Vũ Hồng Sơn ĐHBK HN 39 CHƯƠNG 6 DƯ LƯỢNG THUỐC BVTV 1 Giới thiệu chung 1 Nguồn gốc của thuốc bảo vệ thực vật 1 Định nghĩa 2 Lịch sử phát minh của thuốc BVTV Giai đoạn 1 Trước những năm 1940 Giai đoạn[.]
CHƯƠNG DƯ LƯỢNG THUỐC BVTV Giới thiệu chung Nguồn gốc thuốc bảo vệ thực vật Định nghĩa Lịch sử phát minh thuốc BVTV Giai đoạn 1: Trước năm 1940 Giai đoạn 2: Từ 1940 đến 1960 Giai đoạn 3: Từ 1960 đến 1980 Giai đoạn 4: Từ năm 1980 trở lại Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN 39 Phân loại thuốc BVTV Phân loại theo đối tượng phòng trừ Dựa vào đặc tính tiêu diệt dịch hại thuốc để chia thành: – Thuốc trừ sâu – Thuốc trừ bệnh – Thuốc trừ cỏ – Thuốc trừ chuột – Thuốc trừ nhện – Thuốc trừ ốc sên – Thuốc điều tiết sinh trưởng trồng 1.2.2 Phân loại theo gốc hóa học Dựa theo cấu tạo hóa học ta có nhóm sau: – Thuốc trừ sâu: có nhóm là: • Nhóm thuốc thảo mộc • Nhóm Clo hữu • Nhóm Lân hữu • Nhóm Carbamate Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN PhD Vũ Hồng Sơn-ĐHBK 40 20 1.2.2 Phân loại theo gốc hóa học Dựa theo cấu tạo hóa học ta có nhóm sau: – Thuốc trừ sâu: có nhóm là: • Nhóm thuốc thảo mộc • Nhóm Clo hữu • Nhóm Lân hữu • Nhóm Carbamate • Nhóm Pyrethroide (cúc tổng hợp • Các hợp chất Pheromone • Các chất điều hịa sinh trưởng trùng • Nhóm thuốc vi sinh Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN 41 – Thuốc trừ bệnh: gồm nhóm lớn nhóm vơ nhóm hữu • Nhóm thuốc vơ cơ: chủ yếu nhóm hóa học: + Nhóm đồng (Cu) + Nhóm lưu huỳnh (S) + Nhóm thủy ngân (Hg) • Nhóm thuốc hữu cơ: có nhiều nhóm khác sử dụng: + Nhóm lân hữu + Nhóm Dithiocarbamate + Nhóm Triazole + Nhóm Dicarboximit + Nhóm thuốc sinh học – Thuốc trừ cỏ: có nhóm chính: • Nhóm vơ • Nhóm hữu Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN PhD Vũ Hồng Sơn-ĐHBK 42 21 – Thuốc trừ chuột: có nhóm • Nhóm thảo mộc: mã tiền, hành biển • Nhóm vơ cơ: điển hình chất Asen, kẽm photpho • Nhóm hữu • Nhóm thuốc vi sinh: chủ yếu vi khuẩn Salmonella gây bệnh cho chuột – Chất điều hòa sinh trưởng trồng: gồm chất kích thích sinh trưởng (Auxin Gibberellin, Cytkynin ) chất ức chế sinh trưởng (Paclobutatrazol ) – Thuốc trừ tuyến trùng: gồm nhiều nhóm hóa học nhóm Halogen (chất Methyl bromit ), nhóm lân hữu (Prophos ) Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN 43 Phương pháp xác định Đường hướng chung phương pháp xác định gồm bước: • Tách chiết, tinh đặc dịch chiết • Tách phân đoạn xác định loại thuốc BVTV Tách chiết làm Chiết dung môi hữu a Mẫu chất béo (rau, hoa ) Cácdung mơi thường dùng: • Aceton CH2Cl2 • Hỗn hợp Aceton/Hexan • Acetonitril Ete petrol • Acetonitril CHCl3 • Izopropanol Ete petrol • Izopropanol Benzen • CH2Cl2 • Hỗn hợp Ete etylic/Ete petrol (1/1V) Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN PhD Vũ Hồng Sơn-ĐHBK 44 22 b Mẫu nhiều chất béo – Phương pháp 1: Quá trình chiết thực sắc ký hấp phụ Quá trình rửa giải thực hỗn hợp Ete petrol/CH2Cl2 (65/35) – Phương pháp 2: Trước hết thực chiết dung môi hữu theo cách: • Chiết Soxhlet với Ete petrol • Chiết nóng Hexan • Chiết băng hỗn hợp Ete etylic/Ete petrol • Chiết hỗn hợp Aceton/Ete petrol • Chiết hỗn hợp Ete petrol/Cồn Tiếp theo tách hóa chất BVTC chất béo cách sau: • Chiết hỗn hợp Acetonitril/Hexan Dimetylformamide/Hexan • Chiết sắc ký hấp phụ với chất nhồi Florisil nhôm Các chất Clo hữu Lân hữu tắch với dung dịch rửa giải hỗn hợp Ete etylic- Ete petrol Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN 45 Chiết chưng cất theo nước (bộ chưng cất Dean-Stark) Phương pháp “Headspace” Xác định dư lượng thuốc BVTV Phương pháp hóa sinh a Phương pháp enzym b Phương pháp GT-test Kit Phương pháp sinh học Phương pháp cực phổ Phương pháp quang phổ Phương pháp so màu Phương pháp sắc ký c Sắcký giấy d Sắc ký mỏng e Sắc ký khí (GC) – Detecter cộng kết điện tử (ECD) – Detecter ion hóa lửa (FID) Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN PhD Vũ Hồng Sơn-ĐHBK 46 23 – Detecter vi điện lượng DOHRMAN – Một số loại Detecter khác: • Detecter quang kế lửa (FPD) • Detecter dẫn điện d Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) – Quang phổ kế (λ: 220-280nm) – Huỳnh quang – Detecter ECD – Kìm hãm Cholinesteraza – Cực phổ – Detecter điện hóa (định lượng Carbamate) 2.2.7 Các phương pháp khác Đây phương pháp dùng xác định chất Polychlorobiphenyle (PCB) – Sắc ký khí dùng cột mao quản – Sắc ký khí/khối phổ (GC/MS) – Cộng hưởng từ hạt nhân – Phương pháp miễn dịch học (ELISA) dựa nguyên tắc phản ứng kháng nguyên-kháng thể Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN 47 CHƯƠNG CHẤT KHÁNG SINH Giới thiệu chung – Ảnh hưởng đến sức khỏe người: gây hậu khơng có lợi • Gây dị ứng • Tạo chủng vi sinh vật có khả kháng kháng sinh • Tạo cân q trình tiêu hóa thức ăn (nguồn gốc thực vật) – Ảnh hưởng đến cơng nghệ: có mặt chất kháng sinh sữa thịt gây tác động khơng có lợi cho q trình sản xuất phomát chế biến thịt Các phương pháp xác định chất kháng sinh hay dùng xếp thành nhóm: – Phương pháp vi sinh – Phương pháp điện di – Phương pháp hóa-lý Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN PhD Vũ Hồng Sơn-ĐHBK 48 24 Phương pháp vi sinh Các phương pháp môi trường lỏng Cơ sở phương pháp Các phương pháp hay dùng – Khử màu thị • Test Resazurine: phát Penicilline 0.02-0.05UI/ml sữa Lactobacillus bulgaricus • Test CTT (Chlorure de triphényltétrazolium): phát Penicilline 0.005UI/ml sữa Streptococus thermophilus • Test tím Bromocresol: phát Penicilline 0.05 UI /ml sữa Streptococus thermophilus • Test xanh methylene: phát Penicilline 0.02 UI /ml sữa Streptococus thermophilus – Đo thời gian đông tụ – Đo độ axit – Đo độ đục Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN 49 Các phương pháp môi trường thạch Cơ sở phương pháp Phương pháp tiến hành – Chọn môi trường thạch – Chuẩn bị mẫu: mẫu nghiên cứu chuẩn bị sau: • Để nguyên dạng (sữa) • Hịa tan dung dịch nước muối sinh lý 9% vô trùng (sữa đông, phomat, thực phẩm bổ sung kháng sinh) • Chiết dung mơi (thịt) với dung môi: metanol, metanol/dung dịch đệm bicarbonate pH8 (1/1), H2O/dung dịch đệm bicarbonate pH8 (3/7) Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN PhD Vũ Hồng Sơn-ĐHBK 50 25 – Chủng vi sinh vật • Bacillus stearothermophilus var Calidolactis C953: phương pháp Galesloot Hassing, phát chất kháng sinh sữa tươi, nhạy với Penicilline • Bacillus subtilis ATCC 6633: (American type culture collection) phương pháp Silvermann-Kosikowski, STOP (Swap test on promises) • Sarcina lutea ATCC 9341: phương pháp Carter • Staphylococcus aureus: phương pháp Jacque-Steeg • Bacillus magaterium ATCC 9855: phương pháp Read cộng sự, CAST (Calf antibiotique and sulfa test) • Micrococcus luteus Bacillus cereus: phương pháp MIT (Microbial inhibition test) Ngoài số chủng vi sinh vật nhạy cảm khác hay sử dụng như: Micrococcus flavus, Escherichia coli – Cấy mẫu – Giải thích kết Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN 51 Các phương pháp khác – Sự thay đổi hình thái học – Phương pháp Kosikowski Kết luận Phương pháp điện di Phương pháp có ưu điểm: – Loại trừ ảnh hưởng chất khác – Xác định loại chất kháng sinh – Định lượng kháng sinh – Giới hạn phát giảm xuống đáng kể (tính cho 1ml sữa): • Penicilline 0,0005 UI • Chloramphenicol 2,5 μg • Streptomycine 0,1 μg • Chlortetracyline 0,05 μg • Terramycine 0,05 μg • Neomycine 0,1 μg Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN PhD Vũ Hồng Sơn-ĐHBK 52 26 ... petrol (1/1V) Vũ Hồng Sơn- ĐHBK HN PhD Vũ Hồng Sơn- ĐHBK 44 22 b Mẫu nhiều chất béo – Phương pháp 1: Quá trình chiết thực sắc ký hấp phụ Quá trình rửa giải thực hỗn hợp Ete petrol/CH2Cl2 (65 /35) – Phương... phomat, thực phẩm bổ sung kháng sinh) • Chiết dung mơi (thịt) với dung môi: metanol, metanol/dung dịch đệm bicarbonate pH8 (1/1), H2O/dung dịch đệm bicarbonate pH8 (3 /7) Vũ Hồng Sơn- ĐHBK HN PhD Vũ Hồng. .. pháp xác định chất kháng sinh hay dùng xếp thành nhóm: – Phương pháp vi sinh – Phương pháp điện di – Phương pháp hóa-lý Vũ Hồng Sơn- ĐHBK HN PhD Vũ Hồng Sơn- ĐHBK 48 24 Phương pháp vi sinh Các phương