Vũ Hồng Sơn ĐHBK HN 27 6 Định lượng gluxit bằng phương pháp sắc ký điện di – Phương pháp sắc ký điện di trên giấy – Phương pháp sắc ký cột – Phương pháp sắc ký khí (GC) – Phương pháp sắc ký lỏng hiệu[.]
6 Định lượng gluxit phương pháp sắc ký-điện di – Phương pháp sắc ký-điện di giấy – Phương pháp sắc ký cột – Phương pháp sắc ký khí (GC) – Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN 27 CHƯƠNG LIPIT 1 2 Mục đích Định lượng lipit Trích ly trực tiếp Trích ly sau xử lý hóa học Nghiên cứu thành phần lipit Nghiên cứu cấu trúc – Nghiên cứu triglyxerit HPLC – Nghiên cứu axit béo vị trí Phân tích axit béo GC Chất khơng xà phịng hóa Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN PhD Vũ Hồng Sơn-ĐHBK 28 14 Nghiên cứu chất lượng lipit Đo mức độ thủy phân lipit – Trị số axit 4.3.2 Đo mức độ oxy hóa – Trị số peroxyt (PV) – Phản ứng Kreiss – Trị số p-anisidin (p-AnV) – Phản ứng TBA – Phổ hấp thụ tử ngoại – Xác định axit oxy hóa – Phương pháp Rancimat Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN 29 CHƯƠNG PROTEIN Định lượng protein N tổng số Hệ số chuyển đổi từ N tổng đạm tổng – Protein động vật: 6,25 – Protein thực vật: 5,7 5.1.1 Xác định N amoniac • Vơ hóa Chuyển N hữu thành NH3 (Vơ hóa axit H2SO4) • Chuẩn độ NH3 – Phương pháp Kjeldahl Cất NH3 cất đạm Kjeldahl (NH4)2SO4 + NaOH NH3 + H2O + Na2SO4 Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN PhD Vũ Hồng Sơn-ĐHBK 30 15 Thu NH3: phương pháp • Dùng H3BO3 với thuốc thử Taxiro NH4OH + H3BO3 (NH4)2B4O7 + H2O (màu xanh) Chuẩn tetraborat amon (NH4)2B4O7 + H2SO4 (NH4)2SO4 + H3BO3 (màu tím) • Dùng H2SO4 NH4OH + H2SO4 (NH4)2SO4 + H2O Chuẩn H2SO4 dư NaOH Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN 31 – Phương pháp chuẩn độ điện Dùng điện cực amoniac: chứa NH4Cl ngăn cách với bên ngồi màng kỵ H2O có khả cho khí qua Tại điện cực thiết lập cân bằng: NH3 + H2O ↔ NH4+ + OHE = Eo + 0,059lg[NH3] Định luật [NH4+] khoảng 10-6M-1M Để toàn NH4+ NH3 cần tạo pH >11 Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN PhD Vũ Hồng Sơn-ĐHBK 32 16 – Phương pháp so màu • Dùng thuốc thử NESSLER Thuốc thử Nessler (HgI + KI) + NH4+ phức màu da cam, hấp thụ bước sóng 389nm • Phương pháp Berthelot NH4+ + fenat Na + hypoclorit phức màu xanh, hấp thụ cức đại 630nm • Phản ứng với xalixilat NH4+ + HOC6H4COOH (với có mặt clo) cho độ nhạy gấp 200 lần phương pháp Berthelot có mặt nitroxianat Phương pháp sử dụng rộng rãi dễ dàng tự động hóa Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN Assay UV absorption Bicinchoninic acid Bradford or Coomassie brilliant blue Lowry PhD Vũ Hồng Sơn-ĐHBK absorption mechanism detection limit advantages 0.1-100 ug/ml small sample volume, rapid, low cost 280 nm Tyrosine and tryptophan absorption 562 nm copper reduction (Cu2+ to Cu1+), 20-2000 ug/ml BCA reaction with Cu1+ 470 nm 750 nm 33 complex formation between 20-2000 ug/ml Coomassie brilliant blue dye and proteins copper reduction by proteins, Folin-Ciocalteu 10-1000 ug/ml reduction by the copper-protein complex Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN compatible with detergents and denaturating agents, low variability disadvantages incompatible with detergents and denaturating agents, high variability low or no compatibility with reducing agents compatible with incompatible reducing agents, with detergents rapid high sensitivity and precision incompatible with detergents and reducing agents, long procedure 34 17 5.1.2 Phương pháp nhiệt phân (Dumas) – Nguyên tắc: dựa tro hóa mẫu vật với ự có mặt CuO Cacbon hydro bị oxy hóa tạo CO2 H2O Nito tạo thành N2 định lượng detector dẫn nhiệt Phương pháp sử dụng rộng rãi (TCVN 7598:2007) ưu điểm thời gian phân tích nhanh (3-5 min), gây nhiễm mơi trường cho kết tốt so sánh với phương pháp Kjeldahl PhD Vũ Hồng Sơn-ĐHBK Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN 35 Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN 36 18 5.1.3 Phương pháp kích hoạt notron – Cơ sở phương pháp: nito kích hoạt hạt notron chuyển động nhanh Đo xạ phát nguyên tử nito trở trạng thái bản, từ xác định lượng đạm tổng N14 + n N13 + 2 Nếu có mặt P hay Si gây ảnh hưởng đến kết quả, nhiên xạ chúng có chu kỳ bán hủy 2-5 Do định lượng nito sau mà khơng gặp khó khăn 5.1.4 Phương pháp kích hoạt proton N14 + N1 O14 + n O14 + + + N14 Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN 37 Định tính, định lượng Pr phương pháp hóa học – Phản ứng Biure – Phản ứng Lowry – Phản ứng Ninhydrin – Chuẩn độ formol – Định lương Pr cách gắn chất màu Định lượng Pr phương pháp vật lý – Hấp thụ tử ngoại – Phổ huỳnh quang –Hấp thụ hồng ngoại (IR) cận hồng ngoại (NIR) A (%) = K1AlgR1 + K2AlgR2 +…+ K12AlgR12 + K13A Giá trị dinh dưỡng protein • Định lượng hóa học • Giá trị sinh học – Hệ số tiêu hóa Pr – Giá trị sinh học thực Pr – Hệ số sử dụng Pr PhD Vũ Hồng Sơn-ĐHBK Vũ Hồng Sơn-ĐHBK HN 38 19 ... NH4OH + H3BO3 (NH4)2B4O7 + H2O (màu xanh) Chuẩn tetraborat amon (NH4)2B4O7 + H2SO4 (NH4)2SO4 + H3BO3 (màu tím) • Dùng H2SO4 NH4OH + H2SO4 (NH4)2SO4 + H2O Chuẩn H2SO4 dư NaOH Vũ Hồng Sơn- ĐHBK... rãi (TCVN 759 8:2007) ưu điểm thời gian phân tích nhanh (3 -5 min), gây nhiễm mơi trường cho kết tốt so sánh với phương pháp Kjeldahl PhD Vũ Hồng Sơn- ĐHBK Vũ Hồng Sơn- ĐHBK HN 35 Vũ Hồng Sơn- ĐHBK... Chuyển N hữu thành NH3 (Vơ hóa axit H2SO4) • Chuẩn độ NH3 – Phương pháp Kjeldahl Cất NH3 cất đạm Kjeldahl (NH4)2SO4 + NaOH NH3 + H2O + Na2SO4 Vũ Hồng Sơn- ĐHBK HN PhD Vũ Hồng Sơn- ĐHBK 30 15 Thu NH3: