Nghiên cứu xây dựng quy trình định lượng đồng thời physalin b và d có trong lá cây thù lù cạnh (folium physalis angulata) bằng phương pháp sắc ký lỏng đầu dò pda

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ TRẦN HOÀNG LÂM NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PHYSALIN B VÀ D CÓ TRONG LÁ CÂY THÙ LÙ CẠNH (Folium Physalis angulata) BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG ĐẦU DÒ PDA LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Cần Thơ - 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ TRẦN HOÀNG LÂM NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PHYSALIN B VÀ D CÓ TRONG LÁ CÂY THÙ LÙ CẠNH (Folium Physalis angulata) BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG ĐẦU DÒ PDA Chuyên ngành: Kiểm nghiệm thuốc Độc chất MS: 8720210 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS NGUYỄN THỊ NGỌC VÂN CẦN THƠ, 2021 CẦN THƠ – 10/2019 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa công bố nơi Cần Thơ, ngày … tháng 01 năm 2022 Tác giả luận văn Trần Hoàng Lâm ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, em xin gửi lời cảm ơn đến quý thầy, cô trường Đại học Y Dược Cần Thơ quý thầy, cô liên mơn Hóa phân tích - Kiểm nghiệm - Độc chất tạo điều kiện cho em học tập nghiên cứu Em xin trân trọng bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc đến PGs.Ts Nguyễn Thị Ngọc Vân suốt thời gian học tập nghiên cứu, Cô tận tâm hướng dẫn, góp ý, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý báu truyền lửa nhiệt huyết cho em nghiên cứu khoa học Em xin chân thành cảm ơn Ban Giám đốc anh chị, em trung tâm Kiểm nghiệm Thuốc - Mỹ phẩm - Thực phẩm thành phố Cần Thơ, đặc biệt ThS Phạm Thị Thanh Nga tạo điều kiện thuận lợi, nhiệt tình giúp đỡ hỗ trợ em nhiều thời gian em thực luận văn Cuối em muốn gửi lời cảm ơn đến gia đình, anh chị em lớp Cao học Chuyên khoa I Kiểm nghiệm thuốc Độc chất khóa 2019 - 2021 người bạn ln giúp đỡ, tiếp thêm cho em nhiều động lực giúp đỡ để em vượt qua khó khăn thử thách iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ ix MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan thù lù cạnh 1.2 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học thù lù cạnh 1.3 Tổng quan nhóm physalin 1.4 Tổng quan phương pháp hòa tan chiết xuất 11 1.5 Tình hình nghiên cứu giới nước 13 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu 18 2.3 Đạo đức nghiên cứu 35 Chương KẾT QUẢ 36 3.1 Xây dựng quy trình xử lý mẫu để định lượng physalin B D có thù lù cạnh 36 3.2 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng physalin B D có thù lù cạnh phương pháp sắc ký lỏng đầu dò PDA 44 Chương BÀN LUẬN 56 4.1 Xây dựng quy trình xử lý mẫu để định lượng physalin B D có thù lù cạnh 56 iv 4.2 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng physalin B D có thù lù cạnh phương pháp sắc ký lỏng đầu dò PDA 63 KẾT LUẬN 68 KIẾN NGHỊ 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt AOAC Tiếng Anh Association of Tiếng Việt Official Hiệp hội hóa học phân tích Analytical Community quốc tế GCB Graphitized Carbon Black Than hoạt tính HPLC High Performance Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao Chromatography ICH International Conference on Harmonization IEC International Electrotechnical Ủy ban kỹ thuật điện quốc tế Commission ISO International Organization Tổ chức tiêu chuẩn hoá quốc tế for Standardization LC Liquid Chromatography Sắc ký lỏng LOD Limit of Detection Giới hạn phát LOQ Limit of Quantification Giới hạn định lượng MPLC Medium Pressure Liquid Sắc ký lỏng hiệu trung Chromatography bình PDA Photodiode Array Đầu dò dãy diod quang PSA Primary Secondary Amine Amin bậc Rs Resolution Độ phân giải Rpm Rotate Per Minute Vòng/phút RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn SPE Solid Phase Extraction Chiết pha rắn TFA Trifluoroacetic acid vi Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt tR Rentetion time Thời gian lưu pic UFLC Ultrafast Liquid Sắc ký lỏng siêu nhanh Chromatography UPLC Ultra High Performance Sắc ký lỏng siêu hiệu Liquid Chromatography UV-Vis Ultraviolet-Visible Tử ngoại - Khả kiến vii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học thù lù cạnh Bảng 1.2 Cấu trúc số hợp chất physalin hoạt tính sinh học thù lù cạnh Bảng 2.1 Các chất chuẩn nghiên cứu 18 Bảng 2.2 Các dung mơi, hóa chất sử dụng nghiên cứu 19 Bảng 2.3 Các thiết bị sử dụng nghiên cứu 20 Bảng 2.4 Các pha động khảo sát chế độ rửa giải gradient 22 Bảng 2.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến quy trình chiết siêu âm (*) 26 Bảng 2.6 Mơ tả thí nghiệm khảo sát quy trình chiết 27 Bảng 2.7 Mô tả thí nghiệm khảo sát quy trình loại tạp phân cực 28 Bảng 2.8 Các mức nồng độ độ chất phân tích 32 Bảng 3.1 Kết khảo sát hệ pha động chế độ rửa giải gradient (tham khảo sắc ký đồ phụ lục 3) 36 Bảng 3.2 Chương trình gradient nghiên cứu 39 Bảng 3.3 Kết hiệu suất chiết physalin 42 Bảng 3.4 Kết tính tương thích hệ thống hỗn hợp chuẩn 44 Bảng 3.5 Độ tinh khiết pic physalin D physalin B mẫu thử thêm chuẩn 46 Bảng 3.6 Kết độ xác ngày 49 Bảng 3.7 Kết độ xác liên ngày (n = 18) 50 Bảng 3.8 Kết thẩm định độ 51 Bảng 3.9 Kết thẩm định độ ổn định 51 Bảng 3.10 Kết thẩm định độ thô 52 Bảng 3.11 Hàm lượng physalin B physalin D có thù lù cạnh bốn tỉnh Đồng Sông Cửu Long 53 viii Bảng 4.1 Phân tích tuyến tính physalin D 64 Bảng 4.2 Phân tích tuyến tính physalin B 65 PL66 PL67 PL68 PL69 PL70 cqNC HOA XA e