Tài liệu NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH IN VITRO CÂY HOA LOA KÈN (Lilium poilanei Gapnep) pdf

Tạp chí Khoa học và Phát triển 2011: Tập 9, số 5: 743 – 750 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI 743 NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH IN VITRO CÂY HOA LOA KÈN ( NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH IN VITRO CÂY HOA LOA KÈN (NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH IN VITRO CÂY HOA LOA KÈN ( NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH IN VITRO CÂY HOA LOA KÈN ( Lilium poilanei Lilium poilanei Lilium poilanei Lilium poilanei Gapnep GapnepGapnep Gapnep ) )) ) Study on Rapid Micropropagation of Lilium poilanei Gapnep Nguyễn Thị Phương Thảo 1 , Nông Thị Huệ 1 , Vũ Quang Khánh, Nguyễn Hữu Cường 2 Khoa Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội Khoa Nông học, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội Địa chỉ email tác giả liên hệ: nthue86sh@gmail.com Ngày gửi bài: 27.06.2011; Ngày chấp nhận: 25.10.2011 TÓM TẮT Ở Việt Nam hiện có 3 loài hoa loa kèn hoang dại thuộc chi Lilium được ghi nhận là Lilium brownii F.E Brown, Lilium poilanei Gagnep và Lilium arboricola. Trong đó, Lilium poilanei Gapnep là một nguồn gen rất hiếm trên thế giới với nhiều đặc điểm quí và đây chính là những nguồn gen rất ý có nghĩa trong chọn tạo giống. Hơn thế nữa ở Việt Nam loài hoa này đã từng bị khai thác nghiêm trọng, do vậy việc bảo tồn và phát triển nguồn gen này trong chọn tạo giống Lilium là rất cần thiết. Nghiên cứu này nhằm tìm ra các thông số kỹ thuật thích hợp cho quy trình nhân in vitro cây Lilium poilanei Gapnep từ mô vẩy. Kết quả đã xác định được môi trường tái sinh chồi thích hợp cho mô nuôi cấy là MS + 0,5 mg/l BA + 0,5 mg/l α αα αNAA + 30g/l sucrose, trên môi trường này tỷ lệ chồi tái sinh 83,33%, 2,67 chồi/mẫu sau 8 tuần. Hệ số nhân chồi đạt cao nhất 4,13 lần, chiều cao trung bình cụm chồi đạt 2,64 cm trên môi trường MS chứa 1 mg/l BA và 0,25 mg/l α αα αNAA, Các chồi có chiều cao 4 - 5 cm được sử dụng tạo rễ in vitro. Tỷ lệ chồi ra rễ đạt được cao nhất (93,33%) trên môi trường MS chứa 1 g/l than hoạt tính sau 4 tuần. Từ khóa: Lilium, Lilium poilanei Gapnep, nhân giống vô tính in vitro, BA, kinetin, than hoạt tính SUMMARY In Vietnam, the genus Lilium coposed of three wild species: Lilium brownii F.E Brown, Lilium poilanei Gagnep and Lilium arboricola. Among them, Lilium poilanei Gapnep is an extremely rare species with several good characteristics and presents a valuable germplasm for breeding program. Moreover, this species has been seriously exploited in Vietnam, thus, conservation and development strategy is necessary for this germplasm. This study was carried out on Lilium poilanei Gapnep in order to establish a protocol for rapid propagation from bulb scales for this species. The results indicated that MS medium containing 0.5 mg/l BA and 0.5 mg/l αNAA was found to be the most suitable medium for in vitro shoot regeneration, the rate of regenerated shoots was 83.33% with 2.67 shoots per explant after 8 weeks. The highest rate of shoot propagation was 4.13 times after 8 weeks, the average height of shoot was 2.64 cm on MS medium adding 1 mg/l BA and 0.25 mg/l αNAA. The shoots were transferred to rooting media by the addition of 1g/l activated charcoal and the rate of root formation was 93.33% after 4 weeks. Keywords: Activated- charcoal, BA, Lilium, Lilium poilanei Gapnep, Kinetin; micropropagation.  Lilium      !" # $% & '(  ') *  + , - Lilium Lilium !! . / " 00 123'456789:1 ;6< =>  ? !@ A '7 B%C BD E '4%FG99H91;;I17J 7$%&CLilium longiflorum K!9    Lilium hybrids / L!'  1 M9   C  N51OPQR1%!S'=* A*'5 'R'7LiliumT5 Nghiên cứu nhân nhanh in vitro cây hoa loa kèn (Lilium poilanei Gapnep) 744  'R' @ '7 ." !S' U1 V 3 , P%*!R1WX%YV'" * 23' 'R' Z' W '( 'R' @  B%2,')R'5@ 9@U'(Z[) +'J00\Q*A% ]%@' '7 " <^0 @1 J\0 .+ '( '+_J`!@U+,1 X."'7<a@7"; @ Z' 2 '( X1 =  '7 I0J @7\0b@N'W= 51=]%@''7"0@ 7 I0 @  Z' 2 '( 2,' A 9 c5 = =1 ;;; d * 1  J  23' / ` .+  L. longiflorum%.L. lancifolium1*'7 I      N5 %' ' Lilium 23'  X  Lilium brownii eKGf&'N5UOR1'R' / 'g d GS' R1 - 51  Lilium poilanei h9  Lilium arboricola'7d /'gi1-!@A1Lilium poilanei h9      C +U+,1%/9P% Z' T $%W 2 % !S'  N51  .P   '7 2> > 4A 'W   %/9C'7j'& 5 @ %A U1 9 N  *% '( kA ='%%9i'9A k=iQ * A '2 '7 ') .@  P *' !? Nl %/ 9 A  X *% T 5  'R' @ 2> 5 => +  1 d *    A m E .n  R' U & T .R ! % ]%@'1 'W Q XA *' ." /  R T %/9A'&5@Lilium C'o+U'D%ApQ 'R')!@q%XW'3'$%A Q 4   '4A Lilium poilanei h9'>!d'*'4'R' %/92%Ol'l')R''&5 @, Jrstuvc=wxhc=Fc 2.1 Vật liệu y) "A '( Lilium poilanei h9 23'%Xdiz- Hình 1. Lilium poilanei Gapnep 2.2 Phương pháp nghiên cứu Xử lý mẫu trước khử trùng{-( 23'?!5'1.7'R'CA'R',"A -R' "A A 23' ? !5' N2, | 2,'1 4  B | a O1 S'1 !% 7 ?!5'N2,|2,'2.%/'CA )V Khử trùng{  .%/ 'CA ) V1 R$%o.p2,''C)V1!% 7}%23'B?~,960 0 I0 O + l' }% 23' B? ~ .p =- J 01b  a O1  •  ? VS'P%}%1!%7R5<zao .p2,''C)V-S"A'('R' }%'7W'2,'6z\'P%z J  'P% N 'CA  ) 2• m '%#.n!€ C '" 'R' W * !? Nl ) 2• %) 'CA yi '> ." '7 .` !% !%'!91'R''CP%+!2dd'R' /R'%%•EW*1= P%'‚da16R'CAE'/>% 23'E)2•R!'/'CA) 2•4m'%#.n-/Lilium poilaneih9!%54 ' < za '1 ! 2d g9 51 R Nguyễn Thị Phương Thảo, Nông Thị Huệ, Vũ Quang Khánh, Nguyễn Hữu Cường 745 B1'l'/23''%AT!)2• ƒ Điều kiện nuôi cấy{ * { JJ z J6 0 -„ '2•  R !R J000 %B„ • '+%!R{^•!R_\•@W * 23' S' 5 I o1 Y o 0 .Q1Y.QI}% -‚ U% 9 N… n •  %o_o U'D%./†*!@b1† * 5 '%! b1 † * 5 ƒ b1 † * 5 '/b1!@'/_}%'CA'/1*!@4 o1'P%'%.Q '/'1!@R_ '4AR i@ *% 23' B? ~ U o P skkksiL <0  KB'91 i8 d D' ~ jab I‡ˆ]u‰v=‰Mur 3.1. Tạo vật liệu khởi đầu  !" B%C @    '7 T !? Nl P% . X R' % T  X *% d o%  %) 'CA in vitro 2 "A '(1 5 41 ) R1 'R y !@ U 'D% '( k  ;a61 ='9 ;^;1 L9 ;6<1 LN9! ;661   c9% ;\1 A H!;\I1!9AŠ'!J000 m+%Xp"A'(X*% @C'$%RQR!'/-W QXA "A'O23'!?Nl%/}% 2%)'CA ‹  GzG ;\< m U 'D%  | '( αzLL  GL "[R!QR'("A '(97R'"A1αzLL7 | $%A+ n + !Œ R ! '/1 !@ '/_"A!Œ[2dP@23'( '(  NV d /  C 23' 5 GL )"2d+!ŒR! '/!5O'#A$%RQ!2d '('R''/R!QXA1U'D%A QT%"2d'(αzLL1GL+" [ R ! Q R '( }% 'CA Lilium poilaneih9 3.1.1. Ảnh hưởng của α -NAA đến khả năng phát sinh hình thái của mô vẩy củ Bảng 1. Ảnh hưởng của α αα α-NAA đến khả năng phát sinh hình thái của mô vẩy củ Lilium poilanei Gapnep (sau 8 tuần nuôi cấy) CT α-NAA (mg/l) Tỷ lệ sống (%) Tạo callus (%) Tạo rễ (%) Tạo Chồi (%) Số chồi /mẫu cấy (chồi) 1 (ĐC) 0 100 0 0 0 0 2 0,1 96,67 0 20,00 40,00 1,13 3 0,5 90,00 0 50,00 26,67 0,87 4 1,0 86,67 0 73,33 10,00 0,40 LSD(5%) 0,18 CV(%) 2,5 Ghi chú: Nền môi trường: MS + 30g/l đường + 6,5 g/l agar, pH: 5,7, CT: Công thức, ĐC: đối chứng Nghiên cứu nhân nhanh in vitro cây hoa loa kèn (Lilium poilanei Gapnep) 746 i% \ %o 9 N…1 αzLL 23' .` !%)2•%)'CAm'7R' +!ŒR!QR'(}%'CA• 'R'')D'R'%QD'R' R'%1')D'@'D).` !%αzLL)'7*23R! Q R G"  U C '" 'R' ') D'1)'7!Œ R!QR 9 2,5'%!†*}%5'%!0b αzLLW'W'"[ R!5 ƒ  5 '/ d ) #A '( -) D' '7 .` !%01_αzLL1 '†*5'/' 5 <0b  !@ '/ 5 1I '/_}% 'CA ‡[/αzLLQ†*}%5ƒ [†*}%5'/'7B%2," • ') D' '7 .` !% _ αzLL † * 5 '/ '‚ '| 0b , !@ '/ 5 01< '/_}%'CA2XA*'.`!%αzLLd /C)2•%)'CA'7R' Nl' }%'CAR !QR 92,5'/1%AU†*5'/ !@'/U}%'CAC -)D'.`!%αzLLd/C 01_')"A'(@C•')D' A'!@'/U}%'CA,C51I '/_}%'CA!%\%o%)'CA 3.1.2. Ảnh hưởng của BA đến khả năng phát sinh hình thái của vẩy củ GL  'C P% | ! 2d %' 7 'A '7 R' Nl  [ !Œ 4 ' + .1 W' W' }% %) 'CA 92,5'/G=99=' !Œ1J00<m'‚ pU) 2•'> ."yi'7.`!%J1JµyGLW'3 C ' !Œ R ! '/ '( ) "A '( W*A1GL23'!?Nl, N" /  01 z 10 _ .` !%  ) 2•%)'CA'Ž'7R',!ŒR !QR'(}%'CAG"J•') D'@'D1).`!%GLQ) '7 !Œ R ! Q R C '" 'R' ') D''7.`!%GL)2•%)'CA '‚W'W'}%'CAR!QR 92,5'%!5'/‡[ /GLE01_U10_Q†* 5'%!5'/[2>DJ^1^6z a^1^6b 5 '%!  ^1^6 z 6I1IIb 5 '/1 / • !@ '/_}% 'CA 'Ž [ U5'Cd') D''7.`!% _ GL , J10I '/_}% 'CA 2 XA *'.`!%GL)2•%)'CA'7 R'NlR@@,!ŒR! Q R'(}%'CAgW'3>.` !% αzLL L%B ' *' R ! ) #A'(92,5'/ Bảng 2. Ảnh hưởng của BA đến khả năng tái sinh của mô vẩy củ Lilium poilanei Gapnep (sau 8 tuần nuôi cấy) CT BA (mg/l) Tỷ lệ sống (%) Tạo callus (%) Tạo rễ (%) Tạo Chồi (%) Số chồi /mẫu cấy (chồi) 1 (ĐC) 0 100 0 0 0 0 2 0,1 93,33 26,67 0 16,67 0,60 3 0,5 93,33 40,00 0 60,00 1,77 4 1,0 83,33 56,67 0 73,33 2,03 LSD(5%) 0,22 CV(%) 1,4 h'O{P)2•{yi•I0_2••^1a_1={a161-{-)D'1-{@'D Nguyễn Thị Phương Thảo, Nông Thị Huệ, Vũ Quang Khánh, Nguyễn Hữu Cường 747 , l' W' W' W' }% 'CA R ! Q R 9 2, 5 '/ Q .` !% GL  ) 2• %) 'CA ' + $%""$%-)D'@2%_GL '†*}%'CAR!5'/'5 J10I'/_}%'CA 3.1.3. Ảnh hưởng của BA và α -NAA đến khả năng phát sinh hình thái của vẩy củ [ ;6<1 y%!!9 m '‚  p $%RQR!QR}%'CAl %'  † * %B_'A  ) 2• %) 'CA W*A1!Œ+3 GL01_01a_αzLL01„01a 10_m'+$%"R23'%P '‚U%!@'/_}%'CA@,!ŒR! Q R '( ) #A '( G" I ‡ .` !%GLd/C01_+3αz LLE01z_Q!@'/U}% 'CA !• " No 2> D " E 10 '/_}% '| 01^I '/_}%   7 .`!%GLd/01a_+3 /αzLLQ!@'/U}%'CA '7B%2,[No-)D'01a_GL •01a_αzLL'!@'/U}% 'CA'C5J1^6'/_}%'CA%A U+l'[/αzLL U _Q!@'/U}%'CA"'‚ '|J1<0'/2XA'7TCAp1*' +3GLd/C,αzLL) '7R'Nl@@,!Œ5'/'()"A '(123'5GLd/01a+3, αzLL'7R'Nl@@,!Œ5'/ 2 XA ') D' @ C @ , !Œ 5'/'(}%'CA)2•yi'7.` !%01a_GL•01a_αzLL1!@'/ U}%'CA5J1^6'/ Bảng 3. Ảnh hưởng của BA và α αα α-NAA đến khả năng phát sinh hình thái của mô vẩy củ Lilium poilanei Gapnep (sau 8 tuần nuôi cấy) CT BA (mg/l) α-NAA (mg/l) Tỷ lệ sống (%) Tạo callus (%) Tạo rễ (%) Tạo Chồi (%) Số chồi /mẫu cấy (chồi) 1 0,1 93,33 10,00 16,67 33,33 1,10 2 0,5 93,33 16,67 20,00 20,00 0,80 3 0,1 1,0 86,67 20,00 33,33 10,00 0,63 4 0,1 86,67 23,33 6,67 50,00 1,90 5 0,5 83,33 26,67 13,33 76,67 2,67 6 0,5 1,0 90,00 36,67 20,00 63,33 2,40 LSD5% 0,25 CV% 1,6 h'O{P)2•{yi•I0_2••^1a_1={a161-{-)D' Hình 2. Sự phát sinh hình thái của mô vẩy củ hoa Lilium poilanei Gapnep h'O{Lyi•01_αzLL„Gyi•_GL„-yi•01a_GL•01a_αzLL A B C Nghiên cứu nhân nhanh in vitro cây hoa loa kèn (Lilium poilanei Gapnep) 748 3.2. Giai đoạn nhân nhanh 9 y%!9  ' !Œ ;^J 'A23'.`!%'') 2• %) 'CA !• W' W' !Œ 5 '/ '( }% 'CA ' , / •1 !Œ @ 3 'A  %B d /  C 'Ž '7 R' Nl W' 'Œ' ' $%R Q A=> 1+$%"'(W*" 2d '(αzLL+ !Œ5'/'() "A '( Lilium poilanei h9  . .R 'Ž m X n /  C '( αzLL'7R'Nl@>!,/ ' @ , !Œ 5 '/ -W Q XA !? Nl αzLL d /  01Ja _ + 3 , N" /GLE01a z1a_m'7 R' Nl @ @ , !Œ 4  '/ '( Lilium poilanei h9 • C '" 'R' ') D' '7 !Œ + 3 '(  'C A Q * !@ 4 ' > ‘ ! , @ 'D1 'R' '/ P% Q  'l '/ G" < ‡ '@ n /  αzLL d 01Ja_[No/GLQ*!@ 4 '/ 'Ž [ U %A U 'P% '%.Q'l'/'Ž"B%@ -l T * !@ 4 5 I10< o  'P% '%.Q'l'/5I1I'd') D''D01a_GL•01Ja_αzLL =*!@4'/'Cd')D''D _GL•01Ja_αzLL15<1Io %A U1  + l' [ /  GL U1a_Q*!@4'/'7B%2, "'|I16^o'P%'%.Q 'l '/'Ž"'‚'|J1Ja' 2 XAd/GL'+3,αzLLd /  C m D' '+ !Œ 4 '/ '( Lilium poilaneih9‡+$%"%23' 'Ž 2> Œ , + $%" '( %Aƒ ]%5''!Œ;;;17R' "mU'D%+%Xp*'!? Nl +3  _ GL•01J_αzLL @ 2%'!Œ 4'/R! '( @    S1 ' * !@ 4 '/ 5 <1< o G =99 =  ' !Œ1J00<1mQ) 2•4  W' 3 ' 'R' '/ 23' Q ER'S"A'(7)2•'> ." yi '7 .` !% J1J µy GL  J1; µy sLL ' * !@ 4 '/ R ' > ; '/_}%'CA!%\%o%)'CA2XA )2•@2%'4'/ Lilium poilaneih9R!yi'7.` !% _ GL • 01Ja_ αzLL1 ' * !@ 4 '( '/ 5 <1I o1 'P% ' %.Q'l'/5J1^<' Bảng 4. Ảnh hưởng của BA và α αα α-NAA đến khả năng nhân nhanh của chồi hoa Lilium poilanei Gapnep tái sinh (sau 6 tuần nuôi cấy) CT α-NAA (mg/l) BA (mg/l) Hệ số nhân chồi (lần) Chiều cao TB cụm chồi (cm) 1 0 1,62 1,92 2 0,5 3,04 3,13 3 1,0 4,13 2,64 4 0,25 1,5 3,76 2,25 LSD(5%) 0.26 CV(%) 4,40 Ghi chú: Nền môi trường: MS + 30g/l đường + 6,5 g/l agar, pH: 5,7, CT: Công thức Nguyễn Thị Phương Thảo, Nông Thị Huệ, Vũ Quang Khánh, Nguyễn Hữu Cường 749 Hình 3. Sự nhân nhanh của chồi Lilium poilanei Gapnep Lyi•_GL•01Ja_αzLL„Gyi•1a_GL•01Ja_αzLL 3.3. Tạo rễ cho chồi *'!?Nl5W@,!Œ ƒ'('4Am23'U'D%UP%@ 232N2C%‡%'!Œ1J00a„ c'  ' !Œ1J00I„ '7Juncus effusus 1 i  ' !Œ1J000 P  |'(  5 W @ , !Œ Q  ƒ in vitro82>CŒ'!Œ1;;\m ').@+$%"P*'.`!%_5 W'7R'Nl@'!ŒRT.ƒ '('4ALilium longiflorum  W * A1 .` !%  5 W  ) 2• 5 ƒ ,  23 E 01Ja _ +  _ )   W'W'!ŒQƒ'|'7R' Nl @ @ , !Œ ! 2d '( '/ Lilium poilanei h9 • ') D' ).`!%5WQ†*'/ ƒ'‚5<\1IIb17,*' .` !%  5 W , /  C 01Ja_ Q † * '/  ƒ  a\1IIb -) D' @ 2% ' *' 5 ƒ ' '/ Lilium poilaneih9_='† *5ƒ;I1IIbG"a2XA) 2•yi•I0_2••_=) 2•@CT'"D'/in vitro Qƒ Bảng 5: Ảnh hưởng của than hoạt tính (THT) đến khả năng ra rễ của chồi Lilium poilanei Gapnep (sau 4 tuần nuôi cấy) CT THT (g/lít) Tỷ lệ ra rễ (%) Chiều cao TB (cm/cây) Số lá/ cây (lá) 1 (ĐC) 0 48,33 4,4 5,86 2 0,25 58,33 4,4 5,63 3 0,50 70,00 4,3 5,23 4 0,75 81,66 4,2 5,14 5 1 93,33 4,2 5,03 Ghi chú: Nền môi trường: MS + 30g/l đường + 6,5 g/l agar, pH: 5,7, CT: Công thức, ĐC: đối chứng A B Nghiên cứu nhân nhanh in vitro cây hoa loa kèn (Lilium poilanei Gapnep) 750 <‡ˆur y)2•yi.`!%01a_GL 01a_αzLL'*%$%"@C 5R!'/E)"A'(,†* '/ R !  \I1II !@ '/_}%  J1^6 '/!%\%o U ) 2• 4 1 * !@ 4'l'/'C5<1Io!% ^ %o1'P%'%.Q'l'/5J1^< 'U) 2•yi'D _GL 01Ja_αLL i?Nl)2•yi.`!%_ 5W'†*ƒ5;I1II!%<%o vsstu=Ly‡=‰M Allen, T.C., (1974). Control of viruses in lilies. In: Lilies and other Liliaceae. Royal Horticultural Society. Anderson, W.C., (1977). Rapid propagation of Lilium, cv, Red Carpet, Invitro 13: 145 Beattie D.J. and White J.W. (1993). Liliumhybrids and species. In: De Hertogh A. and Le Nard M. (eds), The Physiology of Flower Bulbs. Elsevier, Amsterdam, pp. 423-454. Bong Hee Hana, Hee Ju Yu, Byeoung Woo Yae, Kee Yeoup Peak (2004). In vitro micropropagation of Lilium longiflorum ‘Georgia’ by shoot formation as influenced by addition of liquid medium. Scientia Horticulturae 103 (2004) 39-49 Đặng Văn Đông, Đinh Thế Lộc (2003). Công nghệ trồng hoa cho thu nhập cao. Cây hoa loa kèn. Nhà xuất bản Lao động xã hội, trang 7- 9 De Jong PC. (1974). Some notes on the evolution of lilies. North American Loa kèn Yearbook 27: 23-28. Dương Tấn Nhựt, Bùi Văn Lê, Michico Tanaa, K. Trần Thanh Vân (2000). Effects of activated charcoal, explant size, explant position and sucrose concentration on plant and shoot regeneration of Lilium longiflorum via young stem culture. Plant Growth Regulation, 33: 59-65. Hackett, W.P., (1969). Aseptic multiplication of loa kèn bublets of bulb sacle. Proc. Int Plant. Propag. Soc. 19: 105 - 108. Krug MGZ, Stipp LCL, Rodriguez APM & Mendes BMJ (2005). “In vitro Organogensis in Watermelon cotyledons”, Pesp agropec. Bras.Brasilia, 40, 9, pp.861 - 865. Murashige (1974). “Plant propagation throwgh tissue cultures” Ann. Rev. Plant Physiol v.25, pp. 135-166. Murashige and Skoog.F (1962). “Arevised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures”, Physiol plant v.15, pp. 473- 497. Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Nhẫn (1999). Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô trong công tác nhân giống hoa loa kèn. Kết quả nghiên cứu khoa học 1995 - 1999. NXB Nông nghiệp Novak, F.J., and Petru, E., (1981). Tissue culture propagation of Lilium hybrids. Scientia Horticulture, 14: 19 - 199 Phạm Hoàng Hộ (1999). Cây cỏ Việt Nam, quyển III, trang 480 Pirinc V, Onay A, Yildirim H, Adiyaman F, Isikalan C & Basaran D, (2003). “Adventitious shoot organogenesis and plant regeneration from cotyledons of diploid Diyarbakir watermelon (Citrullus lanatus cv. “Surme”)”, Turk 5 biol, 101 - 105. Robb, S.M., (1957). The culture of excised tissue form bulb scale of Lilium speciosum Thun. Journal of Experimental Botany, 1957, vol. 8, no. 3, p. 348-352. Sarma, K.S. and Rogers, S.M.D (2000). Plant regeneration from seedling explants of Juncus effuses. Aquatic Botany, Volume 68, Number 3, pp. 239-247(9) Takayama, S., and Misawa, M.A., (1983). Scheme for mass propagation of Lilium in vitro. Physiologia Plantarum. 48: 121 - 125 Van Aartrijk, Blom. Barnhoorn (1984). “Interactions between NAA wounding temperature and TIBA in their effects on asventitions sprout formation on Lilium bulb tissue”, Plant Tissue Culture, pp.131-132. Vasrshney, A., Dahwan, V and Srivastava, P.S., (2000). A protocol for in vitro mass propagation of Asiatic hybrids of loa kèn through liquid stationary culture. In vitro Cellular and Development Biology - Plant. 36: 383 - 391. Nguyễn Văn Song, Nguyễn Thị Ngọc Thương, Đào Thị Hồng Ngân, Phạm Thị Hương, 751 . CỨU NHÂN NHANH IN VITRO CÂY HOA LOA KÈN (NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH IN VITRO CÂY HOA LOA KÈN ( NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH IN VITRO CÂY HOA LOA KÈN ( Lilium poilanei. h'O{Lyi•01_αzLL„Gyi•_GL„-yi•01a_GL•01a_αzLL A B C Nghiên cứu nhân nhanh in vitro cây hoa loa kèn (Lilium poilanei Gapnep) 748 3.2. Giai đoạn nhân nhanh 9 y%!9 