Nghiên cứu phân lập và xây dựng quy trình định lượng các dẫn xuất đơn vòng thơm từ địa y usnea undulata

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ BỘ Y TẾ HỒ THỊ DIỄM PHƯƠNG NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG CÁC DẪN XUẤT ĐƠN VÒNG THƠM TỪ ĐỊA Y Usnea undulata Chuyên ngành: Kiểm nghiệm thuốc độc chất Mã số: 8720210 LUẬN VĂN THẠC SĨ Người hướng dẫn khoa học PGS.TS Nguyễn Thị Thu Trâm Cần Thơ – Năm 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa công bố nơi Tác giả luận văn Hồ Thị Diễm Phương LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành gửi lờn cảm ơn đến Bộ mơn Hóa học, Khoa Khoa học bản; Liên Bộ mơn Hóa phân tích - Kiểm nghiệm thuốc - Độc chất, Khoa Dược - Trường Đại học Y Dược Cần Thơ Đây nơi tơi học tập nghiên cứu tìm hiểu mở rộng thêm nhiều kiến thức Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Quý Thầy Cô truyền đạt kiến thức chuyên môn kinh nghiệm bổ ích suốt q trình học tập thực đề tài Đặc biệt, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Cô hướng dẫn PGS TS Nguyễn Thị Thu Trâm tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi; Bên cạnh đó, tơi xin cảm ơn Thầy PGS TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ tạo điều kiện để thực đề tài thời gian vừa qua Một lần xin gửi lời cảm ơn lời chúc sức khỏe đến Quý Thầy Cô Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến gia đình, người thân, bạn bè người ln bên cạnh động viên, giúp đỡ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn! Tác giả luận văn Hồ Thị Diễm Phương MỤC LỤC Trang Lời cam đoan Lời cảm ơn Danh mục ký hiệu chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan địa y 1.2 Tổng quan hợp chất đơn vòng thơm 10 1.3 Tổng quan nghiên cứu định lượng địa y 15 1.4 Tình hình nghiên cứu liên quan 17 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 2.3 Đạo đức nghiên cứu 30 Chương KẾT QUẢ 31 3.1 Phân lập xác định cấu trúc dẫn xuất đơn vòng thơm từ địa y Usnea undulata 31 3.2 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng dẫn xuất đơn vòng thơm địa y Usnea undulata HPLC với đầu dò PDA 42 Chương BÀN LUẬN 53 4.1 Phân lập xác định cấu trúc dẫn xuất đơn vòng thơm từ địa y Usnea undulata 53 4.2 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng dẫn xuất đơn vòng thơm địa y Usnea undulata HPLC với đầu dò PDA 58 KẾT LUẬN 68 KIẾN NGHỊ 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC KÝ HIỆU CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ viết tắt 13C-NMR 1H-NMR AOAC As ASTM brs CC d DĐVN V DPPH EtOAc GC/MS HCV HPLC HPLC -UV HRMS Hz IC50 IR J LOD LOQ MeOH MIC MOC NMR Từ gốc Nghĩa tiếng Việt 13C Nuclear Magnetic Resonance 1H Nuclear Magnetic Resonance Association of Official Analytical Chemists Asymmetry factor American Society for Testing and Materials broad singlet Column chromatography douplet Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H Hiệp hội nhà hố học phân tích thống Hệ số bất đối xứng Hiệp hội thí nghiệm vật liệu Mỹ 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazy Ethyl acetat Gas Chromatography/Mass Spectroscopy Hepatitis C virus High Performance Liquid Chromatography High Performance Liquid Chromatography- Ultraviolet High Resolution Mass Spectrometry Hertz Inhibitory Concentration Infrared Spectroscopy Coupling constant Limit of detection Limit of quantification Methanol Minimum Inhibitory Concentration Methyl β-orcinolcarboxylat Nuclear Magnetic Resonance Mũi đơn rộng Sắc ký cột Mũi đôi Dược điển Việt Nam V Sắc ký khí ghép khối phổ Virus gây viêm gan C Sắc ký lỏng hiệu cao Sắc ký lỏng hiệu cao đầu dò UV Khối phổ độ phân giải cao Đơn vị đo tần số Nồng độ ức chế tối đa 50% Quang phổ hồng ngoại Giới hạn phát Giới hạn định lượng Nồng độ ức chế tối thiểu Cộng hưởng từ hạt nhân Ký hiệu, chữ viết tắt r Rf RP18 RP-HPLC rpm Rs RSD s S/N SD SKC SKLM tR UV UV-Vis VS δ λmax Từ gốc Correlation Coefficient Retention factor C18-reversed phase Reversed phase high performance liquid chromatography Revolution per minute Resolution Relative standard deviation Singlet Signal/Noise Standard deviation Retention time Ultraviolet UltraViolet-visible Spectrometry Vanilin Sulfat Chemical shift Nghĩa tiếng Việt Hệ số tương quan Hệ số di chuyển Pha đảo C18 Sắc ký lỏng pha đảo Vòng phút Độ phân giải Độ lệch chuẩn tương đối Mũi đơn Tín hiệu/ nhiễu Độ lệch chuẩn Sắc ký cột Sắc ký lớp mỏng Thời gian lưu Tia cực tím Quang phổ tử ngoại khả kiến Thuốc thử vanilin sulfat Độ dịch chuyển hóa học Bước sóng hấp thu cực đại DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Độ lặp lại tối đa chấp nhận hàm lượng theo AOAC 27 Bảng 2.2 Độ thu hồi chấp nhận hàm lượng khác (AOAC) 28 Bảng 2.3 Dung mơi, hóa chất sử dụng chiết xuất, phân lập, định lượng 29 Bảng 2.4 Trang thiết bị 29 Bảng 3.1 Kết sắc ký cột cao aceton UA 32 Bảng 3.2 Kết sắc ký cột phân đoạn UAB1 33 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ NMR hợp chất UAR1 37 Bảng 3.4 Kết sắc ký cột phân đoạn UAB3 37 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ NMR hợp chất UAR2 42 Bảng 3.6 Số lần chiết mẫu thử 45 Bảng 3.7 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống mẫu thử 46 Bảng 3.8 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống mẫu thử 47 Bảng 3.9 Nồng độ tuyến tính hỗn hợp chuẩn 48 Bảng 3.10 Kết sắc ký acid orsellinic methyl β-orcinolcarboxylat 51 Bảng 3.11 Kết thẩm định độ quy trình phân tích 51 acid orsellinic methyl β-orcinolcarboxylat 51 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Các dạng địa y Hình 1.2 Một số chi họ Parmaliaceae Hình 1.3 Một số loài chi Usnea Hình 1.4 Địa y Usnea undulata Stirt (Parmeliaceae) Hình 2.1 Quy trình chiết cao từ U.undulata 21 Hình 2.2 Quy trình chiết- xử lý mẫu thử 25 Hình 3.1 Khảo sát tỷ lệ cao chiết Hình 3.2 Kết SLKM cao chiết 31 Hình 3.3 Sơ đồ phân lập hợp chất từ cao aceton 32 Hình 3.4 Kết sắc ký lớp mỏng hợp chất UAR1 33 Hình 3.5 (a) Sắc ký đồ hợp chất UAR1; (b) Phổ UV hợp chất UAR1 34 Hình 3.6 Phổ MS hợp chất UAR1 (khối phổ thời gian bay) 35 Hình 3.7 Phổ MS hợp chất UAR1 (ba tứ cực ghép nối tiếp) 35 Hình 3.8 Phổ IR hợp chất UAR1 36 Hình 3.9 Phổ 1H-NMR (a) 13C-NMR (b) hợp chất UAR1 36 Hình 3.10 Kết sắc ký lớp mỏng hợp chất UAR2 38 Hình 3.11 (a) Sắc ký đồ hợp chất UAR2; (b) Phổ UV hợp chất UAR2 39 Hình 3.12 Phổ MS hợp chất UAR2 (khối phổ thời gian bay) 40 Hình 3.12 Phổ HRMS hợp chất UAR2 40 Hình 3.13 Phổ MS hợp chất UAR2 (ba tứ cực ghép nối tiếp) 40 Hình 3.14 Phổ IR hợp chất UAR2 41 Hình 3.15 Phổ 1H-NMR (a) 13C-NMR (b) hợp chất UAR2 41 Hình 3.16 Sắc ký đồ khảo sát hệ pha động hệ dung môi 43 Hình 3.17 Sắc ký đồ mẫu thử bước sóng 217, 261, 268 nm 44 Hình 3.18 Sắc ký đồ dung dịch mẫu thử 46 Hình 3.19 Độ tinh khiết pic mẫu thử 47 Hình 3.20 Sắc ký đồ đánh giá tính đặc hiệu quy trình phân tích 48 Hình 3.21 Sắc ký đồ hỗn hợp dung dịch chuẩn nồng độ 48 Hình 3.22 Đồ thị tương quan nồng độ diện tích pic 49 Hình 3.23 Sắc ký đồ giới hạn phát acid orsellinic 50 Hình 3.24 Sắc ký đồ giới hạn phát methyl β-orcinolcarboxylat 50 PL- 35 - PL 7.3 Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn độ xác ngày lần PL- 36 - PL 7.4 Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn độ xác ngày lần PL- 37 - PL 7.5 Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn độ xác ngày lần PL- 38 - PL 7.6 Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn độ xác ngày lần PL- 39 - PHỤ LỤC ĐỘ ĐÚNG PL 8.1 Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn tỷ lệ 80% lần PL- 40 - PL 8.2 Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn tỷ lệ 80% lần PL- 41 - PL 8.3 Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn tỷ lệ 80% lần PL- 42 - PL 8.4 Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn tỷ lệ 100% lần PL- 43 - PL 8.5 Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn tỷ lệ 100% lần PL- 44 - PL 8.6 Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn tỷ lệ 100% lần PL- 45 - PL 8.7 Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn tỷ lệ 120% lần PL- 46 - PL 8.8 Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn tỷ lệ 120% lần PL- 47 - PL 8.9 Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn tỷ lệ 120% lần PL- 48 - PL 8.10 Sắc ký đồ mẫu thử PL- 49 - PL 8.11 Sắc ký đồ mẫu chuẩn ... lượng dẫn xuất đơn vòng thơm từ địa y Usnea undulata? ?? thực với hai mục tiêu: Phân lập xác định cấu trúc dẫn xuất đơn vòng thơm từ địa y Usnea undulata X? ?y dựng thẩm định quy trình định lượng. .. 53 4.1 Phân lập xác định cấu trúc dẫn xuất đơn vòng thơm từ địa y Usnea undulata 53 4.2 X? ?y dựng thẩm định quy trình định lượng dẫn xuất đơn vòng thơm địa y Usnea undulata HPLC... 25 Hình 2.2 Quy trình chiết- xử lý mẫu thử X? ?y dựng thẩm định quy trình định lượng dẫn xuất đơn vòng thơm địa y U undulata HPLC với đầu dò PDA Việc x? ?y dựng thẩm định quy trình định lượng gồm tiêu