Khảo sát tình hình nhiễm và sự đề kháng kháng sinh của staphylococcus aureus tại bệnh viện đa khoa trung ương cần thơ năm 2019 2020

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGUYỄN MINH CHÂU KHẢO SÁT TÌNH HÌNH NHIỄM VÀ SỰ ĐỀ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA STAPHYLOCOCCUS AUREUS TẠI BỆNH VIỆN ĐA KHOA TRUNG ƯƠNG CẦN THƠ NĂM 2019-2020 LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC CẦN THƠ – 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGUYỄN MINH CHÂU KHẢO SÁT TÌNH HÌNH NHIỄM VÀ SỰ ĐỀ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA STAPHYLOCOCCUS AUREUS TẠI BỆNH VIỆN ĐA KHOA TRUNG ƯƠNG CẦN THƠ NĂM 2019-2020 Chuyên ngành: Kỹ thuật Xét Nghiệm Y học Mã số: 8.72.06.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Trần Đỗ Hùng TS Dương Thị Loan CẦN THƠ – 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận văn Nguyễn Minh Châu LỜI CẢM ƠN Sau hai năm học tập, giúp đỡ nhà trường, Thầy, Cô, bạn bè, đồng nghiệp gia đình, tơi hồn thành nhiệm vụ học tập luận văn tốt nghiệp Để có kết này, trước tiên cho phép gửi lời cảm ơn chân thành tới BS Trần Minh Châu, Giám đốc Phòng khám Đa khoa Ánh Thủy - người Thầy - người anh tạo điều kiện cho tơi tham gia khóa học đặt cho mục tiêu tốt đẹp mà phải thực sau tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu Phòng Sau Đại học trường Đại học Y Dược Cần Thơ tạo điều kiện cho suốt trình học tập Với lịng kính trọng biết ơn, xin chân thành cảm ơn PGS Trần Đỗ Hùng, TS Dương Thị Loan giúp đỡ, động viên, khích lệ tơi suốt q trình học tập hồn thành luận văn tốt nghiệp Tơi xin chân thành cảm ơn BS Nguyễn Thị Diệu Hiền, toàn thể anh, chị, em khoa Vi sinh, bệnh viện Đa khoa Trung ương Cần Thơ tận tình giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới người thân gia đình Đó tổ ấm với điểm tựa tinh thần vững suốt trình học tập sống Trân trọng biết ơn Tác giả luận văn Nguyễn Minh Châu MỤC LỤC Trang TRANG PHỤ BÌA LỜI CAM ĐOAN LỜI CÁM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC SƠ ĐỒ - HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Staphylococci Gram dương Staphylococcus aureus 1.2 Kháng sinh đề kháng kháng sinh Staphylococcus aureus 10 1.3 Các nghiên cứu tình hình nhiễm đề kháng kháng sinh Staphylococcus aureus 14 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 2.3 Đạo đức nghiên cứu 35 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 36 3.1 Tình hình nhiễm Staphylococcus aureus Bệnh viện Đa khoa Trung ương Cần Thơ năm 2019-2020 36 3.2 Tình hình đề kháng kháng sinh Staphylococcus aureus 41 Chương 4: BÀN LUẬN 52 4.1 Tình hình nhiễm Staphylococcus aureus Bệnh viện Đa khoa Trung ương Cần Thơ năm 2019-2020 52 4.2 Tình hình đề kháng kháng sinh Staphylococcus aureus Bệnh viện Đa khoa Trung ương Cần Thơ năm 2019-2020 56 KẾT LUẬN 66 KIẾN NGHỊ ………………………………………………………… TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH SÁCH BỆNH NHÂN THAM GIA NGHIÊN CỨU 67 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tiếng Anh Asian Network for ANSORP Surveillance of Resistance Pathogens ATCC CDC CLSI Tiếng Việt Mạng lưới giám sát mầm bệnh kháng thuốc châu Á American Type Culture Bộ sưu tập chủng chuẩn Collection Mỹ The Centers for Disease Trung tâm kiểm sốt phịng Control and Prevention ngừa dịch bệnh Hoa Kỳ Clinical and Laboratory Viện tiêu chuẩn lâm sàng Standards Institute XN Hoa Kỳ Chất lượng xét nghiệm CLXN CFU Colony Forming Unit Đơn vị hình thái khúm khuẩn CLI Clindamycin Kháng sinh Clindamycin CIP Ciprofloxacin Kháng sinh Ciprofloxacin CTX Cefotaxime Kháng sinh Cefotaxime Dx Doxycyclin Kháng sinh Doxycyclin ERY Erythromycin Kháng sinh Erythromycin FUC Fusidic acid Kháng sinh Fusidic acid FUR Nitrofurantoin Kháng sinh Nitrofurantoin GEN Gentamycin Kháng sinh Gentamycin LNZ Linezolid Kháng sinh Linezolid LVX Levofloxacin Kháng sinh Levofloxacin MFX Moxifloxacin Kháng sinh Moxifloxacin MRS Methicilin Resistant Staphylococcus Tụ cầu kháng Methicillin Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt Methicilin Resistant Staphylococcus aureus kháng Staphylococcus aureus Methicillin Methicilin Susceptible Staphylococcus aureus nhạy Staphylococcus aureus Methicillin National Center for Trung tâm Thông tin Công Biotechnology nghệ sinh học Quốc gia (Hoa Information Kỳ) NIT Nitrofurantonin Kháng sinh Nitrofurantonin Ng Acid nalidicid Kháng sinh Acid nalidicid OXA Oxacillin Kháng sinh Oxacillin PEN Penicilline Kháng sinh Penicilline QDA Quinupristin-dalfopristin RIF Rifampicin Kháng sinh Rifampicin TCY Tetracyclin Kháng sinh Tetracyclin TGC Tigecyclin Kháng sinh Tigecyclin VAN Vancomycin Kháng sinh Vancomycin Vancomycin intermediate S.aureus giảm nhạy cảm với Staphylococcus aureus Vancomycin Vancomycin resistant Staphylococcus aureus kháng Staphylococcus aureus Vancomycin MRSA MSSA NCBI VISA VRSA Kháng sinh Quinupristindalfopristin DANH MỤC BẢNG Tên bảng Số trang Bảng 2.1 Thang điểm Barlett dùng đánh giá mẫu đàm 24 Bảng 2.2 Các kháng sinh FDA khuyến cáo thử nghiệm cho 31 Staphylococci Bảng 2.3 Khoảng cho phép chủng vi khuẩn S aureus ATCC 32 chuẩn sử dụng làm QC Bảng 3.1 Tỷ lệ giới tính nhóm tuổi bệnh nhân lấy 36 mẫu Bảng 3.2 Tỷ lệ Staphylococci theo loại bệnh phẩm 37 Bảng 3.3 Tỷ lệ S aureus phân lập từ mẫu bệnh phẩm 37 Bảng 3.4 Mối liên quan giới với chủng vi khuẩn 38 Bảng 3.5 Mối liên quan nhóm tuổi với chủng vi khuẩn 38 Bảng 3.6 Mối liên quan loại bệnh phẩm với chủng vi khuẩn 39 Bảng 3.7 Tỷ lệ phân bố S.aureus khoa phòng 39 Bảng 3.8 Tỷ lệ nhiễm S aureus phân bố theo loại bệnh phẩm 40 Bảng 3.9 Tỷ lệ đề kháng kháng sinh S.aureus mẫu 41 bệnh phẩm Bảng 3.10 Mối liên quan đề kháng kháng sinh S aureus theo 42 nhóm tuổi Bảng 3.11 Tỷ lệ đề kháng kháng sinh MRSA MSSA 49 Bảng 3.12 Tỷ lệ MIC Vancomycine MRSA MSSA 51 Bảng 4.1 Tỉ lệ đề kháng kháng sinh S aureus theo tác giả 54 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Tên biểu đồ Số trang Biểu đồ 3.1 Tỷ lệ đề kháng kháng sinh S aureus bệnh phẩm mủ 45 Biểu đồ 3.2 Tỷ lệ đề kháng kháng sinh S aureus bệnh phẩm 46 đàm Biểu đồ 3.3 Tỉ lệ đề kháng kháng sinh S aureus bệnh phẩm máu 47 Biểu đồ 3.4 Tỉ lệ đề kháng đa kháng sinh S aureus 48 Biểu đồ 3.5 Tỉ lệ MRSA tổng số S.aureus thực kháng sinh đồ 48 10 Nguyễn Văn Kính (2010), "Phân tích thực trạng sử dụng kháng sinh kháng kháng sinh Việt Nam ", CDDEP Disease Dynamics, Economic Policy, tr 60 11 Cao Minh Nga (2008), "Sự kháng thuốc vi khuẩn gây bệnh thường gặp bệnh viện Thống Nhất năm 2006", Tạp chí Y Học 12, tr 1-8 12 Đỗ Thị Thúy Nga (2011), Quy trình thao tác chuẩn thử nghiệm tính nhạy cảm kháng sinh - Tiêu chuẩn đọc kết kháng sinh đồ M100S21, 69 13 Trần Thị Thanh Nga (2011), "Đặc điểm nhiễm khuẩn đề kháng kháng sinh bệnh viện Chợ Rẫy năm 2009-2010", Y Học TP Hồ Chí Minh Tập 15, tr 14 Trần Thái Ngọc (2011), Nghiên cứu đề kháng kháng sinh sinh enzyme beta-lactamase Staphylococcus aureus dược phân lập bệnh phẩm bệnh viện đa khoa trung ương Cần Thơ năm 2010-2011, Đại học Cần Thơ 15 Trần Văn Ngọc (2015), "Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) meropenem, imipenem vancomycin vi khuẩn gây viêm phổi bệnh viện Chợ Rẫy", tr 24 16 Trần Văn Ngọc (2017), "Thực trạng đề kháng kháng sinh viêm phổi bệnh viện viêm phổi thở máy Việt Nam", Tạp chí Hội hơ hấp Việt Nam 4, tr 95 17 Nguyễn Hữu An cộng (2013), "Tỉ lệ đề kháng kháng sinh Staphylococcus aureus mẫu bệnh phẩm viện Pasteur Tp.Hcm", Tạp chí Y học dự phòng XXIII(10), tr 270 - 275 18 Trần Văn Ngọc Nguyễn Văn Thành, Phạm Hùng Vân, Nguyễn Đình Duy, (2017), "Tình hình nguy nhiễm trùng hơ hấp cộng đồng vi khuẩn khó điều trị nhập viện khoa nội", Tạp chí Hơi Hơ hấp Việt Nam, tr 95 19 Lạc Thiên Như, Cao Hữu Nghĩa (2012), Khảo sát đề kháng kháng sinh Staphylococcus aureus viện Pasteur thành phố Hồ Chí Minh từ tháng 5-7/2012, Công nghệ sinh học, Kỹ thuật cơng nghệ TP.HCM 20 Phạm Hùng Vân (2013), Vai trị ý nghĩa kết kháng sinh đồ tình hình đề kháng kháng sinh 21 Tàu Gia Phú (2020), "Sơ lược điều trị Staphylococcus aureus kháng thuốc bối cảnh nay", Pubmed, tr 10 22 Lê Văn Phủng (2009), Vi sinh vật y học, Bộ Y tế 23 Trần Thị Quyên (2012), Khảo sát kháng kháng sinh Staphyloccus aureus chủng Staphylococcus spp Tại Bệnh viện Nhân Dân Gia Định Đại học sư phạm Thành Phố Hồ Chí Minh 24 Bộ Y tế (2015), Hướng dẫn sử dụng kháng sinh 25 Bộ Y tế (2017), Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành Vi sinh Y học 26 Bộ Y tế (2017), Hướng dẫn thực hành kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng 27 Trần Thị Thanh Nga, Trương Thiên Phú, (2018), "Tỷ lệ nhiễm Staphylococcus aureus cầu khuẩn Gram dương đề kháng kháng sinh ci khuẩn bệnh viện Chợ Rẫy từ tháng 01/2013 đến tháng 12/2015", Y Học TP Hồ Chí Minh 22(3), tr 72-79 28 Viện vệ sinh dịch tể Trung ương (2014), Báo cáo tổng quan đề kháng với kháng sinh đáp ứng WHO với kháng thuốc tồn cầu 29 Phạm Hùng Vân &Phạm Thái Bình (2005), "Tình hình đề kháng kháng sinh vi khuẩn Staphylococcus aureus Kết nghiên cứu đa trung tâm thực 235 chủng vi khuẩn hiệu in vitro linezolide.", Tạp chí y học thực hành Cơng trình nghiên cứu khoa học - hội nghị bệnh phổi toàn quốc Cần Thơ - 2005(513), tr 244-248 30 Phạm Hùng Vân &Phạm Thái Bình (2013), Khán sinh- Đề kháng kháng sinh- Kỹ thuật kháng sinh đồ- Các vấn đề thường gặp, Nhà xuất Y học 31 Nguyễn Văn Vinh (2011), "Tìm hiểu tính kháng kháng sinh Staphylococcus aureus phân lập bệnh nhân Viện Pasteur Nha Trang năm 2011", Y Học TP Hồ Chí Minh 25, tr 60-69 Tiếng Anh 32 Biomerieux (2009), VITEK Compact Instrument User manual 33 Biomerieux (2010), VITEK - COMPACT Software user manual 34 Biomerieux (2016), "Standard Operating Procedure for VITEK Compact: Use, Maintenance and Quality Control Procedures", tr 16 35 Erjona Abazaj Blerta Kika, et al (2018), "Prevalence and Risk Factors of Staphylococcus aureus Infection in Hospitalized Patient in Tirana", Journal of Bacteriology and Parasitology 9(5) 36 Erjona Abazaj Blerta Kika, et al (2020), "Prevalence of Staphylococcus aureus and Methicillin-resistant S aureus in Adult Hospitalized Patients in “Mother Theresa” Hospital Center in Albania", Open Access Macedonian Journal of Medical Sciences 8, tr 360-364 37 Chritelle Ngba E Catherine D., et al (2016), "Staphylococcus aureus Toxins and Diabetic foot Ulcer: Role in Pathogenisis and Interest in Diagnosis", TOXINS - MDPI 8(209), tr 20 38 Clinical and laboratory standards institute CLSI (2018), Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; M100, Twentyeighth Informational Supplement 39 Elisabeth H., et al (2017), "The Role of Antibiotics in Modulating Virulence in Staphylococcus aureus", Clin Microbiol Rev 30(4) 40 Hardy K J., et al (2004), "Methicillin-resistant Staphylococcus aureus in the critically ill", Br J Anaesth 92 41 Hellen Gelband, et al (2015), "The State of the World's Antibiotics 2015", CDDEP Disease Dynamics, Economic Policy, tr 68 42 Jae-Hoon S., et al (2005), "Emergence in Asian Countries of Staphylococcus aureus with Reduced Suceptibility to vancomycin", Antimicrobiobialagents and and chemotherapy 48(12) 43 John N G., et al (2016), 2016 Infectious Diseases Society of America (IDSA) Clinical Practice Guideline for the Treatment of Coccidioidomycosis, Vol 63 44 Neil M Ampel John N Galgiani, Janis E Blair, (2016), 2016 Infectious Diseases Society of America (IDSA) Clinical Practice Guideline for the Treatment of Coccidioidomycosis, Vol 63 45 Athena P Kourtis (2019), Staph Infections Can Kill: Prevention at the Front Lines, CDC 46 Lakshmana Swamy Parasa, et al (2011), "Prevalence of induced Clindamycin resistance in methicillin resistant Staphylocuccus aureus from hospital population of coastal Andhara pradesh, South India", iMedPub 47 Angela A Luigi R., et al (2019), "Trends in the antibiotic resistance of S aureus clinical isolates: a years retrospective study in a teaching hospital in South Italy", Infez Med 27(3) 48 Dukic V M cộng (2013), "Epidemics of community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus in the United States: a meta-analysis", PLoS One (1), pp e52722 49 M Monaco, A Pantosti A Sanchini (2007), "Mechanism of antibiotic resistance in Staphylococcus aureus", Future Microbiology (3) 50 Murray, Rosenthal Pfaller (2013), Medical Microbiology, Seventh Edition, 1023 51 Nicholas A T., et al (2020), "Methicillin-resistant Staphylococcus aureus: an overview of basic and clinical research", PMC 52 Wertheim HFL Phu VD, Larsson M, Nadjm B, Dinh Q-D, Nilsson LE, et al (2016), "Burden of Hospital Acquired Infections and Antimicrobial Use in Vietnamese Adult Intensive Care Units" 53 Medhat Abd El-Massih El-Daker Rania Abd El-Hamid El-Kady, et al (2017), "The Multi-drug Resistance cfr Gene: an Evolving Mechanism for Linezolid Resistance in Staphylococcus aureus", Egyptian Journal of Medical Microbiology 26, pp 67-72 54 Abdul R Saleem A., et al (2018), "Characterization of novel antibiotic resistance genes in Staphylococcal aureus", Bacteriology & Mycology: Open Access 55 et al Shagufta H (2005), "Prevalence of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA) in Surgical Site Infections in a Tertiary Care Hospital", International Journal of Pathology 3(2), pp 81-85 56 Jyoti Amatya and Shyam Narayan Labh Shakti Regmi (2020), "Antimicrobial Resistance Pattern of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Strains Isolated from Clinical Specimens in Kathmandu, Nepal", iMedPub 11 57 Joshua S Davis Steven Y C Tong, et al (2015), "Staphylococcus aureus Infections: Epidemiology, Pathophysiology, Clinical Manifestations, and Management", CMR 28, pp 604-623 58 S Y Tong, et al (2015), "Staphylococcus aureus infections: epidemiology, pathophysiology, clinical manifestations, and management", Clin Microbiol Rev 28(3), pp 603-61 59 World Health Organization WHO (2014), Antimicrobial Resistance Global Report on Surveillance 60 World Health Organization WHO (2016-2017), Global Antimicrobial Resistance Surveillance System (GLASS) Report Early implementation 61 World Health Organization WHO (2016-2018), WHO Report on Surveillance of Antibiotic Consumption 62 Xu Ji Wu Yang (2020), "Analysis of the microbial species, antimicrobial sensitivity and drug resistance in 2652 patients in nursing hospital", Heliyon 63 Hamid Heidari Hadi Sedigh Ebrahim-Saraie, et al (2017), "Trends of Antibiotic Resistance in Staphylococcus aureus Isolates Obtained from Clinical Specimens", JKIMSU 6(3) 64 M.D Robert R Redfield (2019), Antibiotic resistance threats in The United States 2019 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phiếu thu thập số liệu “Khảo sát tình hình nhiễm kháng kháng sinh Staphylococcus aureus bệnh viện Đa khoa Trung ương Cần Thơ năm 2019-2020” I PHẦN HÀNH CHÍNH Họ tên: Tuổi: Giới tính: Mã số bệnh nhân: Khoa / Phòng: Loại bệnh phẩm: Mã bệnh phẩm: Đánh giá tổng quan vận chuyển mẫu: Đạt / Chưa đạt II PHẦN CHUYÊN MÔN Loại bệnh phẩm: Mã số bệnh phẩm: Chủng vi khuẩn: MRSA : dương tính / âm tính Kết kháng sinh đồ MIC: Stt Kháng sinh Ký hiệu Erythromycine ERY Clindamycin CLI Oxacillin OXA Penicillin PEN Trimethoprim/Sulfamethoxazole SXT Linezolid LNZ Kháng (R) Trung gian (I) Nhạy (S) Stt Kháng sinh Ký hiệu Tetracyclin TCY Vancomycin VAN Rifampicin Kháng (R) Trung gian (I) Nhạy (S) RIF 10 Ciprofloxacin CIP 11 Levofloxacin LVX 12 Moxifloxacin MFX 13 Gentamycin GEN 14 Nitrofurantoin NIT 15 Tigecyclin TGC 16 Quinupristin + dalfopristin QDA Cần Thơ, ngày… tháng … năm 20 Người thu thập Phụ lục 2a: Sơ đồ nuôi cấy bệnh phẩm Máu Cấy vào chai BHI phase Vi khuẩn không mọc Theo dõi 24h, 48h, ngày Cấy sang thạch BA, CA Vi khuẩn không mọc sau 05 ngày - Nhuộm Gram - Quan sát hình thể vi khuẩn - Cấy sang thạch BA, CA, MC ủ 350±20C/qua đêm - Định danh thực kháng sinh đồ máy Vitek2.compact Vi khuẩn mọc Mủ (nhọt, vết thương, tai,mủ thể ) Bệnh phẩm Nhuộm Gram Cấy Xác định: Bạch cầu đơn, đa nhân, tế bào biểu mô, nấm men, sợi tơ nấm, Cocci Gr+, Diplococci Gr+, Diplococci Gr-, Bacille Gr+, Bacille Gr- Tăng sinh BHI (dịch mũi, họng,mủ,…) Ủ 350±20C/ qua đêm Nhuộm Gram Cấy thạch máu BA Cấy thạch CA Nhuộm Gram Đàm Pha lỗng tỉ lệ ½ với nước muối sinh lý (Hoặc NALC) Ủ bình nến, 350±20C/qua đêm Xác định: Bạch cầu, tế bào, Cocci Gr+, Bacille Gr+, Bacilli - Biện luận kết (kết hợp kết nhuộm Gram ban đầu) - Định danh thực kháng sinh đồ máy Vitek2.compact Gr, Diplococci Gr+, Diplococci Gr-, nấm men, sợi tơ nấm Ủ bình nến, 350±20C/qua đêm Cấy thạch CA (hình sao) Cấy thạch máu, Ủ 350±20C/qua đêm MC (3 chiều) Âm tính Nhuộm Gram Phụ lục 2b: Qui trình thực nhuộm Gram Làm tiêu vi khuẩn thật mỏng, để khô tự nhiên, cố định cách hơ nhanh qua lửa đèn cồn vài lần Lưu ý: hơ nhẹ lửa để lam kính ấm lên vừa phải khơng làm lam kính bị q nóng làm biến thể hình dạng vi khuẩn Đặt lam kính giá nhuộm, cho vài giọt thuốc nhuộm Gram (crystal violet : tím gentian) phủ trùm lên phết vi khuẩn, để yên phút Sau rửa màu thừa dính lam kính vịi nước chảy nhẹ Cho tiếp vài giọt lugol (iode) phủ trùm tiếp lên phết vi khuẩn, để yên phút, rửa lugol thừa dính lam kính vịi nước Tẩy màu cách nhỏ lên góc lam kính nhuộm dung dịch alcool 95% giọt cồn rời khỏi lam kính màu, rửa cồn khỏi lam kính vòi nước Phủ vài giọt safranine lên phết nhuộm, để yên phút Sau rửa safranin thừa dính lam kính vịi nước Thấm khơ lam kính cách ép lam kính tờ giấy thấm Để khơ lam kính hồn tồn khơng khí, quan sát qua kính hiển vi trước hết vật kính x10 để tìm vùng phết bệnh phẩm, Sau nhỏ giọt dầu soi kính lên phết nhuộm và, xoay sang vật kính 100 (vật kính dầu) để quan sát hình thái cách bắt màu vi khuẩn Hình ảnh: đứng thành chùm bắt màu tím đậm Phụ lục 2c: Qui trình thực phản ứng Catalase Nguyên tắc: Hydrogen peroxide (H2O2) hình thành qua trình biến dưỡng carbohydrate H2O2 tích tụ gây độc làm chết vi khuẩn Catalase có tác dụng phân hủy H2O2 thành H2O O2 H2O2 catalase H2O + ½ O2↑ Thực hiện: Dùng vịng cấy vơ trùng lấy khuẩn lạc khuẩn (không 24 giờ) cho lên lam kính, nhỏ giọt H2O2 (3%) vào quệt vi khuẩn, quan sát vòng 10 giây đến phút Kết quả: dương tính (xuất bọt khí) Lưu ý: Nồng độ H2O2 dùng thực thử nghiệm 3% Nếu nồng độ H2O2 cao gây phản ứng dương tính giả Nếu H2O2 thấp gây phản ứng âm tính giả Nếu thực vòng cấy kim loại vi khuẩn mọc mơi trường thạch máu xảy phản ứng dương tính giả Phụ lục 2d: Qui trình thực phản ứng Coagulase Nguyên tắc: Coagulase enzyme có vai trị đơng kết, tác động lên vài hợp phần có huyết tương tạo khối đông Thực hiện: Làm huyền dịch vi khuẩn môi trường BHI broth, lấy 0.5ml huyền dịch vi khuẩn cho vào 0.5ml huyết tương thỏ, ủ 35oC quan sát sau ngưỡng thời gian 4, 8, 12 24 Kết quả: dương tính : xuất khối đơng vịng 24 Lưu ý: Nếu sau thử nghiệm âm tính tiếp tục ủ quan sát sau giờ, 12 24 Một số vi khuẩn S.aureus cho thử nghiệm dương tính vịng giờ, tiếp tục ủ thêm khối đơng tự tan Ngược lại số vi khuẩn S aureus tạo coagulase yếu nên gây đông huyết tương sau ủ 24 Phụ lục 2e: Qui trình thực kỹ thuật máy vi sinh tự động Vitek2 Compact Chuẩn bị mẫu: - Dùng bơm định lượng cho 3ml nước muối (NaCl 0.45%) vào ống nghiệm - Đưa vi khuẩn đồng theo yêu cầu vào ống nước muối, khuấy - Đưa ống mẫu vào máy Densicheck để kiểm tra độ đục GP 0.5-0.63 McF - Nạp ống nghiệm Card test loại vào Cassette - Nếu làm định danh KSĐ lúc, cần ống nghiệm chứa 3ml NaCl 0.45% vơ trùng Dùng pipette hút 280µl huyền dịch định danh cho vào ống nghiệm làm kháng sinh đồ (ống card làm kháng sinh đồ phải đặt liền sau ống card làm định danh - Mẫu phải đưa vào máy vòng 30 phút Nhập mẫu vào máy a) Nạp Cassette vào máy: - Nạp Cassette vào ngăn hút mẫu, nhấn vào phím tương ứng Start Fill - Sau kết thúc hút mẫu đèn nhấp nháy - Mở cửa hút mẫu, lấy Cassette nạp vào ngăn nhập mẫu - Sau kết thúc đèn nhập mẫu nhấp nháy để ta lấy Cassette - Lưu ý sau kết thúc giai đoạn hút mẫu Cassette phải nạp qua ngăn nhập mẫu vòng 10 phút b) Nhập mẫu vào máy khai báo thông tin: - Nạp Cassette vào máy mà chưa khai báo - Từ hình chương trình nhấn chọ Setup Test Post Entry để vào hình: - Khi máy nạp Cassette mà chưa khai báo hình xuất Cassette màu đỏ - Chọn Cassette cần khai báo - Nhập thông cho Cassette mẫu Tạo thông tin bệnh nhân - Nhấn vào biểu tượng View and Maintain - Nhấn vào biểu tượng Add Patient…Information - Nhập thông tin (ID, Tên, Lab ID) vào (* thông tin bắt buộc) - Khi Lab ID trùng khớp với Accession mẫu, máy tự động liên kết - Khi cần tạo mẫu với thông tin bệnh nhân có sẵn, nhấn chọn bệnh nhân sau nhấn vào Add Patient…Information nhập thông tin mẫu Xem kết mẫu - Từ hình nhấn vào Maintain Isolate Information - Từ cửa sổ bên trái, chọn mẫu cần xem, thông tin mẫu hiển thị cửa sổ bên phải - Khi kết qua mẫu hoàn tất máy tự động in kết - Nếu cần in kết mẫu nhấn vào Print Bảo Quản: Vệ sinh hàng tuần khay chứa Card Test cồn 70o xà phòng, có cố tắt điện báo người phụ trách Lab bảo trì Thực máy đo độ đục Densicheck Plus: a) Đo mẫu - Vào Menu dùng phím SLECT chọn chế độ PLASTIC nhấn SLECT xác nhận - Định chuẩn ZERO máy: dùng ống nghiệm plastic chứa nước cất - Đo mẫu: cho ống nghiệm chứa huyền dịch vào máy nhấn SLECT theo bảng sau: GN GP YST NH 0.5-0.63 0.5-0.63 1.80-2.20 2.70-3.30 McF McF McF McF b) Kiểm tra máy - Vào Menu dùng phím SLECT chọn chế độ đo GLASS nhấn SLECT xác nhận - Định chuẩn ZERO máy: nhấn phím ZERO dùng ống chuẩn để đo - Lần lượt đo ống chuẩn khác 0.5; 2; So sánh kết với bảng giới hạn cho phép Lưu ý: Lắc ống mẫu trước đo,k hi đo xoay tay ống vòng giây Phụ lục 3a: Tiêu chuẩn MIC S.aureus theo Viện tiêu chuẩn lâm sàng xét nghiệm Hoa Kỳ CLSI – M100 28 th S SDD I R Susceptibl Tên kháng sinh Đơn vị Sensitive cảm dalfopristin Rifampicin Trimethoprim/ Sulfamethoxazole Tetracyclin Tigecycline Vancomycin Teicoplanin Cefoxitin Intermed iate dependent Nhạy Cholramphenicol Ciprofloxacin Clindamycin Erythromycin Gentamycin Linezolid Levofloxacin Moxifloxacin Nitrofurantonin Oxacyclin Penicilin Quinupristin - e-dose Nhạy cảm Kháng phụ thuộc trung liều gian Resistant Đề kháng µg/mL µg/mL µg/mL µg/mL µg/mL µg/mL µg/mL µg/mL µg/mL µg/mL µg/mL ≤8 ≤1 ≤ 0.5 ≤ 0.5 ≤4 ≤4 ≤1 ≤ 0.5 ≤ 32 ≤2 ≤ 0.12 16 1-2 1-4 µg/mL ≤1 ≥4 µg/mL ≤1 ≥4 µg/mL ≤ 2/38 µg/mL µg/mL µg/mL µg/mL µg/mL ≤4 ≤ ≤2 ≤8 ≤4 64 ≥ 32 ≥4 ≥4 ≥8 ≥ 16 ≥8 ≥4 ≥2 ≥ 128 ≥4 ≥ 0.25 ≥ 4/76 4-8 16 ≥ 16 ≥ ≥ 16 ≥ 32 ≥8 Phụ lục 3b: Hình thức kết xét nghiệm trả đến khoa lâm sàng ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGUYỄN MINH CHÂU KHẢO SÁT TÌNH HÌNH NHIỄM VÀ SỰ ĐỀ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA STAPHYLOCOCCUS AUREUS TẠI BỆNH VIỆN ĐA KHOA TRUNG ƯƠNG CẦN THƠ NĂM 2019- 2020. .. dương bệnh viện Đa khoa Trung ương Cần Thơ năm 2019 - 2020 2) Khảo sát đề kháng kháng sinh Staphylococcus aureus bệnh viện Đa khoa Trung ương Cần Thơ năm 2019 – 2020 3 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU... Staphylococcus aureus Bệnh viện Đa khoa Trung ương Cần Thơ năm 2019- 2020? ?? với hai mục tiêu cụ thể sau: 1) Khảo sát tình hình nhiễm Staphylococcus aureus bệnh phẩm nhiễm cầu khuẩn Gram dương bệnh viện Đa khoa