Nghiên cứu nhân nhanh in vitro cây đu đủ đực (carica papaya l )

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC - - NGUYỄN THỊ HƯƠNG GIANG NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH IN VITRO CÂY ĐU ĐỦ ĐỰC (CARICA PAPAYA L.) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG THÁI NGUYÊN – 2019 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – Đại học Thái Nguyên http://lrc.tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC - - NGUYỄN THỊ HƯƠNG GIANG NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH IN VITRO CÂY ĐU ĐỦ ĐỰC (CARICA PAPAYA L.) Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 42 02 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Người hướng dẫn khoa học: TS Vũ Thị Lan Cơ quan: Trường Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên THÁI NGUYÊN - 2019 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – Đại học Thái Nguyên http://lrc.tnu.edu.vn i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu thực hướng dẫn cô giáo TS.Vũ Thị Lan Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm cam đoan Thái Nguyên, ngày 21 tháng năm 2019 Tác giả Nguyễn Thị Hương Giang Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – Đại học Thái Nguyên http://lrc.tnu.edu.vn ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành Luận văn tốt nghiệp, em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới TS Vũ Thị Lan - Giảng viên Khoa Công nghệ sinh học Trường Đại học Khoa học, cô định hướng nghiên cứu, tận tình giúp đỡ, dẫn tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo, phận Sau Đại học, Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ sinh học thầy cô giáo, cán Khoa, đặc biệt quan tâm, giúp đỡ anh chị ky thuật viên phòng thí nghiệm Khoa Cơng nghệ sinh học q trình học tập nghiên cứu Tôi xin cảm ơn gia đình bạn bè, đồng nghiệp ln bên cạnh ủng hộ, khuyến khích, động viên tạo động lực để tơi hồn thành luận văn Trong q trình làm luận văn khơng tránh khỏi thiếu sót, tơi mong nhận đóng góp q báu từ phía thầy cô, bạn bè đồng nghiệp Em xin chân thành cảm ơn giúp đỡ vô quý báu đó! Thái Nguyên, ngày 21 tháng năm 2019 Học viên Nguyễn Thị Hương Giang Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – Đại học Thái Nguyên http://lrc.tnu.edu.vn MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT vii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung đu đủ 1.1.1 Nguồn gốc 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Đặc điểm hình thái sinh thái đu đủ 1.1.4 Thành phần hóa học giá trị dược liệu đu đủ đực 1.2 Phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 15 1.3 Tình hình nghiên cứu đu đủ phương pháp nuôi cấy mô giới Việt Nam 20 1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 20 1.3.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 22 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Vật liệu nghiên cứu 24 2.1.1 Vật liệu thực vật 24 2.1.2 Hóa chất dụng cụ thí nghiệm 24 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – Đại học Thái Nguyên http://lrc.tnu.edu.vn 2.2 Địa điểm thời gian 25 2.3 Phương pháp nghiên cứu 25 2.3.1 Phương pháp khử trùng mẫu cấy 25 2.3.2 Phương pháp nuôi cấy tạo mô sẹo 25 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu khả tái sinh chồi từ mô sẹo 26 2.3.4 Phương pháp tạo hoàn chỉnh 27 2.4 Điều kiện thí nghiệm 27 2.5 Phương pháp xử lí số liệu 27 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng chế độ khử trùng mẫu cấy 28 3.1.1 Ảnh hưởng chế độ khử trùng đến hiệu khử trùng mẫu 28 3.1.2 Ảnh hưởng độ tuổi mẫu đến hiệu khử trùng 31 3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng (IAA, NAA, BAP NAA) đến khả hình thành mơ sẹo 34 3.2.1 Ảnh hưởng loại vật liệu nuôi cấy đến khả tạo mô sẹo 34 3.2.2 Ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng đến hình thành mơ sẹo 35 3.3 Nghiên cứu tái sinh chồi từ mô sẹo 39 3.4 Nghiên cứu khả nhân nhanh chồi đu đủ đực 42 3.5 Nghiên cứu khả tạo rễ cho chồi đu đủ đực 44 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thơng tin – Đại học Thái Nguyên http://lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Ảnh hưởng chế độ khử trùng đến hiệu khử trùng đu đủ 27 Bảng 3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng độ tuổi mẫu đến hiệu khử trùng sau 2-4 tuần nuôi cấy 30 Bảng 3.3 Ảnh hưởng loại vật liệu đến khả tạo mô sẹo 32 Bảng 3.4 Ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng đến hình thành mơ sẹo (sau tuần nuôi cấy) 34 Bảng 3.5 Ảnh hưởng tổ hợp BAP NAA đến khả tái sinh chồi callus đu đủ (Sau tuần nuôi cấy) 38 Bảng 3.6 Ảnh hưởng tổ hợp BAP NAA đến khả nhân nhanh chồi đu đủ (Sau tuần nuôi cấy) 40 Bảng 3.7 Ảnh hưởng nồng độ IBA, α-NAA đến khả tạo rễ chồi đu đủ đực 42 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – Đại học Thái Nguyên http://lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Các loại đu đủ Hình 1.2 Các loại hoa đu đủ Hình 1.3 Cụm hoa lưỡng tính Hình 1.4 Cụm hoa đơn tính cái Hình 1.5 Cụm hoa đực Hình 2.1 Cây đu đực dùng nghiên cứu 23 Hình 3.1 Mẫu trước sau khử trùng 30 Hình 3.2 Khử trùng mẫu với các độ tuổi khác 33 Hình 3.3 Ni mơ sẹo 37 Hình 3.4 Chồi tái sinh từ mơ sẹo 40 Hình 3.5 Nhân chồi 42 Hình 3.6 Tạo hồn chỉnh 45 Hình 3.7 Rễ đu đủ đực in vitro 46 Hình 3.8 Quy trình nhân giống đu đủ đực 45 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – Đại học Thái Nguyên http://lrc.tnu.edu.vn vii DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT 2,4 D 2,4 – Dichloro phenoxy acetic acid B5 Gamborg’s Cs Cộng CT Công thức CĐ Chế độ ĐC Đối chứng IBA Indole butyric acid MS Murashige & Skoog (1962) NAA  - Naphthalene axetic acid NC Nhân chồi NC Môi trường nhân chồi MS Môi trường tạo mơ sẹo TB Trung bình TC Mơi trường tái sinh chồi Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – Đại học Thái Nguyên http://lrc.tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – Đại học Thái Nguyên http://lrc.tnu.edu.vn A B Hình 3.5 Nhân chồi A) Chồi mơi trường đối chứng, B) Chồi môi trường NC7 3.5 Nghiên cứu khả tạo rễ cho chồi đu đủ đực Các chồi sau giai đoạn nhân nhanh với chiều cao chồi 1- 1,2 cm, xanh, chồi sinh trưởng phát triển bình thường chuyển sang mơi trường rễ để hồn thiện q trình nhân giống in vitro Chất cảm ứng rễ sử dụng IBA với nồng độ 1mg/l, 1,5mg/l, 2,0mg/l NAA bổ sung với nồng độ 0,5mg/l, 1,0 mg/l 2,0 mg/l mơi trường MS bổ sung 0,5g/l than hoạt tính (Bảng 3.7) Các môi trường nghiên cứu bổ sung NAA gồm môi trường R4, R5 R6 chồi không tạo rễ, chồi sinh trưởng chậm, vàng nhạt tương tự mơi trường đối chứng Nhóm mơi trường MS có bổ sung than hoạt tính IBA, chồi sinh trưởng mạnh với cuống dài, màu xanh Trong ba mơi trường nghiên cứu R1, R2 R3 hai môi trường R1 R3 với nồng độ IBA bổ sung 1mg/l 2mg/l chưa thấy rễ sau tuần theo dõi Môi trường R2 bổ sung ung IBA 1,5mg/l than hoạt tính 0,5mg/l sau khoảng 10 ngày hình thành rễ, rẽ trắng, ngắn mập có rễ Sau khoảng tuần rễ sinh trưởng dài khoảng 2,0 cm, từ rễ phát sinh rễ nhỏ (rễ phụ) Môi trường tạo rễ cho kết hình thành rễ sau tuần theo dõi với tỷ lệ 50,0% với sỗ rễ/cây 2,0 Cây đu đủ in vitro có thân gầy, cuống dài, xanh nhạt, rễ có rễ dài rễ phụ Đặc điểm với đặc điểm hình thái học đu đủ đực Như bước đầu tạo đu đủ đực hồn chỉnh phòng thí nghiệm Bảng 3.7 Ảnh hưởng nồng độ IBA, α-NAA đến khả tạo rễ chồi đu đủ đực (sau tuần theo dõi) Kí hiệu mơi trường Nồng độ IBA (mg/l) Nồng độ NAA (mg/l) Tỷ lệ hình thành rễ (%) Số rễ/ ĐC 0 0 Chồi cuống ngắn, vàng nhạt R1 - Thân gầy, cuống ngắn,lá xanh nhạt R2 1,5 50,0 2,0 R3 - Cuống dài, vàng nhạt R4 0,5 0 R5 1,0 0 Cuống ngắn, vàng nhạt Cuống ngắn, vàng nhạt R6 2,0 0 Đặc điểm chồi Thân gầy, cuống dài, xanh nhạt Cuống ngắn, vàng nhạt Kết nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu Đỗ Văn Nam cộng (2013), mơi trường rễ tốt MS có bổ sung than hoạt tính bổ sung IBA 1,5 mg/l, tỷ lệ rễ đạt 50% với số rễ trung bình 6,5 rễ [15] Kết phù hợp với nghiên cứu Setargie cộng (2015): Môi trường cho rễ tốt MS có bổ sung IBA 1,5 mg/l với số rễ cao 16,25 rễ chiều dài rễ trung bình 3,92 cm [55] Đối với nghiên cứu khác đối tượng giống đu đủ khác mơi trường rễ phù hợp mơi trường có bổ sung IBA với nồng độ khác 1, 2, 2,5 mg/l chí – 4,0 mg/l Có khác biệt có nguyên nhân từ đối tượng mẫu đề tài đu đủ đực nghiên cứu khác có đối tượng đu đủ cái lưỡng tính giống đu đủ lựa chọn khác Theo nghiên cứu Rohman cộng (2007) mơi trường rễ tốt MS có bổ sung IBA mg/l (2,18 cm tuần) [51].Với nghiên cứu Panjaitan cộng (2007): tỷ lệ rễ cao thu mơi trường MS có bổ sung IBA mg/l với chiều dài rễ trung bình cm [47] Còn nghiên cứu Roy cộng (2012) mơi trường rễ phù hợp MS ½ bổ sung IBA 4,0 mg/l (sau tuần) số rễ trung bình 12 đến 14 rễ [52] Theo Mumo (2013), mơi trường có bổ sung hàm lượng IBA từ 0,1 mg/l có cảm ứng tạo rễ Tỷ lệ rễ cao môi trường MS bổ sung IBA 2,5 mg/l [36] Kết luận: mơi trường rễ phù hợp MS có bổ sung IBA 1,5 mg/l than hoạt tính A B C D Rễ Hình 3.6 Tạo hồn chỉnh A) Chồi ban đầu môi trường rễ; B, C, D) Chôi môi trường R1, R2, R3 sau tuần; Mũi tên rễ hình thành mơi trường R2 Hình 3.7 Rễ đu đủ đực in vitro môi trường R2 Từ kết nghiên cứu trên, chúng tơi đưa quy trình nhân giống in vitro đu đủ đực sau: Bước 1: Chọn vật liệu nuôi cấy: đoạn thân đu đủ đực Bước 2: Chế độ khử trùng mẫu cấy: HgCl2 0.15% 13 phút Bước 3: Tạo mô sẹo: môi trường MS + α NAA 1,0 mg/l + BAP 0,5 mg/l Bước 4: Tái sinh chồi từ mô sẹo: MS + α NAA 0,1 mg/l + BAP mg/l Bước 5: Nhân nhanh chồi: MS + α NAA 0,25 mg/l + BAP mg/l Bước 6: Tạo hồn chỉnh: mơi trường MS + IBA 1,5 mg/l + than hoạt tính Hình 3.8 Quy trình nhân giống đu đủ đực KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận 1) Đối với chế độ khử trùng mẫu cấy: chế độ khử trùng HgCl2 0,15% 13 phút phù hợp để khử trùng mẫu đưa vào nuôi cấy (tỷ lệ mẫu sống đạt 31,58 %) Vật liệu phù hợp hiệu khử trùng cao mẫu non, phân hóa 2) Ảnh hưởng tổ hợp chất kích thích sinh trưởng đến khả hình thành mơ sẹo: mơi trường MS có bổ sung NAA 1,0 mg/l BAP 0,5 mg/l cho tỷ lệ tạo mô sẹo cao (95,4%) với mơ sẹo có đặc điểm xanh nhạt, rắn, tốc độ sinh trưởng tốt 3) Khả tái sinh chồi từ mô sẹo: môi trường phù hợp cho tái sinh chồi từ mô sẹo môi trường MS bổ sung BAP 1,0 mg/l, NAA 0,1 mg/l, tỷ lệ tái sinh chồi đạt 40,3%, với chất lượng chồi tốt, có màu xanh nhạt Môi trường phù hợp cho nhân chồi từ mô sẹo môi trường MS bổ sung BAP 1,0 mg/l, NAA 0,25mg/l, hệ số nhân chồi đạt 2,67 vớisố lá/ chồi 2-3 lá/chồi, chồi có màu xanh nhạt 4) Tạo hồn chỉnh: mơi trường MS có bổ sung IBA 1,5 mg/l than hoạt tính có tỷ lệ hình thành rễ tốt nhất, với số rễ/ chồi Đặc điểm rễ có rễ dài rễ phụ Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu điều kiện nuôi cấy để tăng hệ số nhân chồi, tạo rễ hồn thiện quy trình nhân giống in vitro đu đủ đực với dòng đu đủ đực khác để tạo nguồn dược liệu phong phú đa dạng TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhị, Lê Thị Muội (1997),“Cơng nghệ tế bào thực vật cải tiến giống trồng”, NXB Nơng nghiệp Hà Nội Ngơ Xn Bình (2010), “Nuôi cấy mô tế bào thực vật”, NXB Khoa học kỹ thuật Nguyễn Đức Đoàn (2005), “ Cây thuốc”, NXB Y học, tr 30-32 Hồ Thị Hà cộng sự, (2014), “Carpainone: Alkaloid từ câu đu đủ”, Tạp chí Khoa học Công nghệ, 52 (5), tr 593-598 Thái Hà, Đặng Mai (2011), “Bạn nhà nông ky thuật trồng chăm sóc đu đủ”, NXB Hồng Đức Trung Hiếu (2005), “Chữa bệnh cây, củ, quả”, NXB Y học Nguyễn Văn Hoan, Nguyễn Tuấn Anh, Phạm Thị Ngọc (2010) “Khảo sát đặc điểm cấu tạo hoa, cụm hoa biểu kiểu hình giới tính mẫu giống đu đủ (Carica Papaya L.) thu thập”, Tạp chí Khoa học Phát triển, 8(6), tr 883 – 889 Lê Văn Hồng (2008), “Cơng nghệ ni cấy mơ tế bào thực vật”, Giáo trình, Trường đại học Đà Nẵng, Đà Nẵng Trần Bá Hoành cộng (2011), “Từ điển giáo khoa Sinh học”, NXB Giáo dục Việt Nam 10 Nguyễn Thành Hối(2000), “Ky thuật trồng đu đủ” , NXB Nông nghiệp, tr 11 Nguyễn Quốc Khang Hà Thị Thanh Bình (1999), “Góp phần nghiên cứu hoạt tính sinh học Flavonoid đu đủ (Carica papaya )”, Tạp chí Dược học, (278), tr 15 - 17 12 Nguyễn Như Khanh (2011), “Giáo trình chất điều hồ sinh trưởng thực vật”,NXB Giáo dục 13 Đỗ Tất Lợi (2004), “Những thuốc vị thuốc Việt Nam”, NXB Y học 14 Đoàn Lư (2015), “Rau ngon thuốc quý”, NXB Dân Trí 15 Đỗ Văn Nam, Nguyễn Thị Thủy, Nguyễn Thị Bích Hồng, Phạm Thị Ngọc, Nguyễn Văn Hoan, Nguyễn Thị Phương Thảo (2013), “Nhân giống vơ tính in vitro đu đủ Carica papaya L.”, Tạp chí Khoa học phát triển,11(6), tr 833-839 16 Nguyễn Thị Nhẫn (2004), “Nghiên cứu quy trình nhân nhanh in vitro đu đủ”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Nơng nghiệp,2(3), tr.174-180 17 Dương Phong (2016), “Ky thuật chọn giống, chăm sóc phòng bệnh cho đu đủ”, NXB Hồng Đức 18 Lê Thị Phú, Nguyễn Thị Thu Sang (2006), “Khảo sát tinh Enzyme Chymopapain mủ trái đu đủ Việt Nam”, Tạp chí Phát triển Khoa học cơng nghệ, 9(5), tr 59-63 19 Ngọc Phương, Hồng Hà (2009), “Đông Y trị bách bệnh”, NXB Văn hóa - thơng tin 20 Phan Đình Kim Thư, An đệ (2012), “Nghiên cứu ky thuật sản xuất giống đu đủ in vitro lưỡng tính nhằm phát triển đu đủ hàng hóa chất lượng cao miền đông nam bộ”, Viện ăn Miền nam, Viện Khoa học nông nghiệp Việt Nam Tiếng anh 21 Ahmad N, Fazal H, Ayaz M, Abbasi B H, Mohammad I,Fazal L (2011), “Dengue fever treatment with Carica papaya leaves extracts”,Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, 1(4), pp 330-333 22 Anjum V, Arora P, Ansari S H, Najmi A K, Ahmad S (2017), “Antithrombocytopenic and immunomodulatory potential of metabolically characterized aqueous extract of Carica papaya leaves” Pharmaceutical Biology, 55(1), pp 2043–2056 23 Boomi M, Ruchi M, Shipra G, Abdul S A, Nirmal K L (2009), “Sperm characteristics and ultrastructure of testes of rats after long-term treatment with the methanol subfraction of Carica papaya seeds”, Asian Journal of Andrology11, pp 583–599 24 Chandrasekaran R , Seetharaman P , Krishnan M , Gnanasekar S, Sivaperumal S (2018), “Carica papaya (Papaya) latex: a new paradigm to combat against dengue and flariasis vectors Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae)”, Biotech 8, pp 83 25 Chong-Pérez B, Carrasco B, Silva H, Herrera F, Quiroz K, GarciaGonzales R (2018), “Regeneration of highland papaya (Vasconcelleapubescens) from anther culture”, Appl Plant Sci., 6(9):e01182 doi: 10.1002/aps3.1182 26 Gatambia E K, Agnes W K, Fredah K R and Monica M W (2016), “In vitro Meristem Culture for Rapid Regeneration of Papaya Plantlets in Liquid Media”, Annual Research & Review in Biology, 9(1), pp 1-7 27 Gheith I, El-Mahmoudy A (2018), "Novel and classical renal biomarkers as evidence for the nephroprotective effect of Carica papaya leaf extract”, Bio Rep, 38(5), pp 1-10 28 Juárez-Rojop IE, Díaz-Zagoya JC, Ble-Castillo JL, MirandaOsorio PH, Castell-Rodríguez AE, Tovilla-Zárate CA, Rodríguez-Hernández A, Aguilar-Mariscal H,Ramón-Frías T, Bermúdez-Oca DY (2012), “Hypoglycemic effect of Carica papaya leaves in streptozotocin-induced diabetic rats”, BMC Complement Altern Med.12, pp.236 29 Levecke B, Buttle D J, Behnke JM, Duce IR, Vercruysse1 J (2014), “Cysteine proteinases from papaya(Carica papaya) in the treatment of Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – Đại học Thái Nguyên http://lrc.tnu.edu.vn experimental Trichuris suis infection in pigs: two randomized controlled trials”, Levecke et al Parasites & Vectors 7, pp.255 30 Mangala BM, Murthy MB, Murthy BK, Bhave S (2012), “Comparison of safety and efficacy of papaya dressing with hydrogen peroxide solution on wound bed preparation in patients with wound gape”, Indian J Pharmacol., 44(6), pp 784–787 31 McCubbin MJ, Staden J V, Debergh P (2003), “A modified technique for in vitro propagation of papaya (Carica papaya L.)”, South Africa Journal of Botany, 69(3), pp 287–291 32 Melariri P, Campbell W, Etusim P, Smith P (2011), “Antiplasmodial Properties and Bioassay-Guided Fractionation of Ethyl Acetate Extracts from Carica papaya Leaves”, Journal of Parasitology Research, Article ID 104954 33 Mikhal'chik EV, Ivanova AV, Anurov MV, Titkova SM, Pen'kov LY, Kharaeva ZF, Korkina LG (2004), “Wound-healing effect of papaya-based preparation in experimental thermal trauma”, Bull ExpBiol Med.,137(6), pp 560-562 34 Mondal M, Gupta S, Mukherjee BB (1994), “Callus culture and plantlet production in carica papaya L”, Plant Cell Rep.,13(7), pp 390- 393 35 Moraes D, Marcelo Arantes Levenhagen MA, Costa-Cruz JM, Costa NettoAP, Rodrigues RM (2017), "In vitro efficacy of latex and purified papain from Carica papaya against Strongyloides venezuelensis eggs and larvae", Rev Inst Med Trop Sao Paulo, PMC 5441158, PMID: 28380118 36 Mumo N N, Rimberia F K, Mamati G E, Kihurani A W (2013), “In vitro regeneration of selected Kenyan papaya (Carica papaya L.) lines through shoot tip culture”, African Journal of Biotechnology,12(49), pp 68266832 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – Đại học Thái Nguyên http://lrc.tnu.edu.vn 37 Murakami S , Eikawa S , Kaya S , IMAO M , Aji T (2016), " AntiTumor and Immunoregulatory Effects of Fermented Papaya Preparation (FPP: SAIDOPS501)", Asian Pac J Cancer Prev, 17(7): pp 3077-84 38 Naggayi M, Mukiibi N, Iliya E (2015), “The protective effects of aqueous extract of Carica papaya seeds in paracetamol induced nephrotoxicity in male wistar rats”, African Health Sciences, 15(2), pp 598–605 39 Nguyen TT, Shaw PN, Parat MO, Hewavitharana AK (2013), "Anticancer activity of Carica papaya: a review", Mol Nutr Food Res, 57(1): pp 153-64 40 Nguyen TT, Parat M-O, Shaw PN, Hewavitharana AK, Hodson MP (2016), “Traditional Aboriginal Preparation Alters the Chemical Profile of Carica papaya Leaves and Impacts on Cytotoxicity towards Human Squamous Cell Carcinoma”, PLoS One, 11(2): e0147956 41 Nisa F Z, Astuti M, Murdiati A, Haryana S M (2017), "Anti-proliferation and Apoptosis Induction of Aqueous Leaf Extract of Carica papaya L on Human Breast Cancer Cells MCF-7" , Pak J Biol Sci, 20(1): pp 36-41 42 Ojo OA , Ojo AB , Awoyinka O , Ajiboye BO , Oyinloye BE , Osukoya OA , Olayide II , Ibitayo A (2017) "Aqueous extract of Carica papaya Linn roots potentially attenuates arsenic induced biochemical and genotoxic effects in Wistar rats.", J Tradit Complement Med, 8(2): pp 324-334 43 Okoko T, Ere D (2012), “Reduction of hydrogen peroxide- induced erythrocyte damage by Carica papaya leaf extract”, Asian Pac J Trop Biomed, 2(6), pp 449-453 44 Otsuki N, Dang NH, Kumagai E, Kondo A, Iwata S, Morimoto C (2010), " Aqueous extract of Carica papaya leaves exhibits anti-tumor Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – Đại học Thái Nguyên http://lrc.tnu.edu.vn activity and immunomodulatory effects", J Ethnopharmacol, 127(3): pp 760-7 45 Pandey S , Cabot PJ , Shaw PN , Hewavitharana AK (2016), " Antiinflammatory and immunomodulatory properties of Carica papaya.", J Immunotoxicol,13(4):pp 590-602 46 Pandey S, Walpole C,Shaw P N,Cabot P J, Hewavitharana A K,1, Batra J (2018), "Bio-Guided Fractionation of Papaya Leaf Juice for Delineating the Components Responsible for the Selective Antiproliferative Effects on Prostate Cancer Cells", Frontiers in Pharmacology, 9: doi: 10.3389/ fphar.2018.01319 47 Panijaitan S B, Aziz M A, Rashid A A, Saleh N M (2007), “In vitro plantlet regeneration from shoot tip of field grown Hermaphrodite Papaya (Carica papaya L cv Eksotika)”, Internationnal Journal of Agriculture & Biology, 09(6), pp 827–832 48 Pathak N , Khan S , Bhargava A , Raghuram GV , Jain D , Panwar H , Samarth RM , Jain SK , Maudar KK , Mishra DK , Mishra PK 92014), "Cancer chemopreventive effects of the flavonoid-rich fraction isolated from papaya seeds", Nutr Cancer;66(5): pp 857-71 49 Prado SBRD, Santos GRC, Mourão PAS, Fabi JP (2019), "Chelatesoluble pectin fraction from papaya pulp interacts with galectin-3 and inhibits colon cancer cell proliferation", Int J Biol Macromol;1(126): pp 170-178 50 Ranasinghe P, Ranasinghe P, Abeysekera W P K M, Premakumara G A S, Perera Y S, Gurugama P, Gunatilake S B (2012), “In vitro erythrocyte membrane stabilization properties of Carica papaya L leaf extracts”, Pharmacognosy Res.; 4(4), pp 196–202 Số hóa Trung tâm Học liệu Cơng nghệ thông tin – Đại học Thái Nguyên http://lrc.tnu.edu.vn 51 Rohman M M, Islam M N, Alam M S, Munshi Rashid Ahmad M S, Paul T K (2007), “Lateral Bud of Papaya (Carica papaya) for Clonal Propagation”, Biotechnology, 6(3): pp 339-343 52 Roy P K, Roy S K, Hakim M L (2012), "Propagation of Papaya ( Carica Papaya L.) cv Shahi through in vitro culture", Bangladesh J Bot, 41(2), pp 191-195 53 Saksena P (2013), “Cell and tissue studies in papaya (Carica papaya L.)”, Nanobiotechnica Universale, 4(1&2), pp 1-11 54 Sekeli R, Hamid M H, Roslinda R A, Wee C, Ong-Abdullah J (2018), “Malaysian Carica papaya L var Eksotika: Current Research Strategies Fronting Challenges”, Frontiers in Plant Science 9, Article 1380 55 Setargie A, Mekbib F, Abraha E (2015),“In vitro Propagation of Papaya (Carica papaya L.)”, World Journal of Agricultural Sciences, 11 (2), pp.84-88 56 Tham C S (2013), “Morphological study of bone marrow to assess the effects of lead acetate on haemopoiesis and aplasia and the ameliorating role of Carica papaya extract” Experimental and Therapeutic Medicine 5,pp 648-652 57 Wu KL, Zeng SJ, Chen ZL, Duan J (2012) In vitro mass propagation of hermaphroditic Carica papaya cv ‘Meizhonghong’ Pak J Bot, 44(5), pp.1669–1676 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – Đại học Thái Nguyên http://lrc.tnu.edu.vn PHỤ LỤC Phụ lục Thành phần môi trường MS (1962) Hàm STT Thành phần lượng Hàm STT Thành phần (mg/l) CaCl2 332,02 lượng (mg/l) 10 ZnSO4 8,60 CaCl2.6H2O 440 KH2PO4 170 11 CoCl2.6H2O 0,025 KNO3 1900,00 12 CuSO4.5H2O 0,025 MgSO4 180,54 13 NaMoO4.2H2O 0,25 NH4NO3 1650,00 14 MnSO4.H2O 16,90 FeSO4.7H2O 27,8 15 Glycin 2,00 EDTA 37,3 Hoặc 36,70 16 Thiamin HCl 0,10 FeNaEDTA H2BO3 6,2 17 Pyridoxine HCl 0,50 KI 0,83 18 Axit Nicotinic 0,50 MnSO4.H2O 16,90 Myo - inositol 100,00 Số hóa Trung tâm Học liệu Công nghệ thông tin – Đại học Thái Nguyên http://lrc.tnu.edu.vn ... Chính l trên, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu nhân nhanh in vitro đu đủ đực (Carica Papaya L. ) Mục tiêu nghiên cứu Nhân giống thành công đu đủ đực phương pháp nuôi cấy mô tế... Hoa l ỡng tính nhụy thối hóa (barren) có 10 nhị, khơng có bầu nhụy Cây đu đủ đực Cây đu đủ Cây đu đủ l ỡng tính Hình 1.1 Các loại đu đủ Theo phân loại Oschae cộng (197 5), trích tài liệu Singh... Jacq (đu đủ nhỏ trái); C cauliflora Jacq; gracilis Sohms; C perythrocarpa Linden and André [17] 1.1.3 Đặc điểm hình thái sinh thái đu đủ a) Đặc điểm hình thái sinh thái đu đủ Đu đủ (Carica papaya