cụm chồi Sử dụng công thức tốt thí nghiệm bổ sung 0,1; 0,3; 0.5 0,7 mg/l NAA Các tiêu xác định gồm: Tỷ lệ mẫu tạo cụm chồi (%), chiều cao chồi (cm), hệ số nhân chồi (lần) chất lượng chồi sau tuần nuôi cấy d) Phương pháp tạo hồn chỉnh Các chồi có chiều cao từ - cm cấy chuyển sang môi trường MS + 30 g đường sucrose + g/l Agar bổ sung IBA (0,3; 0,5; 1; 1,5 mg/l) để tạo hồn chỉnh Mơi trường có bổ sung 0,4 g/l than hoạt tính Các tiêu xác định gồm: Tỉ lệ rễ (%), số rễ/cây chiều dài rễ (cm), chất lượng rễ sau tuần nuôi cấy 2.3 Phương pháp xử lý số liệu So sánh cơng thức thí nghiệm tỉ lệ mẫu sạch, tỉ lệ mẫu tạo cụm chồi, tỉ lệ chồi rễ tiêu chuẩn bình phương (χ2), đồng thời tìm cơng thức tốt tiêu chuẩn U (so sánh mẫu chất) So sánh cơng thức thí nghiệm về số lượng chồi/cụm, chiều dài chồi, chiề u dài rễ và số lươ ̣ng rễ/cây phân tích phương sai nhân tố, tìm cơng thức tốt tiêu chuẩn ducan Số liệu thu thập xử lý phần mềm SPSS (Nguyễn Hải Tuất Nguyễn Trọng Bình, 2005) phần mềm Excel 2.4 Địa điểm nghiên cứu Thí nghiệm tiến hành Phịng Ni cấy mơ - tế bào thực vật thuộc Viện Cơng nghệ sinh TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2021 29 Công nghệ sinh học & Giống trồng học Lâm nghiệp, Trường Đại học Lâm nghiệp Các môi trường nuôi cấ y đươ ̣c điề u chı̉nh đô ̣ pH 5,8, chiếu sáng 10h ngày, với cường độ ánh sáng 2000 - 3000 lux, nhiệt độ phịng ni 25 ± 20C KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Bảng Ảnh hưởng của thời gian khử trùng mẫu HgCl2 0,1% đến khả tạo mẫu Hồng nhung cổ (sau tuần nuôi cấy) Mẫu Mẫu chết Mẫu nhiễm Thời gian khử nảy chồi Số mẫu trùng thí Sớ Sớ HgCl2 0,1% Tỷ lê ̣ Tỷ lê ̣ Số mẫu Tỷ lê ̣ nghiệm mẫu mẫu (phút) (%) (%) (N) (%) (N) (N) 4,0 90 5,5c 0,0 85 94,4 5,0 90 20 22,2b 0,0 70 77,8 6,0 90 35 38,9a 0,0 55 61,1 7,0 90 23 25,6c 7,8 60 66,7 Sig 0,0001 STT Từ bảng cho thấy sử dụng HgCl2 0,1% để khử trùngmẫu với thời gian khử trùng khác có ảnh hưởng rõ rệt đến khả tạo mẫu (sig < 0,05) Khi khử trùng mẫu HgCl2 0,1% thời gian - phút cho tỉ lệ mẫu thấp (5,6 - 22,2%) khơng xuất mẫu bị chết, có tỉ lệ mẫu nhiễm cao (77,8 - 94,4%) Khi tăng thời gian khử trùng mẫu HgCl2 0,1% lên phút tỉ lệ mẫu nảy chồi tăng lên đáng kể (đạt 38,9%), tỉ lệ mẫu nảy chồi lại tiếp tục bị giảm tăng thời gian khử trùng phút (tỉ lệ mẫu đạt 25,6%) Một nghiên cứu khác nhân giống in vitro Hồng tỉ muội (Rosa chinensis Jacq Var minima Redh.) kết cho thấy đoạn đốt thân khử trùng dung dịch HgCl2 0,2% thời gian 10 phút cho tỉ lệ mẫu STT không nhiễm sống sót đạt 71,67% (Nguyễn Ngọc Quỳnh Thơ cộng sự, 2018), kết có sai khác lớn với kết nghiên cứu tác giả, điều yếu tố lồi độ già mẫu cấy khử trùng Như vậy, thời gian khử trùng mẫu cấy bằ ng HgCl2 0,1% lâu gây độc làm chết mẫu, để giảm mức độ nhiễm độc mẫu cấy, cần xử lý HgCl2 0,1% vòng phút cho hiệu tốt (hình 1b) 3.2 Tái sinh chồi Sau tuần nuôi cấ y giai đoạn tạo mẫu sạch, mẫu sống khoẻ mạnh, không nhiễm nấm khuẩn lấy cắt bỏ phần gỗ bi ̣đen đầu, cấy chuyển sang môi trường kích thích tái sinh chồi Kết thu sau tuầ n cấy chuyển thể bảng hình 1c, 1d Bảng Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tái sinh chồi Hồng nhung cổ (sau tuần nuôi cấy) Số chồi tái Tỉ lệ Chiều BAP Số mẫu Số mẫu sinh/ mẫu tái cao chồi (mg/l) cấy tái sinh nách sinh (%) (cm) (cái) 0,5 90 90 100 0,8c 1,5b 1,0 90 90 100 1,5b 1,6b a 1,5 90 90 100 2,1 2,4a c 2,0 90 90 100 0,9 1,3b sig 0,0001 0,001 LSD0,05 0,32 0,34 Số liệu bảng cho thấy, cơng thức thí nghiệm khác cho 100% mẫu nảy chồi, 30 3.1 Tạo mẫu nuôi cấy khởi động HgCl2 nồng độ 0,1% đươ ̣c sử dụng để khử trùng mẫu với thời gian khác Kết thu sau tuần nuôi cấy thể bảng hình 1a, 1b Chất lượng chồi TB Tốt Tốt TB điều chứng tỏ Hồng nhung cổ khả tái sinh chồi tốt Mặc dù vậy, mơi trường TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2021 Công nghệ sinh học & Giống trồng nuôi cấy sử dụng BAP nồng độ khác có ảnh hưởng rõ rệt đến chiều cao chồi, số chồi/nách (sig < 0,05) chất lượng chồi Khi bổ sung BAP từ 0,5 - 1,5 mg/l vào môi trường nuôi cấy làm tăng chiều cao chồi (từ 0,6 - 2,1 cm) số chồi tái sinh/nách tăng lên đáng kể (từ 1,5 - 2,4 chồi) Tiếp tục tăng nồng độ BAP đến 2,0 mg/l kìm hãm chồi phát triển chiều cao (0,9 cm) số chồi tái sinh giảm (chỉ 1,3 chồi) Như vậy, cơng thức thích hợp tái sinh chồi Hồng nhung cổ 1,5 mg/l BAP cho chiều cao chồi lớn (đạt 2,1 cm) 2,4 chồi tái sinh/nách lá, chất lượng chồi tốt (chồi xanh mập) (hình 1c, 1d) Theo số nghiên cứu khác nhân giống in vitro hoa hồng để tạo chồi từ đốt thân Nguyễn Ngọc Quỳnh Thơ cộng (2018) nghiên cứu Hoa hồng tỉ muội sử dụng mơi trường MS có bổ sung mg/l BA (benzyl adenine), 0,5 mg/l kinetin, 0,5 g/l than hoạt tính sau 21 ngày nuôi cấy, tỉ lệ bật chồi đạt 100%, số chồi đạt 3,6 chồi/mẫu, với STT chiều cao trung bình chồi 2,2 cm Một nghiên cứu khác Bùi Thị Thu Hương cộng (2017) Hoa hồng cổ sapa (Rosa gallica L.) sử dụng MS + 1,5 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin + 30 g/l sucrose với tỉ lệ bật chồi 91,67% Nghiên Shirdel cộng (2012) lồi Rosa canina L sử dụng mơi trường MS bổ sung BAP (1mg/l) để tạo chồi từ đốt thân Nosheen Hameed cộng (2006) nghiên cứu nhân giống in vitro loài Rosa indica L cho thấy chồi non nuôi cấy môi trường MS bổ sung 1,5 mg/l BAP tỉ lệ mẫu tạo cụm chồi đạt 100% sau 7,4 ngày nuôi cấy Hầu hết kết nghiên cứu sử dụng BAP nồng độ cao (trên mg/l BAP) để tái sinh chồi từ đốt thân cho hiệu tốt 3.3 Tạo cụm chồi a) Ảnh hưởng nồng độ BAP Kinetin đến khả tạo cụm chồi Kết thu sau tuầ n cấy chuyển thể bảng Bảng Khả tạo cu ̣m chồi Hồng nhung cổ môi trường MS có bổ sung BAP kinetin (sau tuần nuôi cấy) Chất ĐHST Tỉ lệ mẫu Chiều cao Hệ số Chất lượng (mg/l) tạo cụm chồi nhân chồi chồi chồi (%) (cm) BAP Kinetin (lần) 0,5 75,6 1,8c 2,3c Xấu a 1,0 91,1 2,8 3,6b Tốt 0,5 3,2a TB 1,5 87,8 2,6ab 2,0 86,7 2,3b 2,9b TB sig 0,02 0,001 0,0001 LSD0,05 0,27 0,40 Kết phân tích thống kê cho thấy BAP kinetin có ảnh hưởng rõ rệt đến tỉ lệ mẫu tạo cụm chồi, hệ số nhân chồi, chiều cao chồi chất lượng chồi (sig < 0,05) Khi bổ sung vào môi trường nuôi cấy 0,5 mg/l BAP 0,5 mg/l kinetin tỉ lệ mẫu tạo cụm chồi thấp (chỉ 76,6%) chồi phát triển chậm chiều cao (1,8 cm), hệ số nhân chồi đạt 1,8 lần, chồi xấu (chồi nhỏ vàng) Khi tăng nồng độ BAP 1mg/l 0,5 mg/kinetin tỉ lệ mẫu tạo cụm chồi, chiều cao chồi hệ số nhân tăng lên đáng kể (tương ứng đạt 91,1%, 2,8 cm 3,6 chồi/mẫu) chồi có chất lượng tốt (mập xanh) Tiếp tục tăng nồng độ BAP (1,5 - mg/l) + 0,5 mg/l kinetin khả nhân chồi tốt (tương ứng 86,7 - 87,8%, 2,3 - 2,6 cm 2,9 - 3,2 lần) nhiên chất lượng chồi phát triển mức độ trung bình (chồi nhỏ, xanh vàng) xuất hiện tượng rụng chu kỳ nuôi Nghiên cứu kết hợp BAP kinentin giai đoạn nhân nhân nhanh chồi Attia cộng (2012); Bùi Thị Thu Hương cộng (2017) nghiên cứu cho kết tốt, tác giả sử dụng công thức 1mg/lBAP + 1mg/l kinetin có hệ số nhân chổi đạt cao trung bình (2,7 lần) Rosa canina L hay môi trường MS + 1,5 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin + 30 g/l sucrose với hệ số nhân 2,48 chồi/mẫu Hồng cổ sapa Như vậy, môi trường MS bổ sung BAP 1mg/l TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2021 31 Công nghệ sinh học & Giống trồng 0,5 mg/kinetin tốt công thức nghiên cứu giai đoạn nhân nhanh chồi Một số tác giả khác kết hợp BAP, kinetin NAA giai đoạn nhân chồi hồng nhung, vậy, tiếp tục sử dụng cơng thức MS bổ sung BAP mg/l 0,5 mg/kinetin có kết hợp thêm với STT NAA nồng độ khác nhằm tìm hiểu thêm khả nhân chồi Hồng nhung cổ b) Ảnh hưởng nồng độ BAP, kinetin NAA đến khả tạo cụm chồi Kết thu sau tuầ n cấy chuyển thể bảng hình 1e Bảng Khả tạo cu ̣m chồi Hồng nhung cổ môi trường MS bổ sung BAP, kinetin NAA (sau tuần nuôi cấy) Chất ĐHST (mg/l) Tỉ lệ mẫu Chiều cao Hệ số nhân tạo cụm chồi (cm) chồi (lần) NAA BAP Kinetin chồi (%) c 0.1 86,7 2,8 2,6b 0,3 94,4 4,1a 3,9a 1,0 0,5 ab 0,5 83,3 3,7 3,3ab b 3,1ab 0,7 87,8 3,4 Sig 0,134 0,001 0,04 LSD0,05 0,38 0,72 Số liệu bảng cho thấy bổ sung chất điều hòa sinh trưởng BAP, kinetin NAA vào mơi trường ni cấy chồi có chất lượng tốt (chồi mập xanh) Tỉ lệ mẫu tạo cụm chồi cao (từ 83,3 - 94,4%), chồi phát triển chiều cao (2,8 - 4,1 cm) hệ số nhân chồi tốt (2,6 - 3,9 chồi/mẫu), đặc biệt bổ sung thêm NAA giai đoạn nhân chồi tượng bị vàng rụng không xuất Tác giả Nguyễn Văn Việt (2017) nghiên cứu Hồng cổ sapa mơi trường khống WPM bổ sung 0,6 mg/l BAP + 0,4 mg/l kinetin + 0,2 mg/l NAA cho tỉ lệ mẫu tái sinh chồi hệ số nhân chồi đạt cao (93,56% 4,23 lần) Hiệu nhân chồi tốt kết hợp loại chất điều hòa sinh trưởng trên, nhiên lồi phù hợp Chất lượng chồi Tơt Tốt Tốt Tốt với nồng độ khác Như vậy, nghiên cứu ảnh hưởng phối hợp loại chất điều hòa sinh trưởng (BAP, kinetin) nghiên cứu phối hợp chất điều hòa sinh trưởng (BAP, kinetin NAA) xác định công thức BAP mg/l + 0,5 mg/kinetin + 0,3 mg/l NAA cho hiệu nhân nhanh chồi tốt (với tỉ lệ mẫu tạo cụm chồi đạt 94,4%, chiều cao chồi đạt 4,1 cm, hệ số nhân chồi đạt 3,9 lần) (hình 1e) 3.4 Tạo in vitro hoàn chỉnh Nghiên cứu khả rễ in vitro Hồng nhung cổ cách sử dụng môi trường MS có bổ sung IBA nồng độ khác Kết ta ̣o rễ in vitro thể bảng hình 1f Bảng Khả rễ chồ i in vitro Hồng nhung cổ môi trường MS bổ sung IBA nồng độ khác (sau tuần nuôi cấy) Tỷ lê ̣ rễ Số lượng Chiề u dài Chất lượng rễ STT IBA (mg/l) (%) rễ (cái) rễ (cm) 0,3 77,8 2,8c 2,2d TB a a 0,5 97,8 3,8 3,5 Tốt 1,0 91,1 3,2b 2,9bc TB 1,5 85,6 2,9bc 3,2ab TB bc c 2,0 80,0 3,1 2,7 xấu Sig 0,0001 0,015 0,016 LSD0,05 0,47 0,6 Kết kiểm tra thống kê cho thấy có sai khác công thức thı́ nghiê ̣m tất tiêu tỉ lệ chồi rễ, số rễ/cây, chiều dài 32 rễ (sig < 0,05) Bổ sung vào môi trường nuôi cấy 0,3 mg/l IBA cho hiệu rễ (chỉ 77,8%, 2,8 rễ/cây chiều dài rễ 2,2 cm) Tăng TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2021 Công nghệ sinh học & Giống trồng nồng độ IBA 0,5 - mg/l hiệu rễ tăng lên rõ rệt (với 80% chồi rễ, 2,9 - 3,8 rễ/cây, chiều dài rễ đạt 2,7 - 3,5 cm) Tuy nhiên, rễ công thức mg/l IBA chất lượng kém, công thức - 1,5 mg/l IBA mức độ trung bình, chất lượng rễ tốt công thức 0,5 mg/l IBA Một số kết nghiên cứu khác giai đoạn rễ tác giả sử dụng IBA để tạo in vitro hoàn chỉnh, Attia cộng (2012) sử dụng môi trường MS bổ sung mg/l IBA cho tỉ lệ rễ cao (đạt 66,7%) loài Rosa hybrida L, hay tác giả Pegah Khosravi cộng (2007) nghiên cứu cho lồi Rosa hybrida sử dụng mơi trường VS dạng rắn a d không bổ sung auxin với tỉ lệ chồi rễ cao (93,33%) số lượng rễ (4,45), tác giả Bùi Thị Thu Hương cộng (2017) khơng sử dụng chất điều hịa sinh trưởng mơi trường ¼ MS để tạo rễ tỉ lệ mẫu rễ đạt 98,89%, số rễ trung bình 3,36 rễ/cây, rễ hình thành dài, mập sau tuần nuôi cấy Như vậy, khả rễ hoa hồng khác lồi (có lồi cần nồng độ auxin cao, có lồi không cần sử dụng auxin môi trường nuôi cấy) Qua kết nghiên cứu giai đoạn rễ Hồng nhung cổ công thức MS + 0,5 mg/l IBA phù hợp (hình 1f) b c e f Hình Quá trình nhân giống in vitro hoa hồng cổ a Hồng nhung cổ dùng để nhân giống; b Mẫu chồi khử trùng HgCl2 0,1% bắt đầu nảy chồi sau tuần; c-d Chồi tái sinh môi trường MS + 1,5 mg/l BAP sau tuần nuôi cấy; e Cụm chồi phát triển môi trường MS + mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin + 0,3 mg/l NAA Sau tuần ni cấy; f Cây mơ hồn chỉnh môi trường MS + 0,5 mg/l IBA KẾT LUẬN Công thức khử trùng hiệu để tạo mẫu Hồng nhung cổ từ chồi cách lắc mẫu dung dịch HgCl2 0,1% phút, tỉ lệ mẫu nảy chồi đạt 38,9% sau tuần ni cấy Mơi trường thích hợp tái sinh chồi Hồng nhung cổ MS + 1,5 mg/l BAP, chiều cao chồi lớn (đạt 2,1 cm) 2,4 chồi tái sinh/nách lá, chất lượng chồi tốt (chồi xanh mập) sau tuần nuôi cấy Môi trường MS + mg/l BAP + 0,5 mg/kinetin + 0,3 NAA cho hiệu nhân nhanh chồi tốt với tỉ lệ mẫu tạo cụm chồi đạt 94,4%, chiều cao chồi đạt 4,1 cm, hệ số nhân chồi đạt 3,9 lần sau tuần ni cấy TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2021 33 Công nghệ sinh học & Giống trồng Môi trường tạo hoàn chỉnh cho hiệu tốt công thức nghiên cứu là: MS 0,5 mg/l IBA với tỉ lệ chồi rễ đạt 97,8%, 3,8 rễ/chồi rễ dài 3,5 cm, rễ có chất lượng tốt sau tuần nuôi cấy TÀI LIỆU THAM KHẢO Bùi Thị Thu Hương, Đồng Huy Giới Nguyễn Thị Trang, Hồ Thị Quyên, 2017 Nhân nuôi Hoa hồng cổ sapa (Rosa gallica L) kỹ thuật nuôi cấy mơ in vitro Hội nghị khoa học tồn quốc sinh thái tài nguyên sinh vật lần thứ La Việt Hồng, Chu Đức Hà, Ngô Thị Quỳnh, 2019 Nhân giống Hoa hồng nhung Mê Linh - Hà Nội phương pháp nuôi cấy mô Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Đại học Thái ngun, No.01/2019 Nguyễn Ngọc Quỳnh Thơ, Nguyễn Duy Khánh, Huỳnh Thị Ánh Sang, Từ Văn Út, Trương Quỳnh Yến Yến, Nguyễn Thành Luân, Trịnh Thị Hương, 2018 Nghiên cứu tạo chồi in viro loài Hoa hồng tỉ muội (Rosa chinensis Jacq Var minima Redh.), Tạp chí Khoa học cơng nghệ Thực phẩm 15 (1) (2018) 57-64 Nguyễn Văn Việt, 2017 Nghiên cứu nhân giống in vitro Hoa hồng cổ sapa (Rose sp.) phục vụ bảo tồn phát triển nguồn gen Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nông thôn, 322: 76-81 Attia, EL Dessoky S Dessoky, and Adel E ElTarras,2012 In vitropropagation of Rosa hybrida L cv Al-Taif Rose plant African Journal of Biotechnology Vol 11(48), pp 10888-10893 Nguyễn Hải Tuất, Nguyễn Trọng Bình (2005), Khai thác sử dụng SPSS để xử lý số liệu lâm nghiệp, NXB Nông nghiệp Nosheen Hameed, Asad Shabbir, Aamir Ali and Rukhsana Bajwa, 2006 In vitromicropropagation of disease free rose (Rosa indica L.) Mycopath, 4(2): 35-38 Shirdel, M., Motallebi-Azar, A and Mahna, 2012 In vitromicropropagation of dog rose (Rose canina L ) Acta Hortic 937, 911-913 DOI: 10.17660/ActaHortic.2012.937.112 Pegah Khosravi, Maryam Jafarkhani Kermani, Gorban Ali Nematzadeh, Mohammad Reza Bihamta, (2007) A protocol for mass production of Rosa hybrida cv Iceberg through in vitro propagation.Iranian joural of biotechnology, Vol 5, No 2, April 2007 RESEARCH ON IN VITRO PROPAGATION OF Rosa sp Khuat Thi Hai Ninh1, Nguyen Thi Tho1, Kieu Tri Duc1, Nguyen The Huong1, Ho Thi Xuan Hong1 Vietnam National University of Forestry SUMMARY Rosa sp is one of the precious rose varieties in Vietnam producing a pleasant and comforting scent Apart from being used for home decoration, it is also a good option for the distillation of essential oils that are used widely in cosmetic and pharmaceutical industries Therefore, the in vitro propagation method is an effective way to produce disease-resistant offsets and provide a huge source of plantnets for plant material supply areas The study on the technique of in vitro propagating of Rosa sp shows that the most efficient formula in disinfection to produce disease-free offsets from shoots was using HgCl2 0.1% within minutes with 38.9% of success after weeks of in vitro propagation The most suitable medium for vegetative regeneration from shoots was MS + 1.5 mg/l BAP After weeks of in vitro propagation, the highest young plant was 2.1 centimeters and 2.4 regenerative shoots per plant axil which were in good quality (green and big) The medium of MS + mg/l BAP + 0.5 mg/kinetin + 0.3 NAA brought about the best propagating method whose percentage of creating groups of shoots was 94.4%, the height of young plant was 4.1 centimeters and the rate of shoot regeneration was 3.9 folds after weeks of experiment In MS + 0.5 mg/l IBA medium, the fully-formed young plants were produced with the rate of rooting was 97.8%, 3.8 roots per shoot, roots were 3.5 centimeters in length with high quality after weeks of propagation The successful in vitro propagating process would be applied into practice to produce more Rosa sp young plantnets to meet the demand of markets Keywords: BAP, IBA, propagation, Rosa sp., tissue culture Ngày nhận Ngày phản biện Ngày định đăng 34 : 11/3/2021 : 22/4/2021 : 12/5/2021 TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2021 ... auxin môi trường nuôi cấy) Qua kết nghiên cứu giai đoạn rễ Hồng nhung cổ công thức MS + 0,5 mg/l IBA phù hợp (hình 1f) b c e f Hình Quá trình nhân giống in vitro hoa hồng cổ a Hồng nhung cổ dùng... vậy, nghiên cứu ảnh hưởng phối hợp loại chất điều hòa sinh trưởng (BAP, kinetin) nghiên cứu phối hợp chất điều hòa sinh trưởng (BAP, kinetin NAA) xác định công thức BAP mg/l + 0,5 mg/kinetin +... 2021 31 Công nghệ sinh học & Giống trồng 0,5 mg/kinetin tốt công thức nghiên cứu giai đoạn nhân nhanh chồi Một số tác giả khác kết hợp BAP, kinetin NAA giai đoạn nhân chồi hồng nhung, vậy, tiếp